CN102770412A

CN102770412A - (甲基磺酰基)乙基苯异吲哚啉衍生物及其治疗应用

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Publication number: CN102770412A
Application number: CN2010800645105A
Authority: CN
Inventors: 彼得·H·谢弗; 安东尼·J·弗兰克; 汉华·曼; 赛·L·尚卡尔
Original assignee: Celgene Corp
Current assignee: Celgene Corp
Priority date: 2009-12-22
Filing date: 2010-12-21
Publication date: 2012-11-07
Also published as: KR20120113219A; CO6640204A2; ECSP12011987A; US8716252B2; MX2012007217A; CL2012001671A1; JP2013515073A; EP2516395A1; BR112012015129A2; US20130116204A1; CA2783616A1; RU2012131164A; CR20120335A; WO2011079091A1; ZA201203944B; AU2010333767A1; SG181891A1; JP5760008B2

Abstract

提供了(甲基磺酰基)乙基苯异吲哚啉化合物、及其药用盐、溶剂化物或立体异构体。还公开了这些化合物的使用方法和药物组合物。

Description

(甲基磺酰基)乙基苯异吲哚啉衍生物及其治疗应用

1.技术领域

本发明提供了(甲基磺酰基)乙基苯异吲哚啉衍生物。还提供了包含该化合物的药物组合物及用于治疗、预防和控制各种疾病的方法。

2.背景技术

许多细胞功能是3′,5′-环单磷酸腺苷（cAMP）的水平介导的。这样的细胞功能能够有助于炎症病症和疾病，包括哮喘、炎症及其他病症（Lowe和Cheng,Drugs ofthe Future,17(9),799-807,1992）。已经表明在炎症白细胞中cAMP的升高抑制它们的活化和随后的炎症介质（包括TNF α）释放。cAMP水平升高还导致气道平滑肌松弛。另外，过度的或未调节的TNFα生成与大量疾病病症有关，包括但不限于自身免疫疾病和炎性疾病。特定的疾病病症包括内毒素血症和/或中毒性休克综合征[Tracey等人,Nature 330,662-664(1987)和Hinshaw等人,Circ.Shock 30,279-292(1990)]、类风湿性关节炎、炎症性肠病、恶病质[Dezube等人,Lancet,335(8690),662(1990)]、狼疮和癌症。

cAMP失活的主要细胞机制是由于被称为环核苷酸磷酸二酯酶（PDE）的一类同工酶破坏了cAMP[Beavo和Reitsnyder,TrendsinPharm.,11,150-155,1990]。已知PDE家族有超过10个成员。已证实，抑制IV型PDE（PDE 4）酶对抑制炎性介质的释放和呼吸道平滑肌松弛都特别有效(Verghese等人,Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics,272(3),1313-1320,1995]。

提高cAMP水平（例如，抑制PDE 4）和/或因而降低TNFα水平构成了用于治疗许多炎症、感染、免疫学疾病和恶性疾病的有价值的治疗策略。这些疾病包括，但不限于：肺部疾病、败血症性休克、败血症、内毒素性休克、血液动力学休克和败血症综合征、缺血后再灌注损伤、疟疾、分枝杆菌感染、脑膜炎、许多类型的银屑病及其他皮肤疾病、充血性心力衰竭、纤维变性疾病、恶病质、移植排斥、癌症、肿瘤生长、不期望的血管生成、自体免疫疾病、AIDS的机会性感染、类风湿性关节炎、类风湿性脊椎炎、骨关节炎、其他关节炎病症、炎症性肠病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮、麻风病中的ENL、放射损伤、和高氧性肺泡损伤。

另外，多种其他疾病和病症也与不期望的血管生成有关，或以其为特征。例如，增强的或不受调节的血管生成涉及许多疾病和医学病症，包括，但不限于，眼部新血管疾病、脉络膜新血管疾病、视网膜新血管疾病、虹膜红变（角的新血管形成）、病毒性疾病、遗传性疾病、炎症性疾病、变应性疾病、肿瘤生长和自身免疫性疾病。这样的疾病和病症的实例包括，但不限于：糖尿病性视网膜病；早产的视网膜病；角膜移植排斥；新生血管性青光眼；晶状体后纤维组织形成；关节炎；和增殖性玻璃体视网膜病变。

因此，能够控制血管生成、抑制PDE 4和/或抑制某些细胞因子（包括TNFα）生成的化合物可以用于治疗和预防各种疾病和病症。

3.发明内容

本发明提供了(甲基磺酰基)乙基苯异吲哚啉类似物、及其药用盐、溶剂化物（例如水合物）、前药、包合物（clathrate）或立体异构体。

还提供了治疗和控制各种疾病或病症的方法。所述方法包括向需要这种治疗或控制、或患有这样的疾病或病症的患者给予治疗有效量的本文提供的化合物、或其药用盐、溶剂化物、前药、包合物、或立体异构体。

本发明还提供了预防各种疾病和病症的方法，包括向需要这样的预防或处于这样的疾病或病症的风险中的患者给予预防有效量的本文提供的化合物、或其药用盐、溶剂化物、前药、包合物或立体异构体。

本发明还提供了包含本文提供的化合物、或其药用盐、溶剂化物、前药、包合物或立体异构体的药物组合物、单一单位剂型、剂量给药方案和试剂盒。

4.具体实施方式

在一种实施方式中，本发明提供了(甲基磺酰基)乙基苯异吲哚啉化合物、及其药用盐、溶剂化物、前药、包合物和立体异构体。

在另一种实施方式中，本发明提供了治疗、控制和预防各种疾病和病症的方法，包括向患者给予治疗或预防有效量的本文提供的化合物、或其药用盐、溶剂化物、前药、包合物或立体异构体。疾病和病症的实例为本文描述的。

在其他的实施方式中，本文提供的化合物、或其药用盐、溶剂化物、前药、包合物或立体异构体与另一种药物（“第二活性剂”）或治疗联合施予。第二活性剂包括小分子和大分子（例如蛋白质和抗体），其实例为本文提供的，以及干细胞。可以与给予本文提供的化合物组合使用的方法或疗法包括，但不限于，外科手术、输血、免疫疗法、生物学疗法、放射疗法，以及目前用于治疗、预防或控制本文描述的各种病症的其他非基于药物的疗法。

还提供了可以在本文提供的方法中使用的药物组合物（例如，单一单位剂型）。在一种实施方式中，该药物组合物包括本文提供的化合物、或其药用盐、溶剂化物、前药、包合物或立体异构体，以及可选的第二活性剂。

4.1化合物

在一种实施方式中，本文提供了式（I）的化合物：

或其药用盐、溶剂化物或立体异构体，其中：

R¹为氢、葡糖苷酸（“gluc”）、或(环丙基)-C(O)-，其中所述环丙基可以被一个或多个羟基取代；

R²为氢、甲基或gluc；

R³为氢、乙基或gluc；和

R⁴为氢、羟基或–O-gluc；

条件是，当R²为甲基且R³为乙基时，则R¹不能为未取代的(环丙基)-O-。

在一种实施方式中，R¹为氢。在另一种实施方式中，R¹为gluc。在另一种实施方式中，R¹为(环丙基)-C(O)-。在另一种实施方式中，R¹为(环丙基)-C(O)-，其中所述环丙基被羟基取代。

在一种实施方式中，R²为氢。在另一种实施方式中，R²为甲基。在另一种实施方式中，R²为gluc。

在一种实施方式中，R³为氢。在另一种实施方式中，R³为乙基。在另一种实施方式中，R³为gluc。

在一种实施方式中，R⁴为羟基。在另一种实施方式中，R⁴为-O-gluc。

本文还提供了由R¹-R⁴得到的每种组合。

在一种实施方式中，R¹为氢，R²为甲基，和R³为乙基。

在另一种实施方式中，R¹为氢，R²为gluc，和R³为乙基。

在另一种实施方式中，R¹为(环丙基)-C(O)-，其中所述环丙基被-OH取代，R²为甲基，和R³为乙基。

在另一种实施方式中，R¹为(环丙基)-C(O)-，且R³为乙基。在另一种实施方式中，其中R¹为(环丙基)-C(O)-和R³为乙基，R²为氢。在另一种实施方式中，其中R¹为(环丙基)-C(O)-和R³为乙基，R²为gluc。

在一种实施方式中，R²和R³均为氢。在另一种实施方式中，其中R²和R³均为氢，R¹为(环丙基)-C(O)-。

在另一种实施方式中，R¹为(环丙基)-C(O)-，且R²为甲基。在另一种实施方式中，其中R¹为(环丙基)-C(O)-，且R²为甲基，R¹为氢。在另一种实施方式中，其中R¹为(环丙基)-C(O)-和R²为甲基，R¹为gluc。

在另一种实施方式中，R¹为(环丙基)-C(O)-，其中环丙基被-OH取代，且R³为乙基。在另一种实施方式中，其中R¹为(OH-取代的环丙基)-C(O)-和R³为乙基，R²为氢。在另一种实施方式中，其中R¹为(OH-取代的环丙基)-C(O)-和R³为乙基，R²为gluc。

具体化合物包括，但不限于∶

和

如本文使用的，除非另有说明，术语“药用盐”是指由可药用的无毒酸（包括无机酸和有机酸）制备的盐。合适的无毒酸包括无机酸和有机酸，例如，但不限于：乙酸、海藻酸、邻氨基苯甲酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、甲酸、富马酸、糠酸、葡糖酸、谷氨酸、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、缩水甘油酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘液酸、硝酸、扑酸、泛酸、苯乙酸、丙酸、磷酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、对氨基苯磺酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。在一种实施方式中，合适酸的是盐酸、氢溴酸、磷酸和硫酸。

如本文使用的，且除非另有说明，术语“溶剂化物”是指进一步包括通过非共价分子间作用力结合的化学计量的或非化学计量量的溶剂的化合物。当溶剂为水时，所述溶剂化物为水合物。

如本文使用的，且除非另有说明，术语“前药”是指化合物的衍生物，其在生物学条件下（体外或体内）能够发生水解、氧化或发生其他反应而提供该化合物。前药的实例包括，但不限于：包含可生物水解的部分的化合物，该可生物水解的部分例如可生物水解的酰胺、可生物水解的酯、可生物水解的氨基甲酸酯、可生物水解的碳酸酯、可生物水解的酰脲和可生物水解的磷酸酯类似物。前药的其他实例包括含有-NO、-NO₂、-ONO或-ONO₂部分的化合物。前药通常可利用公知的方法来制备，如在Burger’sMedicinal Chemistry and Drug Discovery,172-178,949-982（Manfred E.Wolffed.,第5版，1995）和Design of Prodrugs（H.Bundgaard ed.,Elselvier,New York1985）中描述的方法。

除非另有说明，如本文使用的术语“可生物水解的氨基甲酸酯”、“可生物水解的碳酸酯”、“可生物水解的酰脲”和“可生物水解的磷酸酯”分别指化合物的氨基甲酸酯、碳酸酯、酰脲和磷酸酯，它们：1）不会影响该化合物的生物活性，但可赋予该化合物有利的体内性质，例如吸收、作用持续时间或作用的开始；或2）是生物学非活性的，但可在体内转化成生物学活性化合物。可生物水解的氨基甲酸酯的实例包括，但不限于包括低级烷基胺、取代的乙二胺、氨基酸、羟基烷基胺、杂环胺和杂芳基胺、以及聚醚胺部分的氨基甲酸酯。

除非另有说明，如本文使用的术语“立体异构体”涵盖所有对映异构/立体异构纯的和对映异构/立体异构富集的本发明提供的化合物。

除非另有说明，如本文使用的术语“立体异构纯的”是指包含化合物的一种立体异构体而基本上不含该化合物的其他立体异构体的组合物。例如，具有一个手性中心的化合物的立体异构纯的组合物将基本上不含该化合物的相反的对映异构体。具有两个手性中心的化合物的立体异构纯的组合物将基本上不含该化合物的其他非对映异构体。典型的立体异构纯的化合物包括大于约80%重量的该化合物的一种立体异构体和小于约20%重量的该化合物的其他立体异构体，更优选大于约90%重量的该化合物的一种立体异构体和小于约10%重量的该化合物的其他立体异构体，更优选大于约95%重量的该化合物的一种立体异构体和小于约5%重量的该化合物的其他立体异构体，或最大于约97%重量的该化合物的一种立体异构体和小于约3%重量的该化合物的其他立体异构体。

除非另有说明，如本文使用的术语“立体异构富集的”是指包含大于约55%重量的化合物的一种立体异构体，大于约60%重量的化合物的一种立体异构体，大于约70%重量，或大于约80%重量的化合物的一种立体异构体的组合物。

除非另有说明，如本文使用的术语“对映异构纯的”是指具有一个手性中心的化合物的立体异构纯的组合物。类似地，术语“对映异构富集的”是指具有一个手性中心的化合物的立体异构富集的组合物。

除非另有说明，如本文使用的术语“烷基”是指具有如本文指定的碳原子数的饱和直链或支链烃。代表性的饱和直链烷基包括：-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基和-正己基；而饱和支链烷基包括：-异丙基、-仲丁基、-异丁基、-叔丁基、-异戊基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基丁基等。术语“烷基”也涵盖环烷基。

除非另有说明，如本文使用的术语“环烷基”是指包含3至15个碳原子，并且在碳原子之间没有交替或共振双键（resonating double bond）的一类烷基。其可包含1至4个环。未取代的环烷基的实例包括，但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基和金刚烷基。环烷基可以被一个或多个取代基取代。

如本文使用的，术语“芳基”是指包含5至14个环原子的碳环芳香环。碳环芳基的环原子全部为碳原子。芳环结构包括具有一个或多个环状结构的化合物，例如单环、二环或三环化合物以及苯并稠合碳环部分，如5,6,7,8-四氢萘基等。具体地，芳基为单环或双环。代表性的芳基包括苯基、蒽基、芴基、茚基、薁基（azulenyl）、菲基和萘基。

应当注意，如果描述的结构和对该结构给出的名称之间存在不一致，则以描述的结构为准。此外，如果结构或结构部分的立体化学没有用例如粗线或虚线来指示，则该结构或结构部分应被理解为涵盖其所有的立体异构体。

4.2治疗、预防和/或控制的方法

本文包括利用本文提供的化合物、或其药用盐、溶剂化物（例如水合物）、前药、包合物或立体异构体来治疗、预防和/或控制各种疾病或病症的方法。不受特定理论的限制，本文提供的化合物能够抑制PDE 4酶活性、控制血管生成或抑制某些细胞因子的生成，所述细胞因子包括，但不限于TNF-α、INF-α、IP-10、MIG、IL-1β、IL-12、IL-18、GM-CSF和/或IL-6。不受特定理论的限制，本文提供的化合物能够刺激某些其他细胞因子（包括IL-10）的生成，以及充当T细胞活化的抑制剂，导致细胞因子例如但不限于IL-2和/或IFN-γ的生成减少。另外，本文提供的化合物能够抑制NK细胞的作用。此外，本文提供的化合物可以是免疫调节性的和/或细胞毒素的，因而可以用作化疗剂，特别是用于对抗例如但不限于慢性淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病和弥漫性大B细胞淋巴瘤之类的疾病。本文提供的化合物也能够抗血管生成，因而，可以用于治疗癌症。因此，不受特定理论的限制，本文提供的化合物具有的一些或所有这类特征使得其可用于治疗、控制和/或预防各种疾病或病症。

疾病或病症的实例包括，但不限于：肺部病症，包括，但不限于哮喘、COPD、硬皮病和特发性肺纤维化；皮肤病，包括，但不限于皮肤型红斑狼疮（cutaneous lupus erythmatosus）、盘状红斑狼疮、皮肌炎、系统性红斑狼疮、银屑病、异位性皮炎（atomic dermatitis）、结节病和表皮结节病；TNFα相关病症，包括，但不限于炎症疾病、自身免疫性疾病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、痛风性关节炎、银屑病、克罗恩病和溃疡性结肠炎；癌症；白血病，包括慢性淋巴细胞性白血病和急性成淋巴细胞性白血病；淋巴瘤，包括弥漫性大B细胞淋巴瘤；与血管生成相关的病症，如癌症或肿瘤生长；疼痛，包括，但不限于复杂性区域疼痛综合征（“CRPS”）；黄斑变性（“MD”）和葡萄膜炎，及其相关综合征；石棉相关病症；寄生虫病；免疫缺陷病症；CNS病症；CNS损伤；动脉粥样硬化和相关病症；睡眠功能障碍和相关病症；血红蛋白病和相关病症（例如贫血）；及其他各种疾病和病症。

除非另有说明，如本文使用的术语“治疗”是指根除或改善疾病或病症、或者与该疾病或病症相关的一种或多种症状。在某些实施方式中，该术语是指向患有这样的疾病或病症的受试者给药一种或多种预防或治疗而使所述疾病或病症的扩散或恶化最小化。在某些实施方式中，该术语是指在具体疾病的症状发作之后，与其他另外的活性剂一起给予本文提供的化合物与或不与其他另外的活性剂一起给予本文提供的化合物。

除非另有说明，如本文使用的术语“预防”是指预防疾病或病症、或其一种或多种症状的发作、复发或扩散。在某些实施方式中，该术语是指在症状发作之前，尤其是对于处于本文提供的疾病或病症的风险之中的患者，用本文提供的化合物与或不与其他另外的活性化合物治疗或给药所述化合物。该术语涵盖抑制或减少具体疾病的症状。在某些实施方式中，患有家族病史的患者尤其地为预防方案的候选者。另外，具有复发症状病史的患者也是预防的潜在候选者。在这点上，术语“预防”可以与术语“预防性治疗”互换地使用。

除非另有说明，如本文使用的术语“控制”是指预防或减缓疾病或病症、或其一种或多种症状的进展、扩散或恶化。通常，受试者从预防或治疗试剂得到的有益效果不会导致疾病或病症的治愈。在这点上，术语“控制”涵盖治疗患有特定疾病的患者以尝试预防或最小化疾病的复发。

除非另有说明，如本文使用的化合物的“治疗有效量”是指在治疗或控制疾病或病症中足够提供治疗益处、或者足够延迟或最小化与所述疾病或病症相关的一种或多种症状的量。化合物的治疗有效量指单独或与其他疗法组合使用的治疗剂的量，该量在治疗或控制疾病或病症中可提供治疗益处。术语“治疗有效量”可以涵盖改善整个治疗、减少或避免疾病或病症的症状或病因或者增强另一种治疗剂的治疗效果的量。

除非另有说明，如本文使用的化合物的“预防有效量”是指足够预防疾病或病症、或者预防疾病复发的量。化合物的预防有效量指单独或与其他试剂组合使用的治疗剂的量，该量在预防疾病方面提供预防益处。术语“预防有效量”可以涵盖改善整个预防或增强另一种预防试剂的预防功效的量。

除非另有说明，如本文使用的术语“给药（给予）”涵盖当本文提供的化合物存在于患者体外时向患者提供本文提供的化合物。因此，该术语涵盖向患者提供分离的或纯化的化合物。

肺部病症的实例包括，但不限于在2005年10月27日公开的美国公开号2005/0239842A1中描述的那些，将其引入本文作为参考。具体实例包括肺动脉高压和相关病症。肺动脉高压和相关病症的实例包括，但不限于∶哮喘；慢性阻塞性肺病（COPD）；原发性肺动脉高压（PPH）；继发性肺动脉高压（SPH）；家族性PPH；偶发性PPH；前毛细血管肺动脉高压；肺动脉高压（PAH）；肺动脉高压；特发性肺动脉高压；特发性肺纤维化，血栓性肺动脉病（TPA）；致丛性肺动脉病（plexogenic pulmonary arteriopathy）；功能性I至IV型肺高压；和与以下疾病相关、涉及以下疾病或由以下疾病继发的肺动脉高压：左心室异常、二尖瓣瓣膜病、缩窄性心包炎、主动脉瓣狭窄、心肌病、纵隔纤维变性、肺静脉畸形引流、肺静脉闭塞症、胶原血管病、先天性心脏病、HIV病毒感染、药物和毒素如氟苯丙胺、先天性心脏病、肺静脉高压、慢性阻塞性肺病、间质性肺病、睡眠呼吸障碍、肺泡通气不足、慢性高原病、新生儿肺病、肺泡-毛细管发育不良、镰状红细胞病、其他凝血障碍、慢性血栓栓塞、结缔组织疾病、狼疮（包括全身性和皮肤性狼疮）、血吸虫病、结节病或肺毛细管瘤。

在一种实施方式中，本文提供了治疗、预防或控制哮喘的方法。在另一种实施方式中，本文提供治疗、预防或控制COPD的方法。在另一种实施方式中，本文提供了治疗、预防或控制特发性肺纤维化的方法。

皮肤病的实例包括，但不限于在2005年9月29日公开的美国专利公开号2005/0214328A1中描述的那些，将其引入本文作为参考。具体的实例包括，但不限于角化病和相关症状、以表皮的过度生长为特征的皮肤疾病或病症、痤疮、皱纹及其他皮肤病。

如本文使用的，术语“角化病”是指以存在角质层的局限性过度生长为标志的任何表皮病变，包括但不限于光化性角化病、脂溢性角化病、角化棘皮瘤、毛囊角化病（达里耶病）、内翻性毛囊角化病、掌跖角皮病（PPK，掌跖角化症）、毛发角化病和灰泥角化病。术语“光化性角化病”也指老年性角化病、老年角化病、老年疣、老年性扁平疣（plana senilis）、日光性角化病、角皮病、或角质瘤。术语“脂溢性角化病”也指皮脂溢性疣、老年疣或基底细胞乳头状瘤。角化病的特征是具有下述症状中的一种或多种：暴露表面（例如面部、手、耳朵、颈部、腿和胸）的外观粗糙、鳞皮状、红斑丘疹、小半鞘翅、小穗或小瘤，被称为皮角的角蛋白赘生物、过度角化、毛细管扩张、弹性组织变性、含色素小痣、棘皮症、角化不全、角化不良症、乳头状瘤病、基底细胞色素过度沉积、细胞异型度、分裂象（mitotic figures）、异常细胞间粘连、密集炎症渗透和鳞状细胞癌的小范围流行。

以表皮过度生长为特征的皮肤疾病或病症的实例包括，但不限于：以存在表皮过度生长为标志的任何状况、疾病或病症，包括但不限于，与乳头状瘤病毒相关的感染、砷角化病、累-特二氏征、疣状角化不良瘤（WD）、小棘毛壅病（TS）、变异性红角皮病（EKV）、胎儿鱼鳞病（丑角样鱼鳞病）、指拐垫、表皮黑素棘皮瘤、汗孔角化病、银屑病、鳞状细胞癌、融合性网状乳头状瘤（CRP）、软垂疣、皮角、考登病（多发性错构瘤综合征）、黑色丘疹性皮肤病（DPN）、表皮痣综合征（ENS）、寻常性鱼鳞癣、传染性软疣、结节性痒疹、和黑棘皮病（AN）。

其他皮肤病包括，但不限于：表皮红斑狼疮、盘状红斑狼疮、皮肌炎、系统性红斑狼疮、银屑病和表皮结节病。在一种实施方式中，本文提供了治疗、预防或控制表皮红斑狼疮的方法。在另一种实施方式中，本文提供了治疗、预防或控制盘状红斑狼疮的方法。在另一种实施方式中，本文提供了治疗、预防或控制皮肌炎的方法。在一种实施方式中，本文提供了治疗、预防或控制系统性红斑狼疮的方法。在另一种实施方式中，本文提供了治疗、预防或控制银屑病的方法。在另一种实施方式中，本文提供了治疗、预防或控制皮肤结节病的方法。

TNFα升高相关病症的实例包括，但不限于：在WO 98/03502和WO98/54170中描述的那些，将这两篇的全部内容都引用本文作为参考。具体的实例包括，但不限于：内毒素血症或中毒性休克综合征；恶病质；成人呼吸窘迫综合征；骨吸收疾病，例如关节炎；高钙血症；移植物抗宿主反应；脑型疟疾；炎症；肿瘤生长；慢性肺部炎症疾病；再灌注损伤；心肌梗死；中风；循环性休克；类风湿性关节炎；克罗恩病；HIV感染和AIDS；其他的病症。类风湿性关节炎、痛风性关节炎、类风湿性脊椎炎、强直性脊柱炎、骨关节炎、银屑病关节炎及其他关节炎性病症、败血症性休克、脓毒症、内毒素性休克、移植物抗宿主病、消瘦、克罗恩病、溃疡性结肠炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮、麻风病中的ENL、HIV、AIDS和AIDS中的机会性感染；例如以下的病症：败血症性休克、脓毒症、内毒素性休克、血液动力学休克和败血症综合征、局部缺血后再灌注损伤、疟疾、分枝杆菌感染、脑膜炎、银屑病、充血性心力衰竭、纤维变性疾病、发热、恶病质、移植排斥、致癌或癌性病症、哮喘、自体免疫疾病、放射损伤和高氧性肺泡损伤；病毒感染，例如由疱疹病毒引起的感染；病毒性结膜炎；或特应性皮炎。

在一种实施方式中，本文提供了治疗、预防或控制类风湿性关节炎的方法。在另一种实施方式中，本文提供了治疗、预防或控制银屑病关节炎的方法。在另一种实施方式中，本文提供了治疗、预防或控制强直性脊柱炎的方法。在一种实施方式中，本文提供了治疗、预防或控制痛风性关节炎的方法。在另一种实施方式中，本文提供了治疗、预防或控制克罗恩病的方法。在另一种实施方式中，本文提供了治疗、预防或控制溃疡性结肠炎的方法。在另一种实施方式中，本文提供了治疗、预防或控制银屑病的方法。

癌症和癌前病症的实例包括，但不限于以下文献中描述的那些：Muller等人的美国专利号6,281,230和5,635,517；Zeldis的多个美国专利申请，包括2004年11月4日公布的公开号2004/0220144A1（Treatment ofMyelodysplastic Syndrome（骨髓增生异常综合征的治疗））、2004年2月12日公开的2004/0029832A1（Treatment of Various Types of Cancer（多种类型的癌症的治疗））、和2004年5月6日公布的2004/0087546（Treatment ofMyeloproliferative Diseases（骨髓增生性疾病的治疗））。实例还包括在2004年12月2日公开的WO 2004/103274中描述的那些。将所有这些参考文献的全部内容引入本文作为参考。

癌症的具体实例包括，但不限于：皮肤癌，如黑素瘤；淋巴结癌；乳腺癌；宫颈癌；子宫癌；胃肠道癌；肺癌；卵巢癌；前列腺癌；结肠癌；直肠癌；口腔癌；脑癌；头颈癌；咽喉癌；睾丸癌；肾癌；胰腺癌；骨癌；脾癌；肝癌；膀胱癌；喉癌；鼻道癌；以及与AIDS相关的癌症。所述化合物特别地用于治疗血癌和骨髓癌，如多发性骨髓瘤及急性和慢性白血病，例如成淋巴细胞性白血病、成髓细胞性白血病、淋巴细胞性白血病和髓细胞性白血病。本文提供的化合物可用于治疗、预防或控制原发性或转移性肿瘤。

其他具体的癌症包括，但不限于：晚期恶性肿瘤、淀粉样变性、成神经细胞瘤、脑膜瘤、血管外皮细胞瘤、多发性脑转移、多形性成胶质细胞瘤、成胶质细胞瘤、脑干胶质瘤、预后不良恶性脑肿瘤、恶性胶质瘤、复发性恶性胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、多形性少突神经胶质瘤、神经内分泌肿瘤、直肠腺癌、Dukes C期和D期结直肠癌、不可切除的结肠直肠癌、转移性肝细胞癌、卡波济氏肉瘤、核型急性成髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病（CLL）、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、皮肤T-细胞淋巴瘤、皮肤B-细胞淋巴瘤、弥漫性大B-细胞淋巴瘤、低级滤泡性淋巴瘤、转移性黑素瘤（局部黑素瘤，包括，但不限于眼黑素瘤）、恶性间皮瘤、恶性胸腔积液间皮瘤综合征、腹膜癌、乳头状浆液性癌、妇科肉瘤、软组织肉瘤、硬皮病、皮肤血管炎、朗格汉斯细胞组织细胞增多症、平滑肌肉瘤、进行性骨化性纤维发育不良、激素难治性前列腺癌、切除性高危软组织肉瘤、不可切除的肝细胞癌、Waldenstrom′s巨球蛋白血症、郁积性骨髓瘤、无痛性骨髓瘤、输卵管癌、雄激素非依赖性前列腺癌、雄激素依赖性IV期非转移性前列腺癌、激素不敏感性前列腺癌、化疗-不敏感性前列腺癌、乳头状甲状腺癌、滤泡性甲状腺癌、甲状腺髓样癌和平滑肌瘤。在具体的实施方式中，所述癌症是转移癌。在另一实施方式中，所述癌症是化疗或放射难治的或对其有抗性的癌症。

在一种实施方式中，本发明提供了治疗、预防或控制各种形式的白血病的方法，所述白血病，如慢性淋巴细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病和急性成髓细胞性白血病，包括复发的、难治的或有抗性的白血病，如在2006年2月9日公开的美国专利公开号2006/0030594中所公开的，将其全部内容引入本文作为参考。

术语“白血病”是指血液形成组织的恶性肿瘤。白血病包括，但不限于：慢性淋巴细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病和急性成髓细胞性白血病。所述白血病可以是复发的、难治的或对常规治疗有抗性的。术语“复发的”是指在治疗后白血病已经好转的患者的骨髓中白血病细胞重新出现以及正常血细胞减少的情况。术语“难治的或有抗性的”是指即使在强化治疗后，患者的骨髓中仍具有残留白血病细胞的情况。在一种实施方式中，本文提供了治疗、预防或控制慢性淋巴细胞性白血病的方法。在另一种实施方式中，本文提供了治疗、预防或控制急性成淋巴细胞性白血病的方法。

在另一种实施方式中，本文提供了治疗、预防或控制各种类型的淋巴瘤包括非霍奇金淋巴瘤（NHL）的方法。术语“淋巴瘤”是指在网状内皮和淋巴系统中产生的异源群肿瘤。“NHL”是指在免疫系统的位点中的淋巴样细胞的恶性单克隆增殖，所述免疫系统的位点包括淋巴结、骨髓、脾、肝和胃肠道。NHL的实例包括，但不限于，外套细胞淋巴瘤（MCL）、中度分化的淋巴细胞性淋巴瘤、中间淋巴细胞性淋巴瘤（ILL）、弥散性低分化淋巴细胞性淋巴瘤（PDL）、弥漫性大B细胞淋巴瘤、中心细胞性淋巴瘤、弥漫性小核裂细胞淋巴瘤（DSCCL）、滤泡性淋巴瘤和可在显微镜下看见的任何类型的外套细胞淋巴瘤（结节状淋巴瘤、弥漫性淋巴瘤、母细胞性淋巴瘤和外套带淋巴瘤）。在一种实施方式中，本文提供了治疗、预防或控制弥漫性大B细胞淋巴瘤的方法。

与不期望的血管发生相关的或以其为特征的疾病和病症的实例包括，但不限于，炎症疾病、自身免疫性疾病、病毒性疾病、遗传性疾病、过敏性疾病、细菌性疾病、眼部新血管疾病、脉络膜新血管疾病、视网膜新血管疾病、癌症和潮红（角的新生血管形成）。与不期望的血管生成相关的或以其为特征的疾病和病症的具体实例包括，但不限于：关节炎、子宫内膜异位、克罗恩病、心力衰竭、晚期心力衰竭、肾脏损伤、内毒素血症、中毒性休克综合征、骨关节炎、逆转录病毒复制、消瘦、脑膜炎、二氧化硅诱发的纤维化、石棉-诱发的纤维化、兽医病症、恶性肿瘤相关的高钙血症、中风、循环性休克、牙周炎、齿龈炎、大红细胞性贫血、难治性贫血、和5q-缺失综合征。

疼痛的实例包括，但不限于在2005年9月15日公开的美国专利公开号2005/0203142A1中描述的那些，将其引入本文作为参考。疼痛的具体类型包括，但不限于：伤害性疼痛、神经性疼痛、伤害性疼痛和神经性疼痛的混合型疼痛、内脏痛、偏头痛、头痛和术后疼痛。

伤害性疼痛的实例包括，但不限于，与化学或热烧伤相关的疼痛、皮肤割伤、皮肤擦伤、骨关节炎、类风湿性关节炎、腱炎、和筋膜疼痛。

神经性疼痛的实例包括，但不限于，I型CRPS、II型CRPS、反射交感性营养不良（RSD）、反射神经血管性营养不良、反射性营养不良、交感神经持续性疼痛综合征、灼性神经痛、Sudeck骨萎缩、痛觉神经营养不良、肩手综合征、创伤后营养不良、三叉神经痛、疱疹后神经痛、癌症相关疼痛、幻肢痛、纤维肌痛、慢性疲劳综合征、脊髓损伤性疼痛、中枢中风后疼痛、神经根病、糖尿病性神经病、中风后疼痛、梅毒性神经病、及其他疼痛性神经性病症，例如由药物，如长春新碱和万珂（velcade，硼替佐米）引起的病症。

如本文使用的术语“复杂区域性疼痛综合征”、“CRPS”和“CRPS和相关综合征”是指具有一种或多种下述特征的慢性疼痛病症：疼痛，无论是自发性或诱发性，其包括，异常性疼痛（对通常不引起疼痛的刺激的疼痛反应）和痛觉过敏（对通常仅引起轻度疼痛的刺激的夸大反应）；对刺激事件不相称的疼痛（例如踝扭伤后的数年严重疼痛）；不限于单一周围神经分布的局部疼痛；和与营养性皮肤改变（毛发和指甲生长异常，以及皮肤溃疡）相关的自发失调（例如水肿、血流改变和多汗）。

MD和相关综合征的实例包括，但不限于：在2004年5月13日公开的美国专利公开号2004/0091455中描述的那些，将其引入本文作为参考。具体的实例包括，但不限于：萎缩性（干性）MD、渗出性（湿性）MD、年龄相关黄斑病（ARM）、脉络膜新血管形成（CNVM）、视网膜色素上皮脱落（PED）、和视网膜色素上皮萎缩（RPE）。在一种实施方式中，本文提供治疗预防或控制葡萄膜炎的方法。

石棉-相关病症的实例包括，但不限于，在2005年5月12日公开的美国公开号2005/0100529中描述的那些，将其引入本文作为参考。具体的实例包括，但不限于：间皮瘤、石棉沉着病、恶性肿瘤性胸腔积液、良性渗出性积液、胸膜斑块、胸膜钙化、弥漫性胸膜肥厚、圆形肺不张、纤维变性团块、和肺癌。

寄生虫病的实例包括，但不限于，在2006年7月13日公开的美国公开号2006/0154880中描述的那些，将其引入本文作为参考。寄生虫病包括由人胞内寄生物引起的疾病和病症，所述胞内寄生物例如，但不限于：恶性疟原虫(P.falcifarium)、卵形疟原虫(P.ovale)、间日疟原虫(P.vivax)、三日疟原虫(P.malariae)、杜氏利什曼原虫(L.donovari)、婴儿利什曼原虫(L.infantum)、埃塞俄比亚利什曼原虫(L.aethiopica)、硕大利什曼原虫(L.major)、热带利什曼原虫(L.tropica)、墨西哥利什曼原虫(L.mexicana)、巴西利什曼原虫(L.braziliensis)、猪弓形虫(T.Gondii)、仓鼠巴贝西原虫(B.microti)、分歧巴贝西原虫(B.divergens)、结肠巴贝西原虫(B.coli)、小隐孢子虫(C.parvum)、环孢子虫(C.cayetanensis)、赤痢阿米巴原虫(E.histolytica)、贝氏等孢球虫(I.belli)、曼氏血吸虫(S.mansonii)、肾脏血吸虫(S.haematobium)、锥虫(Trypanosoma ssp.)、弓形虫(Toxoplasma ssp.)、和蟠尾丝虫(O.volvulus)。也涵盖由非人胞内寄生物引起的其他疾病和病症，所述非人胞内寄生物例如，但不限于：牛巴贝西原虫(Babesia bovis)、狗巴贝西原虫(Babesia canis)、吉氏巴贝西原虫(Banesia Gibsoni)、蜥蜴的球孢子虫(Besnoitia darlingi)、猫胞裂虫（Cytauxzoon felis)、艾美球虫(Eimeria ssp.)、哈芒球虫(Hammondia ssp.)和泰勒虫(Theileria ssp.)。具体的实例包括，但不限于：疟疾、巴贝西虫病、锥虫病、利什曼病、弓形体病、脑膜脑炎、角膜炎、阿米巴病、贾第鞭毛虫病、隐孢子虫病、等孢子球虫病、环孢子虫病、微孢子虫病、蛔虫病、鞭虫病、钩虫病、类圆线虫病、弓蛔虫病、旋毛虫病、淋巴丝虫病、盘尾丝虫病、丝虫病、血吸虫病、和由动物血吸虫引起的皮炎。

免疫缺陷病症的实例包括，但不限于：在2006年8月24日公开的美国公开号2006/0188475中描述的那些。具体的实例包括，但不限于，腺苷脱氨酶缺乏、具有正常或升高Ig的抗体缺乏、毛细血管扩张性共济失调、淋巴细胞缺乏综合征、普通可变型免疫缺陷、具有过多的IgM的Ig不足、Ig重链缺失、IgA缺乏、具有胸腺瘤的免疫缺陷、网状细胞发育不全、尼兹诺夫综合征（Nezelofsyndrome）、选择性IgG亚类缺乏、婴儿暂时性低丙种球蛋白血症、威-奥氏综合征（湿疹血小板减少和免疫功能综合征，Wistcott-Aldrich syndrome）、X-连锁无丙种球蛋白血症、X-连锁重症联合免疫缺陷。

CNS病症的实例包括，但不限于，在2005年6月30日公开的美国公开号2005/0143344中描述的那些，将其引入本文作为参考。具体的实例包括，但不限于：肌萎缩性侧索硬化症、阿尔茨海默病、帕金森氏病、亨廷顿氏疾病、多发性硬化症、其他神经免疫性障碍例如图雷特氏综合征（Tourette syndrome）、瞻妄（delerium）、或短期发生的意识障碍、以及遗忘症，或在缺少其他中枢神经系统损伤时发生的零散记忆损伤。

CNS损伤和相关综合征的实例包括，但不限于，在2006年6月8日公开的美国公开号2006/0122228中描述的那些，将其引入本文作为参考。具体的实例包括，但不限于，CNS损伤/伤害和相关综合征，包括但不限于，原发性脑损伤、继发性脑损伤、外伤性脑损伤、局部脑损伤、弥漫性轴突损伤、头部损伤、脑震荡、脑震荡后综合征、脑挫伤和撕裂、硬脑膜下血肿、表皮血肿、创伤后癫痫、慢性植物状态、完全性SCI、不完全性SCI、急性SCI、亚急性SCI、慢性SCI、脊髓中央综合征、布朗-塞卡尔(氏)综合征、脊髓前角综合征、脊髓圆锥综合征、马尾综合征、神经原性休克、脊髓休克、认知水平改变、头痛、恶心、呕吐、记忆丧失、眩晕、复视、视力模糊、情绪不稳、睡眠障碍、易激惹、集中不能、紧张、行为损伤、认知缺陷和发作。

其他疾病或病症包括，但不限于，病毒性、遗传性、过敏性和自身免疫性疾病。具体的实例包括，但不限于：HIV、肝炎、成人呼吸窘迫综合征、骨吸收疾病、慢性肺部炎症疾病、皮炎、囊性纤维化、败血症性休克、败血症、内毒素性休克、血液动力学休克、脓毒病综合征、局部缺血后再灌注损伤、脑膜炎、银屑病、纤维变性疾病、恶病质、移植物抗宿主病、移植排斥、自身免疫性疾病、类风湿性脊椎炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎、多发性硬化症、系统性红斑狼疮、麻风的ENL、放射损伤、癌症、哮喘或高氧性肺泡损伤。

动脉粥样硬化和相关病症的实例包括，但不限于，在2002年5月9日公开的美国公开号2002/0054899中公开的那些，将其引入本文作为参考。具体的实例包括，但不限于：涉及动脉粥样硬化的所有形式的病症，包括血管介入术（如血管成形术）、支架、经皮腔内斑块旋切术和移植后再狭窄。本文涉及所有形式的血管介入术，包括心血管和肾系统的疾病，例如但不限于，肾血管成形术、经皮冠状动脉介入术（PCI）、经皮穿刺冠状动脉成形术（PTCA）、颈动脉经皮经腔血管成形术（PTA）、冠状搭桥移植、具有支架移植的血管成形术、骼骨、股动脉或胭动脉的外周经皮经腔介入术、和使用浸渍的人造移植物的外科手术介入。下表提供了可能需要治疗的主要体动脉的列表，本发明预期所有这些：

睡眠功能障碍和相关综合征的实例包括，但不限于，在2005年10月6日公开的美国公开号2005/0222209A1中公开的那些，将其引入本文作为参考。具体的实例包括，但不限于：打鼾、睡眠性呼吸暂停、失眠症、发作性睡病、下肢不宁综合征、睡惊症、睡行症、睡眠进食，和与慢性神经性或炎症病症相关的睡眠功能障碍。慢性神经性或炎症病症包括，但不限于：复杂区域性疼痛综合征、慢性腰痛、肌肉骨骼痛、关节炎、神经根病、与癌症相关的疼痛、纤维肌痛、慢性疲劳综合征、内脏痛、膀胱痛、慢性胰腺炎、神经病（糖尿病性神经病、疱疹后神经病、外伤性神经病或炎性神经病）、以及神经变性病症，如帕金森症、阿尔茨海默病、肌萎缩性侧索硬化症、多发性硬化症、亨廷顿氏疾病、运动徐缓；肌肉强直；帕金森震颤；帕金森步态；运动冻结；抑郁症；长期记忆缺失，鲁宾斯坦-泰必氏综合征（Rubinstein-Taybi syndrome，RTS)；痴呆；姿势不稳定性；运动机能减退性病症；突触核蛋白病症；多系统萎缩；纹状体黑质变性；橄榄桥脑小脑萎缩；夏-德氏综合征；具有帕金森病特征的运动神经元病；路易体痴呆；τ病理学病症；进行性核上性麻痹；皮质基底节变性；额颞性痴呆；淀粉状蛋白病理学病症；轻度认知缺陷；伴有帕金森病的阿尔茨海默病；威尔逊病；哈勒沃登-施帕茨病；薛迪克-东氏病（白细胞异常色素减退综合征，Chediak-Hagashi disease）；SCA-3脊髓小脑性共济失调；X-连锁张力帕金森病；朊病毒病；运动过度性病症；舞蹈病；颤搐；张力障碍性震颤；肌萎缩性侧索硬化症（ALS）；CNS创伤和肌阵挛。

血红蛋白病和相关病症的实例包括，但不限于：在2005年6月30日公开的美国公开号2005/0143420A1中描述的那些，将其引入本文作为参考。具体的实例包括，但不限于：血红蛋白病、镰状细胞贫血和与CD34+细胞分化相关的任何其他病症。

在其他实施方式中，还涵盖本文提供的化合物在各种免疫学应用中的用途，尤其作为疫苗佐剂，特别是抗癌疫苗佐剂，如在2007年3月1日提交的美国临时公开号2007/0048327中公开的疫苗佐剂，将其全部内容引入本文作为参考。这些实施方式还涉及本文提供的化合物与疫苗组合使用，以治疗或预防癌症或感染性疾病，以及作为免疫调节的化合物的其他各种用途，如过敏性反应的减轻或脱敏。

本文提供的化合物，或其药用盐、溶剂化物、包合物、立体异构体或前药的剂量根据如下因素而变化，例如：待治疗、预防或控制的具体指征；患者的年龄和状况；以及，如果与第二活性剂一起使用，所用第二活性剂的量。通常，本文提供的化合物、或其药用盐、溶剂化物、包合物、立体异构体或前药可以每天约0.1mg至约500mg的量使用，并可以按照常规方式调整(例如在治疗、预防或控制期间的每天给药相同量)、按周期调整(例如一周用药、一周停药)、或者在治疗、预防或控制的过程中增加或减少用量。在其他的实施方式中，所述剂量可以为约1mg至约300mg、约0.1mg至约150mg、约1mg至约200mg、约10mg至约100mg、约0.1mg至约50mg、约1mg至约50mg、约10mg至约50mg、约20mg至约30mg、约1mg至约30mg、或约1mg至约20mg。

4.3第二活性剂

在本文提供的方法和组合物中，本文提供的化合物，或其药用盐、溶剂化物、前药、包合物、或立体异构体可以与其他药理学活性化合物（“第二活性剂”）组合使用。某些组合可以在治疗特定类型的疾病或病症和与这样的疾病或病症相关的病症和症状中起协同作用。本文提供的化合物、或其药用盐、溶剂化物、包合物、立体异构体或前药也可以减轻与某些第二活性剂有关的副作用，反之亦然。

一种或多种第二活性成分或药剂可以用于本文提供的方法和组合物。第二活性剂可以是大分子（例如蛋白质）或小分子（例如合成的无机分子、有机金属分子、或有机分子）。

大分子活性剂的实例包括，但不限于，造血生长因子、细胞因子、以及单克隆抗体和多克隆抗体。活性剂的具体实例是抗-CD40单克隆抗体（如，例如SGN-40）；组蛋白脱乙酰酶抑制剂（例如SAHA和LAQ 824）；热休克蛋白-90抑制剂（如，例如17-AAG）；胰岛素样生长因子-1受体激酶抑制剂；血管内皮生长因子受体激酶抑制剂（如，例如PTK787）；胰岛素生长因子受体抑制剂；溶血磷脂酸酰基转移酶抑制剂；IkB激酶抑制剂；p38MAPK抑制剂；EGFR抑制剂（例如吉非替尼和盐酸埃罗替尼）；HER-2抗体（例如曲妥单抗

和帕妥珠单抗（Omnitarg^TM））；VEGFR抗体（例如贝伐单抗（Avastin^TM））；VEGFR抑制剂（例如flk-1特异性激酶抑制剂；SU5416和ptk787/zk222584）；P13K抑制剂（例如渥曼青霉素）；C-Met抑制剂（例如PHA-665752）；单克隆抗体（例如利妥昔单抗

托西莫单抗

依决洛单抗

和G250）和抗TNF-α抗体。小分子活性剂的实例包括，但不限于，小分子抗癌剂和抗生素（例如克拉霉素）。可以与本文提供的化合物组合的具体的第二活性化合物将根据待治疗、预防或控制的具体指征而变化。

在某些实施方式中，第二活性剂包括，但不限于，抗凝血药、利尿药、强心苷、钙离子通道阻滞药、血管扩张药、前列环素类似物、内皮素拮抗剂、磷酸二酯酶抑制剂（例如PDEV抑制剂）、内切酶抑制剂、脂质降低剂、血栓烷抑制剂、类固醇和已知可降低肺动脉压的其他治疗药。具体实例包括，但不限于：华法林

利尿药、强心苷、地高辛-氧、地尔硫卓、硝苯地平、血管扩张药，如前列环素（例如前列腺素I2（PGI2）、依前列醇曲前列尼尔

一氧化氮（NO）、波生坦

氨氯地平、依前列醇曲前列尼尔

前列环素、他达那非

辛伐他汀

奥马曲拉

厄贝沙坦

普伐他汀

地高辛、L-精氨酸、伊洛前列素、betaprost和西地那非

在某些实施方式中，第二活性剂包括，但不限于，角质层分离剂，类视色素、α-羟基酸、抗生素、胶原、肉毒杆菌毒素、干扰素、类固醇和免疫调节剂。具体的实例包括但不限于：5-氟尿嘧啶、马索罗酚、三氯乙酸、水杨酸、乳酸、乳酸铵、尿素、维A酸、异维A酸、抗生素、胶原、肉毒杆菌毒素、干扰素、皮质类固醇、反式视黄酸和胶原，如人胎盘胶原、动物胎盘胶原、异体真皮胶原（Dermalogen）、脱细胞真皮基质（Alloderm）、筋膜（Fascia）、人工真皮粉末（Cymetra）、自体胶原（Autologen）、牛胶原（Zyderm）、牛胶原（Zyplast）、Resoplast和艾斯丽质（Isolagen）。

在其他的实施方式中，第二活性剂包括，但不限于，司马沙尼；环孢菌素；依那西普；多西环素；硼替佐米；阿西维辛；阿柔比星；盐酸阿考达唑；阿克罗宁；阿多来新；阿地白介素；六甲蜜胺；安波霉素；乙酸阿美蒽醌；安吖啶；阿那曲唑；安曲霉素；门冬酰胺酶；曲林菌素；阿扎胞苷；阿扎替派；阿佐霉素；巴马司他；苯佐替派；比卡鲁胺；盐酸比生群；二甲磺酸双奈法德；比折来新；硫酸博来霉素；布喹那钠；溴匹立明；白消安；放线菌素C；卡普睾酮；卡醋胺；卡贝替姆；卡铂；卡莫司汀；盐酸卡柔比星；卡折来新；西地芬戈；塞来考昔；苯丁酸氮芥；西罗霉素；顺铂；克拉屈滨；甲磺酸克立那托；环磷酰胺；阿糖胞苷；达卡巴嗪；更生霉素；盐酸柔红霉素；地西他滨；右奥马铂；地扎胍宁；甲磺酸地扎胍宁；地吖醌；多西他赛；多柔比星；盐酸多柔比星；屈洛昔芬；柠檬酸屈洛昔芬；丙酸屈他雄酮；达佐霉素；依达曲沙；盐酸依氟鸟氨酸；依沙芦星；恩洛铂；恩普氨酯；依匹哌啶；盐酸表柔比星；厄布洛唑；盐酸依索比星；雌莫司汀；雌莫司汀磷酸钠；依他硝唑；依托泊苷；磷酸依托泊苷；氯苯乙嘧胺；盐酸法倔唑；法扎拉滨；芬维A胺；氟尿苷；磷酸氟达拉滨；氟尿嘧啶；氟西他滨；磷喹酮；福司曲星钠；吉西他滨；盐酸吉西他滨；羟基脲；盐酸伊达比星；异环磷酰胺；伊莫福新；异丙铂；依立替康；盐酸依立替康；醋酸兰瑞肽；来曲唑；醋酸亮丙瑞林；盐酸利阿唑；洛美曲索钠；洛莫司汀；盐酸洛索蒽醌；马索罗酚；美登素；盐酸氮芥；醋酸甲地孕酮；醋酸美仑孕酮；美法仑；美诺立尔；巯嘌呤；甲氨蝶呤；甲氨蝶呤钠；氯苯氨啶；美妥替哌；米丁度胺；米托卡星；丝裂红素；米托洁林；米托马星；丝裂霉素；米托司培；米托坦；盐酸米托蒽醌；麦考酚酸；诺考达唑；诺加霉素；奥马铂；奥昔舒仑；紫杉醇；培门冬酶；培利霉素；戊氮芥；硫酸培洛霉素；培磷酰胺；哌泊溴烷；哌泊舒凡；盐酸吡罗蒽醌；普卡霉素；普洛美坦；卟吩姆钠；泊非霉素；泼尼莫司汀；盐酸丙卡巴肼；嘌呤霉素；盐酸嘌呤霉素；吡唑呋喃菌素；利波腺苷；沙芬戈；盐酸沙芬戈；司莫司汀；辛曲秦；磷乙酰天冬氨酸钠；司帕霉素；盐酸锗螺胺；螺莫司汀；螺铂；链黑菌素；链佐星；磺氯苯脲；他利霉素；替可加兰钠；泰索帝；替加氟；盐酸替洛蒽醌；替莫泊芬；替尼泊苷；替罗昔隆；睾内酯；硫咪嘌呤；硫鸟嘌呤；塞替派；噻唑呋林；替拉扎明；柠檬酸托瑞米芬；醋酸曲托龙；磷酸曲西立滨；三甲曲沙；葡糖醛酸三甲曲沙；曲普瑞林；盐酸妥布氯唑；乌拉莫司汀；乌瑞替派；伐普肽；维替泊芬；硫酸长春碱；硫酸长春新碱；长春地辛；硫酸长春地辛；硫酸长春匹定；硫酸长春甘酯；硫酸长春罗辛；酒石酸长春瑞滨；硫酸长春罗定；硫酸长春利定；伏氯唑；折尼铂；净司他丁；和盐酸佐柔比星。

其他第二试剂包括，但不限于，20-表-1,25-二羟维生素D3；5-乙炔基尿嘧啶；阿比特龙；阿柔比星；酰基富烯；腺环戊醇；阿多来新；阿地白介素；ALL-TK拮抗剂；六甲蜜胺；氨莫司汀；amidox；氨磷汀；氨基乙酰丙酸；氨柔比星；安吖啶；阿那格雷；阿那曲唑；穿心莲内酯；血管生成抑制剂；拮抗剂D；拮抗剂G；antarelix；抗背侧发育形态发生蛋白-1；抗雄激素药(前列腺癌)；抗雌激素药；抗瘤酮；反义寡核苷酸；甘氨酸阿非迪霉素；细胞凋亡基因调节剂；细胞凋亡调节剂；无嘌呤酸；阿糖-CDP-DL-PTBA；精氨酸脱氨酶；asulacrine；阿他美坦；阿莫司汀；axinastatin1；axinastatin 2；axinastatin 3；阿扎司琼；阿非迪霉素；重氮酪氨酸；浆果赤霉素III衍生物；balanol；巴马司他；BCR/ABL拮抗剂；benzochlorins；苯甲酰星孢素；β内酰胺衍生物；β-alethine；亚阿克拉霉素B（betaclamycinB）；白桦脂酸；bFGF抑制剂；比卡鲁胺；比生群；双氮丙啶基精胺；双奈法德；bistratene A；比折来新；breflate；溴匹立明；布度钛；丁硫氨酸亚砜胺；卡泊三醇；抑激酶素C；喜树碱衍生物；卡培他滨；甲酰胺-氨基-三唑；羧基酰胺基三唑；CaRest M3；CARN 700；软骨衍生抑制剂；卡折来新；酪蛋白激酶抑制剂（ICOS）；澳粟精胺；杀菌肽B；西曲瑞克；chlorlns；氯喹喔啉磺酰胺；西卡前列素；顺卟啉；克拉屈滨；克罗米芬类似物；克霉唑；collismycin A；collismycin B；考布他汀A4；考布他汀类似物；conagenin；crambescidin 816；克立那托；缩酚酸肽8；缩酚酸肽A衍生物；curacin A；环戊蒽醌；cycloplatam；cypemycin；阿糖胞苷十八烷基磷酸钠；细胞溶解因子；cytostatin；达昔单抗；地西他滨；脱氢膜海鞘素B（dehydrodidemnin B）；地洛瑞林；地塞米松；右异环磷酰胺；右雷佐生；右维拉帕米；地吖醌；膜海鞘素B；didox；二乙基去甲精胺（diethylnorspermine）；二氢-5-氮胞苷；9-二氢紫杉醇；dioxamycin；二苯基螺莫司汀；多西他赛；二十二烷醇；多拉司琼；去氧氟尿苷；多柔比星；屈洛昔芬；屈大麻酚；倍癌霉素SA；依布硒啉；依考莫司汀；依地福新；依决洛单抗；依氟鸟氨酸；榄香烯；乙嘧替氟；表柔比星；依立雄胺；雌莫司汀类似物；雌激素激动剂；雌激素拮抗剂；依他硝唑；磷酸依托泊苷；依西美坦；法倔唑；法扎拉滨；芬维A胺；非格司亭；非那司提；黄酮类抗肿瘤药；氟卓斯汀；fluasterone；氟达拉滨；盐酸fluorodaunorunicin；福酚美克；福美坦；福司曲星；福莫司汀；钆替沙林；硝酸镓；加洛他滨；加尼瑞克；明胶酶抑制剂；吉西他滨；谷胱甘肽抑制剂；hepsulfam；调蛋白（heregulin）；六亚甲基双乙酰胺；金丝桃素；伊班膦酸；伊达比星；艾多昔芬；伊决孟酮；伊莫福新；伊洛马司他；伊马替尼

咪喹莫特；免疫刺激肽；胰岛素样生长因子-1受体抑制剂；干扰素激动剂；干扰素；白介素；碘苄胍；碘阿霉素；4-甘薯苦醇；伊罗普拉；伊索拉定；isobengazole；isohomohalicondrin B；伊他司琼；j asplakinolide；kahalalide F；三醋酸片螺素-N；兰瑞肽；leinamycin；来格司亭；硫酸蘑菇多糖；leptolstatin；来曲唑；白血病抑制因子；白细胞α干扰素；亮丙立德+雌激素+黄体酮；亮丙瑞林；左旋咪唑；利阿唑；线状聚胺类似物；亲脂二糖肽；亲脂铂类化合物；lissoclinamide 7；洛铂；胍乙基磷酸丝氨酸；洛美曲索；氯尼达明；洛索蒽醌；洛索立宾；勒托替康；德卟啉镥（lutetium texaphyrin）；lysofylline；裂解肽；美坦辛；制苷糖酶素A；马立马司他；马索罗酚；乳腺丝抑蛋白（maspin）；基质溶解素抑制剂；基质金属蛋白酶抑制剂；美诺立尔；美巴龙；美替瑞林；甲硫氨酸酶；甲氧氯普胺；MIF抑制剂；米非司酮；米替福新；米立司亭；米托胍腙；二溴卫矛醇；丝裂霉素类似物；米托萘胺；mitotoxin成纤维细胞生长因子-皂草素蛋白；米托蒽醌；莫法罗汀；莫拉司亭；爱必妥，人绒毛膜促性腺激素；单磷酰脂质A+分支杆菌细胞壁sk；莫哌达醇；芥子类抗癌剂；印度洋海绵B（mycaperoxide B）；分支杆菌细胞壁提取物；myriaporone；N-乙酰基地那林；N-取代的苯甲酰胺；那法瑞林；那瑞替喷；纳洛酮+喷他佐辛；napavin；naphterpin；那托司亭；奈达铂；奈莫柔比星；奈立膦酸；尼鲁米特；nisamycin；一氧化氮调节剂；硝基氧抗氧化剂；nitrullyn；奥利默森（oblimersen)

O6-苄基鸟嘌呤；奥曲肽；okicenone；寡核苷酸；奥那司酮；昂丹司琼；昂丹司琼；oracin；口服细胞因子诱导物；奥马铂；奥沙特隆；奥沙利铂；oxaunomycin；紫杉醇；紫杉醇类似物；紫杉醇衍生物；palauamine；棕榈酰根霉素；帕米磷酸；人参三醇；帕诺米芬；菌铁素；帕折普汀；培门冬酶；培得星；戊聚糖多硫酸钠；喷司他丁；pentrozole；全氟溴烷；培磷酰胺；紫苏子醇；苯连氮霉素；乙酸苯酯；磷酸酶抑制剂；溶血性链球菌制剂；盐酸毛果芸香碱；吡柔比星；吡曲克辛；placetin A；placetin B；纤溶酶原活化因子抑制剂；铂络合物；铂化合物；铂-三胺络合物；卟吩姆钠；泊非霉素；泼尼松；丙基二吖啶酮；前列腺素J2；蛋白酶体抑制剂；基于A蛋白的免疫调节剂；蛋白激酶C抑制剂；蛋白激酶C抑制剂；microalgal；蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂；嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂；紫红素；吡唑啉吖啶；吡多酸化血红蛋白聚乙二醇缀合物；raf拮抗剂；雷替曲塞；雷莫司琼；ras-法呢基蛋白转移酶抑制剂；ras抑制剂；ras-GAP抑制剂；脱甲基瑞替普汀；依替磷酸铼Re 186；根霉素；核酶；RII维甲酰胺；罗希吐碱；罗莫肽；罗喹美克；rubiginoneB1；ruboxyl；沙芬戈；saintopin；SarCNU；肉芝软珊瑚醇(sarcophytol)A；沙格司亭；Sdi1模拟物；司莫司汀；衰老衍生抑制剂1；正义寡核苷酸；信号转导抑制剂；西佐喃；索布佐生；硼卡钠；苯基乙酸钠；solverol；生长调节素结合蛋白；索纳明；膦门冬酸；穗霉素D；螺莫司汀；脾脏五肽；海绵抑制素1；角鲨胺；stipiamide；基质降解酶抑制剂；sulfinosine；超活性血管活性肠肽拮抗剂；suradista；苏拉明；八氢吲嗪三醇；他莫司汀；他莫昔芬甲碘化物；牛磺莫司汀；他佐罗汀；替可加兰钠；替加氟；tellurapyrylium；端粒酶抑制剂；替莫泊芬；替尼泊苷；十氧化四氯（tetrachlorodecaoxide）；tetrazomine；原糖松草碱（thaliblastine）；噻可拉林；血小板生成素；血小板生成素模拟物；胸腺法新；胸腺生成素受体激动剂；噻可拉林；促甲状腺激素；锡乙基初紫红素；替拉扎明；二氯二茂钛；topsentin；托瑞米芬；翻译抑制剂；维甲酸；三乙酰尿苷；曲西立滨；三甲曲沙；曲普瑞林；托烷司琼；妥罗雄脲；酪氨酸激酶抑制剂；酪氨酸磷酸化抑制剂；UBC抑制剂；乌苯美司；泌尿生殖窦衍生生长抑制因子；尿激酶受体拮抗剂；伐普肽；variolin B；维拉雷琐；藜芦胺；verdins；维替泊芬；长春瑞滨；vinxaltine；牡荆碱；伏氯唑；扎诺特隆；折尼铂；亚苄维C；和净司他丁斯酯。

在某些实施方式中，所述活性剂包括，但不限于，2-甲氧雌甾二醇、端粒酶素（telomestatin）、多发性骨髓瘤细胞的凋亡诱导剂（例如TRAIL）、他汀类、司马沙尼（semaxanib）、环孢菌素、依那西普、多西环素、硼替佐米、奥利默森

瑞米凯德（remicade）、多西他赛、塞来考昔、美法仑、地塞米松类固醇、吉西他滨、顺铂、替莫唑胺、依托泊苷、环磷酰胺、替莫唑胺、卡铂、丙卡巴肼、格立得（gliadel）、他莫昔芬、托泊替康、甲氨蝶呤、

泰素、泰索帝、氟尿嘧啶、亚叶酸、依立替康、希罗达、CPT-11、干扰素α、聚乙二醇化干扰素α（例如，聚乙二醇内含子A（PEG INTRON-A））、卡培他滨、顺铂、塞替派、氟达拉滨、卡铂、脂质体柔红霉素、阿糖胞苷、紫杉特尔（doxetaxol）、紫杉醇、长春碱、IL-2、GM-CSF、达卡巴嗪、长春瑞滨、唑来膦酸、palmitronate、克拉霉素、白消安、泼尼松、二膦酸盐、三氧化二砷、长春新碱、多柔比星

紫杉醇、更昔洛韦、阿霉素、雌莫司汀磷酸钠

舒林酸、依托泊苷和各种细胞毒素和/或细胞生长抑制剂。

在某些实施方式中，根据待治疗、预防或控制的指征，可以在下列文献中找到具体第二试剂的实例，将所有文献的全部内容引入本文：美国专利号6,281,230和5,635,517；和美国公开号2004/0220144、2004/0190609、2004/0087546、2005/0203142、2004/0091455、2005/0100529、2005/0214328、2005/0239842、2006/0154880、2006/0188475、2006/0122228和2005/0143344。

在某些实施方式中，第二活性剂包括，但不限于，抗抑郁剂、抗惊厥药、抗高血压药、抗焦虑剂、钙离子通道阻滞药、肌肉松弛药、非麻醉止痛剂、阿片类镇痛药、抗炎药、cox-2抑制剂、免疫调节剂、α-肾上腺素能受体激动剂或拮抗剂、免疫抑制剂、皮质类固醇、高压氧、氯胺酮、其他麻醉剂、NMDA拮抗剂、和在例如Physician’s DeskReference 2003中找到的其他治疗药。具体的实例包括，但不限于：乙酰水杨酸塞来考昔

氯胺酮、加巴喷丁

苯妥英

卡马西平

奥卡西平

丙戊酸

硫酸吗啡、氢吗啡酮、泼尼松、灰黄霉素、溴戊双铵、阿仑膦酸盐、苯海拉明（dyphenhydramide）、胍乙啶、酮咯酸

降钙素、二甲亚砜（DMSO）、可乐宁

溴苄胺、酮色林、利血平、氟哌利多、阿托品、酚妥拉明、布比卡因、利多卡因、对乙酰氨基酚、去甲替林

阿米替林

丙咪嗪多虑平

氯米帕明氟西汀

舍曲林

萘普生、萘法唑酮

文拉法辛

曲唑酮

安非他酮

美西律、硝苯地平、普萘洛尔、曲马多、拉莫三嗪、万络、齐考诺肽、氯胺酮、美沙芬、苯二氮卓、巴氯芬、替扎尼定和苯氧苄胺。

在某些实施方式中，第二活性剂包括，但不限于，类固醇、光敏剂、整联蛋白、抗氧剂、干扰素、黄嘌呤衍生物、生长激素、神经营养因子、新生血管形成调节剂、抗-VEGF抗体、前列腺素、抗生素、植物雌激素、抗炎化合物或血管生成抑制化合物、或其组合。具体的实例包括但不限于：维替泊芬、purlytin、血管静止类固醇、rhuFab、干扰素-2α、己酮可可碱、初卟啉锡、莫特沙芬、诺适得（兰尼单抗注射剂，lucentis）、镥、9-氟-11,21-二羟基-16,17-1-甲基次乙基二(氧基)孕-1,4-二烯-3,20-二酮、拉坦前列素（参见美国专利号6,225,348）、四环素及其衍生物、利福霉素及其衍生物、大环内酯、甲硝唑（美国专利号6,218,369和6,015,803）、染料木黄酮、染料木苷、6’-O-Mal染料木苷、6’-O-Ac染料木苷、黄豆苷元、黄豆苷、6’-O-Mal黄豆苷、6’-O-Ac黄豆苷、黄豆黄素、大豆球蛋白、6’O-Mal大豆球蛋白、鹰嘴豆素A、芒柄花黄素（美国专利号6,001,368）、曲安奈德、地塞米松（美国专利No.5,770,589）、沙立度胺、谷胱甘肽（美国专利No.5,632,984）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、转化生长因子b（TGF-b）、脑源神经营养因子（BDNF）、2型纤溶酶原活化因子（PAI-2）、EYE101（EyetechPharmaceuticals）、LY333531（Eli Lilly）、Miravant和RETISERT植入物（Bausch&Lomb）。将所有上述引用的参考文献的全部内容引入本文作为参考。

在某些实施方式中，第二活性剂包括，但不限于：蒽环类、铂、烷化剂、奥利默森

顺铂、环磷酰胺、替莫多司、卡铂、丙卡巴肼、格立得、他莫昔芬、托泊替康、甲氨蝶呤、泰索帝、依立替康、卡培他滨、顺铂、噻替派、氟达拉滨、卡铂、脂质体柔红霉素、阿糖胞苷、紫杉特尔（doxetaxol）、紫杉醇、长春碱、IL-2、GM-CSF、达卡巴嗪、长春瑞滨、唑来膦酸、palmitronate、克拉霉素（biaxin）、白消安、泼尼松、二膦酸盐、三氧化二砷、长春新碱、多柔比星

紫杉醇、更昔洛韦、阿霉素、博来霉素、透明质酸酶、丝裂霉素C、米帕林、塞替派、四环素和吉西他滨。

在某些实施方式中，第二活性剂包括，但不限于，氯喹、奎宁、奎尼丁、乙胺嘧啶、磺胺嘧啶、多西环素、克林霉素、甲氟喹、卤泛群、伯氨喹、羟氯奎、氯胍、阿托伐醌、阿奇毒素、苏拉明、喷他脒、美拉胂醇、硝呋噻氧、苄硝唑、两性霉素B、五价锑化合物（例如葡糖酸锑钠）、干扰素γ、伊曲康唑、死亡前鞭毛体和BCG的组合、亚叶酸、皮质类固醇、磺酰胺、螺旋霉素、IgG（血清学）、甲氧苄啶、和磺胺甲噁唑。

在某些实施方式中，第二活性剂包括，但不限于，抗生素（治疗性或预防性），例如但不限于，氨苄西林、四环素、青霉素、头孢菌素类、链霉素、卡那霉素、和红霉素；抗病毒药，例如但不限于，金刚烷胺、金刚烷乙胺、阿昔洛韦和利巴韦林；免疫球蛋白；血浆；免疫增强药，例如但不限于，左旋咪唑和异丙肌苷；生物制剂，例如但不限于γ球蛋白、转移因子、白介素和干扰素；激素，例如但不限于，胸腺激素；和其他免疫学试剂，例如但不限于，B细胞刺激物（例如，BAFF/BlyS）、细胞因子（例如，IL-2、IL-4和IL-5）、生长因子（例如TGF-α）、抗体（例如抗-CD40和IgM）、包含未甲基化的CpG基元的寡核苷酸和疫苗（例如，病毒和肿瘤肽疫苗）。

在某些实施方式中，第二活性剂包括，但不限于，阿片类；多巴胺激动药或拮抗剂，例如但不限于，左旋多巴、L-DOPA、可卡因、α-甲基酪氨酸、利血平、丁苯那嗪、苯托品、帕吉林、甲磺酸非诺多潘、卡麦角林、二盐酸普拉克索、罗匹尼罗、盐酸金刚烷胺、盐酸司来吉兰、卡比多巴、甲磺酸培高利特、Sinemet CR和Symmetrel；MAO抑制剂，例如但不限于异丙异烟肼、氯吉兰、苯乙肼和异卡波肼；COMT抑制剂，例如但不限于，托卡朋和恩他卡朋；胆碱酯酶抑制剂，例如但不限于，水杨酸毒扁豆碱、硫酸毒扁豆碱、溴化毒扁豆碱、溴化新斯的明、甲基硫酸新斯的明、安贝氯铵、依酚氯铵、他克林、氯解磷定、双复磷、溴化双解磷、二乙酰一肟（diacetyl monoxim）、依酚氯铵（endrophonium）、吡啶斯的明和癸二胺苯酯；抗炎药，例如但不限于，萘普生钠、双氯酚酸钠、双氯芬酸钾、塞来考昔、舒林酸、奥沙普秦、二氟尼柳、依托度酸、美洛昔康、布洛芬、酮洛芬、萘丁美酮、罗非考昔、甲氨蝶呤、来氟米特、柳氮磺吡啶、金盐、Rho-D免疫球蛋白、麦考酚酸吗乙酯、环胞菌素、硫唑嘌呤、他克莫司、巴利昔单抗、达克珠单抗、水杨酸、阿司匹林、水杨酸甲酯、二氟尼柳、双水杨酯、奥沙拉秦、柳氮磺吡啶、对乙酰氨基酚、吲哚美辛、舒林酸、甲芬那酸、甲芬那酸钠、托美丁、酮咯酸、双氯酚酸、氟比洛芬、奥沙普秦、吡罗昔康、美洛昔康、安吡昔康、屈噁昔康、吡罗昔康、替诺昔康、保泰松、羟布宗、安替比林、氨基比林、阿扎丙宗、齐留通（ziteuton）、金硫葡糖、硫代苹果酸金钠、金诺芬、甲氨蝶呤、秋水仙碱、别嘌醇、丙磺舒、苯磺唑酮和苯溴马隆或倍他米松及其他糖皮质激素；以及止吐药，例如但不限于甲氧氯普胺、多潘立酮、普鲁氯嗪、异丙嗪、氯丙嗪、曲美苄胺、昂丹司琼、格拉司琼、羟嗪、乙酰亮氨酸单乙醇胺、阿立必利、阿扎司琼、苯喹胺、氨醇醋茶碱、溴必利、布克立嗪、氯波必利、赛克力嗪、茶苯海明、地芬尼多、多拉司琼、美克洛嗪、美沙拉妥、美托哌丙嗪、大麻隆、奥昔喷地、匹哌马嗪、东莨菪碱、舒必利、四氢大麻酚、硫乙拉嗪、硫丙拉嗪、托烷司琼及其混合物。

在某些实施方式中，第二活性剂包括，但不限于，免疫调节剂、免疫抑制剂、抗高血压药、抗惊厥药、纤维蛋白溶解剂、抗血小板剂、抗精神病药、抗抑郁剂、苯二氮卓类、丁螺环酮、金刚烷胺、及用于患有CNS损伤/损害和相关综合征的患者的其他已知或常用试剂。具体的实例包括，但不限于：类固醇（例如糖皮质激素，例如但不限于，甲泼尼龙、地塞米松和倍他米松）；抗炎剂，包括，但不限于，茶普生钠、双氯芬酸钠、双氯芬酸钾、塞来考昔、舒林酸、奥沙普秦、二氟尼柳、依托度酸、美洛昔康、布洛芬、酮洛芬、萘丁美酮、罗非考昔、甲氨蝶呤、来氟米特、柳氮磺吡啶、金盐、Rho-D免疫球蛋白、麦考酚酸吗乙酯、环胞菌素、硫唑嘌呤、他克莫司、巴利昔单抗、达克珠单抗、水杨酸、阿司匹林、水杨酸甲酯、二氟尼柳、双水杨酯、奥沙拉秦、柳氮磺吡啶、对乙酰氨基酚、吲哚美辛、舒林酸、甲芬那酸、甲芬那酸钠、托美丁、酮咯酸、双氯酚酸、氟比洛芬、奥沙普秦、吡罗昔康、美洛昔康、安吡昔康、屈噁昔康、吡罗昔康（pivoxicam）、替诺昔康、保泰松、羟布宗、安替比林、氨基比林、阿扎丙宗、齐留通、金硫葡糖、硫代苹果酸金钠、金诺芬、甲氨蝶呤、秋水仙碱、别嘌醇、丙磺舒、苯磺唑酮、和苯溴马隆；cAMP类似物，包括但不限于：db-cAMP；包含哌甲酯药物的试剂，其包括l-苏式-哌甲酯、d-苏式-哌甲酯、dl-苏式-哌甲酯、l-赤式-哌甲酯、d-赤式-哌甲酯、dl-赤式-哌甲酯及其混合物；和利尿剂，例如但不限于，甘露醇、呋塞米、甘油和脲。

在某些实施方式中，第二活性剂包括，但不限于，三环抗抑郁药、选择性5-羟色胺重摄取抑制剂、抗癫痫药（加巴喷丁、普加巴林、卡马西平、奥卡西平、左乙拉西坦、托吡酯）、抗心律失常剂、钠通道阻断剂、选择性炎症介质抑制剂、阿片类试剂、第二免疫调节化合物、组合试剂及用于睡眠疗法的其他已知或常用试剂。具体的实例包括，但不限于，加巴喷丁、奥施康定、吗啡、托吡酯、阿米替林、去甲替林、卡马西平、左旋多巴、L-DOPA、可卡因、α-甲基酪氨酸、利血平、丁苯那嗪、苯托品、帕吉林、甲磺酸非诺多潘、卡麦角林、二盐酸普拉克索、罗匹尼罗、盐酸金刚烷胺、盐酸司来吉兰、卡比多巴、甲磺酸培高利特、Sinemet CR、三环癸胺（Symmetrel）、异丙异肼、氯吉兰、苯乙肼、异卡波肼、托卡朋、恩他卡朋、水杨酸毒扁豆碱、硫酸毒扁豆碱、溴化毒扁豆碱、溴化新斯的明、甲基硫酸新斯的明、安贝氯铵、依酚氯铵、他克林、氯解磷定、双复磷、溴化双解磷、二乙酰一肟、依酚氯铵、吡啶斯的明、癸二胺苯酯、萘普生钠、双氯酚酸钠、双氯芬酸钾、塞来考昔、舒林酸、奥沙普秦、二氟尼柳、依托度酸、美洛昔康、布洛芬、酮洛芬、萘丁美酮、罗非考昔、甲氨蝶呤、来氟米特、柳氮磺吡啶、金盐、Rho-D免疫球蛋白、麦考酚酸吗乙酯、环胞菌素、硫唑嘌呤、他克莫司、巴利昔单抗、达克珠单抗、水杨酸、阿司匹林、水杨酸甲酯、二氟尼柳、双水杨酯、奥沙拉嗪、柳氮磺吡啶、对乙酰氨基酚、吲哚美辛、舒林酸、甲芬那酸、甲芬那酸钠、托美丁、酮咯酸、双氯酚酸、氟比洛芬、奥沙普秦、吡罗昔康、美洛昔康、安吡昔康、屈噁昔康、吡罗昔康、替诺昔康、保泰松、羟布宗、安替比林、氨基比林、阿扎丙宗、齐留通、金硫葡糖、硫代苹果酸金钠、金诺芬、甲氨蝶呤、秋水仙碱、别嘌醇、丙磺舒、苯磺唑酮、苯溴马隆、倍他米松及其他糖皮质激素、甲氧氯普胺、多潘立酮、普鲁氯嗪、异丙嗪、氯丙嗪、曲美苄胺、昂丹司琼、格拉司琼、羟嗪、乙酰亮氨酸单乙醇胺、阿立必利、阿扎司琼、苯喹胺、氨醇醋茶碱、溴必利、布克立嗪、氯波必利、赛克力嗪、茶苯海明、地芬尼多、多拉司琼、美克洛嗪、美沙拉妥、美托哌丙嗪、大麻隆、奥昔喷地、匹哌马嗪、东莨菪碱、舒必利、四氢大麻酚、硫乙拉嗪、硫丙拉嗪、托烷司琼及其混合物。

在某些实施方式中，第二种活性剂包括，但不限于，白介素，例如IL-2（包括重组IL-II（“rIL2”）和金丝雀痘IL-2）、IL-10、IL-12和IL-18；干扰素，例如干扰素α-2a、干扰素α-2b、干扰素α-n1、干扰素α-n3、干扰素β-Ia和干扰素γ-Ib；和G-CSF；羟基脲；丁酸酯或丁酸酯衍生物；一氧化二氮；羟基脲；HEMOXIN^TM（NIPRISAN^TM；参见美国专利号5,800,819）；Gardos通道拮抗剂，例如克霉唑和三芳基甲烷衍生物；去铁胺；蛋白C；和输血，或输入血液代用品例如Hemospan^TM或Hemospan^TM PS（Sangart）。

可以通过相同的或不同的施用途径同时或顺序向患者给药本文提供的化合物，或其药用盐、溶剂化物、包合物、立体异构体或前药和第二活性剂。应用于特定活性剂的特定给药途径的适合性将取决于活性剂本身（例如，其是否可以口服给药而不会在进入血流之前分解）和待治疗的疾病。本文提供的化合物的给药途径之一是口服。第二活性剂或成分的给药途径是本领域普通技术人员已知的。参见，例如Physicians’Desk Reference（第60版，2006）。

在一种实施方式中，第二活性剂以约1mg至约1000mg、约5mg至约500mg、约10mg至约350mg、或约50mg至约200mg的量每天一次或每天两次通过静脉内或皮下给药。第二活性剂的具体用量将取决于所用的具体试剂、待治疗或控制的疾病类型、疾病的严重性和阶段、以及本文提供的化合物和同时给药至患者的任何可选的其他活性剂的量。

如本文在别处所讨论的，本发明还涵盖减轻、治疗和/或预防与常规疗法相关的有害或不期望的效果的方法，所述常规疗法包括，但不限于：外科手术、化疗、放疗、激素疗法、生物学疗法和免疫疗法。可以在与常规疗法相关的副作用发生之前、期间或发生之后，向患者给药本文提供的化合物及其他活性成分。

4.4循环疗法

在某些实施方式中，将本文提供的预防或治疗试剂对患者循环给药。循环疗法包括给药一段时间的活性剂、然后停止一段时间（即，中止给药），并重复该顺序给药。循环疗法可减少对一种或多种疗法发展出抗性，避免或减轻其中一种疗法的副作用，和/或改善治疗的功效。

因此，在一种实施方式中，本文提供的化合物在四至六周的循环中，以单剂量或分开剂量每日给药，并伴随约一周或两周的停止期。循环疗法进一步允许增加给药循环的频率、数量和长度。因此，另一种实施方式涵盖以比单独给药时典型循环数更多的循环给药本文提供的化合物。在仍然另一种实施方式中，本文提供的化合物以更多循环次数来给药，该循环次数在未同时给药第二活性成分的患者中通常会造成剂量限制毒性。

在一种实施方式中，本文提供的化合物以约0.1mg至约500mg/天的剂量每日给药或连续给药三或四周，然后中止一或两周。在其他实施方式中，所述剂量可以为约1mg至约300mg、约0.1mg至约150mg、约1mg至约200mg、约10mg至约100mg、约0.1mg至约50mg、约1mg至约50mg、约10mg至约50mg、约20mg至约30mg、或约1mg至约20mg，接着中止。

在一种实施方式中，在四至六周循环期间，口服给药本文提供的化合物和第二活性成分，在给药第二活性成分之前30至60分钟，给药本文提供的化合物。在另一种实施方式中，在约90分钟的每个循环中，本文提供的化合物和第二活性成分的组合通过静脉内输注来给药。

通常，向患者给药组合治疗期间的循环次数为约1至约24个循环，更通常为约2至约16个循环，或约四至约三个循环。

4.5药物组合物和剂型

药物组合物可用于制备独立的单一单位剂型。本文提供的药物组合物和剂型包含本文提供的化合物，或其药用盐、溶剂化物、立体异构体、包合物或或前药。药物组合物和剂型可以进一步包含一种或多种赋形剂。

本文提供的药物组合物和剂型还可以包括一种或多种另外的活性成分。在上面4.3节中公开了可选的第二或另外的活性成分的实例。

本文提供的单一单位剂型适于口服、粘膜（例如鼻腔、舌下、阴道、口腔或直肠）、胃肠外（例如皮下、静脉内、推注、肌内、或动脉内）、局部（例如滴眼剂或其他眼科制剂）、透皮或经皮给药至患者。剂型的实例包括，但不限于：片剂；囊片剂；胶囊，如弹性软明胶胶囊；扁囊剂；糖锭剂；锭剂；分散剂；栓剂；粉剂；气雾剂（例如，鼻腔喷雾剂或吸入剂）；凝胶剂；适于口服或粘膜给药至患者的液体剂型，包括混悬剂（例如水性或非水液体混悬剂、水包油型乳剂、或油包水液体乳剂）、溶液剂、和酏剂；适于胃肠外给药至患者的液体剂型；适于局部给药的滴眼剂或其他眼科制剂；和可以重新构建以提供适于胃肠外给药至患者的液体剂型的无菌固体（例如晶体或非晶形固体）。

本发明的剂型的组成、形状和类型将根据其用途而改变。例如，用于急性治疗疾病的剂型可以包含比用于慢性治疗同样疾病的剂型所包含的更大量的一种或多种活性成分。类似地，胃肠外剂型可以包含比用于治疗相同疾病的口服剂型所包含的更小量的一种或多种活性成分。在具体剂型中使用的这些和其他方式将彼此不同，其对于本领域技术人员而言是显而易见的。参见，例如Remington’s Pharmaceutical Sciences,第18版,MackPublishing,Easton PA(1990)。

在一种实施方式中，药物组合物和剂型包含一种或多种赋形剂。合适的赋形剂是药学领域技术人员已知的，本文提供了合适赋形剂的非限制性实例。特定的赋形剂是否适于掺入药物组合物或剂型中取决于本领域众所周知的多种因素，其包括但不限于将该剂型施用至患者的方式。例如，口服剂型如片剂可包含不适于在胃肠外剂型中使用的赋形剂。特定赋形剂的适合性也可取决于剂型中的具体活性成分。例如，某些活性成分的分解可通过某些赋形剂，例如乳糖，或当暴露于水时来加速。包括伯胺或仲胺的活性成分特别易于发生这种加速分解。因此，提供包括包含有很少（如果有的话）乳糖和其他单糖或二糖的药物组合物和剂型。如本文使用的术语“无乳糖”是指乳糖存在的量（如果有的话）不足以实质上增加活性成分的降解速率。

无乳糖组合物可以包括本领域公知的赋形剂，这些赋形剂列在例如美国药典（U.S.Pharmacopeia（USP）25-NF20（2002）中。通常，无乳糖组合物包括药学可相容的或药学可接受量的活性成分、粘合剂/填充剂、和润滑剂。优选的无乳糖剂型包括活性成分、微晶纤维素、预糊化淀粉和硬脂酸镁。

还提供了含有活性成分的无水药物组合物和剂型，因为水可促进某些化合物的降解。例如，加入水（例如5%）是制药领域中广泛接受的作为一种模拟长期储存的方式，以测定特征，如制剂随时间的保质期或稳定性。参见，例如Jens T.Carstensen,Drug Stability:Principles & Practice,2d.Ed.,Marcel Dekker，NY，NY，1995,pp.379-80。实际上，水和热加速某些化合物分解。因此，水对制剂的作用可能非常显著，因为在剂型的制备、加工、包装、贮存、装运和使用期间，通常会遇到水气和/或湿气。

可以使用无水或水分含量低的成分并在低水分或低湿度条件下制备本发明的无水药物组合物和剂型。如果预期在制备、包装和/或贮存期间将实质性地接触水气和/或湿气，则包含乳糖和包含伯胺或仲胺的至少一种活性成分的药物组合物和剂型优选是无水的。

无水药物组合物应当以保持其无水性质的方式来制备和贮藏。因此，优选地使用已知可防止暴露于水的材料来包装无水组合物，从而将它们装在合适的剂型试剂盒中。合适的包装的实例包括，但不限于，密封的箔、塑料、单位剂量容器（例如小药瓶）、泡罩包装、和窄条包装。

还提供了包含一种或多种可降低活性成分分解速率的化合物的药物组合物和剂型。这样的化合物在本文中称为“稳定剂”，其包括，但不限于：抗氧化，剂如抗坏血酸、pH缓冲液、或盐缓冲液。

如赋形剂的用量和种类，剂型中活性成分的用量和种类可根据多种因素而改变，所述因素为例如，但不限于：向患者给药的途径。在一种实施方式中，剂型包含含量为约0.10mg至约500mg的本文提供的化合物。在其他实施方式中，剂型包含含量为约0.1、1、2、5、7.5、10、12.5、15、17.5、20、25、50、100、150、200、250、300、350、400、450或500mg的本文提供的化合物。

在其他实施方式中，剂型包含含量为约1mg至约1000mg、约5mg至约500mg、约10mg至约350mg或约50mg至约200mg的第二活性成分。当然，第二活性剂的具体含量将取决于所用的具体试剂、待治疗或控制的疾病或病症、以及本文提供的化合物和同时给药至患者的可选的另一种活性剂的用量。

4.5.1口服剂型

适于口服给药的本发明药物组合物可以制成分散的剂型，例如，但不限于：片剂（例如咀嚼片）、囊片剂、胶囊和液体剂（例如调味糖浆剂）。这样的剂型包含预定量的活性成分，并可以用本领域技术人员公知的制药方法来制备。通常参见Remington’s Pharmaceutical Sciences,第18版，MackPublishing,Easton PA（1990）。

本文提供的口服剂型是根据常药用混合技术，将活性成分与至少一种赋形剂密切混合来制备的。根据期望给药的制剂形式，赋形剂可以采用多种形式。例如，适用于口服液体剂或气雾剂剂型的赋形剂包括，但不限于：水、二醇、油、醇、调味剂、防腐剂、和着色剂。适用于固体口服剂型（例如粉剂、片剂、胶囊和囊片剂）的赋形剂的实例包括，但不限于，淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、造粒剂、润滑剂、粘合剂和崩解剂。

在一种实施方式中，口服剂型为片剂或胶囊，在此情况下，采用固体赋形剂。如果期望，可以采用标准的水性或非水性技术来对片剂实施包衣。这样的剂型可以通过任何制药方法来制备。通常，药物组合物和剂型是通过均匀地和紧密地将所述活性成分与液体载体、细分的固体载体、或两者组合进行混合来制备的，然后，如有必要，将所述产物制成期望的形状。

例如，可以通过压制或模制来制备片剂。压制片可以通过：在适宜的机器中压制呈自由流动形式的活性成分，如粉末或颗粒，并且其可选地与赋形剂混合来制备。模压片可以通过在适宜的机器中将用惰性液体稀释剂润湿的粉末化合物的混合物压模来制备。

可以用于本文提供的口服剂型的赋形剂的实例包括，但不限于，粘合剂、填充剂、崩解剂和润滑剂。适用于药物组合物和剂型的粘合剂包括，但不限于，玉米淀粉、马铃薯淀粉或其他淀粉、明胶、天然和合成树胶例如阿拉伯胶、海藻酸钠、海藻酸、其他藻酸盐、粉末西黄蓍胶、瓜尔胶、纤维素及其衍生物（例如乙基纤维素、醋酸纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠）、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、预糊化淀粉、羟丙基甲基纤维素（例如No.2208、2906、2910）、微晶纤维素及其混合物。

微晶纤维素的合适形式包括，但不限于：作为AVICEL-PH-101、AVICEL-PH-103、AVICEL RC-581、AVICEL-PH-105（可从FMC Corporation，American Viscose Division，Avicel Sales，Marcus Hook，PA获得）出售的物质及其混合物。具体的粘合剂是作为AVICEL RC-581出售的微晶纤维素和羧甲基纤维素钠的混合物。合适的无水或低水分赋形剂或添加剂包括AVICEL-PH-103^TM和淀粉1500LM。

适用于本文提供的药物组合物和剂型的填充剂的实例包括，但不限于，滑石、碳酸钙（例如颗粒或粉末）、微晶纤维素、粉末纤维素、葡聚糖结合剂、高岭土、甘露醇、硅酸、山梨醇、淀粉、预糊化淀粉及其混合物。在一种实施方式中，药物组合物中的粘合剂或填充剂通常占药物组合物或剂型的约50至约99重量%。崩解剂可以用在组合物中以提供当暴露于水相环境时崩解的片剂。包含太多崩解剂的片剂可能会在储存时崩解，而包含太少崩解剂的片剂可能不会以期望的速率或在期望的条件下发生崩解。因此，应当使用足够量的崩解剂来形成本发明的固体口服剂型，所述量既不太多也不太少，以至于不会不利地改变活性成分的释放。所用崩解剂的量根据制剂的类型而改变，并可由本领域技术人员容易地确定。在一种实施方式中，药物组合物包括约0.5至约15重量%的崩解剂，或约1至约5重量%的崩解剂。

可以用于本发明的药物组合物和剂型的崩解剂包括，但不限于：琼脂-琼脂、海藻酸、碳酸钙、微晶纤维素、交联羧甲纤维素钠、交聚维酮、聚克立林钾、淀粉羟乙酸钠、马铃薯淀粉或木薯淀粉、其他淀粉、预糊化淀粉、其他淀粉、粘土、其他海藻素、其他纤维素、树胶及其混合物。

可以用于药物组合物和剂型的润滑剂包括，但不限于：硬脂酸钙、硬脂酸镁、矿物油、轻质矿物油、甘油、山梨醇、甘露醇、聚乙二醇、其他二醇、硬脂酸、十二烷基硫酸钠、滑石、氢化植物油（例如花生油、棉籽油、葵花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和豆油）、硬脂酸锌、油酸乙酯、月桂酸乙酯、琼脂及其混合物。其他润滑剂包括，例如syloid硅胶（AEROSIL200，由W.R.Grace Co.of Baltimore，MD制备）、合成二氧化硅的凝固气雾剂（由Degussa Co.ofPiano，TX销售）、CAB-O-SlL（由Cabot Co.ofBoston，MA销售的热解二氧化硅产品）及其混合物。如果使用，润滑剂通常以小于其掺入的药物组合物或剂型的约1重量%的量使用。

在一种实施方式中，固体口服剂型包括本文提供的化合物、无水乳糖、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸、胶体无水二氧化硅和明胶。

4.5.2控释剂型

本文提供的活性成分可以通过本领域普通技术人员公知的控释方式或通过递送装置给药。实例包括，但不限于：在下列美国专利中描述的那些：3,845,770；3,916,899；3,536,809；3,598,123；和4,008,719；5,674,533；5,059,595；5,591,767；5,120,548；5,073,543；5,639,476；5,354,556和5,733,566中描述的那些，将所有上述专利均引入本文作为参考。这样的剂型可用于提供一种或多种活性成分的缓释或控释，其使用例如羟丙基甲基纤维素、其他聚合基质、凝胶、渗透膜、渗透系统、多层包衣、微粒、脂质体、微球或其组合来提供可变比例的期望释放特征。本领域普通技术人员公知的那些控释制剂，包括本文描述的那些，可被容易地选择来与本文提供的活性剂来使用。在一种实施方式中，提供适于口服给药的单一单位剂型，例如但不限于适合于控制释放的片剂、胶囊、胶囊锭（gelcap）和囊片剂。

在一种实施方式中，控释药物产品都改善药物的疗效，使其优于其非控释对应药物所获得的疗效。在另一种实施方式中，在药物治疗中使用的控释制剂的特征为，能够在最短的时间内应用最少的药物来治愈或控释病症。控释制剂的优点包括延长药物活性、降低服药频率、和提高患者的顺应性。另外，控释制剂可用于影响起效时间或其他特性，例如血药水平，从而可以影响副作用（例如不良作用）的发生。

在另一种实施方式中，控释制剂被设计成最初释放能快速产生期望的治疗或预防效果的一定量的药物（活性成分），然后逐渐和持续释放其他药物量，以在延长的时间段内维持这种治疗或预防效果的水平。在一种实施方式中，为了在体内维持药物的这种恒定的水平，药物必须以替代被代谢或排出体外的药物量的速率从剂型中释放。活性成分的控释可以通过各种条件来刺激，包括，但不限于：pH、温度、酶、水或其他生理条件或化合物。

4.5.3胃肠外剂型

胃肠外剂型可以通过各种途径给药至患者，包括，但不限于：皮下、静脉内（包括推注）、肌内和动脉内给药。在某些实施方式中，胃肠外剂型的给药绕过了患者对污染物的天然防御，因而，在这些实施方式中，胃肠外剂型为无菌的或者能够在给药至患者前灭菌。胃肠外外剂型的实例包括，但不限于：注射用溶液、溶解或悬浮在注射用可药用赋形剂中的干产品、注射用混悬剂和乳剂。

可用于提供胃肠外剂型的合适载体是本领域技术人员公知的。实例包括，但不限于：USP注射用水；水性载体，例如但不限于：氯化钠注射液、林格氏注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化钠注射液和乳酸林格氏注射液；水混溶的载体，例如但不限于：乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇；以及非水性载体，例如但不限于：玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苄酯。

本文公开的提高一种或多种活性成分溶解性的化合物也可以加入到胃肠外剂型中。例如，环糊精及其衍生物可以用来提高本文提供的免疫调节化合物及其衍生物的溶解性。参见，例如美国专利号5,134,127,将其引入本文作为参考。

4.5.4局部和粘膜剂型

本文提供的局部和粘膜剂型包括，但不限于：喷雾剂、气雾剂、溶液剂、乳剂、混悬剂、滴眼剂或其他眼科制剂，或本领域技术人员已知的其他形式。参见，例如Remington’s PharmaceuticalSciences,1第16和第18版，Mack Publishing,Easton PA(1980&1990)；和Introduction to PharmaceuticalDosage Forms，第4版，Lea&Febiger,Philadelphia(1985)。适用于治疗口腔内粘膜组织的剂型可以配制成漱口药或口腔凝胶剂。

可用于提供本文包括的局部和粘膜剂型的合适赋形剂(例如载体和稀释剂)及其他材料是制药领域的技术人员所公知的，并取决于给定药物组合物或剂型将施用的具体组织。在一种实施方式中，赋形剂包括，但不限于：水、丙酮、乙醇、乙二醇、丙二醇、1,3-丁二醇、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、矿物油及其混合物，以形成无毒的和可药用的的溶液剂、乳剂或凝胶剂。如果期望，也可以向药物组合物和剂型中加入增湿剂或保温剂。这样的其他成分的实例是本领域公知的。参见，例如Remington’sPharmaceuticalSciences,第16版和第18版，Mack Publishing,Easton PA(1980&1990)。

还可以调节药物组合物或剂型的pH来改善一种或多种活性成分的递送。类似地，可以调节溶剂载体的极性、其离子强度或张力来改善递送。可以将化合物例如硬脂酸酯加入药物组合物或剂型中，以改变一种或多种活性成分的亲水性或亲油性，从而改善递送。在其他实施方式中，硬脂酸酯可以作为制剂的脂质载体、作为乳化剂或表面活性剂、以及作为递送增强剂或渗透增强剂。在其他实施方式中，还可以使用活性成分的盐、溶剂化物、前药、包合物或立体异构体来进一步调节得到的组合物的性质。

4.6试剂盒

在一种实施方式中，本文提供的活性成分优选不同时或不通过相同的给药途径施用至患者。在另一种实施方式中，提供可简便地将合适量的活性成分给药至患者的试剂盒。

在一种实施方式中，试剂盒包括本文提供的化合物的剂型。试剂盒可以进一步包括其他活性成分，例如奥利默森

美法仑、G-CSF、GM-CSF、EPO、托泊替康、达卡巴嗪、依立替康、泰索帝、IFN、COX-2抑制剂、己酮可可碱、环丙沙星、地塞米松、IL2、IL8、IL18、Ara-C、长春瑞滨、异维A酸、13顺式-视黄酸或其药理学活性变体或衍生物、或其组合。所述其他活性成分的实例包括，但不限于：本文公开的那些（参见，例如4.3节）。

在其他实施方式中，试剂盒可以进一步包括用来给药所述活性成分的装置。这样的装置的实例包括，但不限于：注射器、滴袋、贴片和吸入器。

试剂盒可以进一步包括供移植的细胞或血液，以及能用于给药一种或多种活性成分的可药用载体。例如，如果活性成分以必须重构用于胃肠外施用的固体形式来提供，那么该试剂盒可以包括合适载体的密封容器，其中所述活性成分可溶解以形成适于胃肠外给药的无颗粒的无菌溶液。可药用载体的实例包括，但不限于：USP注射用水；水性载体，例如但不限于：氯化钠注射液、林格氏注射液，葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化钠注射液、和乳酸林格氏注射液；水混溶的载体，例如但不限于：乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇；以及非水性载体，例如但不限于：玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、和苯甲酸苄酯。

5.实施例

通过以下非限制性实施例来阐述本发明的一些实施方式。

5.1(2S,3S,4S,5R,6R)-6-(2-(2-((S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基-氨基)-2-氧乙氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H- 吡喃-2-羧酸

步骤1:将(S)-N-(2-(1-(3-乙氧基-4-羟基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基)-3-氧异吲哚啉-4-基)环丙烷甲酰胺（0.38g,0.83mmol）和3,4,5-三乙酰氧基-6-(2,2,2-三氯-亚氨代乙酰基氧基)-四氢吡喃-2-羧酸苄酯（0.46g,0.83mmol）在二氯甲烷（40mL）中的反应混合物冷冻至-15°C至-20°C，用BF₃·OEt₂（0.10mL,0.83mmol）处理，并在-15°C至-20°C下搅拌2小时。在2小时之后，将反应混合物温热至室温，并搅拌过夜。将反应混合物用EtOAc（10vol）稀释，然后用饱和NaHCO₃水溶液（5vol）、2%NaCl（5vol）洗涤，干燥（MgSO₄）并浓缩。将粗混合物洗脱穿过120g ISCO柱，5%至20%的EtOAc/CH₂Cl₂。在浓缩流分之后，在真空下干燥产物12小时，得到呈浅黄色固体的(2S,3S,4S,5R,6S)-2-(苄氧基羰基)-6-(4-((S)-1-(7-(环丙烷甲酰氨基)-1-氧异吲哚啉-2-基)-2-(甲基磺酰基)乙基)-2-乙氧基苯氧基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三醋酸酯（250mg，产率56%）∶¹H-NMR(DMSO-d₆):10.4(s,1H),8.26-8.23(d,J=8Hz,1H),7.53-7.48(t,J=7Hz,1H),7.39-7.31(m,5H),7.20-7.18(d,J=7Hz,1H),7.13-7.12(d,J=2Hz,1H),7.09-7.07(d,J=9Hz,1H),6.95-6.92(dd,J=1,8Hz,1H),5.9-5.88(dd,J=4,10Hz,1H),5.44-5.37(重叠d和t,J_d=8Hz,J_t=10Hz,2H),5.17-5.03(m,4H),4.70-4.63(m,2H),4.38-4.30(m,1H),4.21-4.15(d,J=18Hz,1H),4.08-3.95(m,3H),3.04(s,3H),2.00(s,3H),1.97(s,3H),1.81-1.76(m,4H),1.32-1.27(t,J=7Hz,3H),0.89-0.86(d,J=6Hz,4H).HPLC:Waters Nova-Pak C18柱,150x 3.9mm,4μm;梯度：在20分钟内CH₃CN/0.1%aq H₃PO₄10/90至90/10,1.0mL/min,t_R14.022min,在240nm 98.5AP。

步骤2:将(2S,3S，4S,5R,6S)-2-(苄氧基羰基)-6-(2-乙氧基-4-((S)-2-(甲基磺酰基)-1-(4-硝基-1,3-二氧异吲哚啉-2-基)乙基)苯氧基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三醋酸酯（1.67g,1.96mmol）和10%Pd-C（250mg）在EtOAc（150mL）中的悬浮液置于Parr氢化瓶（吹扫3×氮气，3×氢气）中，调节压力至40-45psi。在4小时之后，将反应混合物过滤穿过硅藻土，用EtOAc（5mL)）洗涤滤饼。在浓缩之后，在40°C下，在真空下干燥产物2小时，得到呈淡黄色固体的(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(4-((S)-1-(7-(环丙烷甲酰氨基)-1-氧异吲哚啉-2-基)-2-(甲基磺酰基)乙基)-2-乙氧基苯氧基)四氢-2H-吡喃-2-羧酸(1.45g，产率>99%)。¹H-NMR(DMSO-d₆):13.349(s,1H),10.48(s,1H),8.25-8.22(d,J=8Hz,1H),7.53-7.48(t,J=7Hz,1H),7.21-7.18(d,J=7Hz,1H),7.12-7.08(m,2H),7.01-6.97(dd,J=1,8Hz,1H),5.9-5.85(dd,J=4,10Hz,1H),5.44-5.37(重叠d和t,J_d=8Hz,J_t=10Hz,2H),5.13-5.04(m,2H),4.69-4.63(d,J=18Hz,1H),4.51-4.48(d,J=10Hz,1H),4.38-4.29(m,1H),4.21-4.15(d,J=18Hz,1H),4.08-3.99(m,3H),3.04(s,3H),2.01(s,3H),1.98(s,3H),1.97(s,3H),1.82-1.76(m,1H),1.35-1.30(t,J=6Hz,3H),0.89-0.86(d,J=6Hz,4H).HPLC:Waters Nova-Pak C18柱,150x 3.9mm,4μm;梯度：在20分钟内CH₃CN/0.1%aq H₃PO₄10/90至90/10，1.0mL/min,t_R 10.951min,在240nm 96.2AP。

步骤3:将(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(4-((S)-1-(7-(环丙烷甲酰氨基)-1-氧异吲哚啉-2-基)-2-(甲基磺酰基)乙基)-2-乙氧基苯氧基)四氢-2H-吡喃-2-羧酸（1.4g，1.84mmol）和Na₂CO₃（0.59g,5.52mmol）在MeOH（40mL）中的悬浮液在30°C下加热8小时，接着在室温下加热8小时。将反应混合物冷却至0°C-5°C，然后用AcOH（0.53mL）酸化。在将反应混合物温热至室温之后，浓缩该混合物。使粗残余物洗脱穿过PrepSep 10gC18柱，用10%至25%CH₃CN/H₂O洗脱。冷冻干燥级分，得到呈淡黄色固体的(2S,3S,4S,5R,6R)-6-(2-(2-((S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基氨基)-2-氧乙氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-羧酸（920mg，78%）∶¹H-NMR(MeOH-d₆,):8.29-8.26(d,J＝8.4Hz,1H),7.76-7.71(t,J=8.0Hz,1H),7.49-7.43(t,J=7.0Hz,1Hv),7.27-7.25(d,J=8Hz,2H),7.15-7.09(m,2Hz),7.04-7.01(dd,J=2,9Hz,1H),6.06-6.01(dd,J=4.0,11.0Hz,1H),4.95-4.93(d,J=7Hz,1H),4.87(bs,可交换的质子,5H,),4.64-4.58(d,J=18Hz,1H,),4.33-4.24(m,1H),4.19-4.07(m,3H),3.8(s,3H),3.96-3.90(dd,J=4,14Hz,1H),3.77-3.74(d,J=8Hz,1H),3.59-3.51(m,3H),3.06(s,3H),1.82-1.75(m,1H),1.42-1.38(t,J=14Hz,3H),1.05-0.92(m,4H).¹³C-NMR(DMSO-d₆):171.8,171.7,168.1,148.3,146.9,142.2,136.9,132.9,131.3,119.9,117.5,117.0,116.8,116.7,116.2,113.7,100.1,76.7,73.9,73.0,71.8,64.5,53.7,48.8,46.2,40.9,15.7,15.4,7.8.HPLC:Waters Nova-Pak C18柱，150x 3.9mm,4μm;梯度：在20分钟内CH₃CN/0.1%aq H₃PO₄10/90至90/10,1.0mL/min,t_R 6.952min,在240nm 99.03AP。C₂₉H₃₄N₂O₁₂S1.9[H₂O]的理论值:%C(52.07);%H(5.70);%N(4.19)；实测值：%C(51.78);%H(5.30);%N(4.01)。

5.2(S)-N-(2-(1-(3-乙氧基-4-羟基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基)-3-氧异吲哚啉 -4-基)环丙烷甲酰胺

步骤1∶将(S)-7-氨基-2-(1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基)异吲哚啉-1-酮（10g,24.7mmol）和无水TMSI（50g,250mmol）在80°C下加热1.5至2小时。将该混合物冷却至0°C-5°C，并用5%含水亚硫酸钠淬灭。加入二氯甲烷（CH₂Cl₂），并强力搅拌浆液直到所有的固体溶解。分离出CH₂Cl₂层，用水和盐水洗涤，然后浓缩成泡沫状物（9.6g，产率＞99%）。通过柱色谱（经60分钟，MeOH 0-5%/CH₂Cl₂）纯化粗产物。合并期望的组分，并浓缩，得到呈黄色固体的(S)-7-氨基-2-(1-(3-乙氧基-4-羟基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基)异吲哚啉-1-酮（6g，产率62%）。UPLC:AcquityUPLC BEH C8,2.1×50mm,1.7μ，经2分钟，从99:1至15:85梯度,0.1%aq.TFA/MeCN,0.8mL/min,35°C:t_R 0.86分钟。

步骤2:向(S)-7-氨基-2-(1-(3-乙氧基-4-羟基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基)异吲哚啉-1-酮（5.86g，15.0mol）在THF（60mL）中的混合物中加入环丙甲酰氯（1.5mL,16.1mmol）。将该混合物加热至60°C 1小时，然后，冷却至室温。除去溶剂，并使用柱色谱（MeOH/CH₂Cl₂；经60分钟0-5%）纯化粗残余物，得到4.7g的粗产物，产率68%。接着，通过制备-HPLC进行进一步纯化，得到呈白色固体的(S)-N-(2-(1-(3-乙氧基-4-羟基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基)-3氧异吲哚啉-4-基)环丙烷甲酰胺（1.38g，产率20%）。HPLC:HPLC:Hypersil DBS C8柱，250x 4.6mm,5μm;经15分钟，99/1至85/15的梯度CH₃CN/10mM aq.KH₂PO₄,1.0mL/min,35°C,运行时间20分钟∶t_R12.45分钟。¹H-NMR(DMSO-d₆):10.51(1H,s),9.07(1H,s),8.22-8.25(1H,d),7.47-7.53(1H,t),7.18-7.20(1H,d),7.01(1H,d),6.78-6.86(2H,m),5.82-5.87(1H,m),4.61-4.67(1H,d),3.91-4.33(5H,m),3.02(3H,s),1.76-1.82(1H,m),1.31-1.36(3H,t),0.82-0.96(4H,m);LC-MS ES⁺(M+1)459。

5.3(S)-N-(2-(1-(3,4-二羟基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基)-3-氧异吲哚啉-4-基) 环丙烷甲酰胺

将(S)-7-氨基-2-(1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基)异吲哚啉-1-酮（5g，12.4mol）和无水TMSI（25g,125mmol）的混合物在80°C加热16小时。将该混合物冷却至室温，并用5%亚硫酸钠水溶液淬灭。加入乙酸乙酯，分离层。将有机层用水、盐水洗涤，然后经Na₂SO₄干燥。将有机层浓缩，接着将溶剂更换为THF。向THF溶液中，加入环丙甲酰氯（1.2mL，13.2mmol）。将该混合物加热至40°C 0.5小时，接着冷却至室温。用1N NaHCO₃水溶液淬灭该混合物，之后，用乙酸乙酯萃取。将有机层先用1N NaHCO₃水溶液、水洗涤，接着用盐水洗涤。除去溶剂，将粗物质悬浮在40°C的ACN中1小时。通过过滤收集产物，得到1g的粗物质，产率19%。通过制备-HPLC进一步纯化，接着用2N HCl水溶液处理，得到呈白色固体的(S)-N-(2-(1-(3,4-二羟基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基)-3-氧异吲哚啉-4-基)环丙烷甲酰胺（0.25g，产率5%）。HPLC:HPLC:Hypersil DBS C8柱，250x 4.6mm,5μm;经15分钟，99/1至85/15的梯度CH₃CN/10mM aq.KH₂PO₄,1.0mL/min,35°C,运行时间20分钟∶t_R 10.91分钟。¹H-NMR(DMSO-d₆):10.51(1H,s),9.02-9.07(2H,d),8.22-8.25(1H,d),7.48-7.53(1H,t),7.18-7.20(1H,d),6.70-6.78(3H,m),5.77-5.81(1H,m),4.59-4.65(1H,d),3.86-4.26(3H,m),3.02(3H,s),1.76-1.83(1H,m),0.88-0.90(4H,m).LC-MSES⁺(M+1)431。

5.4(S)-N-(2-(1-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基)-3-氧异吲哚啉 -4-基)环丙烷甲酰胺

步骤1∶将(S)-7-氨基-2-(1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基))乙基)异吲哚啉-1-酮（10g，24.7mol）和无水TMSI（50g,250mmol）的混合物在80°C加热1.5至2小时。将该混合物冷却至0°C-5°C，并用5%亚硫酸钠溶液淬灭。加入二氯甲烷，并强力搅拌浆液直到所有的固体溶解。分离出CH₂Cl₂层，并用水和盐水洗涤，然后浓缩成泡沫状物（9.6g，产率＞99%）。将粗产物通过柱色谱（经60分钟，MeOH 0-5%/CH₂Cl₂）纯化。合并期望的组分，并浓缩，得到呈黄色固体的(S)-7-氨基-2-(1-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基)异吲哚啉-1-酮（6g，产率65%）。UPLC:AcquityUPLC BEH C8,2.1x 50mm,1.7μ,经2分钟，99:1至15:85的梯度,0.1%aq.TFA/MeCN,0.8mL/min,35°C:t_R 0.80分钟。

步骤2:向(S)-7-氨基-2-(1-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)异吲哚啉-1-酮（5.86g，15.0mol）在THF（60mL）中的混合物中加入环丙甲酰氯（1.5mL,16.1mmol）。将该混合物加热至60°C 1小时，然后，冷却至室温。除去溶剂，并使用柱色谱（MeOH/CH₂Cl₂∶经60分钟0-5%）纯化粗残余物，得到4.7g的粗产物，产率68%。然后，通过制备-HPLC进行进一步纯化，得到呈白色固体的(S)-N-(2-(1-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基)-3氧异吲哚啉-4-基)环丙烷甲酰胺(0.3g，产率4.3%)。HPLC:HPLC:Hypersil DBS C8柱,250×4.6mm,5μm;经15分钟，从99/1至85/15的梯度CH₃CN/10mM aq.KH₂PO₄,1.0mL/min,35°C,运行时间20分钟∶t_R 11.84分钟。¹H-NMR(DMSO-d₆):10.50(1H,s),9.11(1H,s),8.22-825(1H,d),7.48-7.53(1H,t),7.18-7.2(1H,d),6.84-6.95(3H,m),5.80-5.85(1H,m),4.60-6.66(1H,d),3.90-4.30(3H,m),3.75(3H,s),3.04(3H,s),1.79-1.83(1H,m),0.88-0.90(4H,m);LC-MS ES⁺(M+1)445。

5.57-氨基-2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基-苯基)-2-甲烷磺酰基-乙基]-2,3-二氢异吲哚-1-酮

步骤1：将2-溴甲基-6-硝基-苯甲酸甲酯（4.0g，14.6mmol）、(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基-苯基)-2-甲烷磺酰基-乙胺（4.0g，14.6mmol）和三乙胺（4.4mL,31.6mmol）在DMF（40mL）中的溶液在80°C-90°C加热1天。在真空下除去溶剂，得到油状物。用乙酸乙酯（150mL）和HCl（2N,50mL）萃取该油状物。将有机层用HCl（2N,2×50mL）、水（2×50mL）、盐水（2×50mL）洗涤，并经MgSO₄干燥。在真空下除去溶剂，得到黄色油状物。将油状物在乙醚（50mL）中浆液化，得到悬浮液。过滤该悬浮液，并用乙醚洗涤，得到呈黄色固体的2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基-苯基)-2-甲烷磺酰基-乙基]-7-硝基-2,3-二氢异吲哚-1-酮（3.43g，产率54%）∶¹HNMR(CDCl₃)□1.5(t,J=7Hz,3H,CH₃),2.99(s,3H,CH₃),3.69(dd,J=5,15Hz,1H,CHH),3.86(s,3H,CH₃),4.07(q,J=7Hz,2H,CH₂),4.27(dd,J=11,15Hz,1H,CHH),4.30(d,J=17Hz,1H,NCHH),4.54(d,J=17Hz,1H,NCHH),5.70(dd,J=5,10Hz,1H,NCH),6.85(d,J=8Hz,1H,Ar),6.94-7.00(m,2H,Ar),7.58-7.76(m,3H,Ar)。

步骤2∶在Parr中，在氢气（50-60psi）下，将2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲烷磺酰基-乙基]-7-硝基-2,3-二氢异吲哚-1-酮（3.0g，6.9mmol)）和Pd/C（10%，350mg）在甲醇/乙酸乙酯（每次150mL）中的悬浮液振摇20小时。将该悬浮液过滤穿过硅藻土垫料，并用丙酮（300mL）洗涤。在真空下除去溶剂，得到固体。将该固体在甲醇（10mL）中浆液化3小时。过滤该悬浮液，并用甲醇洗涤，得到呈白色固体的7-氨基-2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基-苯基)-2-甲烷磺酰基-乙基]-2,3-二氢异吲哚-1-酮（1.5g，产率55%）∶mp,135-137°C;¹H NMR(CDCl₃)□1.44(t，J=7Hz,3H,CH₃),2.93(s,3H,CH₃),3.66(dd,J=5,15Hz,1H,CHH),3.85(s,3H,CH₃),4.06(q,J=7Hz,2H,CH₂),4.13(d,J=16Hz,1H,CHH),4.22(dd,J=10,15Hz,1H,CHH),4.35(d,J=17Hz,1H,CHH),5.19(brs,2H,NH₂),5.64(dd,J=5,10Hz,1H,NCH),6.54(d,J=8Hz,1H,Ar),6.61(d,J=7Hz,1H,Ar),6.83(d,J=8Hz,1H,Ar),6.90-6.96(m,2H,Ar),7.20(t，J=8Hz,1H,Ar);¹³C NMR(CDCl₃)14.59,41.28,48.01,51.81,55.87,56.14,64.48,110.98,111.38,112.22,113.41,114.75,119.23,129.89,133.08,142.36,146.02,148.72,149.45,170.57;C₂₀H₂₄N₂O₅S的理论值:C,59.39;H,5.98;N,6.93。实测值：C,59.04;H,6.04;N,6.74。

5.6测定

5.6.1PDE 4抑制测定

可以使用本领域通常已知的任何方法测定PDE 4抑制。例如，使用Hill和Mitchell[Hill and Mitchell,Faseb J.,8，A217(1994)]的改进方法，将U937细胞（人前单核细胞系）培养至1×10⁶细胞/mL，并离心收集。在磷酸盐缓冲盐水中洗涤1×10⁹细胞的细胞沉淀物，然后冷冻在-70°C用于后续纯化，或立即溶解在冷的匀浆缓冲液（20mM的Tris-HCI,pH 7.1,3mM的2-巯基乙醇，1mM的氯化镁，0.1mM的乙二醇-双-(β-氨基乙基乙醚)-N,N,N¹,N¹-四乙酸（EGTA）、1μM苯甲基磺酰氟（PMSF）和1μg/ml亮肽素）。将细胞在Dounce匀浆器中匀浆化20次，通过离心获得包含胞质成分的上清液。然后，将上清液负载在在匀浆缓冲液中平衡的Sephacryl S-200柱上。在匀浆缓冲液中，以约0.5mL/min的速率洗脱粗的4型磷酸二酯酶，并使用咯利普兰测定成分的磷酸二酯酶活性。合并包含PDE 4活性（咯利普兰敏感）的成分，并等分用于后续应用。

基于Hill和Mitchell描述的方法进行磷酸二酯酶测定。该测定以100μl的总体积进行，其包含多种浓度的感兴趣的化合物，50mM Tris-HCl，pH7.5，5mM氯化镁和1μM cAMP（其中1%为³H cAMP）。将反应物在30°C下培养30分钟，然后煮沸2分钟终止。预测定用于这些试验的萃取物包含的PDE 4含量，使得反应在线性范围内，和消耗小于15%的总底物。在反应终止之后，将样品冷冻在4°C，然后在30°C下，用10μl的10mg/mL蛇毒液处理15分钟。接着，通过加入200μl的季铵离子交换树脂（AG1-X8,BioRad）15分钟除去未用的底物。然后，将样品以3000rpm旋转5分钟，取50μl的水相进行计数。每个数据点进行一式两份，将活性表示为对照的百分数。接着，由最少三个独立实验的剂量反应曲线确定化合物的IC₅₀。

5.6.2PMBC中的TNFα抑制测定

通过Ficoll Hypaque（Pharmacia，Piscataway，NJ，USA）密度离心，获得来自正常供体的外周血单核细胞（PBMC）。在补充有10%AB+人血清（Gemini Bio-products，Woodland，CA，USA）、2mM L-谷氨酰胺、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素（Life Technologies）的RPMI 1640（LifeTechnologies，Grand Island，NY，USA）中培养细胞。

将PBMC（2×10⁵个细胞）在96孔平底Costar组织培养板（Corning，NY，USA）中铺板，一式三份。在化合物缺乏或存在下，用LPS（来自马流产沙门氏菌（Salmonellaabortus equi）Sigma目录号L-1887，St.Louis，MO，USA）以1ng/ml的终浓度刺激细胞。将本文提供的化合物溶于在DMSO（Sigma）中，并在使用前即刻用培养基进一步稀释。在所有测定中，最终的DMSO浓度可以为约0.25%。在LPS刺激前1小时，将化合物加入到细胞中。然后在37°C下，在5%CO₂中培养细胞18-20小时，然后收集上清液，用培养基稀释，并通过ELISA（Endogen，Boston，MA，USA）测定TNFα水平。使用非线性回归、S形剂量-应答计算IC50，限制顶部为100%而底部为0%，允许可变斜率（GraphPad Prism 3.02版）。

5.6.3各种PDE 4抑制相关测定

5.6.3.1PBMC纯化和刺激

将来自健康供血者（Blood Center ofNew Jersey，East Orange,NJ）的人白细胞单位用无菌Hank’s平衡盐溶液（HBSS）1:1稀释，并经室温Ficoll-Paque Plus（GE Healthcare）离心，得到外周血单核细胞（PBMC）。将PBMC在HBSS中洗涤，再悬浮在Roswell Park Memorial Institute（RPMI）完全培养基（RPMI 1640,BioWhittaker，Walkersville,MD），5%人血清，100U/ml青霉素，100mg/mL链霉素，2mM L-谷氨酰胺）中，并计数。向96孔平底板的每个孔中加入一百μl（2×10⁶/ml）的PBMC（最终细胞计数=2×10⁵/孔），并在37°C下培养1小时。向每个试验孔中加入50μl（4×）化合物，向每个对照孔中加入50μl包含1%二甲亚砜（DMSO）的培养基([DMSO]_最终=0.25%)。在37°C下，将该板培养1小时。然后，用50μl来自马流产沙门氏菌（Sigma）的4ng/mL脂多糖(LPS)([LPS]_最终=1ng/mL)刺激，并在37°C下培养18小时。对于采用超抗原刺激，将PBMC以在完全培养基中3×10⁵细胞/孔铺板在96-孔组织培养板中，在37°C下用化合物预处理1小时，然后用100ng/mL葡萄球菌肠毒素B（SEB）（Toxin Technology，Sarasota,,FL）刺激18小时。

5.6.3.2定量逆转录-聚合酶链反应

收集细胞，并根据制造商的说明（例如RNeasy，Qiagen,Valencia,CA）进行RNA分离。根据制造商的实验设计（例如，RT试剂盒，AppliedBiosystems，Foster City，CA）进行逆转录，对于每种样品，将1μg RNA转化成cDNA。每种试样使用50ng cDNA进行定量实时聚合酶链反应（PCR），用于基因表达分析。用于靶基因和内源甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）控制的基因表达测定可以来自例如Applied Biosystems。在实时PCR System7500（Applied Biosystems）上测量表达。例如，用SDS v.1.3.1软件计算相对量。

5.6.3.3细胞因子和趋化因子蛋白质分析

将来自每孔的50μl上清液转移到新的圆底部96孔板中，并贮存在-20°C，使用Luminex IS 100仪器（Luminex Corporation,Austin,TX），通过胞计数珠阵列进行细胞因子分析。在测定之前，将用于Luminex xMAP Technology（Millipore）的具有抗体结合珠粒的LincoPlex试剂盒合并到多联模式（multiplex format）中。使用Upstate Beadview软件进行数据分析。通过酶联免疫吸附(ELISA)（R&D Systems）测量来自SEB刺激的PBMC的IL-2和IFN-γ水平。

5.6.3.4PMN分离和刺激

通过使用除去PBMC的Ficoll梯度离心与PBMC分离，从人白细胞中分离出多形核细胞（PMN）。通过沉积在3%葡聚糖中，接着低渗溶解在0.2%盐水中，以除去红细胞。最后，使用HLAII类磁珠耗尽任何污染的单核细胞。用滴定化合物预处理PMN（3×10⁵细胞/孔），然后用各种剂量的ZymosanA颗粒（热杀的酿酒酵母）刺激。将硫酸多粘菌素B（(40nM终浓度）加入到所有样品中，以中和任何污染的LPS。在培养过夜之后，收集上清液，并用ELISA测定IL-8。

对于LTB4生成，将PMN再悬浮在不含钙或镁（BioWhittaker）而包含10mM 4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸（HEPES）（pH=7.2）的磷酸缓冲盐水中，并以1.7x10⁶细胞/孔的浓度铺板在96-孔组织培养板中。在37°C和5%CO₂下，用50μM硫柳汞（Sigma）/1mM CaCl₂/1mM MgCl₂处理细胞15分钟，然后用在终浓度0.01%DMSO中的化合物处理10分钟，一式两份。用1mM甲酰基-Met-Leu-Phe（fMLF,Sigma）刺激PMN，然后通过加入甲醇（20%终浓度）溶解细胞，并冷冻在干冰/异丙醇浴中10分钟。将溶胞产物贮存在-70°C下，直到通过竞争的竞争LTB4ELISA（R&DSystems）测量LTB4含量。

对于CD18/CD11b（Mac-1）表达，用化合物预处理PMN 10分钟，并用N-甲酰基-Met-Leu-Phe（fMLF）刺激30分钟，然后放置在冰上，用抗-CD18-FITC和抗-CD11b-PE染色，并通过使用荧光激活细胞分选仪（FACS）Calibur流式细胞仪（BD Biosciences）的流式细胞仪分析。

为了测量中性粒细胞对内皮细胞的粘附，在实验前4天，将人脐静脉内皮细胞（HUVEC,Anthrogenesis Corporation,Cedar Knolls,NJ）铺板在包含2%FBS的培养基中的96孔板（5×10³细胞/孔）上，以确保HUVEC粘附到板上。在实验当天，将中性粒细胞与人白细胞分离，用荧光染料Calcein-AM（Molecular Probes,Oregon）标记1小时。将标记的中性粒细胞（2×10⁵/孔）加入到粘附的HUVECs上，在5%CO₂的湿培养箱中，在37°C下用化合物预处理10分钟。加入fMLF以触发中性粒细胞对HUVECs的粘附30分钟。用包含2%葡萄糖的PBS洗涤细胞，以除去未粘附的中性粒细胞，并用荧光计测量粘附的中性粒细胞的数量。

对于IL-8生成测定，将PMN以3×10⁵细胞/孔铺板在完全培养基中的96-孔组织培养板中，在37°C和5%CO₂下，用在终浓度0.1%DMSO中的化合物处理1小时，一式两份。然后，用未受调理素作用的、煮沸的ZymosanA（Sigma）以2.5×10⁵颗粒/孔刺激PMN 18小时。收集上清液，并通过ELISA（R&D Systems）测定IL-8。

5.6.3.5NK细胞纯化和刺激

通过用于阴性选择富集NK细胞的RossetteSep混合物（StemCellTechnologies,Inc.）培养30分钟，接着进行Ficoll-Hypaque密度梯度离心，从来自健康供血者的白细胞单位分离NK细胞。分离出CD56⁺NK细胞至~85%纯度，如通过流式细胞仪测定。在4°C下，用100μg/mL的人IgG(Sigma)涂层平底的板过夜。冲洗掉未结合的IgG。将NK细胞以2×10⁵细胞/孔铺板在96-孔板中，加入10ng/mL的IL-2（R&D Systems,Minneapolis MN）。然后，将试验化合物加入到所述板中。在培养48小时之后，收集上清液，并通过ELISA（R&D Systems）分析TNF-α、IFN-γ、GM-CSF和MIP-1α的水平。

5.6.3.6角质形成细胞增殖、TNF-α生成和存活

对于增殖研究，从Cell Applications,Inc.(San Diego,CA)获得人新生包皮表皮角质形成细胞（HEKn细胞），并以3000细胞/孔铺板在96-孔平底组织培养板中两天。使用细胞计数试剂盒（Dojindo Molecular Technologies,Inc,Gaithersburg,MD）测量细胞增殖。对于TNF-α生成和存活研究，从CascadeBiologics（Portland,OR）获得HEKn细胞，并培养在补充有生长因子的无血清培养基中。当细胞达到80%融合时，对细胞进行胰蛋白酶处理（trypsinized），并以1×10⁵细胞/孔铺板在6-孔平皿中。将该板培养24小时，以进行细胞粘附。用试验化合物或0.1%DMSO（作为赋形剂对照）处理HEKn细胞1小时，之后在用312nm UVB灯泡校准的UV Stratalinker 2400（Stratagene,La Jolla,CA）中，用50mJ/cm²的紫外线B（UVB）照射。替换培养基和化合物，并将细胞培养18小时。移除上清液以进行在TNF–αELISA中的试验，之后，向每个孔加入100μl的三磷腺苷(ATP)-样试剂（PerkinElmer Life and Analytical Sciences,Shelton,CT），以测定存活力。将溶胞产物转移到板上，振摇2分钟，之后用TopCount NXT LuminescenceCounter（PerkinElmer Life and Analytical S ciences）阅读化学发光。

5.6.4细胞增殖

从Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH（Braunschweig，Germany）获得细胞系Namalwa、MUTZ-5和UT-7。从美国典型培养物保藏中心（Manassas，VA，USA）获得细胞系KG-1。在所有细胞系中，细胞增殖（如用³H-胸苷的掺入来表示）如下测量。

在96孔板中，将细胞以6000个细胞/孔铺板到培养基中。在37°C，在5%CO₂的湿培养箱中，以约0.25%DMSO的终浓度，用约100μM、10μM、1μM、0.1μM、0.01μM、0.001μM、0.0001μM和0μM化合物预处理细胞72小时，一式三份。然后，向每孔中加入一微居的³H-胸苷(Amersham)，在37°C下，在5%CO₂的湿培养箱中，将细胞再培养6小时。使用细胞收集器（Tomtec)），将细胞收集到UniFilter GF/C滤板（Perkin Elmer）上，让板干燥过夜。加入Microscint20（Packard）（25μL/孔），在TopCount NXT（Packard）中分析板。每孔计数一分钟。通过全部三份取平均值并用DMSO对照（0%抑制）标准化，计算细胞增殖的百分比抑制。在每个细胞系中，每种化合物在三个独立实验中测顶。使用非线性回归、S形剂量-应答计算最终IC₅₀，限定顶部为100%，底部为0%，允许可变斜率（GraphPad Prismv3.02）。

5.6.5细胞周期分析

用DMSO或一定量本文提供的化合物处理细胞过夜。按照制造商的实验设计，使用CycleTEST PLUS（Becton Dickinson）对细胞周期进行碘化丙啶染色。在染色后，通过FACSCalibur流式细胞仪，使用ModFit LT软件（Becton Dickinson）分析细胞。

5.6.6细胞凋亡分析

在不同时间点，用DMSO或一定量本文提供的化合物处理细胞，然后用膜联蛋白-V洗涤缓冲液（BD Biosciences）洗涤。用膜联蛋白-V结合蛋白和碘化丙啶（BD Biosciences）培养细胞10分钟。使用流式细胞术分析样本。

5.6.7抗增殖测定

第1天：将细胞以50μl/孔在10%FBS RPMI（w/谷氨酰胺，w/o笔长（pen-strip））中接种到96孔板中过夜。使用以下细胞：

结直肠癌细胞：Colo 2053200个细胞/孔；阳性对照依立替康

胰腺癌细胞：BXPC-31200个细胞/孔；阳性对照吉西他滨

前列腺癌细胞：PC31200个细胞/孔；阳性对照多西紫杉醇

乳腺癌细胞：MDA-MB-2312400个细胞/孔；阳性对照紫杉醇

第2天：化合物连续稀释到0.00001μm~10μm（或0.000001μM-1μM），以50μl/孔（2×）一式两份和相应的阳性对照一起加入到板中。然后，将板在37°C培养72小时。

第5天：通过CellTiter Glo方法检测结果。向板中加入100μl/孔的CellTiter Glo试剂，并在室温下培养10分钟，然后，用Top Count reader分析。每种化合物的IC₅₀值典型地均基于两个或多个独立实验的结果。

5.7PDE 4抑制

使用基本上类似于在上述5.6.1和5.6.3节中描述的那些的方法，测量一些化合物抑制PDE 4的能力。

试验化合物包括∶(S)-N-(2-(1-(3-乙氧基-4-羟基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基)-3-氧异吲哚啉-4-基)环丙烷甲酰胺；(S)-N-(2-(1-(3,4-二羟基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基)-3-氧异吲哚啉-4-基)环丙烷甲酰胺；(S)-N-(2-(1-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基)-3-氧异吲哚啉-4-基)环丙烷甲酰胺；和7-氨基-2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基-苯基)-2-甲烷磺酰基-乙基]-2,3-二氢异吲哚-1-酮。根据该试验，测得试验化合物的IC₅₀值在约2μM至约85μM范围内。

5.8TNFα抑制

使用基本上类似于在上述5.6.2节中描述的那些的方法，测量一些化合物抑制TNFα的能力。

试验化合物包括∶(2S,3S,4S,5R,6R)-6-(2-(2-((S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基氨基)-2-氧乙氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-羧酸；(S)-N-(2-(1-(3-乙氧基-4-羟基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基)-3-氧异吲哚啉-4-基)环丙烷甲酰胺；(S)-N-(2-(1-(3,4-二羟基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基)-3-氧异吲哚啉-4-基)环丙烷甲酰胺；(S)-N-(2-(1-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基)-3-氧异吲哚啉-4-基)环丙烷甲酰胺；和7-氨基-2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基-苯基)-2-甲烷磺酰基-乙基]-2,3-二氢异吲哚-1-酮。

除了一种试验化合物的IC₅₀测定为约0.6μM，没有测定出其他试验化合物的IC₅₀值。对于其他试验化合物，测定10μM的抑制%。当每种化合物都以10μM存在时，观察到TNFα的抑制为约30%至约45%。

如上所述本发明的实施方式仅仅用于举例，本领域技术人员将认识到，或者仅使用常规实验将能够确定具体化合物、材料和方法的许多等同物。所有这些等同物都被认为在本发明的范围内，并被所附权利要求书所涵盖。

将本发明参考的所有专利、专利申请和出版物的全部内容引入本文。本申请中的任何参考文献的引用或说明并非承认这样的参考文献是本发明可用的现有技术。参考所附的权利要求，将更好地理解本发明的全部范围。

Claims

1.式（I）的化合物：

或其药用盐、溶剂化物或立体异构体，其中：

R²为氢、甲基或gluc；

R³为氢、乙基或gluc；和

R⁴为氢、羟基或-O-gluc；

条件是，当R²为甲基，R³为乙基时，则R¹不能为未取代的(环丙基)-O-。

2.权利要求1的化合物，其中R¹为氢。

3.权利要求1的化合物，其中R¹为(环丙基)-C(O)-。

4.权利要求1的化合物，其中R²为氢。

5.权利要求1的化合物，其中R²为甲基。

6.权利要求1的化合物，其中R²为gluc。

7.权利要求1的化合物，其中R³为氢。

8.权利要求1的化合物，其中R³为乙基。

9.权利要求1的化合物，其中R⁴为羟基。

10.权利要求1的化合物，其中R⁴为-O-gluc。

11.权利要求1的化合物，其为：

或其药用盐、溶剂化物或立体异构体。

12.权利要求1的化合物，其为：

或其药用盐、溶剂化物或立体异构体。

13.一种药物组合物，包含权利要求1的化合物、或其药用盐、溶剂化物或立体异构体。

14.一种治疗、控制或预防疾病或病症的方法，所述方法包括向患者给予权利要求1的化合物、或其药用盐、溶剂化物或立体异构体，其中所述疾病或病症为癌症、与血管生成有关的病症、疼痛、黄斑变性或相关综合征、皮肤病、肺部病症、石棉相关病症、寄生虫病、免疫缺陷病症、CNS病症、CNS损伤、动脉粥样硬化或相关病症、睡眠功能障碍或相关病症、血红蛋白病或相关病症、或TNFα相关病症。