CN102793729A - 雷公藤甲素与凤尾草总黄酮配伍药物组合物及制备和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属于药物领域,公开了雷公藤甲素与凤尾草总黄酮配伍的药物组合物及其制备和用途。该药物组合物由重量份的雷公藤甲素1份与凤尾草总黄酮10-3—105份混合均匀制成。凤尾草总黄酮是由凤尾草药材经乙醇溶液提取、有机溶剂分配、大孔树脂柱和聚酰胺柱精制而成的总黄酮。该药物组合物在制备治疗类风湿性关节炎、抗肿瘤、免疫抑制、抗炎药物中的应用。
Description
技术领域
本发明属于药物领域,特别涉及雷公藤甲素与凤尾草总黄酮配伍的药物组合物及其制备和用途。
背景技术
雷公藤甲素(Triptolide)是从中药雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)中分离出的环氧化二萜内酯化合物,是雷公藤的主要有效成分之一。雷公藤甲素的药理活性强,具有显著的免疫抑制、抗炎、抗肿瘤和抗生育作用,在临床上主要用于治疗类风湿性关节炎、红斑狼疮、皮肤病、恶性肿瘤、肾炎和器官排斥反应等50多个病种。但同时它又属于毒性很强的药物, LD50(半数致死量)约为0.8mg/kg(小鼠口服),具有肝、肾等多脏器毒性,其有效剂量与中毒剂量很相近,临床用药很不安全,这大大限制了雷公藤甲素在治疗类风湿性关节炎等自身免疫系统异常导致的疾病、恶性肿瘤和器官排斥反应等多种疾病中的应用。研究开发减少雷公藤甲素的毒性,同时保持或增强其药理活性的方法,对于提高雷公藤甲素临床应用的安全性具有十分重要的意义。
凤尾草系凤尾蕨科植物凤尾草(Pteris mutifida Poir.)的干燥全草,具有清热利湿,凉血止血,消肿解毒之功效,临床用于治疗痢疾,肠炎,肝炎,咽喉炎,泌尿系炎症,扁桃体炎,痈疮疖肿,风湿等病症。本发明公开了雷公藤甲素与凤尾草总黄酮配伍的药物组合物及其制备和用途,该药物组合物与雷公藤甲素比较,具有治疗类风湿性关节炎、抗肿瘤、免疫抑制、抗炎活性相当,毒性小的优点,可大大提高雷公藤甲素的临床应用安全性。 该药物组合物可作为治疗类风湿性关节炎、抗肿瘤、免疫抑制、抗炎药使用。
发明内容
本发明的目的是提供雷公藤甲素与凤尾草总黄酮配伍的药物组合物及其制备和用途。
本发明的技术方案是这样实现的:
雷公藤甲素与凤尾草总黄酮配伍的药物组合物由重量份的雷公藤甲素1份与凤尾草总黄酮10-3—105份混合均匀即得。
上述药物组合物的制备过程包括:
1、制备凤尾草总黄酮
① 取凤尾草药材,加70%乙醇,加热回流提取,合并提取液,浓缩,干燥,粉碎,得凤尾草总提取物。
② 将凤尾草总提取物用适量水制成悬浮液后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取后,将水相溶液减压浓缩,干燥,粉碎,得水部位提取物。
③ 将水部位提取物上大孔树脂柱分离,依次用水,10%乙醇,50%乙醇,95%乙醇洗脱,将50%乙醇洗脱液减压浓缩,干燥,粉碎,得大孔树脂50%乙醇洗脱提取物。
④ 将大孔树脂50%乙醇洗脱提取物上聚酰胺柱分离,依次用水,10%乙醇,50%乙醇,95%乙醇洗脱,将50%乙醇洗脱液减压浓缩,干燥,粉碎,得聚酰胺50%乙醇洗脱提取物,即为凤尾草总黄酮。
⑤ 通过高效液相色谱以及核磁共振等波谱技术分离鉴定凤尾草总黄酮中含有忍冬苷(即:木犀草素-7-O–α-L-鼠李糖(1→2)-β-D-葡萄糖苷)、野漆树苷(即:芹菜素-7-O–α-L-鼠李糖(1→2)-β-D-葡萄糖苷)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖-4′-O-α-L-鼠李糖苷、新西兰牡荆苷(即:芹菜素-6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷)等黄酮化合物。
2、将重量份的雷公藤甲素1份与凤尾草总黄酮10-3—105份混合均匀即得药物组合物。
该药物组合物可直接药用,或采用常规方法加入合适药用辅料制成药剂学上可接受的剂型使用,如片剂、胶囊、口服液、酊剂、颗粒剂、软膏、注射剂、乳剂、滴丸以及缓释和控释制剂。
雷公藤甲素与凤尾草总黄酮配伍的药物组合物与雷公藤甲素的毒性,免疫抑制、抗炎、治疗类风湿性关节炎和抗肿瘤活性比较的药理学实验数据参见实施例6—13,实验结果表明:药物组合物的毒性大大低于雷公藤甲素的毒性,药物组合物有很好的免疫抑制、抗炎、治疗类风湿性关节炎和抗肿瘤活性,可作为治疗类风湿性关节炎、抗肿瘤、免疫抑制、抗炎药使用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细说明,但应理解本发明的范围非仅限于这些实施例的范围。
实施例1
凤尾草总黄酮的制备:
① 取凤尾草15Kg,加6倍量的70%乙醇,加热回流提取三次,合并提取液,浓缩,干燥,粉碎,得凤尾草总提取物1550g。
② 将凤尾草总提取物用适量水制成悬浮液后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取后,将水相溶液减压浓缩,干燥,粉碎,得水部位提取物1000g。
③ 将水部位提取物上LSA-40型大孔树脂柱分离,依次用水,10%乙醇,50%乙醇,95%乙醇洗脱,将50%乙醇洗脱液减压浓缩,干燥,粉碎,得大孔树脂50%乙醇洗脱提取物50g。
④ 将大孔树脂50%乙醇洗脱提取物上聚酰胺柱分离,依次用水,10%乙醇,50%乙醇,95%乙醇洗脱,将50%乙醇洗脱液减压浓缩,干燥,粉碎,得聚酰胺50%乙醇洗脱提取物30g,即为凤尾草总黄酮。
实施例2
取雷公藤甲素1g与凤尾草总黄酮1mg混合均匀得药物组合物,将药物组合物采用常规方法加入合适药用辅料制成药剂学上可接受的剂型,如片剂、胶囊、口服液、酊剂、颗粒剂、软膏、注射剂、乳剂、滴丸以及缓释和控释制剂,药物组合物及其制剂作为治疗类风湿性关节炎、抗肿瘤、免疫抑制、抗炎药使用。
实施例3
取雷公藤甲素1g与凤尾草总黄酮1g混合均匀得药物组合物,将药物组合物采用常规方法加入合适药用辅料制成药剂学上可接受的剂型,如片剂、胶囊、口服液、酊剂、颗粒剂、软膏、注射剂、乳剂、滴丸以及缓释和控释制剂,药物组合物及其制剂作为治疗类风湿性关节炎、抗肿瘤、免疫抑制、抗炎药使用。
实施例4
取雷公藤甲素1g与凤尾草总黄酮100g均匀得药物组合物,将药物组合物采用常规方法加入合适药用辅料制成药剂学上可接受的剂型,如片剂、胶囊、口服液、酊剂、颗粒剂、软膏、注射剂、乳剂、滴丸以及缓释和控释制剂,药物组合物及其制剂作为治疗类风湿性关节炎、抗肿瘤、免疫抑制、抗炎药使用。
实施例5
取雷公藤甲素1mg与凤尾草总黄酮100g混合均匀得药物组合物,将药物组合物采用常规方法加入合适药用辅料制成药剂学上可接受的剂型,如片剂、胶囊、口服液、酊剂、颗粒剂、软膏、注射剂、乳剂、滴丸以及缓释和控释制剂,药物组合物及其制剂作为治疗类风湿性关节炎、抗肿瘤、免疫抑制、抗炎药使用。
实施例6
药物组合物与雷公藤甲素的急性毒性比较试验:
采用改良寇氏法进行小鼠口服急性毒性比较试验,结果(见表1)表明药物组合物比雷公藤甲素的毒性小很多。
表1. 小鼠口服急性毒性比较试验结果
实施例7
药物组合物与雷公藤甲素对大鼠肝功能的影响对比试验:
SD大鼠,雌雄各半,体重180-220g,随机分成蒸馏水组、雷公藤甲素组、雷公藤甲素与凤尾草总黄酮配伍的药物组合物组,每组10只。按以下剂量灌胃给药,雷公藤甲素0.7mg/kg,药物组合物组以雷公藤甲素计0.7mg/kg。连续给药3天,每天两次,最后一次给药后禁食,正常饮水,一小时后,股动脉取血,3500rpm离心5min,取血清,检测ALT和AST。试验结果(见表2)表明,药物组合物对大鼠肝损伤比雷公藤甲素轻,说明药物组合物毒性更低。
表2. 对大鼠肝功能的影响比较试验结果
实施例8
药物组合物与雷公藤甲素对大鼠肾功能的影响比较试验:
雄性SD大鼠,体重180-220g,随机分成蒸馏水组、雷公藤甲素组、雷公藤甲素与凤尾草总黄酮配伍的药物组合物组,每组10只。按以下剂量灌胃给药,雷公藤甲素0.1mg/kg,药物组合物组以雷公藤甲素计0.1mg/kg。连续给药60天,每天一次,实验结束前一天,收集24h尿液测尿蛋白,取血清,检测肌酐和尿素氮。试验结果(见表3)表明,药物组合物对大鼠肾损伤比雷公藤甲素轻,说明药物组合物毒性更低。
表3. 对大鼠肾功能的影响比较试验结果
实施例9
药物组合物与雷公藤甲素的免疫抑制活性比较试验:
材料和仪器:昆明种小鼠,雌雄各半,体重18-22g,雷公藤甲素,雷公藤甲素与凤尾草总黄酮配伍的药物组合物,地塞米松片,RMI-1640培养基,脂多糖(LPS)、刀豆素A(ConA)及MTT,DMSO。CO2培养箱,高速低温离心机,倒置显微镜,自动酶标仪。
方法:取小鼠,雌雄各半,随机均分成蒸馏水组、地塞米松组、雷公藤甲素组、雷公藤甲素与凤尾草总黄酮配伍的药物组合物组,每组10只。按以下剂量灌胃给药,地塞米松7.5mg/kg,雷公藤甲素0.2mg/kg,药物组合物组以雷公藤甲素计0.2mg/kg。连续给药7天。
MTT法测定脾淋巴细胞增殖:小鼠给药7天后脱颈处死,无菌条件下摘取脾脏,制备成2×106/mL浓度的脾细胞悬液(经台盼蓝染色,活力≥95%),在96孔板上每孔加100μL细胞悬液,分别加入ConA(10μg/ml)和LPS(20μg/ml)各100μL。每个样品设3个重复孔。用RMI-1640培养液,置37℃、5%CO2培养箱培养48h后,每孔加入10μL MTT(5mg/mL),37℃孵育4h,1000rpm离心10min,弃上清,再每孔加入150μL二甲基亚砜(DMSO)振荡。在自动酶标仪测OD值(λ=492nm)。
试验结果(见表4)表明,与蒸馏水组比较,雷公藤甲素组和药物组合物组对T、B淋巴细胞的增殖有显著的抑制作用,并且两者的免疫抑制作用相当。
表4. 对小鼠T、B淋巴细胞增殖的影响
实施例10
药物组合物与雷公藤甲素的抗炎作用比较试验:
小鼠耳廓肿胀实验:取昆明种小鼠,雌雄各半,体重18-22g,随机均分成空白模型组、雷公藤甲素组、雷公藤甲素与凤尾草总黄酮配伍的药物组合物组,每组10只。按以下剂量灌胃给药,雷公藤甲素0.1mg/kg,药物组合物组以雷公藤甲素计0.1mg/kg,空白模型组给2%丙二醇。连续给药3天。末次给药后1h,将20μl二甲苯涂于小鼠右耳廓两面致炎, 左耳不涂为对照,1.5h 后将小鼠处死,剪下双耳, 用直径6mm 的打孔器分别在同一部位打下圆耳片, 称重, 以左右耳片重量差作为肿胀度, 计算抑制率。试验结果(见表5)表明药物组合物组与雷公藤甲素组对小鼠耳廓肿胀抑制率相当,说明二者抗炎效果相当。
表5. 小鼠耳廓肿胀试验结果
实施例11
药物组合物与雷公藤甲素治疗类风湿性关节炎作用比较试验:
动物分组与模型制备方法:取适应性喂养7 天后的雄性SD大鼠,体重180-220g, 在乙醚轻度麻醉下于右后足跖部(原发侧)无菌皮内注射弗氏完全佐剂(弗氏完全佐剂CFA制备:取无水羊毛脂加热后,量取4ml,稍冷却后加液体石蜡6ml,研磨均匀后70℃高压灭菌,按每毫升加入80℃灭活1h的卡介苗10mg制成)0.1 ml,诱导产生AA佐剂性关节炎。接种CFA后9d测量大鼠左后足(继发侧)肿胀程度,观察关节炎性反应。将出现多发性关节炎症状的大鼠随机分组: 模型组、雷公藤甲素组、雷公藤甲素与凤尾草总黄酮配伍的药物组合物组,每组各10只。
给药方法:于接种CFA后第10d开始灌胃给药,共给药12d,按以下剂量灌胃给药,雷公藤甲素0.1mg/kg,药物组合物组以雷公藤甲素计0.1mg/kg,模型组给2%丙二醇。观察(1)足跖肿胀度:分别在模型复制日、致炎后第10d、14d、18d、21d(即给药日、给药后第4d、8d、11d)用无弹性的软皮尺测量大鼠左后跖固定部位周径,计算各组大鼠足跖肿胀度。肿胀度为模型复制前后的周径差。(2):关节炎指数(AI):在致炎后第21d测量一次各组全身关节病变程度。全身病变按5 级评分法评价,根据未注射佐剂的其余3 只肢体的病变程度累积计分,计算出指数。标准如下:0 分:无红肿;1 分:小趾关节红肿;2 分:趾关节和足跖肿胀;3 分:踝关节以下的足爪肿胀;4分:包括踝关节在内的全部足爪肿胀。把各个关节的累积计分起来,即为每只大鼠关节肿胀的指数。试验结果(见表6)表明:药物组合物与雷公藤甲素对佐剂性关节炎动物模型左足爪肿胀度和关节炎指数影响相差不大,说明二者治疗关节炎效果相当。
表6. 对佐剂性关节炎动物模型的影响
实施例12
药物组合物与雷公藤甲素的体外抗肿瘤活性比较试验:
采用MTT法测定雷公藤甲素、雷公藤甲素与凤尾草总黄酮配伍的药物组合物对以下人肿瘤细胞体外生长的抑制作用,测定半数杀伤浓度(IC50),药物组合物的浓度以相应的雷公藤甲素量计,阳性对照药为顺铂(Cisplatin)。
人肿瘤细胞株:早幼粒白血病细胞株HL-60,多发性骨髓瘤细胞株U266,胃癌细胞株MGC-803,肺癌细胞株A-549,肝癌细胞株SMMC-7721,宫颈癌细胞株Hela,乳腺癌细胞株MCF-7,鼻咽癌细胞株HNE-1,卵巢癌细胞株Caov-3,喉癌细胞株Hep-2,结肠癌细胞株Col-6,肾癌细胞株Re-01,前列腺癌细胞株PC-3,T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat。
试验结果(见表7)表明:药物组合物和雷公藤甲素对各测试肿瘤细胞的IC50相当,说明药物组合物和雷公藤甲素对各测试肿瘤细胞体外生长抑制作用效果相当。
表7 受试药物对肿瘤细胞株的半数杀伤浓度(IC50)
实施例13
药物组合物与雷公藤甲素的体内抗肿瘤活性比较:
比较雷公藤甲素、雷公藤甲素与凤尾草总黄酮配伍的药物组合物对小鼠S180肉瘤体内生长的抑制作用,测定抑瘤率。药物组合物的浓度以相应的雷公藤甲素量计。
昆明种小鼠,雌雄各半,体重20g±2g,于每只小鼠右腋皮下接种S180小鼠肿瘤细胞4×106, 建立S180小鼠肿瘤移植模型。随机分成生理盐水组、阳性对照组、高中低剂量给药组,每组各10只。接种24h后开始灌胃给药,阳性对照组给予依托泊苷(VP-16)4mg/kg,给药组给予高中低剂量相应药物,每天1次,连续10天。于末次给药24h后处死动物,称体重,完整剥离瘤块,用滤纸吸干后称重,求抑瘤率。
试验结果(见表8)表明:药物组合物和雷公藤甲素对小鼠S180肉瘤体内生长抑瘤率相当,说明药物组合物和雷公藤甲素对小鼠S180肉瘤体内生长的抑制作用效果相当。
表8对小鼠S180肉瘤体内生长的抑制作用
Claims (5)
1.在此处键入权利要求项1,雷公藤甲素与凤尾草总黄酮配伍药物组合物及制备和用途,其特征在于该药物组合物是由下述重量份的原料药混合均匀制成的,雷公藤甲素1份、凤尾草总黄酮10-3—105份。
2.在此处键入权利要求项2,如权利要求1所述的凤尾草总黄酮,其特征在于其制备方法是:
① 取凤尾草药材,加70%乙醇,加热回流提取,合并提取液,浓缩,干燥,粉碎,得凤尾草总提取物;
② 将凤尾草总提取物用适量水制成悬浮液后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取后,将水相溶液减压浓缩,干燥,粉碎,得水部位提取物;
③ 将水部位提取物上大孔树脂柱分离,依次用水,10%乙醇,50%乙醇,95%乙醇洗脱,将50%乙醇洗脱液减压浓缩,干燥,粉碎,得大孔树脂50%乙醇洗脱提取物;
④ 将大孔树脂50%乙醇洗脱提取物上聚酰胺柱分离,依次用水,10%乙醇,50%乙醇,95%乙醇洗脱,将50%乙醇洗脱液减压浓缩,干燥,粉碎,得聚酰胺50%乙醇洗脱提取物,即为凤尾草总黄酮。
3.如权利要求1或2所述的凤尾草总黄酮,其特征在于含有忍冬苷、野漆树苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖-4′-O-α-L-鼠李糖苷、新西兰牡荆苷等黄酮化合物。
4.如权利要求1所述的药物组合物,可直接药用,或采用常规方法加入合适药用辅料制成药剂学上可接受的剂型使用。
5.如权利要求1所述的药物组合物在制备治疗类风湿性关节炎、抗肿瘤、免疫抑制、抗炎药物中的应用。
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