CN102796151A - 基于茜素染料的α-D-N-乙酰神经氨酸苷化合物及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于茜素染料的α-D-N-乙酰神经氨酸苷化合物及其制备方法与应用。基于茜素染料的α-D-N-乙酰神经氨酸苷或其盐的通式如(Ⅷ)所示,其中,R1、R2和R3独立选自H、C1-18烷基、OR5、C1-6烷基-OR5、NO2、CN或卤素;R4为C1-6烷基-OR5或COOR5;R5为H、烷基酯或金属离子。该化合物可作为唾液酸酶的显色底物,在唾液酸酶作用下,分解出茜素染料,与金属离子络合而显色。基于该化合物的检测试剂盒及检测方法操作简单、快速、灵敏,且特异性好,可广泛应用于各级医疗检验场所,尤其是基层医疗机构,对细菌性阴道病的预防、诊治和康复有极为重要的意义。
Description
技术领域
本发明属于医学检验领域,具体涉及一种新的化合物:基于茜素染料的α-D-N-乙酰神经氨酸苷及其盐,其制备方法,以及其在制备细菌性阴道病检测试剂盒上的应用。
背景技术
细菌性阴道病(Bacterial Vaginosis,简称BV)是由于细菌过度生长所致阴道微生态的非正常改变,从而导致的一类多微生物病。以前曾命名为非特异性阴道炎、加特纳菌性阴道炎、厌氧菌性阴道炎、嗜血杆菌性阴道炎、棒状杆菌阴道炎等。直到1984年,在瑞典国际会议上才正式命名为“细菌性阴道病”。BV 是最常见的妇产科疾病之一,通过对患有BV 的妇女的阴道分泌物进行培养后发现,BV 患者阴道中分离到的菌种大约是健康妇女阴道中分离到菌种的两倍,其中普沃氏菌属、卟啉单胞菌属、消化链球菌属、动弯杆菌属、阴道加特纳菌属、和不产H2O2的乳杆菌,都与BV有密切关系;而在健康妇女阴道中大量增养出的是产H2O2的乳杆菌,由此可推断产H2O2的乳杆菌可以抑制BV相关细菌的活性。
细菌性阴道病是妇产科最常见的疾病之一,感染率在15%~50%,且易复发。患BV的妇女中有50%的人易早产或分娩低体重儿,她们所生下的孩子也很可能会因此带有各种后遗症。越来越多的证据表明,BV是导致组织性绒毛膜炎、羊水感染、剖腹产术后子宫内膜炎及其他妊娠不良和妊娠并发症的危险因素。另外在妇科中,BV主要与输卵管炎、盆腔炎、宫外孕、不孕症、泌尿系感染、术后感染及妇科肿瘤有关。因此,细菌性阴道病的检测就显得尤为重要。
1984年Amsel提出诊断BV的标准,即符合以下4项指标中的3项可诊断为BV:(1)阴道pH>4.5;(2)阴道分泌物增多,变稀如奶状,有异味;(3)胺试验(Whiff)阳性,即在阴道分泌物中加入10% KOH产生鱼腥味;(4)阴道涂片中可见线索细胞。这四项诊断指标,后来被称为BV诊断“金标准”。然而要在实际中准确实施并非易事。首先,一些与感染无关的因素如近期性交、阴道灌洗、行经或是存在大量子宫颈粘液等同样可以导致阴道pH值升高,或使分泌产生异味;胺试验中对气味的鉴别因人而异;而对于作BV诊断最佳标志的线索细胞的识别则受到显微设备的质量、样本的采集以及操作者的经验等诸多因素的共同影响,主观性强,因而很难对判定结果进行统计和比较。80年代后期,人们发现了BV与阴道中特有的微生物有关,并依此研究出一系列新的BV诊断技术和方法,包括阴道分泌物培养、革兰染色方法和脱落细胞巴氏染色法。但这些方法敏感度均不甚理想,在实际临床应用中依赖于操作者的经验以及熟练程度。
随着对BV发病机制的不断深入了解,产生了以检测BV患者阴道分泌物中所特有的微生物的代谢产物为基础的生化诊断方法。这些方法具有优于上述各方法的特性,客观且适于批量操作,最常见的是阴道分泌物中致病菌的酶活性检测。大量研究都已证实,阴道分泌物中唾液酸酶含量及活性高低与细菌性阴道病之间存在较好的正相关性,BV患者的阴道分泌物中有产生唾液酸酶的细菌存在,非BV患者的阴道分泌物中则几乎不显示异常的唾液酸酶活性。2000年,美国FDA批准了Gryphus Diagnostics公司的BVBlue试剂盒,该试剂盒采用唾液酸酶(也称为神经氨酸酶)专利底物,特异性检测BV患者阴道分泌物中唾液酸酶活性。US6512100公开了BVBlue试剂盒专利显色底物,其显色基团需在碱性溶液中才能发生颜色改变。该专利还公开了一种基于吲哚基团的神经氨酸苷,其中5-溴-4-氯-3-吲哚显色基团已广泛应用在多种临床病原菌的显色培养方面,如专利US6051391、US6068988、US6416970等就公开了这方面的临床应用。国内公开号CN200510053328、CN200610056827、CN200910037435、CN201010100450、CN201010285203、CN201020511784、CN201110174158等都采用了5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸苷作为显色底物来检测唾液酸酶活性,同时基本都采用重氮盐与显色基团反应,以加快反应速度和提高反应灵敏度。上述唾液酸酶底物,都是国外专利产品,合成难度较大,价格昂贵。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种新的化合物:基于茜素染料的α-D-N-乙酰神经氨酸苷或其盐。
本发明的另一个目的在于提供基于茜素染料的α-D-N-乙酰神经氨酸苷或其盐的制备方法。
本发明的另一个目的在于提供一种细菌性阴道病检测试剂盒。
本发明的另一个目的在于提供一种细菌性阴道病的检测方法。
本发明所采用的技术方案是:
基于茜素染料的α-D-N-乙酰神经氨酸苷或其盐,其具有如式(Ⅷ)所示的通式:
其中,R1、R2和R3独立选自H、C1-18烷基、OR5、C1-6烷基-OR5、NO2、CN或卤素,优选的,R1、R2和R3独立选自H、C1-18烷基或卤素。
R4为C1-6烷基-OR5或COOR5;
R5为H、烷基酯或金属离子。
优选的,所述基于茜素染料的α-D-N-乙酰神经氨酸苷或其盐,其结构式如式(Ⅸ)或式(Ⅹ)所示:
一种基于茜素染料的α-D-N-乙酰神经氨酸苷的制备方法,包括如下步骤:
1) 使N-乙酰神经氨酸与氯化试剂反应得到酰氯,再与无水甲醇进行酯化反应,得到式I表示的化合物:
2) 将上一步得到的产物与乙酰化试剂在有机溶剂中进行乙酰化反应,得到式Ⅱ表示的化合物:
3) 将上一步得到的产物溶于乙酰氯中,通干燥氯化氢搅拌反应,得到式Ⅲ表示的化合物:
4)将上一步得到的产物与茜素类染料,在有机溶剂中进行酯交换反应,得到式Ⅴ表示的化合物;所述茜素类染料的通式如式(Ⅳ)所示, R1、R2和R3独立选自H、C1-18烷基、OR5、-C1-6烷基-OR5、NO2、CN或卤素,R5为H、烷基酯或金属离子:
5)上一步得到的产物进行水解,得到式Ⅵ表示的化合物:
。
基于茜素染料的α-D-N-乙酰神经氨酸苷钠盐的制备方法,由上述式Ⅵ表示的化合物与NaOH反应,得到式Ⅶ表示的化合物:
一种细菌性阴道病检测试剂盒,包括反应液,该反应液基于茜素染料的α-D-N-乙酰神经氨酸苷或其盐、金属阳离子和乙酸钾缓冲液。
反应液中基于茜素染料的α-D-N-乙酰神经氨酸苷或其盐的浓度为1~20mg/ml,金属阳离子的浓度为0.1~5mmol/L,乙酸钾浓度为0.1~0.5mol/L,pH值为5.5~6.5。
金属阳离子包括Fe2+、Al3+、Mn2+、Sn2+、Cu2+中的任一种。
上述细菌性阴道病检测试剂盒还包括阴性对照和阳性对照,所述阴性对照品为不含唾液酸酶的磷酸盐缓冲液;阳性对照品为含唾液酸酶的磷酸盐缓冲液。
利用上述试剂盒检测细菌性阴道病的方法,包括如下步骤:
1) 将取好样的拭子浸泡入反应液中,37℃反应5-15分钟;
2)反应结束,观察样品拭子的颜色变化,颜色不变者为阴性,颜色变化者为阳性。
本发明的有益效果在于:
本发明的基于茜素染料的α-D-N-乙酰神经氨酸苷或其盐可作为唾液酸酶的显色底物,在唾液酸酶作用下,分解出茜素染料,与金属离子络合而显色,如图1所示。颜色深浅与神经氨酸酶浓度成正相关,即酶浓度越高,显色越深,用分光光度计来检测,吸光度A值越高,如图2所示,可以根据显色的深浅初步判定感染的严重程度。
本发明的检测试剂盒及检测方法操作简单、快速、灵敏,且特异性好,可广泛应用于各级医疗检验场所,尤其是基层医疗机构,对细菌性阴道病的预防、诊治和康复有极为重要的意义。
附图说明
图1为茜素与金属阳离子形成络合物的结构示意图;
图2为茜素-2-α-D-N-乙酰神经氨酸苷钠盐在含不同浓度神经氨酸酶的水溶液中的吸光度(横坐标为波长(nm),纵坐标为吸光度A值。茜素-2-α-D-N-乙酰神经氨酸苷钠盐浓度为10mg/ml,Fe2+浓度为2mmol/L。箭头表示神经氨酸酶的浓度(U/ml)变化从小到大依次为0、5.0、10、20、40。所用仪器为分光光度计,型号721)。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步说明,但并不局限于此,凡依照本发明公开内容所作出的本领域等同替换,均属于本发明的保护范围。
实施例1
茜素-2-α-D-N-乙酰神经氨酸苷及其钠盐的合成:
(1)N-乙酰神经氨酸6g悬浮于50ml无水甲醇中,0.8ml氯化亚砜缓慢滴加到悬浮液中,搅拌过夜。然后旋转蒸发,得白泡沫状物质,此为式Ⅰ所示的化合物:
(2)式Ⅰ所示的化合物4.2g溶解于80ml吡啶中,冰盐冷却,90ml乙酸酐缓慢滴加到冷却的溶液中,滴加完毕,持续搅拌48小时。然后旋转蒸发,剩余物溶于80ml乙酸乙酯,400 ml水洗后无水硫酸钠干燥。过滤,滤液中加入20g硅胶,旋转蒸发,得干燥硅胶附着物。洗脱液石油醚:乙酸乙酯(2:3)柱层析硅胶附着物,得式Ⅱ所示的化合物:
(3)5.5g式Ⅱ所示的化合物溶于80ml乙酰氯中,通干燥氯化氢至饱和,密封后常温搅拌过夜。然后减压旋转蒸去乙酰氯,剩余物中加入100ml二氯甲烷,旋转蒸发干。粘稠油状物中加入100ml甲苯,使油状物完全溶解。真空油泵减压旋转蒸发,使甲苯完全蒸发,得灰白色化合物,此为式Ⅲ所示的化合物:
(4)将质量为4.8克的茜素(Ⅳ’)悬浮在80ml丙酮中并与80ml的氢氧化钾(0.3mol/L)溶液混匀以形成一种盐。向该溶液中加入一种50ml的含3.6克式Ⅲ所示的化合物的丙酮和乙醚(50:50)混合物。将上述混合液体搅拌约20小时,然后加入3ml氢氧化钾溶液(2mol/L),随后加入20ml的式Ⅲ所示化合物 (0.5mol/L)的丙酮溶液。将该混合溶液再搅拌16小时。用旋转蒸发仪低压蒸发掉乙醚和丙酮,并用冰乙酸调整pH到约6.5。所得固体用冲洗过滤,滤饼在50℃下过夜干燥。
得到的黄色固体重新悬浮在2-8℃的80ml冰乙酸中,震荡洗涤5分钟,真空抽滤。将所得产品溶解在200ml二氯甲烷中,添加5ml三乙胺调整pH值。将20克氧化铝加入溶液中,搅拌30分钟,过滤除去氧化铝,滤液采用旋转蒸发仪蒸发掉残留溶剂,从而得到一种黄色固体。该固体用无水乙醇重结晶,过滤干燥后的固体即为式Ⅴ’所示化合物:
(5)将2.6克式Ⅴ’所示化合物溶解在60ml无水甲醇中,然后加入0.5克甲醇钠,室温反应,TLC监测,30分钟后原料消失从而得到一种红色溶液,此红色溶液成分为茜素-2-α-D-N-乙酰化神经氨酸苷,其化学式如Ⅸ所示,需制成盐的形式方可长期稳定存放:
(6)红色茜素-2-α-D-N-乙酰化神经氨酸苷溶液中加入5ml氢氧化钠(0.5mol/L)溶液,室温搅拌30分钟,用冰乙酸中和至pH7.6。置-20℃冷冻过夜。然后采用冷冻干燥的方式得一种红色固体。该固体用乙醚溶解重结晶,干燥所得即为茜素-2-α-D-N-乙酰神经氨酸苷钠盐,其化学式如Ⅹ所示:
茜素-2-α-D-N-乙酰神经氨酸苷钠盐的表征数据:
1H NMR(CDCl3,300MHz)δ: 8.0(br, 1H), 7.80(m, 2H), 7.55(m, 2H), 7.25(m, 1H), 6.89(m, 1H), 5.0(br, 1H), 4.29(m, 1H), 3.95(m, 1H), 3.81(m, 1H), 3.77(m, 1H), 3.61(m, 1H), 3.56(m, 1H), 3.38(m, 1H), 2.48(m, 1H), 2.23(m, 1H), 2.02(s, 3H), 2.0(br, 4H)。
13C NMR(CDCl3, 75MHz)δ: 182.3, 182.1, 174.8, 170.5, 151.6, 151.0, 133.8, 133.6, 132.3, 132.2, 129.9, 130.1, 126.7, 123.2, 122.7, 119.2, 103.9, 73.6, 72.8, 70.1, 68.5, 64.5, 54.0, 39.1, 23.6。
实施例2
细菌性阴道病检测试剂盒及检测方法1
1.试剂盒组成
(1)反应液:称取茜素-2-α-D-N-乙酰神经氨酸苷钠盐溶解于0.5mol/L乙酸钾溶液中,使其浓度为10mg/ml;称取柠檬酸铁铵溶解在上述溶液中,终浓度2mmol/L;用冰乙酸调pH至6.0~6.5,分装为0.5ml/反应管,反应管为透明塑料或玻璃制成。
(2)阴性对照:不含有唾液酸酶的磷酸盐缓冲液, pH值为7.4。
(3)阳性对照:含10U唾液酸酶的磷酸盐缓冲液,pH值为7.4。
2.本试剂盒的使用方法:先将取好样的拭子浸泡入反应液中,置于37℃恒温箱反应5分钟;反应结束,观察样品拭子的颜色变化,颜色不变者为阴性,颜色变为紫色者为阳性。
用BVBlue法做对照方法,对临床高度怀疑为BV患者的78例样本中,本发明检测出阳性73例,BVBlue法检测出阳性74例,二者的阳性符合率为98.6%(73/74)。
用BVBlue法诊断为BV阴性的136例样本中,本发明检测出阴性136例,二者的阴性符合率为100%(136/136)。
统计上述数据发现,本发明的阳性预期值(PPV)为100%(73/73),阴性预期值(NPV)为99.3%(140/141)。从以上214例临床样本的比较结果来分析,本发明的灵敏度、特异性均与FDA批准的BVBlue试剂盒基本一致。且本发明的试剂盒不用使用BVBlue试剂盒的显色剂,直接显色判断,操作更简便;反应时间也只有BVBlue试剂盒的一半,操作更快速。
实施例3
细菌性阴道病检测试剂盒及检测方法2
1.试剂盒组成
(1)反应液:称取茜素-2-α-D-N-乙酰神经氨酸苷溶解于0.25mol/L乙酸钾溶液中,使其浓度为15mg/ml;称取氯化锰溶解在上述溶液中,终浓度1mmol/L;用冰乙酸调pH至5.5~6.0,分装为0.5ml/反应管,反应管为透明塑料或玻璃制成。
(2)阴性对照:不含有唾液酸酶的磷酸盐缓冲液,pH值为7.4。
(3)阳性对照:含10U唾液酸酶的磷酸盐缓冲液,pH值为7.4。
2.本试剂盒的使用方法:先将取好样的拭子浸泡入反应液中,置于37℃恒温箱反应5分钟;反应结束,观察样品拭子的颜色变化,颜色不变者为阴性,颜色变为紫色者为阳性。
用BVBlue法做对照方法,对临床高度怀疑为BV患者的65例样本中,本发明检测出阳性63例,BVBlue法检测出阳性63例,二者的阳性符合率为100%(63/63)。
用BVBlue法诊断为BV阴性的136例样本中,本发明检测出阴性136例,二者的阴性符合率为100%(136/136)。
统计上述数据发现,本发明的阳性预期值(PPV)为100%(63/63),阴性预期值(NPV)为100%(138/138)。从以上201例临床样本的比较结果来分析,本发明的灵敏度、特异性均与FDA批准的BVBlue试剂盒基本一致。且本发明的试剂盒不用使用BVBlue试剂盒的显色剂,直接显色判断,操作更简便;反应时间也只有BVBlue试剂盒的一半,操作更快速。
实施例4
细菌性阴道病检测试剂盒及检测方法3
1.试剂盒组成
(1)反应液:称取茜素-2-α-D-N-乙酰神经氨酸苷钠盐溶解于0.35mol/L乙酸钾溶液中,使其浓度为5mg/ml;称取硫酸铝溶解在上述溶液中,终浓度1.5mmol/L;用冰乙酸调pH至6.2~6.5,分装为0.5ml/反应管,反应管为透明塑料或玻璃制成。
(2)阴性对照:不含有唾液酸酶的磷酸盐缓冲液,pH值为7.4。
(3)阳性对照:含10U唾液酸酶的磷酸盐缓冲液,pH值为7.4。
2.本试剂盒的使用方法:先将取好样的拭子浸泡入反应液中,置于37℃恒温箱反应5分钟;反应结束,观察样品拭子的颜色变化,颜色不变者为阴性,颜色变为红色者为阳性。
用BVBlue法做对照方法,对临床高度怀疑为BV患者的58例样本中,本发明检测出阳性58例,BVBlue法检测出阳性58例,二者的阳性符合率为100%(63/63)。
用BVBlue法诊断为BV阴性的127例样本中,本发明检测出阴性127例,二者的阴性符合率为100%(127/127)。
统计上述数据发现,本发明的阳性预期值(PPV)为100%(58/58),阴性预期值(NPV)为100%(127/127)。从以上185例临床样本的比较结果来分析,本发明的灵敏度、特异性均与FDA批准的BVBlue试剂盒基本一致。且本发明的试剂盒不用使用BVBlue试剂盒的显色剂,直接显色判断,操作更简便;反应时间也只有BVBlue试剂盒的一半,操作更快速。
实施例5
细菌性阴道病检测试剂盒及检测方法4
1.试剂盒组成
(1)反应液:称取茜素-2-α-D-N-乙酰神经氨酸苷溶解于0.25mol/L乙酸钾溶液中,使其浓度为10mg/ml;称取氯化锡溶解在上述溶液中,终浓度2mmol/L;用冰乙酸调pH至5.8~6.2,分装为0.5ml/反应管,反应管为透明塑料或玻璃制成。
(2)阴性对照:不含有唾液酸酶的磷酸盐缓冲液,pH值为7.4。
(3)阳性对照:含10U唾液酸酶的磷酸盐缓冲液,pH值为7.4。
2.本试剂盒的使用方法:先将取好样的拭子浸泡入反应液中,置于37℃恒温箱反应5分钟;反应结束,观察样品拭子的颜色变化,颜色不变者为阴性,颜色变为橘黄色者为阳性。
用BVBlue法做对照方法,对临床高度怀疑为BV患者的67例样本中,本发明检测出阳性62例,BVBlue法检测出阳性62例,二者的阳性符合率为100%(62/62)。
用BVBlue法诊断为BV阴性的104例样本中,本发明检测出阴性104例,二者的阴性符合率为100%(104/104)。
统计上述数据发现,本发明的阳性预期值(PPV)为100%(62/62),阴性预期值(NPV)为100%(104/104)。从以上171例临床样本的比较结果来分析,本发明的灵敏度、特异性均与FDA批准的BVBlue试剂盒基本一致。且本发明的试剂盒不用使用BVBlue试剂盒的显色剂,直接显色判断,操作更简便;反应时间也只有BVBlue试剂盒的一半,操作更快速。
实施例6
细菌性阴道病检测试剂盒及检测方法5
1.试剂盒组成
(1)反应液:称取茜素-2-α-D-N-乙酰神经氨酸苷钠盐溶解于0.5mol/L乙酸钾溶液中,使其浓度为12mg/ml;称取硫酸铜溶解在上述溶液中,终浓度1mmol/L;用冰乙酸调pH至5.5~6.0,分装为0.5ml/反应管,反应管为透明塑料或玻璃制成。
(2)阴性对照:不含有唾液酸酶的磷酸盐缓冲液,pH值为7.4。
(3)阳性对照:含10U唾液酸酶的磷酸盐缓冲液,pH值为7.4。
2.本试剂盒的使用方法:先将取好样的拭子浸泡入反应液中,置于37℃恒温箱反应5分钟;反应结束,观察样品拭子的颜色变化,颜色不变者为阴性,颜色变为绿色者为阳性。
用BVBlue法做对照方法,对临床高度怀疑为BV患者的52例样本中,本发明检测出阳性49例,BVBlue法检测出阳性49例,二者的阳性符合率为100%(49/49)。
用BVBlue法诊断为BV阴性的93例样本中,本发明检测出阴性93例,二者的阴性符合率为100%(93/93)。
统计上述数据发现,本发明的阳性预期值(PPV)为100%(49/49),阴性预期值(NPV)为100%(93/93)。从以上145例临床样本的比较结果来分析,本发明的灵敏度、特异性均与FDA批准的BVBlue试剂盒基本一致。且本发明的试剂盒不用使用BVBlue试剂盒的显色剂,直接显色判断,操作更简便;反应时间也只有BVBlue试剂盒的一半,操作更快速。
以上实施例仅为介绍本发明的优选案例,对于本领域技术人员来说,在不背离本发明精神的范围内所进行的任何显而易见的变化和改进,都应被视为本发明的一部分。
Claims (10)
2.根据权利要求1所述的基于茜素染料的α-D-N-乙酰神经氨酸苷或其盐,其特征在于, R1、R2和R3独立选自H、C1-18烷基或卤素。
4.一种基于茜素染料的α-D-N-乙酰神经氨酸苷的制备方法,包括如下步骤:
使N-乙酰神经氨酸与氯化试剂反应得到酰氯,再与无水甲醇进行酯化反应,得到式I表示的化合物:
将上一步得到的产物与乙酰化试剂在有机溶剂中-25~0℃进行乙酰化反应,得到式Ⅱ表示的化合物:
将上一步得到的产物溶于乙酰氯中,通干燥氯化氢搅拌反应,得到式Ⅲ表示的化合物:
4)将上一步得到的产物与茜素类染料,在有机溶剂中进行酯交换反应,得到式Ⅴ表示的化合物;所述茜素类染料的通式如式(Ⅳ)所示, R1、R2和R3独立选自H、C1-18烷基、OR5、-C1-6烷基-OR5、NO2、CN或卤素,R5为H、烷基酯或金属离子:
5)上一步得到的产物进行水解,得到式Ⅵ表示的化合物:
。
6.一种细菌性阴道病检测试剂盒,包括反应液,该反应液包括权利要求1~3任一项所述的基于茜素染料的α-D-N-乙酰神经氨酸苷或其盐、金属阳离子和乙酸钾缓冲液。
7.根据权利要求6所述的细菌性阴道病检测试剂盒,其特征在于,反应液中基于茜素染料的α-D-N-乙酰神经氨酸苷或其盐的浓度为1~20mg/ml,金属阳离子的浓度为0.1~5mmol/L,乙酸钾浓度为0.1~0.5mol/L,pH值为5.5~6.5。
8.根据权利要求6或7所述的细菌性阴道病检测试剂盒,其特征在于,所述金属阳离子包括Fe2+、Al3+、Mn2+、Sn2+、Cu2+中的任一种。
9.根据权利要求6所述的细菌性阴道病检测试剂盒,其特征在于,还包括阴性对照和阳性对照,所述阴性对照品为不含唾液酸酶的磷酸盐缓冲液;阳性对照品为含唾液酸酶的磷酸盐缓冲液。
10.利用权利要求6所述的试剂盒检测细菌性阴道病的方法,包括如下步骤:
1) 将取好样的拭子浸泡入反应液中,37℃反应5-15分钟;
2)反应结束,观察样品拭子的颜色变化,颜色不变者为阴性,颜色变化者为阳性。
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CN2012102631184A CN102796151A (zh) | 2012-07-27 | 2012-07-27 | 基于茜素染料的α-D-N-乙酰神经氨酸苷化合物及其制备方法与应用 |
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CN2012102631184A CN102796151A (zh) | 2012-07-27 | 2012-07-27 | 基于茜素染料的α-D-N-乙酰神经氨酸苷化合物及其制备方法与应用 |
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CN1108260A (zh) * | 1993-12-24 | 1995-09-13 | 三菱化学株式会社 | 唾液酸衍生物 |
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