CN102814214B - 蛇足石杉孢子的破壁方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种蛇足石杉孢子的破壁方法，该法采用球磨仪，针对去囊或不去囊的孢子，通过不同频率和时间的组合，可快速有效地将孢子粉碎成微裂状态，克服孢子壁阻碍孢子萌发的技术难题，加速孢子萌发，提高其萌发率。应用本发明，为解决蛇足石杉野生资源日益减少和自然繁殖率低的问题提供了有益的研究基础，更为深入开发其医药价值提供了有力的种源保障。

Description

蛇足石杉孢子的破壁方法
技术领域
本发明涉及植物孢子破壁技术，尤其是一种蛇足石杉孢子的破壁方法。
背景技术
蛇足石杉（Huperzia serrata(Thunb．)Thev．）为蕨类石杉科石杉属蛇足石杉。以其有效成分石杉碱甲为母核开发出的“希普林”被誉为目前抗老年痴呆的最好药物。由于来源为野生千层塔，而石杉碱甲含量又极低，因而导致资源紧缺。研究表明，千层塔的繁殖尚有很大的困难。蛇足石杉孢子数量非常大，这是进行蛇足石杉植株繁殖的有利条件，可是，其孢子繁殖要求条件复杂，萌发时间很长，在技术上亟待突破。目前对蛇足石杉孢子繁殖的研究甚少。孢子外壁的主要成分为孢粉素，据报道，孢粉素是一种能抗高温、高压的高分子氧化聚台物，系孢粉的“骨髂”，在孢子的自我保护中发挥重要作用。由于蛇足石杉孢子壁的特殊结构，其孢子壁对孢子的萌发有一定的阻碍作用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种方便、快速、有效的蛇足石杉孢子的破壁方法，以高效利用现有资源快速繁殖蛇足石杉，为开发其医药用途所需原料来源提供充分保障。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：蛇足石杉孢子的破壁方法，取蛇足石杉孢子，采用3mm碳化钨的珠子、2ml试样管，在频率20～30HZ条件下，球磨仪粉碎1～5min。
蛇足石杉孢子为成熟孢子。
成熟孢子先干燥并刺破孢子囊。
刺破孢子囊的成熟孢子不去囊，在频率20HZ条件下，球磨仪粉碎3～4min。
不去囊时，将蛇足石杉孢子粉碎至孢子破裂程度达到70～80％。
刺破孢子囊的成熟孢子去囊，在频率30HZ条件下，球磨仪粉碎1～3min。
去囊时，将蛇足石杉孢子粉碎至孢子破裂程度达到80～90％。
球磨仪为德国莱驰的MM200球磨仪。
蛇足石杉孢子的取样量为1g，每个试样管放1个珠子。
为有效地对蛇足石杉孢子的外壁进行破壁，发明人研究了球磨仪的破壁方法，结果表明采用德国莱驰MM200球磨仪，针对去囊或不去囊的孢子，通过不同频率和时间的组合，可快速有效地将孢子粉碎成微裂状态。如此，克服孢子壁阻碍孢子萌发的技术问题，加速孢子萌发，提高其萌发率。应用本发明，为解决蛇足石杉野生资源日益减少和自然繁殖率低的问题提供了有益的研究基础，更为深入开发其医药价值提供了有力的种源保障。
具体实施方式
实施例1
取蛇足石杉成熟孢子1.02g，先干燥并刺破孢子囊，带囊孢子，采用3mm碳化钨的珠子、2ml试样管，每个试样管放1个珠子，在频率20HZ条件下，德国莱驰的MM200球磨仪粉碎2min。
显微镜下观察孢子未破裂，仍饱满完整。
实施例2
取蛇足石杉成熟孢子1.03g，先干燥并刺破孢子囊，带囊孢子，采用3mm碳化钨的珠子、2ml试样管，每个试样管放1个珠子，在频率20HZ条件下，德国莱驰的MM200球磨仪粉碎3min。
显微镜下观察可见孢子达到微裂（微裂指孢子沿着裂缝处开裂），孢子破裂程度达到70～75％。
实施例3
取蛇足石杉成熟孢子1.01g，先干燥并刺破孢子囊，带囊孢子，采用3mm碳化钨的珠子、2ml试样管，每个试样管放1个珠子，在频率20HZ条件下，德国莱驰的MM200球磨仪粉碎4min。
显微镜下观察可见孢子达到微裂，孢子破裂程度达到75～80％。
实施例4
取蛇足石杉成熟孢子1.03g，先干燥并刺破孢子囊，带囊孢子，采用3mm碳化钨的珠子、2ml试样管，每个试样管放1个珠子，在频率25HZ条件下，德国莱驰的MM200球磨仪粉碎4min。
显微镜下观察，孢子多碎裂（孢子粉碎成碎片），孢子破裂程度达到100％。
实施例5
取蛇足石杉成熟孢子1.01g，先干燥并刺破孢子囊，去囊孢子，采用3mm碳化钨的珠子、2ml试样管，每个试样管放1个珠子，在频率20HZ条件下，德国莱驰的MM200球磨仪粉碎3min。
显微镜下观察孢子未破裂，仍饱满完整。
实施例6
取蛇足石杉成熟孢子1.02g，先干燥并刺破孢子囊，去囊孢子，采用3mm碳化钨的珠子、2ml试样管，每个试样管放1个珠子，在频率30HZ条件下，德国莱驰的MM200球磨仪粉碎1min。
显微镜下观察，孢子达到微裂，孢子破裂程度达到80～85％。
实施例7
取蛇足石杉成熟孢子1.00g，先干燥并刺破孢子囊，去囊孢子，采用3mm碳化钨的珠子、2ml试样管，每个试样管放1个珠子，在频率30HZ条件下，德国莱驰的MM200球磨仪粉碎3min。
显微镜下观察，孢子多碎裂，孢子破裂程度达到85～90％。
为便于比较，发明人采用传统的直播法、组培法对未破壁的蛇足石杉孢子以及本发明处理后破壁的蛇足石杉孢子进行萌发比较试验。以60粒孢子重复3次试验，以一年观察时间为限，结果如下。
表1蛇足石杉孢子萌发比较试验
可见，应用本发明处理后，破壁的蛇足石杉孢子比未破壁的萌发率可提高约30％～40％。

Claims (4)

1.一种蛇足石杉孢子的破壁方法，其特征在于：取蛇足石杉成熟孢子，先干燥并刺破孢子囊，采用3mm碳化钨的珠子、2ml试样管；刺破孢子囊的成熟孢子不去囊，在频率20～25HZ条件下，球磨仪粉碎3～4min；或刺破孢子囊的成熟孢子去囊，在频率30HZ条件下，球磨仪粉碎1～3min。
2.根据权利要求1所述的蛇足石杉孢子的破壁方法，其特征在于：在频率20～25HZ条件下，将蛇足石杉孢子粉碎至孢子破裂程度达到70～80％；在频率30HZ条件下，将蛇足石杉孢子粉碎至孢子破裂程度达到80～90％。
3.根据权利要求1至2任一所述的蛇足石杉孢子的破壁方法，其特征在于：所述球磨仪为德国莱驰的MM200球磨仪。
4.根据权利要求3所述的蛇足石杉孢子的破壁方法，其特征在于：所述蛇足石杉孢子的取样量为1g，每个试样管放1个珠子。
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