CN102835666B - 用于治疗胃溃疡的乳酸菌菌株的食品组合物以及医药组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种食品组合物以及医药组合物，特别是一种用于治疗胃溃疡的乳酸菌菌株的食品组合物以及医药组合物。
Description
技术领域
本发明涉及一种食品组合物以及医药组合物，特别是一种用于治疗胃溃疡的乳酸菌菌株的食品组合物以及医药组合物。
背景技术
胃幽门螺旋杆菌在1982年时，由Marshall及Warren所发现与消化器官的溃疡性发炎有关。消化器官的溃疡性发炎一直以来认为因压力与生活型态导致胃液分泌过盛，使溃疡性发炎反复发生。所以对于此疾病的治疗一直朝向抑制胃液分泌或中和胃液酸度，让疾病获得缓解。直至1982年发现胃幽门螺旋杆菌的存在，才开始发展抗生素的治疗，缩短了消化性溃疡疾病治疗的时程。2005年时，Marshall及Warren以“胃幽门螺旋杆菌及其在发炎与消化器官溃疡疾病上所扮演的角色(the bacterium Helicobacter pylori and its role in gastritis andpeptic ulcer disease)”一题，获得诺贝尔医学奖，直接证明此贡献对于人类医学上是十分重大的。
消化性溃疡疾病在现今工商社会是层出不穷的。现代人的压力、生活型态以及饮食无法定时定量为主因。在消化性溃疡病人身上，多数伴随胃幽门螺旋杆菌的感染。病人对于抗生素的治疗必须要持续一段时间的延续性，但经常因繁忙的生活而有所忽略，导致菌体有可能产生抗药性。再者，使用抗生素的治疗会一并消灭人体内的有益菌，因而对于人体引发不良的症状。
以药物治疗胃幽门螺旋杆菌通常得并用多种药物，这些药物有抗生素，如四环霉素(amoxicillin)、巨环类抗生素(metronidazole)等、铋盐(bismuth)、质子泵阻断剂(proton pump inhibitor)，如losec、takepron。单独使用一种抗生素易产生抗药性，还会让这些抗药的菌种趁机坐大，收不到任何效果，故通常会选用两种抗生素再加上铋盐或是质子泵阻断剂，也就是“三合一疗法”。但铋盐的效果似乎不如质子泵阻断剂来的好，故在中国台湾也少用铋盐。一般疗程为两周，胃幽门螺旋杆菌根除率可达90％。如果只用一种抗生素外加质子泵阻断剂，则根除率减为80％～85％。目前在中国台湾，健保给付也是以两周为限，除非有特殊病例需要延长治疗或再次治疗。除了以上的药物以外，也有使用乙型抗组织氨药物取代质子阻断剂，究竟如何选择最佳的药物组合，必需视病人的状况而定。但是这种三合一疗法也有其缺点在，包括副作用的产生，如呕心、腹泻、胀气、晕眩等，常因此影响到病人服药的顺服性。
一般食用含乳酸菌(LAB)的产品仅具有调整肠道的健康效果，虽然有数以万计的乳酸菌菌株存在自然界，但仅有少数乳酸菌株具有抑制胃幽门螺旋杆菌活性的特质。少数这些菌株所具有的耐酸与耐胆盐能力、吸附胃黏膜表皮细胞的能力及在通过肠胃道后仍可存活的能力等特性，是筛选有促进健康效果的菌株时的重要依据。时至今日，仅有少数几株经证明其具有抑制胃幽门螺旋杆菌活性效果的乳酸菌菌株被确认出来。而乳酸菌对身体健康的功能在于菌株(strain)的特异性而非菌种(species)，此种对于人的身体健康有特殊功效的菌株称为功能性益生菌(Guidelines for the evaluation of probiotics in food；Report ofjoint FAO/WHO working group on drafting guidelines for the evaluation ofprobiotics in food；London Ontario，Canada April 30 and May 1，2002：1-7)。
国内外有许多乳酸菌与胃幽门螺旋杆菌反应有关的文献报导。在针对乳酸菌抑制胃幽门螺旋杆菌活性的能力进行体外的研究方面，由益生菌所产生的结合型亚麻油酸，经由分解IKK-γ(IκB kinase；IκB激酶)及Hsp90(Heat shockprotein 90；热休克蛋白90)复合体，启动NF-κB(Nuclear factor-kappaB；核转录因子-κB)信号传递链，在被胃幽门螺旋杆菌感染且发炎的胃部黏膜表皮细胞，产生抗发炎活性(Jung M.Kim，2008)。活性乳酸菌Lactobacillus plantarumMLBPL1，Lactobacillus rhamnosus GG，Lactococcus lactis在细胞上可减少胃幽门螺旋杆菌的附着约50％，且活性乳酸菌可以抑制被胃幽门螺旋杆菌感染的细胞产生IL-8(Interleukin-8；白细胞介素-8)，降低细胞分泌IL-8的浓度，有助于减少细胞的发炎反应及胃幽门螺旋杆菌接受器CD74的产生(S.Rokka，2008)。
发明内容
本发明一方面广义的包含由下列任一种生物性培养物：唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivarius)AP-32菌株，中国典型培养物保藏中心保藏编号CCTCC NO：M 2011127及约氏乳酸杆菌(Lactobacillus johnsonii)MH-68菌株，中国典型培养物保藏中心保藏编号CCTCC NO：M 2011128，以及生理上可接受的赋形剂或稀释剂所组成的食品组合物或医药组合物。
在另一项具体实施例中，增强抗胃幽门螺旋杆菌能力的生理上可接受的下列任一种菌株的同种或突变种的生物性培养物：唾液乳酸杆菌AP-32菌株，中国典型培养物保藏中心保藏编号CCTCC NO：M 2011127以及约氏乳酸杆菌MH-68菌株，中国典型培养物保藏中心保藏编号CCTCC NO：M 2011128。
又，另一项具体实施例中，本发明可广义的包括经由乳酸菌菌株与胃幽门螺旋杆菌竞争、抑制分析及动物试验、人体临床试验所证实具有抑制胃幽门螺旋杆菌活性的任一种前述生物性培养物。
本发明亦可广义的包括本发明说明书中分开或总合说明的部分、构成要件与特征，及任何包含所述部分、构成要件与特征中任何一种或更多种的任何或全部组合，且若本文所述及的明确完整事物已于与本发明有关的相关技术中出现已知的同等物时，该已知的同等物将如同独立事项并入本文中。
附图说明
图1显示，分别以108至109个cfu(Colony-Forming Units)唾液乳酸杆菌AP-32菌株CCTCC NO：M 2011127或约氏乳酸杆菌MH-68菌株CCTCC NO：M2011128与108至109个cfu(Colony-Forming Units)胃幽门螺旋杆菌在厌氧环境下共同培养37℃，24小时后，取上清液进行尿素酶活性分析试验。正对照组为Amoxicillin抗生素。抗生素浓度为240μg/mL时，并无法抑制胃幽门螺旋杆菌分泌尿素酶代谢产生氨的能力，所以上清液呈现碱性，表示上清液内含高浓度的氨。L.gasseri、L.rhamnnosus及240μg/mL抗生素，皆比唾液乳酸杆菌AP-32菌株CCTCC NO：M 2011127、约氏乳酸杆菌MH-68菌株CCTCC NO：M2011128及1200μg/mL抗生素高出近5倍的氨浓度。
图2显示，分别以108至109个cfu(Colony-Forming Units)唾液乳酸杆菌AP-32菌株CCTCC NO：M 2011127或约氏乳酸杆菌MH-68菌株CCTCC NO：M2011128与108至109个cfu(Colony-Forming Units)胃幽门螺旋杆菌在厌氧环境下共同培养37℃，24小时后，取上清液进行尿素酶活性分析试验。正对照组为Amoxicillin抗生素，负对照组为E.coli HB101，计算乳酸菌菌株及抗生素的抑制能力。计算方法为：(E.coli HB101与胃幽门螺旋杆菌共同培养后的上清液吸光值-乳酸菌与胃幽门螺旋杆菌共同培养后的上清液吸光值)/E.coli HB101与胃幽门螺旋杆菌共同培养后的上清液吸光值×100％。计算的数值即为菌株抑制胃幽门螺旋杆菌生物活性范围百分比。唾液乳酸杆菌AP-32菌株CCTCC NO：M 2011127、约氏乳酸杆菌MH-68菌株CCTCC NO：M 2011128及1200μg/mL抗生素抑制胃幽门螺旋杆菌的能力比其它三组高出76％之多。
图3显示，8位病人服用唾液乳酸杆菌AP-32菌株CCTCC NO：M 2011127及约氏乳酸杆菌MH-68菌株CCTCC NO：M 2011128胶囊前后，其13C呼气试验数值的分布及变化。病人服用唾液乳酸杆菌AP-32菌株CCTCC NO：M2011127及约氏乳酸杆菌MH-68菌株CCTCC NO：M 2011128胶囊前后，其13C呼气试验数值有显着降低，明确显示唾液乳酸杆菌AP-32菌株CCTCC NO：M2011127及约氏乳酸杆菌MH-68菌株CCTCC NO：M 2011128有抑制人体内胃幽门螺旋杆菌的生长及生理活性。
图4显示，8位病人服用唾液乳酸杆菌AP-32菌株CCTCC NO：M 2011127及约氏乳酸杆菌MH-68菌株CCTCC NO：M 2011128胶囊前后，其13C呼气试验数值的平均值±标准差。病人服用唾液乳酸杆菌AP-32菌株CCTCC NO：M2011127及约氏乳酸杆菌MH-68菌株CCTCC NO：M 2011128胶囊前后，其13C呼气试验数值有显着降低，明确表达唾液乳酸杆菌AP-32菌株CCTCC NO：M2011127及约氏乳酸杆菌MH-68菌株CCTCC NO：M 2011128有抑制人体内胃幽门螺旋杆菌的生长及生理活性。
具体实施方式
本发明可广义的包含由下列任一种乳酸菌菌株，其选自以下任一或多种组合的生物性培养物：唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivarius)AP-32菌株，中国典型培养物保藏中心保藏编号CCTCC NO：M 2011127及约氏乳酸杆菌(Lactobacillus johnsonii)MH-68菌株，中国典型培养物保藏中心保藏编号CCTCC NO：M 2011128。
许多文献指出益生菌可以分泌大量酸性物质，帮助已感染胃幽门螺旋杆菌病人平衡胃内的胃液pH值、破坏胃幽门螺旋杆菌侵蚀细胞后所形成的氨、以及与胃幽门螺旋杆菌竞争生存的空间，以达到抑制胃幽门螺旋杆菌活性的功效。
本发明所述的乳酸菌菌株的冷冻干燥培养物已保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址为中国武汉。保藏的详细资料如表1所示：
表1
如表1所列已保藏的两株乳酸菌已发现具有抗胃幽门螺旋杆菌的能力，包括抑制胃幽门螺旋杆菌的活性、对于胃幽门螺旋杆菌抗生素治疗所引起的副作用(例如腹泻等)以及胃部不舒服症状(例如胃胀气、胃酸逆流等)有减缓及治疗的功能。
实施例1：抗胃幽门螺旋杆菌的乳酸菌的形态学以及一般性质。
根据16S rDNA序列分析以及API细菌鉴定系统分析结果来确认菌株在分类学上的特征。发现本发明所述的两株乳酸菌分别为唾液乳酸杆菌以及约氏乳酸杆菌。上述菌株在形态学及一般性质上的特征详细列于表2：
表2
实施例2：抗胃幽门螺旋杆菌的乳酸菌对抑制胃幽门螺旋杆菌分解尿素产生氨及二氧化碳的活性的作用，主要为检测氨的浓度及抑制胃幽门螺旋杆菌的百分比(以液体培养的尿素酶活性分析试验为体外功效验证平台)。
检测本发明的抗胃幽门螺旋杆菌的乳酸菌株-唾液乳酸杆菌AP-32菌株CCTCC NO：M 2011127以及约氏乳酸杆菌MH-68菌株CCTCC NO：M 2011128对尿素酶的抑制效果，其是将胃幽门螺旋杆菌与前述抗胃幽门螺旋杆菌的乳酸菌分别共同培养后测定培养基内氨的浓度，藉此来验证上述菌株的抗胃幽门螺旋杆菌的能力。使用如下的实验步骤：
1.培养胃幽门螺旋杆菌的菌液到达适量的菌数浓度。
2.取适量胃幽门螺旋杆菌的菌液加入适量的乳酸菌培养液的菌液或适量的胃幽门螺旋杆菌的菌液加入适量的Amoxicillin(抑制幽门杆菌生长的正对照组)。
3.混合均匀后将1mL液体加入斜面培养基作双相培养法，37℃厌氧环境培养24小时。
4.将步骤3的菌液离心3000rpm、10分钟，取上清液，进行尿素酶活性分析试验。
5.配制尿素酶反应缓冲液：20％urea+0.012％phenol red within PBS，pH6.5。
6.取10μL菌液的上清液加入300μL尿素酶反应缓冲液放入酶联免疫分析法(ELISA)培养皿中，37℃反应1小时。
7.测量550nm的吸光值，需以尿素酶反应缓冲液作为空白对照组。吸光值愈高，液体愈红愈碱，代表胃幽门螺旋杆菌活性愈好，分泌的尿素酶愈多。
数据的统计分析如表3、表4及图1、图2所示，以平均值±标准差(Mean±SD)表示。图1及图2所示为：当分别以108至109个cfu(Colony-Forming Units)唾液乳酸杆菌AP-32菌株CCTCC NO：M 2011127或约氏乳酸杆菌MH-68菌株CCTCC NO：M 2011128与108至109个cfu(Colony-Forming Units)胃幽门螺旋杆菌在厌氧环境下共同培养37℃24小时后，取上清液进行尿素酶活性分析试验。正对照组为Amoxicillin抗生素，负对照组为E.coli HB101。
由图1所示，抗生素浓度为240μg/mL时，并无法抑制胃幽门螺旋杆菌分泌尿素酶代谢产生氨的能力，所以上清液呈现碱性，即表示上清液内含高浓度的氨。L.gasseri、L.rhamnnosus及240μg/mL抗生素，皆比唾液乳酸杆菌AP-32菌株CCTCC NO：M 2011127、约氏乳酸杆菌MH-68菌株CCTCC NO：M2011128及1200μg/mL抗生素高出近5倍的氨浓度，显示L.gasseri、L.rhamnnosus及240μg/mL抗生素并未使胃幽门螺旋杆菌失去生物活性。
图2以E.coli HB101作为负对照组，计算乳酸菌菌株及抗生素的抑制能力。计算方法为：(E.coli HB101与胃幽门螺旋杆菌共同培养后的上清液吸光值-乳酸菌与胃幽门螺旋杆菌共同培养后的上清液吸光值)/E.coli HB101与胃幽门螺旋杆菌共同培养后的上清液吸光值×100％。计算的数值即为菌株抑制胃幽门螺旋杆菌生物活性范围的百分比。如图2所示，唾液乳酸杆菌AP-32菌株CCTCCNO：M 2011127、约氏乳酸杆菌MH-68菌株CCTCC NO：M 2011128以及1200μg/mL抗生素抑制胃幽门螺旋杆菌的能力比其它三组高出76％之多，显示唾液乳酸杆菌AP-32菌株CCTCC NO：M 2011127、约氏乳酸杆菌MH-68菌株CCTCC NO：M 2011128有助于降低胃幽门螺旋杆菌的生物活性并进一步抑制胃幽门螺旋杆菌的生长。表3及表4为本发明的菌株及对照组分别与胃幽门螺旋杆菌培养，其上清液的吸光值以及抑菌范围百分比(means±SD)：
表3 上清液的吸光值，表示上清液内含氨浓度的多寡。
表4 抑制胃幽门螺旋杆菌生物活性范围的百分比。
实施例3；抗胃幽门螺旋杆菌的乳酸菌in house人体临床试验预试验。
胃幽门螺旋杆菌会分泌尿素酶，分解尿素，产生氨及二氧化碳。因此，13C呼气试验是使用此特性发展出来的，此方法的原理是胃幽门螺旋杆菌在体内产生尿素酶，用13C或14C标记的尿素由受试者服下后，即分解产生带同位素标记的二氧化碳，收集呼气标本，用液体闪烁记数器或用气体核素质谱仪对标记的二氧化碳，灵敏度高，可定量，患者无痛，方法简单快速，对检测胃幽门螺旋杆菌是否根治十分可靠。但因14C有少量放射性物质，故目前均用13C尿素呼气实验法。以抽血检验方式收集16位确定曾感染胃幽门螺旋杆菌病人，进行13C呼气试验，其中有8位病人确定为感染胃幽门螺旋杆菌病人：
1.确定病人截至目前为止并无胃溃疡或胃穿孔的重大症状。
2.试验前四周停止服用任何与乳酸菌相关的产品。
3.服用唾液乳酸杆菌AP-32菌株CCTCC NO：M 2011127以及约氏乳酸杆菌MH-68菌株CCTCC NO：M 2011128胶囊，每颗胶囊的含菌量为2×109cfu/capsule(Colony-Forming Units/capsule)。早晚各一颗，持续服用4周。
4.四周服用完毕，停用两周后进行13C呼气试验。
5.观察服用前后13C呼气试验数值的变化。
数据的统计分析如表5及图3、图4所示，图3为病人13C呼气试验数值分布情形；图4为13C呼气试验数值，以Mean±SD表示。图3所示为8位病人服用唾液乳酸杆菌AP-32菌株CCTCC NO：M 2011127及约氏乳酸杆菌MH-68菌株CCTCC NO：M 2011128胶囊前后，其13C呼气试验数值的分布及变化。如图4所示，8位病人服用唾液乳酸杆菌AP-32菌株CCTCC NO：M2011127及约氏乳酸杆菌MH-68菌株CCTCC NO：M 2011128胶囊前后，其13C呼气试验数值的平均值±标准差，结果显示病人服用唾液乳酸杆菌AP-32菌株CCTCC NO：M 2011127及约氏乳酸杆菌MH-68菌株CCTCC NO：M 2011128胶囊后，其13C呼气试验数值有显着降低，明确显示唾液乳酸杆菌AP-32菌株CCTCC NO：M 2011127及约氏乳酸杆菌MH-68菌株CCTCC NO：M 2011128有抑制人体内胃幽门螺旋杆菌的生长及生理活性。表5所示为病人服用唾液乳酸杆菌AP-32菌株CCTCC NO：M 2011127及约氏乳酸杆菌MH-68菌株CCTCCNO：M 2011128胶囊前后，13C呼气试验数值(means±SD)：
表5人体临床试验预试验，服用唾液乳酸杆菌AP-32菌株CCTCC NO：M2011127及约氏乳酸杆菌MH-68菌株CCTCC NO：M 2011128胶囊前后，13C呼气试验数值。
乳酸菌要发挥抗胃幽门螺旋杆菌的效果除了产酸能力外，更要确认菌株能够在人体内发挥其与胃幽门螺旋杆菌竞争抑制作用，因此，进行人体临床试验是必要的手段。经由人体临床试验预试验结果，本发明的抗胃幽门螺旋杆菌乳酸菌可以提供治疗或舒缓胃幽门螺旋杆菌感染后所造成症状的医疗用途。本发明所描述的抗胃幽门螺旋杆菌乳酸菌可同时降低胃幽门螺旋杆菌生理活性并抑制其生长。本发明的一个目标就是继续朝向达成这些希求或至少提供大众在胃幽门螺旋杆菌治疗上除抗生素外的新选择，本发明找出对人体无副作用且有益健康的抗胃幽门螺旋杆菌乳酸菌来作为胃幽门螺旋杆菌治疗的新选择。
以上所述的实施例仅是为说明本发明的技术思想及特点，其目的在使本领域技术人员能够了解本发明的内容并据以实施，不能以之限定本发明的权利要求，即大凡依本发明所揭示的精神所作的均等变化或修饰，仍应涵盖在本发明的权利要求内。
Claims (12)
1.一种食品组合物，其特征在于，包含：
用于治疗胃溃疡的乳酸菌菌株，该菌株选自以下任一或多种组合的生物性培养物：唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivarius)AP-32菌株，保藏编号CCTCCNO:M2011127以及约氏乳酸杆菌(Lactobacillus johnsonii)MH-68菌株，保藏编号CCTCC NO:M2011128，上述菌株均保藏于中国典型培养物保藏中心；以及
生理上可接受的赋形剂或稀释剂。
2.如权利要求1所述的食品组合物，其特征在于，该乳酸菌菌株为唾液乳酸杆菌AP-32菌株，保藏编号CCTCC NO:M2011127。
3.如权利要求1所述的食品组合物，其特征在于，该乳酸菌菌株为约氏乳酸杆菌MH-68菌株，保藏编号CCTCC NO:M2011128。
4.如权利要求1所述的食品组合物，其特征在于，该赋形剂或稀释剂为一种食品。
5.如权利要求4所述的食品组合物，其特征在于，该食品包含奶酪、乳制饮品、乳粉、茶、咖啡或以上的组合。
6.如权利要求4所述的食品组合物，其特征在于，该食品包含发酵乳。
7.如权利要求4所述的食品组合物，其特征在于，该食品包含酸奶。
8.如权利要求1所述的食品组合物，其特征在于，该乳酸菌菌株为具有活性的菌株。
9.一种治疗胃溃疡的医药组合物，其特征在于，包含：
用于治疗胃溃疡的乳酸菌菌株，该菌株选自以下任一或多种组合的生物性培养物：唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivarius)AP-32菌株，保藏编号CCTCCNO:M2011127以及约氏乳酸杆菌(Lactobacillus johnsonii)MH-68菌株，保藏编号CCTCC NO:M2011128，上述菌株均保藏于中国典型培养物保藏中心；以及
医药上可接受的赋形剂或稀释剂。
10.如权利要求9所述的医药组合物，其特征在于，该乳酸菌菌株为唾液乳酸杆菌AP-32菌株，保藏编号CCTCC NO:M2011127。
11.如权利要求9所述的医药组合物，其特征在于，该乳酸菌菌株为约氏乳酸杆菌MH-68菌株，保藏编号CCTCC NO:M2011128。
12.如权利要求9所述的医药组合物，其特征在于，该乳酸菌菌株为具有活性的菌株。
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Effective date of registration: 20180607 Address after: 223200 No. 2, Jing Yi Road, Huaian technical and Economic Development Zone, Jiangsu Patentee after: Jinqiao Biological Technology Co., Ltd. Address before: 234000 outer ring road south of Suzhou Development Zone in Anhui Province Patentee before: Anhui Jin Qiao Biotechnology Co., Ltd. |