CN102846946A - 一种中药组合物在制备治疗糖尿病肾病的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种中药组合物在制备治疗糖尿病肾病的药物中的应用。本发明中药组合物由黄芪、人参、丹参等11味中药组成，可有效改善链脲佐菌素(STZ)致大鼠糖尿病肾病模型肾功能，与阳性药物缬沙坦作用相当，临床可用于糖尿病肾病的防治。

Description

一种中药组合物在制备治疗糖尿病肾病的药物中的应用

技术领域

本发明涉及一种中药组合物的新用途，具体地，涉及一种中药组合物在制备治疗糖尿病肾病的药物中的应用。

背景技术

糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)是在糖尿病病程中出现的以蛋白尿、高血压、水肿、肾功能不全等肾脏病变为特征的疾病,是糖尿病常见且严重微血管并发症之一,DN所致终末期肾病己成为慢性肾功能衰竭的主要病因。也是糖尿病患者的主要死亡原因之一。DN发病机制尚未完全阐明,目前认为主要是在遗传易感性基础上,糖脂代谢紊乱、氧化应激、血管活性物质、血流动力学改变、多种细胞因子和炎症因子等多种因素参与引起的肾脏慢性损伤。

近年来随着糖尿病的日益流行,DN发病率也呈迅速增长,成为目前的研究热点之一。合适的DN动物模型的建立对于深入探讨DN的发病机制及DN治疗药物的开发具有重要的意义。

DN的早期治疗效果较好，对终末期肾病则主要采取透析和肾移植。在临床工作中，防治DN进展的主要措施有：低蛋白饮食（LPD），控制血糖，控制血压，戒烟，应用血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI），另外，他汀类降脂药，抗氧化剂、噻唑烷二酮、内皮素拮抗剂、蛋白激酶C、β抑制剂亦被认为有一定的肾脏保护作用，基因治疗、干细胞移植亦给糖尿病肾病带来新希望。

本发明是在中国专利ZL 02146573.8的基础上进行的改进发明，在此全文引用该专利文件记载的内容。中国专利ZL 02146573.8未记载该中药组合物在制备制备治疗糖尿病肾病的药物中的应用。

发明内容

本发明目的是提供一种中药组合物在制备治疗糖尿病肾病的药物中的应用；

本发明药物是选用黄芪、人参、附子、丹参等11味药物组成，具有温阳化饮，益气活血的功效。

所述中药组合物由如下重量份的原料药制成：

黄芪 150-450份、附子40-120份、人参或党参75-225份、 丹参75-225份、葶苈子50-150份、香加皮或南五加皮60-180份、泽泻75-225份、玉竹25-75份、桂枝30-90份、红花30-90份、陈皮25-75份；

优选地，所述中药组合物由如下重量份的原料药制成：

黄芪450份、附子112.5份、人参或党参225份、丹参225份、葶苈子150份、香加皮或南五加皮180份、泽泻225份、玉竹75份、桂枝90份、红花90份、陈皮75份；

优选地，所述中药组合物由如下重量份的原料药制成：

黄芪250份、附子112.5份、人参或党参200份、丹参120份、

葶苈子135份、香加皮或南五加皮150份、泽泻200份、玉竹60份、

桂枝75份、红花75份、陈皮60份。

本发明中药组合物的活性成分可以由常规的提取工艺[如范碧亭《中药药剂学》（上海科学出版社1997年12月第1版）]制得，更优选地，所述中药组合物的活性成分由下列步骤制得的有效成分组成：

（1）将黄芪、葶苈子、泽泻、人参或党参、香加皮或南五加皮用7-9倍量70%乙醇提取，滤过，浓缩至在60℃热测时相对密度为1.25-1.30的清膏； 

（2）提取桂枝、陈皮的挥发油；

（3）附子、丹参、玉竹、红花加6-10倍量水煎煮2次，每次2小时，合并提取液，滤过；桂枝、陈皮提油后的水溶液滤过，收集水溶液滤液，再加6-10倍量水煎煮残渣1小时，滤过，合并水溶液；将上述所得的各种水溶液合并，浓缩至相对密度为1.25-1.30清膏，搅拌中加入乙醇，至醇浓度70%，静置，滤过，滤液浓缩至在60℃热测时相对密度为1.25-1.30清膏。

本发明还提供了该中药组合物胶囊剂的制备方法：

（1）按比例称取黄芪、葶苈子、泽泻、人参或党参、香加皮或南五加皮，加8倍量70%乙醇回流提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至在60℃热测时相对密度为1.25-1.30的清膏，备用；

（2）按比例称取桂枝、陈皮提取挥发油，提油后的水溶液滤过，备用，残渣再加8倍量水煎煮1小时，滤过，合并水煎液，备用；

（3）按比例称取附子、丹参、玉竹、红花，加水9倍量，煎煮2次，每次2小时，合并提取液，滤过，与步骤（2）中桂枝、陈皮水煎液合并，浓缩至在60℃热测时相对密度为1.25-1.30的清膏，搅拌中加入乙醇，至醇浓度70%，4℃以下静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至在60℃热测时相对密度为1.25-1.30 的清膏，与步骤（1）的醇提清膏混合，65-70℃烘干；

（4）将步骤（3）所得干膏粉碎成100目粉，加70%乙醇适量制粒，喷入桂枝、陈皮挥发油，混匀，装胶囊，即得。

本发明中药组合物中，作为活性组分的原料药的拉丁名及其加工方法来自《中药大辞典》（1977年7月，第一版，上海科学技术出版社）和《中国药典》（2005年版，化学工业出版社）。

本发明中药组合物还可以按常规的制剂工艺，例如，范碧亭《中药药剂学》（上海科学出版社1997年12月第1版）记载的制备工艺，制成药剂学可接受的任意常规剂型，例如胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液或丸剂等。

本发明的应用中，所述中药组合物制剂剂型为胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液或丸剂，为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括：PEG6000，PEG4000，虫蜡等。为使上述剂型能够实现中药药剂学，需在制备这些剂型时加入药学可接受的其它辅料（范碧亭《中药药剂学》，上海科学出版社1997年12月第1版中各剂型记载的辅料）。

本发明中药组合物的用量，按活性组分原料药总重量计，为4-20克/日，可每日服用一次，优选为分2-4次服用，还优选为6-12克/日，分2-4次服用，更优选为7.59克/日，分3次服用。

为阐明本发明中药组合物治疗糖尿病肾病的活性，用按实施例1方法所制得的药物（以下称本发明药物）进行了下列试验。

实验材料

1.1 造模

SPF级SD大鼠，雄性，260~300g，200只，北京维通利华实验动物技术有限公司。取180只大鼠，禁食不禁水12h，单次腹腔注射60mg/kg 链脲佐菌素(STZ)造模，1ml/100g。另取20只大鼠，单次腹腔注射等体积0.1mol/L的柠檬酸盐缓冲液作为空白组。72小时后对造模大鼠尾部采血测量血糖，选取血糖值>16.7mmol/L的大鼠作为DM大鼠。

1.2分组：如表1造模后的大鼠随机分为5组，另设正常对照组。

表1 本发明药物对大鼠DN的影响实验动物分组及给药情况

分组	动物数（只）	剂量	相当于拟临床人用量的倍数
				空白组	20
模型组	25
				缬沙坦组	25	10mg/kg	8
本发明药物高剂量组	25	1.2g生药/kg	16
				本发明药物中剂量组	25	0.6g生药/kg	8
本发明药物低剂量组	25	0.3g生药/kg	4

本发明药物由石家庄以岭药业股份有限公司提供，阳性药缬沙坦，北京诺华制药有限公司生产，模型组和正常对照组大鼠在相同时间点给予等量0.5%CMC-Na灌胃。STZ，sigma提供。生化试剂总蛋白、白蛋白、肌酐、尿素等均来自北京九强生物技术有限公司。

观测的指标、时间和内容

1.3.1 每周测体重和摄食量、饮水量，单位g/100g体重。

1.3.2 给药的第7周测量24h尿量。将大鼠置于代谢笼中，每笼1只，适应1天后，用锥形瓶收集24h尿液。检测尿肌酐。

1.3.3 测尿量的同时取血立即测量血糖。其他血样4℃离心，-20℃保存血清。测量总蛋白（TP）、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、血清肌酐（SCr）和尿肌酐。计算肌酐清除率（CCr，ml/kg/min）=[尿肌酐（μmol/L）×尿量（ml）/血清肌酐（μmol/L）]×[1000/体重（g）] ×[1/1440（min）]。

1.3.4 解剖大鼠，取肾脏，称量肾脏重量，计算肾脏指数（g/100g体重）。取肾脏HE染色，做病理检查。

仪器系统

稳豪型血糖试纸，强生（上海）医疗器械有限公司。

Biofuge PrimoR 高速冷冻离心机，德国贺利氏。

7080型生化分析仪，日本日立公司生产。

统计方法

用SPSS11.5软件做统计分析。用Shapiro-Wilk方法做正态性检验，用2-sided Dunnett方法做One-Way ANOVA检验，用Mann-Whitney U方法做Nonparametric Tests。

结果

2.1对DN大鼠体重、摄食量和饮水量的影响

在造模后1~7周，与空白组比较，模型组大鼠体重降低（P<0.01）。与模型组比较，缬沙坦组及本发明药物各剂量组的动物体重无显著统计学差异，阳性药组大鼠体重下降比模型组还多，本发明药物各剂量组大鼠体重比模型组有所缓和。在造模后1~7周，与空白组比较，模型组大鼠的摄食量和饮水量大幅度增加。与模型组比较，各给药组大鼠摄食量和饮水量无明显变化。见表2-4。

表2对DN大鼠体重的影响(                                                ±s，g)

组别

一周

二周

三周

四周

五周

六周

七周

模型组

276±45##

274±44##

272±49##

263±50##

259±30##

258±33##

245±35##

空白组

379±44

403±40

430±41

432±41

460±47

469±44

474±43

缬沙坦

263±28

271±30

252±36

259±31

237±32

233±41

239±30

高剂量

272±33

274±32

265±40

270±36

266±32

281±32

282±41

中剂量

275±35

282±34

275±42

268±45

267±33

266±43

266±33

低剂量

259±28

268±27

266±21

263±25

267±31

265±35

263±34

注：与空白组比较，## P<0.01

表3对DN大鼠摄食量的影响(

±s, g/100g体重)

组别	一周	二周	三周	四周	五周	六周	七周
								模型组	18.13	16.30	15.78	16.98	18.03	16.04	16.93
空白组	7.03	6.35	6.60	5.95	5.37	6.02	6.03
								缬沙坦	15.80	16.76	14.56	16.78	16.31	19.71	18.71
高剂量	13.51	14.73	13.78	13.07	13.44	14.28	15.90
								中剂量	14.88	15.71	12.99	14.14	15.49	16.23	16.09
低剂量	15.79	15.3	13.49	15.38	14.42	16.60	16.96

表4对DN大鼠饮水量的影响(

±s, g/100g体重)

组别	一周	二周	三周	四周	五周	六周	七周
								模型组	94.54	77.74	64.23	74.58	73.44	76.19	79.97
空白组	10.71	10.24	8.98	8.87	8.37	6.97	6.88
								缬沙坦	72.10	76.86	59.33	82.26	89.44	77.69	88.55
高剂量	72.40	74.15	61.51	68.26	73.00	61.87	72.39
								中剂量	80.09	80.47	63.00	66.18	86.45	67.20	76.16
低剂量	90.40	85.99	67.36	76.90	71.89	76.18	73.52

2.2对DN大鼠24小时尿量的影响

与空白组比较，模型组大鼠24小时尿量增加（P<0.01）。与模型组比较，缬沙坦组对大鼠24小时尿量无影响，本发明药物可减少DM大鼠尿量，其中高、低剂量组尿量与模型组相比明显减少（P<0.05）。见表5。

表5对DN大鼠24小时尿量的影响(

±s)

组别	N	24h尿量（ml）
			模型组	19	118.5±29.8##
空白组	20	13.3±4.0
			缬沙坦	8	106.1±39.0
高剂量	12	77.7±37.4*
			中剂量	18	82.4±42.4
低剂量	14	75.07±35.0*

注：与空白组比较，## P<0.01；与模型组比较，* P<0.05

2.3对DN大鼠肾脏指数和血糖的影响

    与空白组比较，模型组大鼠肾脏指数和血糖增加（P<0.01）。与模型组比较，缬沙坦组和本发明药物各剂量组对大鼠肾脏指数和血糖有下降趋势，但无明显统计学差异。见表6。

表6对DN大鼠肾脏指数和血糖的影响(±s)

组别	N	肾脏指数（g/100g体重）	血糖（mmol/L）
				模型组	17	0.6270±0.0582##	32.2±2.4##
空白组	20	0.3336±0.0379	13.1±2.3
				缬沙坦	7	0.6004±0.0553	28.4±0.0
高剂量	12	0.5744±0.0469	27.4±0.0
				中剂量	17	0.5906±0.0949	27.2±4.1
低剂量	14	0.6081±0.0735	29.8±6.1

注：与空白组比较，## P<0.01

2.4对DN大鼠生化指标的影响

与空白组比较，模型组大鼠血清BUN和CRE增加（P<0.01），TP 、ALB和CCr降低（P<0.01）。与模型组比较，缬沙坦组大鼠血清BUN降低（P<0.01），CCr增加（P<0.05）。与模型组比较，本发明药物高剂量组大鼠血清BUN降低（P<0.01）；中剂量组大鼠血清BUN降低（P<0.01），CCr和TG增加（P<0.05）；低剂量组大鼠血清BUN降低（P<0.01）。结果见表7。

表7对DN大鼠生化指标的影响(

±s)

组别

N

BUN(mmol/L)

CRE(μmol/L)

CCr(ml/kg/min)

TP(g/L)

Alb(g/L)

模型组

16

23.52±8.06##

117.4±20.5##

7.16±3.26##

45.71±10.41##

23.51±4.58##

空白组

20

7.08±1.00

83.5±15.0

13.70±1.12

58.08±4.58

31.66±2.05

缬沙坦

7

11.29±1.79**

107.1±10.6

9.04±2.50*

54.46±7.45

26.57±2.31

高剂量

12

13.39±2.28**

109.0±15.1

8.73±2.95

53.01±6.58

26.00±3.71

中剂量

16

10.39±2.67**

100.4±22.0*

12.58±4.38*

54.83±8.76

26.68±3.59

低剂量

10

11.03±3.50**

108.6±11.6

9.29±2.28

47.07±10.49

23.14±4.27

注：与空白组比较，## P<0.01；与模型组比较，** P<0.01，* P<0.05

2.5对DN大鼠病理的影响

模型组肾脏形态学表现主要为肾小球高过滤所致的肾小球肥大，兼有糖原蓄积导致的肾小管上皮细胞空泡变性以及颗粒变性。肾小球毛细血管网扩张充血比较明显。

本发明药物低剂量组、缬沙坦组，肾脏形态学表现与模型组相比较均无明显可见差异。本发明药物中、高剂量组，肾小球肥大，肾小管上皮细胞空泡变性以及颗粒变性等病变也可见到，但程度较轻，主要形态学改变为肾小管弥漫性肿胀。

结论

本发明药物可改善STZ致大鼠糖尿病肾病模型肾功能，与阳性药物缬沙坦作用相当，表明本发明药物临床可用于糖尿病肾病的治疗。

具体实施方式

实施例1：本发明药物胶囊剂的制备

处方：

黄芪450g    附子112.5g  人参225g  丹参225g  葶苈子150g

香加皮180g  泽泻225g    红花90g   玉竹75g   陈皮75g  桂枝90g

制备方法：

（1）按照处方比例称取黄芪、葶苈子、泽泻、人参、香加皮，加8倍量70%乙醇回流提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至在60℃热测时相对密度为1.25-1.30的清膏，备用；

（2）按照处方比例称取桂枝、陈皮，提取挥发油，提油后的水溶液滤过，备用，残渣再加8倍量水煎煮1小时，滤过，合并水煎液，备用；

（3）按照处方比例称取附子、丹参、玉竹、红花，加水9倍量，煎煮2次，每次2小时，合并提取液，滤过，与步骤（2）中桂枝、陈皮水煎液合并，浓缩至在60℃热测时相对密度为1.25-1.30 的清膏，搅拌中加入乙醇，至醇浓度70%，4℃以下静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至在60℃热测时相对密度为1.25-1.30 的清膏，与步骤（1）的醇提清膏混合，65-70℃烘干；

（4）干膏混合粉碎成100目粉，加70%乙醇适量制粒，喷入桂枝、陈皮挥发油，混匀，装胶囊，制成1000粒，即得。

实施例2：本发明药物片剂的制备

处方：

黄芪150g  附子40g  人参225g  丹参225g  葶苈子50g

香加皮180g  泽泻75g  玉竹75g  桂枝30g  红花90g  陈皮25g

制备方法：

（1）按照处方比例称取黄芪、葶苈子、泽泻、人参、香加皮，加8倍量70%乙醇回流提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至在60℃热测时相对密度为1.25-1.30的清膏，备用；

（2）桂枝、陈皮按照处方量蒸馏提取挥发油，提油后的水溶液滤过，备用，残渣再加8倍量水煎煮1小时，滤过，合并水煎液，备用；

（3）附子、丹参、玉竹、红花加水9倍量煎煮2次，每次2小时，合并提取液，滤过，与步骤（2）中桂枝、陈皮水煎液合并，浓缩至在60℃热测时相对密度为1.25-1.30 的清膏，搅拌中加入乙醇，至醇浓度70%，4℃以下静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至在60℃热测时相对密度为1.25-1.30的清膏，与步骤（1）的醇提清膏混合，65-70℃烘干；

（4）干膏混合粉碎成100目粉，加70%乙醇适量制粒，喷入桂枝、陈皮挥发油，混匀，按常规制剂方法制成片剂。

实施例3：本发明药物口服液的制备

处方：

黄芪250g  附子112.5g  党参200g   丹参120g   葶苈子135g

南五加皮150g  泽泻200g  玉竹60g  桂枝75g  红花75g  陈皮60g

制备方法：按常规制剂方法制成口服液。

Claims (7)

1.一种中药组合物在制备治疗糖尿病肾病的药物中的应用，其特征在于所述中药组合物由如下重量份的原料药制成：

黄芪 150-450份、附子40-120份、人参或党参75-225份、丹参75-225份、葶苈子50-150份、香加皮或南五加皮60-180份、泽泻75-225份、

玉竹25-75份、桂枝30-90份、红花30-90份、陈皮25-75份。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述中药组合物由如下重量份的原料药制成：

黄芪450份、附子112.5份、人参或党参225份、丹参225份、

葶苈子150份、香加皮或南五加皮180份、泽泻225份、玉竹75份、

桂枝90份、红花90份、陈皮75份。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述中药组合物由如下重量份的原料药制成：

黄芪150份、附子40份、人参或党参225份、丹参225份、

葶苈子50份、香加皮或南五加皮180份、泽泻75份、玉竹75份、

桂枝30份、红花90份、陈皮25份。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述中药组合物由如下重量份的原料药制成：

黄芪250份、附子112.5份、人参或党参200份、丹参120份、

葶苈子135份、香加皮或南五加皮150份、泽泻200份、玉竹60份、

桂枝75份、红花75份、陈皮60份。

5.如权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于，所述中药组合物的活性成分由下列步骤制成：

（1）将黄芪、葶苈子、泽泻、人参或党参、香加皮或南五加皮用7-9倍量70%乙醇提取，滤过，浓缩至在60℃热测时相对密度为1.25-1.30的清膏； 

（2）提取桂枝、陈皮的挥发油；

（3）附子、丹参、玉竹、红花加6-10倍量水煎煮2次，每次2小时，合并提取液，滤过；桂枝、陈皮提油后的水溶液滤过，收集水溶液滤液，再加6-10倍量水煎煮残渣1小时，滤过，合并水溶液；将上述所得的各种水溶液合并，浓缩至相对密度为1.25-1.30清膏，放冷，搅拌中加入乙醇，至醇浓度70%，静置，滤过，滤液浓缩至在60℃热测时相对密度为1.25-1.30的清膏。

6.如权利要求1-4中任一项所述的应用，其特征在于，所述中药组合物作为活性成分的药物制剂为胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液或丸剂。

7.根据权利要求6所述药物胶囊剂的制备方法，其特征在于，它是由以下步骤组成：

（1）按比例称取黄芪、葶苈子、泽泻、人参或党参、香加皮或南五加皮，加入8倍量70%乙醇回流提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至在60℃热测时相对密度为1.25-1.30的清膏，备用；

（2）按比例称取桂枝、陈皮，提取挥发油，提油后的水溶液滤过，备用，残渣再加8倍量水煎煮1小时，滤过，合并水煎液，备用；

（3）按比例称取附子、丹参、玉竹、红花，加水9倍量，煎煮2次，每次2小时，合并提取液，滤过，与步骤（2）中桂枝、陈皮水煎液合并，浓缩至在60℃热测时相对密度为1.25-1.30 的清膏，搅拌中加入乙醇，至醇浓度70%，4℃以下静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至在60℃热测时相对密度为1.25-1.30的清膏，与步骤（1）的醇提清膏混合，65-70℃烘干；

（4）将步骤（3）所得干膏粉碎成100目粉，加70%乙醇适量制粒，加入桂枝、陈皮挥发油，混匀，装胶囊，即得。