CN102830103B - 荧光分子修饰的纳米银探针及其试剂盒与在检测人IgE中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种荧光分子修饰的纳米银探针。纳米银探针以直径为10~30nm的纳米银球为内核，银球外表面键合有荧光分子链和适配体链。本发明还公开了包含上述探针的试剂盒与在检测人IgE中的应用。本发明的纳米银探针耦合荧光增强液的方法能大大提高荧光检测的灵敏度，检测人IgE的线性范围宽从0.5ng/ml至10μg/ml,检测限低，特异性好。此种纳米银探针的合成及修饰方法成熟，荧光增强液廉价易得，两者的联合可以使检测人IgE的灵敏度大大提高。此种信号放大的方法为蛋白质标志物的荧光分析检测提供了一种极好的方法。
Description
技术领域
本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种荧光分子修饰的纳米银探针及其试剂盒与在检测人IgE中的应用。
背景技术
人免疫球蛋白IgE是一种和人的过敏反应密切相关的一种低丰度蛋白，监测人体内IgE的变化，对于疾病的预防和诊断具有重要的意义。常用的检测人IgE的方法有放射免疫测定法和酶联免疫法，放射免疫的缺点是费用高、时间长、放射性同位素易过期而且污染环境，而酶联免疫法的缺点是需要使用双抗体，成本较高，双抗不易得到。适配体是具有三维空间结构能特异性识别目标蛋白质的DNA或RNA分子，合成容易，易于修饰且稳定。我们利用适配体功能化的纳米银可以实现对人IgE的特异识别。
纳米银具有优良的光学特性，当荧光分子距离纳米银一定距离时（最佳距离为8nm），纳米银能够使荧光分子的荧光信号增强，利用纳米银增强荧光的特性，我们合成了同时有适配体分子和荧光分子修饰的纳米银探针来实现对人IgE的识别与检测。我们建立了一种基于纳米银探针和荧光增强液的信号放大方法用于人IgE的高灵敏，特异性分析检测。
发明内容
本发明所要解决的技术问题，是提供一种灵敏的荧光增强技术并适用于人IgE检测的荧光分子修饰的纳米银探针。
本发明还要解决的技术问题，是提供提供包含上述纳米银材料的试剂盒，用于人IgE的检测。
本发明最后要解决的技术问题，是提供上述试剂盒在检测人IgE中的应用。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
一种荧光分子修饰的纳米银探针，它以直径为10~30nm的纳米银球为内核，银球外表面键合有荧光分子链和适配体链；
其中，所述的荧光分子链为5’-SH-AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA-Cy5；
其中，所述的适配体链为：5’-SH-AAAAAAAAAAAAAAA GGGGC ACGTT TATCCGTCCC TCCTA GTGGC GTGCCCC。
上述荧光分子修饰的纳米银探针的制备方法，它包括如下步骤：
(1)在冰浴条件下，将2-20mmol/L硝酸银溶液逐滴加入至3-30mmol/L硼氢化钠溶液中，硝酸银与硼氢化钠的反应摩尔比为1：3，不断搅拌至反应完全，然后补加硼氢化钠溶液，补加的硼氢化钠的摩尔量为上述参与反应的硼氢化钠的摩尔量的7％，继续搅拌至室温，得到纳米银溶液；
(2)将荧光分子链和适配体链按摩尔比(1~99):(1~9)加入步骤(1)得到的纳米银溶液中，静置10~24小时，荧光分子链和适配体链的总摩尔量与纳米银摩尔量之比为(100-1000):1；
所述的荧光分子链，其核苷酸序列为：5’AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA，其5’端由巯基修饰，3’端由Cy5修饰；
所述的适配体链，其核苷酸序列为：5’AAAAA AAAAA AAAAA GGGGC ACGTTTATCC GTCCC TCCTA GTGGC GTGCC CC3’，其5’端由巯基修饰；
(3)向步骤(2)得到的混合体系中加入1×PBS缓冲溶液，使得混合体系中的PBS缓冲溶液的浓度为0.1×PBS，静置3~10小时；
(4)向步骤(3)得到的混合体系中加入1~5mol/L氯化钠溶液，静置2~4小时，重复加入氯化钠溶液与静置的步骤1~4次，使得氯化钠的终浓度为0.1~0.3mol/L；
(5)将步骤(4)得到的混合体系静置24~72小时，取上清液；
(6)将步骤(5)得到的上清液经离心去除上清，取沉淀加入1×PBS缓冲溶液重悬，重复离心与重悬的步骤2~4次，1×PBS缓冲溶液每次的加入体积为待加入的混合体系体积的0.1~5倍；最后离心得到的沉淀用1×PBSM缓冲溶液重悬即得备用探针。
步骤(2)中，荧光分子链和适配体链摩尔比优选为(1~10):(1~1:10)，最优选为3:1；静置时间优选为15~20h，最优选为18h；荧光分子链和适配体链的总摩尔量与纳米银摩尔量之比优选为（200~300）:1，最优选为288:1。
步骤(3)中，PBS缓冲溶液优选为1×PBS，即包含如下物质的水溶液：137mM NaCl，2.7mM KCl，10mM Na2HPO4.12H2O，2mM KH2PO4；静置时间优选为6h。
步骤(4)中，氯化钠溶液的浓度优选为2mol/L；氯化钠的终浓度优选为0.2mol/L；静置时间优选为3h。
步骤(5)中，静置时间优选为48h。
步骤(6)中，所述的离心条件为10000~20000rpm条件下离心10~30分钟，优选15000条件下离心15分钟。所述的1×PBSM配方为1×PBS和1mmol/L MgCl2。
上述荧光分子修饰的纳米银探针在制备检测人IgE的试剂中的应用。
一种用于检测IgE的试剂盒，该试剂盒包含如下试剂：荧光分子修饰的纳米银探针、磷酸盐缓冲液、Tween-20、羊抗人IgE、人IgE、硝酸银、氢醌、牛血清白蛋白、醛基片基。
上述用于检测IgE的试剂盒在检测人IgE中的应用。
利用上述检测IgE的试剂盒检测人IgE含量的具体方法，依次顺序包括如下步骤：
(1)配制溶液：
稀释液：将20×PBS用二次水稀释20倍至1×PBS；
洗涤液：1×PBS溶液按0.05％的体积比加入吐温-20溶液；
阴性对照：将0.1g牛血清白蛋白溶解于100mL1×PBS溶液中，得1mg/ml BSA溶液；
封闭液：将1g牛血清白蛋白溶解于100mL1×PBS溶液中即得10mg/ml BSA封闭液；
底物：用1mg/ml BSA配制所需浓度的羊抗人IgE标准样品溶液；
荧光增强液：18.2mmol/L硝酸银和1.82mmol/L氢醌等体积混合；
探针：用（1×PBSM）溶液配制1.3nmol/L的荧光分子修饰的纳米银探针；其中，1×PBSM配方为1×PBS和1mmol/L MgCl2。
(2)将不同浓度的羊抗人IgE溶液、待测样品和阴性对照在醛基片上点样，分别为25μl，4℃条件下固定过夜；
(3)每孔加入10~200μL封闭液，在37℃条件下封闭1~3小时，用洗涤液荡洗5~15min，洗涤3~4次，拍干；
(4)在不同的孔中加入不同浓度的人IgE标准样品溶液30μL，在其余的孔中加入30μL样品溶液，在37℃条件下反应1小时，用洗涤液荡洗5min，洗涤3~4次，拍干；
(5)每孔加入1.3nmol/L荧光分子修饰的纳米银探针30μL，在37℃条件下反应1~3小时，用洗涤液荡洗5~15min，洗涤3~4次，拍干；
(6)每孔加入30μL荧光增强液，避光反应1~8min，去离子水冲洗3~4遍，拍干；
(7)用Luxscan-10K/A Microarray Scanner生物芯片扫描仪扫描，不同浓度的羊抗人IgE标准样品溶液对应不同的荧光信号强度，得到IgE标准曲线，由标准曲线计算得到样品中人IgE的浓度。
有益效果：本发明的纳米银探针耦合荧光增强液的方法能大大提高荧光检测的灵敏度，不需要通过改变仪器的结构来提高检测性能，巧妙地提高了检测能力。此种探针的合成及修饰方法成熟，荧光增强液廉价易得，两者的联合使用可以得到惊人的结果。为蛋白质的荧光分析检测提供了一种极好的方法。
本发明利用适配体分子对蛋白质的特异性识别作用实现对人IgE的高灵敏特异性检测，对人IgE的分析范围为0.5ng/ml-16ng/ml,且特异性好，人免疫球蛋白IgG、IgM、人血清蛋白HSA没有干扰。我们发展的纳米银簇对Cy5有很好的荧光增强效果，此种荧光增强液独一无二，商品化的银增强溶液虽然能形成银纳米簇，但是没有荧光增强的作用。对于生物分析、荧光示踪、细胞成像和基于银纳米粒子的药物输送与治疗中的金属荧光增强研究，本发明提供了一个坚实的有前景的平台。
附图说明
图1纳米银探针的透射电子显微镜图。
图2为检测高浓度人IgE的浓度信号相关性曲线及扫描图。
图3为检测低浓度人IgE的浓度信号相关性曲线。
图4为检测人IgE的特异性曲线。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1：纳米银探针的制备。
(1)在冰浴的条件下，将2mmol/L的硝酸银以一定的速度滴加至3mmol/L的硼氢化钠溶液中（两者反应摩尔比为1:3），不断搅拌至反应完全，反应完成后补加7％摩尔量的硼氢化钠溶液并加热得到黄色溶液，纳米银的浓度为2.6nM。
(2)将荧光分子链和适配体链按摩尔比3:1加入步骤(1)得到的纳米银溶液中，静置18小时。荧光分子链和适配体链的总摩尔量与纳米银摩尔量之比为288。
所述的荧光分子链，其核苷酸序列为：5’AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA，其5’端由巯基修饰，3’端由Cy5修饰；
所述的适配体链，其核苷酸序列为：5’AAAAA AAAAA AAAAA GGGGC ACGTTTATCC GTCCC TCCTA GTGGC GTGCC CC3’，其5’端由巯基修饰。
(3)向步骤(2)得到的混合体系中加入1×PBS（137mM NaCl,2.7mM KCl,10mM,Na2HPO4.12H2O,2mM KH2PO4）溶液，使PBS的浓度为0.1×，静置6小时。
(4)向步骤(3)得到的混合体系中加入2mol/L氯化钠溶液，每隔3小时加一次氯化钠，静置，使氯化钠的终浓度为0.2mol/L。
(5)将步骤(4)得到的混合体系静置48小时，取上清液。
(6)将步骤(5)得到的上清液经离心去除上清，沉淀加入1×PBS溶液重悬，重复离心与重悬的步骤3次，PBS缓冲溶液每次的加入体积为待加入的混合体系体积的1倍；最后离心得到的沉淀经1×PBSM重悬即得荧光分子修饰的纳米银探针。图1为纳米银探针的透射电子显微镜图，是将纳米银探针溶液直接滴在碳支持膜上采集图像得到。
实施例2：纳米银探针的制备。
(1)在冰浴的条件下，将20mmol/L的硝酸银以一定的速度滴加至30mmol/L的硼氢化钠溶液中（两者反应摩尔比为1:3），不断搅拌至反应完全，反应完成后补加7％摩尔量的硼氢化钠溶液并加热得到黄色溶液，纳米银的浓度为2.6nmol/L。
(2)将荧光分子链和适配体链按摩尔比1:1加入步骤(1)得到的纳米银溶液中，静置10小时。荧光分子链和适配体链的总摩尔量与纳米银摩尔量之比为100。
所述的荧光分子链，其核苷酸序列为：5’AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA，其5’端由巯基修饰，3’端由Cy5修饰；
所述的适配体链，其核苷酸序列为：5’AAAAA AAAAA AAAAA GGGGC ACGTTTATCC GTCCC TCCTA GTGGC GTGCC CC3’，其5’端由巯基修饰。
(3)向步骤(2)得到的混合体系中加入1×PBS（137mM NaCl,2.7mM KCl,10mM,Na2HPO4.12H2O,2mM KH2PO4）溶液，使PBS的浓度为0.1×，静置3小时。
(4)向步骤(3)得到的混合体系中加入1mol/L氯化钠溶液，静置2小时，重复加入氯化钠溶液与静置的步骤1次，使氯化钠的终浓度为0.1mol/L。
(5)将步骤(4)得到的混合体系静置24小时，取上清液。
(6)将步骤(5)得到的上清液经离心去除上清，沉淀加入1×PBS溶液重悬，重复离心与重悬的步骤2次，PBS缓冲溶液每次的加入体积为待加入的混合体系体积的0.1倍；最后离心得到的沉淀经1×PBSM重悬即得荧光分子修饰的纳米银探针。
实施例3：纳米银探针的制备。
(1)在冰浴的条件下，将10mmol/L的硝酸银以一定的速度滴加至20mmol/L的硼氢化钠溶液中（两者反应摩尔比为1:3），不断搅拌至反应完全，反应完成后补加7％摩尔量的硼氢化钠溶液并加热得到黄色溶液，纳米银的浓度为2.6nmol/L。
(2)将荧光分子链和适配体链按摩尔比99:9加入步骤(1)得到的纳米银溶液中，静置24小时。荧光分子链和适配体链的总摩尔量与纳米银摩尔量之比为1000。
所述的荧光分子链，其核苷酸序列为：5’AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA，其5’端由巯基修饰，3’端由Cy5修饰；
所述的适配体链，其核苷酸序列为：5’AAAAA AAAAA AAAAA GGGGC ACGTTTATCC GTCCC TCCTAGTGGC GTGCC CC3’，其5’端由巯基修饰；
(3)向步骤(2)得到的混合体系中加入1×PBS（137mM NaCl,2.7mM KCl,10mM,Na2HPO4.12H2O,2mM KH2PO4）溶液，使PBS的浓度为0.1×，静置10小时。
(4)向步骤(3)得到的混合体系中加入5mol/L氯化钠溶液，静置4小时，重复加入氯化钠溶液与静置的步骤4次，使氯化钠的终浓度为0.3mol/L。
(5)将步骤(4)得到的混合体系静置72小时，取上清液。
(6)将步骤(5)得到的上清液经离心去除上清，沉淀加入1×PBS溶液重悬，重复离心与重悬的步骤4次，PBS缓冲溶液每次的加入体积为待加入的混合体系体积的5倍；最后离心得到的沉淀经1×PBSM重悬即得荧光分子修饰的纳米银探针。
实施例4：用于检测人IgE的试剂盒。
荧光分子修饰的纳米银探针实施例1~3的方法合成；
PBS（购自上海生工生物工程有限公司）及Tween-20（购自天津科美有限公司）用于配制洗涤液；
牛血清白蛋白购自北京博奥森生物技术有限公司；
羊抗人IgE购自Sigma；
人IgE购自于美国Biological；
硝酸银购自于Sigma；
氢醌购自于（南京试剂有限公司）；
醛基片基购自于（上海百傲科技有限公司）。
所有溶液均用高纯水配制。
实施例5：检测高浓度人IgE的方法。
利用实施例4的试剂盒检测人IgE含量的具体方法，依次顺序包括如下步骤：
(1)配制溶液：
稀释液：将20×PBS用二次水稀释20倍至1×PBS；
洗涤液：1×PBS溶液按0.05％的体积比加入吐温-20溶液；
阴性对照：将0.1g牛血清白蛋白溶解于100mL1×PBS溶液中，得1mg/ml BSA溶液；
封闭液：将1g牛血清白蛋白溶解于100mL1×PBS溶液中即得10mg/ml BSA封闭液；
底物：用1mg/ml BSA配制所需浓度的羊抗人IgE标准样品溶液；
荧光增强液：18.2mmol/L硝酸银和1.82mmol/L氢醌等体积混合；
探针：用1×PBSM溶液配制1.3nmol/L的荧光分子修饰的纳米银探针；
(2)将羊抗人IgE和阴性对照物BSA在醛基片上点样，分为为25μl的样品，4℃条件下固定过夜；
(3)每孔加入30μL封闭液，在37℃条件下封闭2小时，用洗涤液荡洗5min，洗涤3次，拍干；
(4)在不同的孔中加入16ng/ml-10μg/ml的人IgE标准样品溶液30μL，在其余的孔中加入30μL样品溶液，在37℃条件下反应1小时，用洗涤液荡洗5min，洗涤3~4次，拍干；
(5)每孔加入1.3nmol/L荧光分子修饰的纳米银探针30μL，在37℃条件下反应1小时，用洗涤液荡洗5min，洗涤3次，拍干；
(6)每孔加入30μL荧光增强液，避光反应8min，去离子水冲洗3遍，拍干；
(7)用Luxscan-10K/A Microarray Scanner生物芯片扫描仪扫描，不同浓度的羊抗人IgE标准样品溶液对应不同的荧光信号强度，得到IgE标准曲线，由标准曲线计算得到样品中人IgE的浓度。结果见图2。
实施例6：检测低浓度人IgE的方法。
利用实施例4的试剂盒检测人IgE含量的具体方法，依次顺序包括如下步骤：
(1)配制溶液：
稀释液：将20×PBS用二次水稀释20倍至1×PBS；
洗涤液：1×PBS溶液按0.05％的体积比加入吐温-20溶液；
阴性对照：将0.1g牛血清白蛋白溶解于100mL1×PBS溶液中，得1mg/ml BSA溶液；
封闭液：将1g牛血清白蛋白溶解于100mL1×PBS溶液中即得10mg/ml BSA封闭液；
底物：用1mg/ml BSA配制所需浓度的羊抗人IgE标准样品溶液；
荧光增强液：18.2mmol/L硝酸银和1.82mmol/L氢醌等体积混合；
探针：用1×PBSM溶液配制1.3nmol/L的荧光分子修饰的纳米银探针；
(2)将羊抗人IgE和阴性对照物BSA在醛基片上点样，分为25μl的样品，4℃条件下固定过夜；
(3)每孔加入30μL封闭液，在37℃条件下封闭2小时，用洗涤液荡洗5min，洗涤3次，拍干；
(4)在不同的孔中加入0.5ng/ml-16ng/ml的人IgE标准样品溶液30μL，在其余的孔中加入30μL样品溶液，在37℃条件下反应1小时，用洗涤液荡洗5min，洗涤3~4次，拍干；
(5)每孔加入1.3nmol/L荧光分子修饰的纳米银探针(1×PBS)，在37℃条件下反应1小时，用洗涤液荡洗5min，洗涤3次，拍干；
(6)每孔加入30μL荧光增强液，避光反应8min，去离子水冲洗3遍，拍干；
(7)用Luxscan-10K/A Microarray Scanner生物芯片扫描仪扫描，不同浓度的羊抗人IgE标准样品溶液对应不同的荧光信号强度，得到IgE标准曲线，由标准曲线计算得到样品中人IgE的浓度。结果见图3。
实施例7：低浓度人IgE的特异性。
试验方法：
(1)配制溶液：
稀释液：将20×PBS用二次水稀释20倍至1×PBS；
洗涤液：1×PBS溶液按0.05％的体积比加入吐温-20溶液；
阴性对照：将0.1g牛血清白蛋白溶解于100mL1×PBS溶液中，得1mg/ml BSA溶液；
封闭液：将1g牛血清白蛋白溶解于100mL1×PBS溶液中即得10mg/ml BSA封闭液；
底物：用1mg/ml BSA配制所需浓度的羊抗人IgE标准样品溶液；
荧光增强液：18.2mmol/L硝酸银和1.82mmol/L氢醌等体积混合；
探针：用1×PBS溶液配制1.3nmol/L的荧光分子修饰的纳米银探针；
(2)将羊抗人IgE和阴性对照物BSA在醛基片上点样，分为为25μl的样品，4℃条件下固定过夜；
(3)每孔加入30μl BSA（10mg/ml），在37℃条件下封闭2小时，用洗涤液荡洗5min，洗涤3次，拍干；
(4)在不同的孔中分别加入2ng/ml IgE、10μg/ml人血清白蛋白（HSA）、10μg/ml人免疫球蛋白IgM、10μg/ml人免疫球蛋白IgG各30μl，在37℃条件下反应1小时，用洗涤液荡洗5min，洗涤3次，拍干；
(4)每孔加入1.3nmol/L荧光分子修饰的纳米银探针30μL，在37℃条件下反应1小时，用洗涤液荡洗5min，洗涤3次，拍干；
(5)每孔加入30μL荧光增强液，避光反应2min，另外留一些孔不加任何试剂作为对照，去离子水冲洗3遍，拍干；
(6)用Luxscan-10K/A Microarray Scanner生物芯片扫描仪扫描，得到IgE特异性的数据。结果见图4。
本发明将纳米银簇应用于人IgE的分析检测中，当人IgE的浓度在16ng/ml to10μg/ml,荧光信号强度与浓度具有很好的相关性，相关系数为0.990。由纳米银探针耦合荧光增强液得到的荧光信号远远大于单纯纳米银探针的荧光信号。图2中，1为纳米银探针检测人IgE的数据曲线，2为纳米银簇检测人IgE的数据曲线。当人IgE的浓度降低至0.5ng/ml-16ng/ml,荧光信号强度与浓度的对数值仍具有很好的相关性，相关系数为0.997。图3中，1为纳米银探针检测人IgE的数据曲线，2为纳米银簇检测人IgE的数据曲线，3为纳米银簇相对与浓度对数的线性关系图。同时我们也对此纳米银簇在检测低浓度人IgE的特意性进行了考察，图4显示相比纳米银探针，纳米银簇具有很好的特异性，能特异性识别人IgE。此种纳米银簇对人IgE的检测限低于0.5ng/ml。
Claims (5)
1.一种荧光分子修饰的纳米银探针，其特征在于，它以直径为10～30nm的纳米银球为内核，银球外表面键合有荧光分子链和适配体链；
其中，所述的荧光分子链为5’-SH-AAAAA AAAAA AAAAA AAAAA AAAA-Cy5；
其中，所述的适配体链为：5’-SH-AAAAA AAAAA AAAAA GGGGC ACGTT TATCCGTCCC TCCTA GTGGC GTGCC CC。
2.权利要求1所述的荧光分子修饰的纳米银探针的制备方法，其特征在于，它包括如下步骤：
(1)在冰浴条件下，将2-20mmol/L硝酸银溶液逐滴加入至3-30mmol/L硼氢化钠溶液中，硝酸银与硼氢化钠的反应摩尔比为1：3，不断搅拌至反应完全，然后补加硼氢化钠溶液，补加的硼氢化钠的摩尔量为上述参与反应的硼氢化钠的摩尔量的7%，继续搅拌至室温，得到纳米银溶液；
(2)将荧光分子链和适配体链按摩尔比(1～99):(1～9)加入步骤(1)得到的纳米银溶液中，静置10～24小时，荧光分子链和适配体链的总摩尔量与纳米银摩尔量之比为(100-1000):1；
所述的荧光分子链，其核苷酸序列为：5’AAAAA AAAAA AAAAA AAAAA AAAA，其5’端由巯基修饰，3’端由Cy5修饰；
所述的适配体链，其核苷酸序列为：5’AAAAA AAAAA AAAAA GGGGC ACGTTTATCC GTCCC TCCTA GTGGC GTGCC CC3’，其5’端由巯基修饰；
(3)向步骤(2)得到的混合体系中加入1×PBS缓冲溶液，使得混合体系中的PBS缓冲溶液的浓度为0.1×PBS，静置3～10小时；
(4)向步骤(3)得到的混合体系中加入1～5mol/L氯化钠溶液，静置2～4小时，重复加入氯化钠溶液与静置的步骤1～4次，使得氯化钠的终浓度为0.1～0.3mol/L；
(5)将步骤(4)得到的混合体系静置24～72小时，取上清液；
(6)将步骤(5)得到的上清液经离心去除上清，取沉淀加入1×PBS缓冲溶液重悬，重复离心与重悬的步骤2～4次，1×PBS缓冲溶液每次的加入体积为待加入的混合体系体积的0.1～5倍；最后离心得到的沉淀用1×PBSM缓冲溶液重悬即得备用探针。
3.根据权利要求2所述的荧光分子修饰的纳米银探针的制备方法，其特征在于，步骤(6)中，所述的离心条件为10000～20000rpm条件下离心10～30分钟。
4.权利要求1所述的荧光分子修饰的纳米银探针在制备检测人IgE的试剂中的应用。
5.一种用于检测人IgE的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含如下试剂：荧光分子修饰的纳米银探针、磷酸盐缓冲液、Tween-20、羊抗人IgE、人IgE、硝酸银、氢醌、牛血清白蛋白、醛基片基。
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