CN102775233A - 新型杀虫抑菌生物肥料及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种生物肥，具体为一种新型杀虫抑菌生物肥料及其制备方法。提高微生物肥的杀菌杀虫效果及肥效。一种新型杀虫抑菌生物肥料，由5.5亿个/毫升的巨大芽孢杆菌30-50份，4.0亿个/毫升的沼泽红假单胞菌10-30份，562mg/mL的阿维链霉菌药效成分B1a1-3份，糖蜜200-300份，十二烷基苯磺酸钠0.02-0.04份，吐温-80 0.03-0.05份，水600-800份组成。本发明所述的药肥复合生物制剂及其生产工艺，确立巨大芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌和阿维链霉菌的发酵工艺参数，各项指标均符合农业部有关微生物肥料的质量标准。本发明的产品药肥复合生物制剂具有肥料和杀虫抑菌效果，应用前景广阔。
Description
技术领域
本发明涉及一种生物肥，具体为一种新型杀虫抑菌生物肥料及其制备方法。
背景技术
微生物肥料由一种或数种有益微生物活细胞制备而成的肥料。主要有根瘤菌剂、固氮菌剂、磷细菌剂、抗生菌剂、复合菌剂等。微生物肥料生产成本低，应用效果好，不污染环境，使用后不仅增产，而且提高农产品的质量，因此，在我国农业可持续发展中占重要地位。随着生态农业和绿色农业的发展，化学农药和化学肥料对土壤和人类造成的危害愈来愈受到人们的重视，限制使用化学农药和化学肥料已成为21世纪的主流。
目前微生物肥料技术方案种类众多，其效果主要集中在提高土壤肥效的方面，对于微生物肥杀菌的效果并没有做深入的研究，如201010588684.3公开的技术方案包括沼泽红假单胞菌发酵液、酵母菌发酵液、固氮菌发酵液、解磷菌发酵液和硅酸盐细菌发酵液的混合发酵物。在很多文章也提出，微生物肥料中也可以加入能够分泌毒素成分的微生物而制成具有杀菌杀虫功能的微生物肥。河北大学学报2006年7月，26卷4期公开了一种具有杀虫效果的微生物肥料制剂的研制。其核心内容是使用了胶质孢芽杆菌、圆褐固氮菌、阿维链霉菌分别发酵扩大培养，然后混合。该技术方案制备的肥料具有杀虫和提高肥效的双重效果。但是微生物肥本身是依靠微生物活动固氮、解磷、解钾，而加入能产生毒素的微生物，不可避免地对肥效产生一定的副作用。为此需要研制出具良好的杀虫效果和良好的肥料效果为一体的复合生物制剂，将成为我国微生物肥料今后的发展和研究趋势 。
发明内容
本发明的技术方案为了提高微生物肥的杀菌杀虫及肥效而提供了一种新型杀虫抑菌生物肥料及其制备方法。
本发明的技术方案是， 一种新型杀虫抑菌生物肥料，原料按重量份为：
5.5亿个/毫升的巨大芽孢杆菌 30-50份
4.0亿个/毫升的沼泽红假单胞菌 10-30份
562mg/mL的阿维链霉菌药效成分B1a 1-3份
糖蜜 200-300份
十二烷基苯磺酸钠 0.02-0.04份
吐温-80 0.03-0.05份
水 600-800份。
一种新型杀虫抑菌生物肥料的制备方法，步骤为：
（1）分别将巨大芽孢杆菌活化发酵深层培养得到液体，沼泽红假单胞菌发酵深层培养得到液体，阿维链霉菌发酵深层培养得到液体
（2）在1吨发酵罐中依次加入
① 5.5亿个/毫升巨大芽孢杆菌液30-50份，4.0亿个/毫升沼泽红假单胞菌液10-30份，562mg/mL阿维链霉菌药效成分B1a 液7-13份，
② 化料锅中加入糖蜜200-300份，80℃下搅拌30分钟后加入发酵罐中，
③ 化料锅中加入十二烷基苯磺酸钠0.02-0.04份，吐温0.03-0.05份，水，搅拌30分钟后加入发酵罐中，
（3）最后加水，加水总量为600-800份，
（4）在30℃下发酵48小时。
本发明所述的药肥复合生物制剂及其生产工艺， 确立巨大芽孢杆菌、 沼泽红假单胞菌和阿维链霉菌的发酵工艺参数，各项指标均符合农业部有关微生物肥料的质量标准。本发明工艺设计先进，液体深层发酵具有周期短、效率高、成本低、可大规模工业化生产等特点。操作性强， 适合于工业化生产.本发明的产品药肥复合生物制剂具有肥料和杀虫抑菌效果，应用前景广阔.
本发明的特点和优点：（1）本发明把巨大芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌和阿维链霉菌组合，其中巨大芽孢杆菌能分解土壤卵磷脂62%，分解核酸56%，分解有机化合物，释放91%的磷素。可以将土壤中固定的磷、钾转化为植物可以吸收利用的速效磷和速效钾，补充作物磷钾养分的不足；（2）沼泽红假单胞菌具固氮能力，提高土壤氮水平；促进土壤物质转化，改善土壤结构，提高土壤肥力；消除土壤中的有害物质，促进污染物的转化；产生脯氨酸、维生素、辅酶Q等生理活性物质，激活细胞，促进根系发育，提高光合作用和生长能力；钝化病原物致病力，激活土壤中放线菌等有益微生物，抑制丝状真菌等致病菌，增强作物抗病防病能力。（3）阿维链霉菌可以产生阿维菌素， 可有效杀死棉铃虫、玉米螟、美洲斑潜蝇等地上和根结线虫、地老虎、喽骷、金针虫等， 减少化学农药的用量。而且三种菌之间互相干扰小，肥效显著。具有高活性、高稳定性、作用效果快、成本低、具有固氮、解磷、解钾、杀虫、抑菌多种功能。
具体实施方式
实施例1
一种新型杀虫抑菌生物肥料及其制备方法，步骤为：
（1）菌种活化：将3菌株的保存菌种分别接种在各自的种子斜面培养基上，巨大芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌30℃恒温培养48h，阿维链霉菌28℃培养14d。
（2）种子培养：1L三角瓶中分别分装3菌株的种子培养基，120℃,30min灭菌，冷却至室温后分别接种各自的斜面种子，恒温摇床振荡培养，阿维链霉菌30℃，180r/min培养48h，镜检无杂菌，菌丝粗壮，种子液PH为6.5左右；巨大芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌30℃，200r/min培养14-18h，镜检菌体成对或单个排列，菌体粗壮，结晶紫染色均匀，PH为6.0-6.3.
（3）200L自动发酵罐发酵：将各自的发酵培养基加到3个发酵罐中，121℃，30min灭菌，冷却至室温后，分别接种巨大芽孢杆菌的接种量为7%，培养条件为：温度32℃，罐压0.05-0.06MP，搅拌转速150-180r/min，无菌空气流量1：0.5，发酵周期30-32h。沼泽红假单胞菌接种量为10%，培养条件为：温度30℃，罐压0.05-0.06MP，不开搅拌器，无菌空气流量1：0.5，发酵周期20-24h。阿维链霉菌的接种量为10%，培养条件为： 温度30℃，罐压0.05-0.06MP,搅拌转速为200r/min通风比为1:0.5，发酵周期8-9d.
（4）将制成的巨大芽孢杆菌：沼泽红假单胞菌：阿维链霉菌按照比例混合加入1吨发酵罐中，加入糖蜜、吐温-80、十二烷基苯磺酸钠，水，30℃培养48h。
所述的比例为：
5.5亿个/毫升的巨大芽孢杆菌 40重量份
4.0亿个/毫升的沼泽红假单胞菌 20重量份
562mg/mL的阿维链霉菌药效成分B1a 10重量份
糖蜜 240重量份
十二烷基苯磺酸钠 0.03重量份
吐温-80 0.04重量份
水 690重量份
上述方法中所涉及菌种的发酵培养基
（1）巨大芽孢杆菌菌斜面培养基（g/L）组成为：葡萄糖10g，(NH4 ) 2 SO4 0.5 g，酵母粉0.5g，NaCl0.3g，KCl0.3g，MgSO4·7H2O0.3g，FeSO4·7H2O0.03 g ,MnSO4 ·4H2 O0.03g，卵磷0.4g，CaCO31.0 g，琼脂12g，H2O1000 mL ，pH7.0-7.5。
种子培养基（g/L）：LB培养基，胰化蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl10g。
液体发酵培养基（g/L）：玉米粉20 g ，黄豆粉10g ，K2HPO41.5 g，MgSO4·7 H2O 1.5 g ，C a CO3 1.5g ，琼18-20g，pH7.5。
（2）沼泽红假单胞菌斜面培养基（g/L）：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂14.0 g和无菌水1000mL。
种子培养基（g/L）：葡萄糖2g，乙酸钠2g， NH4Cl2g，酵母膏1.5g，微量元素1.5g， pH7.0-7.5。
液体发酵培养基（g/L）：同种子培养基。
（3）阿维链霉菌斜面培养基（g/L）：可溶性淀粉20g，KNO31g，K2HPO40.5g，MgSO4· 7H2O0.5g，NaCl0.5g，FeSO4· 7H2O0.01g，琼脂20g，自来水1000mL，pH7.2-7.4。
种子培养基（g/L）：葡萄糖5.0g，黄豆饼粉5.0g，硫酸铵0.5g，磷酸氢二钾0.5g， PH为6.8。
液体培养基（g/L）：葡萄糖5.0g，黄豆饼粉5.0g，硫酸铵0.5g，磷酸二氢钾0.15g，硫酸镁0.025g，磷酸氢二钾0.25g，PH为6.6.
肥效实验
1试验地点：山西太原郊区玉米园
2试验时间：2011年5月
3试验对象：玉米
4配方：新型杀虫抑菌生物肥料原液50倍侵种；并于齐苗后喷施500倍液喷施一次。
5试验方案：
于太原郊区选取土质肥沃，地力均匀的田块，于2011年5月进行玉米栽植。种植前用本产品50倍液浸种，并于齐苗后用500倍液处理1次。对照药剂为背景技术中所述的具有杀虫效果的微生物肥料。
本试验每小区为垄宽3.25m，长15m，设置3次重复。处理及对照随机排列，于种植后8d和14d调查出苗率，并于5-6叶期调查其叶片最上缘至地表高度，根数量以及地上地下部鲜重。
6试验效果：
表1 新型菌剂对玉米苗期影响
| 产品 | 对照药剂 | 清水对照 | 增加百分比(%) | |
| 8d后出苗率(%) | 80.25 | 75.43 | 71.62 | 8.63 |
| 14d后出苗率(%) | 89.83 | 83.24 | 80.33 | 9.50 |
| 5-6叶期株高(cm) | 58.24 | 56.41 | 55.32 | 5.28 |
| 根数量 | 13.3 | 11.6 | 10.8 | 23.15 |
| 地上部鲜重(g) | 32.6 | 25.2 | 23.3 | 39.91 |
| 地下部鲜重(g) | 2.4 | 1.9 | 1.4 | 71.43 |
与对照相比，经新型杀虫抑菌生物肥料剂型处理后8d和14d出苗率、苗期株高、苗期根数量、地上部鲜重和地下部鲜重分别提高8.63% 、9.50%、5.28%、23.15%、39.91%和71.43%。可见菌剂能对玉米苗期起到明显的壮苗作用，且地上部分干重、地下部分干重均明显大于对照， 说明菌剂处理不仅提高出苗率、提高玉米的质量，而且对玉米的生长速度也有一定的促进作用。
实施例2
制备方法同实施例1各个原料比例为
5.5亿个/毫升的巨大芽孢杆菌 30重量份
4.0亿个/毫升的沼泽红假单胞菌 30重量份
562mg/mL的阿维链霉菌药效成分B1a 7重量份
糖蜜 300重量份
十二烷基苯磺酸钠 0.03重量份
吐温-80 0.05重量份
水 600重量份
肥效及杀菌杀虫效果测试
1试验地点：山西太原郊区茄子园
2试验时间：2011年5月
3试验对象：茄子
4配方：新型杀虫抑菌生物肥料原液300倍分别于5月11、21日、6月5、20日喷施4次
5试验方案：
于太原郊区选取土质肥沃，地力均匀的田块，于2011年5月进行茄子栽植。分别于5月11、21日、6月5日、20日喷施4次。于苗期选取长势均匀的茄子苗10株调查苗鲜重及其根数量，收获后取具有代表性的果实10个调查单果重并测产。
6试验效果：
表2 新型菌剂对茄子苗期及产量影响
| 产品 | 对照药剂 | 清水对照 | 增加百分比(%) | |
| 苗鲜重（g） | 13.3 | 11.2 | 8.7 | 52.87 |
| 根数量 | 8.4 | 6.2 | 5.8 | 44.83 |
| 单果重(g) | 636.9 | 607.5 | 574.3 | 10.90 |
| 亩产量(kg) | 892.4 | 796.5 | 762.4 | 17.05 |
新型杀虫抑菌生物肥料原液应用于茄子后， 苗期表现为壮苗作用。同时有利于茄子植株生长，催花、催果作用明显，表现为长势整齐旺盛，叶色浓绿，茄子果型好，有光泽。在茄子上喷施新型杀虫抑菌生物肥料原液后，增产、增效显著。每亩增产约130kg， 增产率达17.05%。
实施例3
制备方法同实施例1
5.5亿个/毫升的巨大芽孢杆菌 50重量份
4.0亿个/毫升的沼泽红假单胞菌 10重量份
562mg/mL的阿维链霉菌药效成分B1a 13重量份
糖蜜 300重量份
十二烷基苯磺酸钠 0.04重量份
吐温-80 0.03重量份
水 800重量份
肥效及杀菌杀虫效果测试
1试验地点：山西太原郊区梨树园
2试验时间：2011年4月
3试验对象：梨树
配方： 新型杀虫抑菌生物肥料原液喷施浓度为 500 倍液，于盛花期开始喷施，每7d喷施1 次，共喷施3 次。
5试验方案：
于太原郊区选取土质肥沃，地力均匀的梨园，种植品种为酥梨。于2011年6月上旬盛花期选取长势均匀的梨树进行喷施，每7d喷施一次。于坐果期选取长势均匀的梨树3株，全株调查轮纹病和黑星病发病情况，并于收获期调查单果重，并根据调查面积测量亩产。对照药剂为背景技术中所述的具有杀虫效果的微生物肥料。
6试验效果：
表3新型菌剂对酥梨的影响
| 产品 | 对照药剂 | 清水对照 | 增加百分比(%) | |
| 轮纹病发病率（%） | 2.4 | 10.7 | 20.3 | 17.90 |
| 黑星病发病率(%) | 4.1 | 9.8 | 24.6 | 20.50 |
| 可溶性固形物(mg/ml) | 16.2 | 12.8 | 11.6 | 39.66 |
| 单果重（g） | 307.1 | 258.6 | 254.2 | 20.81 |
| 产量(kg) | 4136.5 | 3864.7 | 3628.3 | 14.01 |
新型杀虫抑菌生物肥料原液喷施梨树后，显著提高梨树单果重及其可溶性固形物含量，并有效的提高了酥梨的亩产，增产幅度达到14.01%。喷施条件下，对梨树黑星病、轮纹病都呈现显著的抑菌活性，经菌剂处理后轮纹病和黑星病的发病率仅为2.4%和4.1%。
Claims (3)
1.一种新型杀虫抑菌生物肥料，其特征在于原料按重量份为：
5.5亿个/毫升的巨大芽孢杆菌 30-50份
4.0亿个/毫升的沼泽红假单胞菌 10-30份
562mg/mL的阿维链霉菌药效成分B1a 1-3份
糖蜜 200-300份
十二烷基苯磺酸钠 0.02-0.04份
吐温-80 0.03-0.05份
水 600-800份。
2.一种新型杀虫抑菌生物肥料的制备方法，其特征在于：步骤为：
（1）分别将巨大芽孢杆菌活化发酵深层培养得到液体，沼泽红假单胞菌发酵深层培养得到液体，阿维链霉菌发酵深层培养得到液体
（2）在1吨发酵罐中依次加入
① 5.5亿个/毫升巨大芽孢杆菌液30-50份，4.0亿个/毫升沼泽红假单胞菌液10-30份，562mg/mL阿维链霉菌药效成分B1a 液7-13份，
② 化料锅中加入糖蜜200-300份，80℃下搅拌30分钟后加入发酵罐中，
③ 化料锅中加入十二烷基苯磺酸钠0.02-0.04份，吐温0.03-0.05份，水，搅拌30分钟后加入发酵罐中，
（3）最后加水，加水总量为600-800份，
（4）在30℃下发酵48小时。
3.根据权利要去1所述的新型杀虫抑菌生物肥料，其特征在于：
原料按重量份为：
5.5亿个/毫升的巨大芽孢杆菌 40重量份
4.0亿个/毫升的沼泽红假单胞菌 20重量份
562mg/mL的阿维链霉菌药效成分B1a 10重量份
糖蜜 240重量份
十二烷基苯磺酸钠 0.03重量份
吐温-80 0.04重量份
水 690重量份。
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