CN102763685A - 一种抗香蕉枯萎病发酵液及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明一种抗香蕉枯萎病发酵液，含以下培养基质：饼肥、红糖和水，其中饼肥和红糖的总重量与水的总重量比为1:4，培养基质的C/N比为15~25：1。该发酵液中含大量拮抗微生物，对香蕉枯萎病具有显著的控制作用，并且该发酵液的培养基质来源方便，成本低廉。还公开了上述抗香蕉枯萎病发酵液的制备方法，该制备方法工艺简单。同时公开了上述抗香蕉枯萎病发酵液在制备具有抗香蕉枯萎病的药物中的应用。

Description

一种抗香蕉枯萎病发酵液及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种抗香蕉枯萎病发酵液及其制备方法和应用。

背景技术

香蕉枯萎病是由尖胞镰刀菌古巴专化型（Fusarium oxysporium f.sp.cubense,FOC）病原真菌引起的毁灭性土传病害，自1874年首次在澳大利亚发现以来，曾于1896年在巴拿马造成大面积危害，之后逐渐传至世界各地，是至今无法解决的世界科技难题。目前，在我国广东、海南、广西、云南和福建等香蕉主产区，香蕉枯萎病是由FOC的4号生理小种引起的，发病蕉园发病率一般在30-50%，重病区可达90%以上，导致香蕉减产、甚至绝收，是香蕉生产上的一个主要限制因子。

迄今对该香蕉枯萎病尚无理想的抗病品种和化学药剂，因此，结合栽培措施，施用对该病具有拮抗效果的微生物发酵液，从而抑制土壤香蕉枯萎病数量，改变土壤的微生物生态结构，促进香蕉生长，提高香蕉广谱抗病性，成为一种理想的生物防治措施。目前，关于单一菌株在植物生物防治上的应用报道很多，而含有多种香蕉枯萎病拮抗菌的复合发酵液及发酵工艺鲜有报道。单一菌株在室内及盆栽时效果较好，但在大田应用中往往效果不显著。人们普遍的研究方法是先获得拮抗菌株然后再对拮抗菌株进行固态或者液态发酵，这种单一的菌株发酵，受到有益微生物数量少，繁殖系数低，发酵条件复杂等因素的制约,最终导致其在大田应用的效果不显著。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种抗香蕉枯萎病发酵液，该发酵液中含大量拮抗微生物，对香蕉枯萎病具有显著的控制作用，并且该发酵液的培养基质来源方便，成本低廉。

本发明的第二个目的在于提供上述抗香蕉枯萎病发酵液的制备方法，该制备方法工艺简单。

本发明的最后一个目的在于提供上述抗香蕉枯萎病发酵液在制备具有抗香蕉枯萎病作用的药物中的应用。

本发明的第一个目的是通过如下技术方案来实现的：一种抗香蕉枯萎病发酵液，含以下重量份的培养基质：饼肥、红糖和水，其中饼肥和红糖的总重量与水的总重量比为1:4，培养基质的C/N比为15~25：1。

本发明所述饼肥优选为豆粕、花生饼和菜籽饼中的一种或几种。

本发明的第二个发明目的是通过如下技术方案来实现的：上述抗香蕉枯萎病发酵液的制备方法，含以下步骤：

(1)将红糖溶于水中得红糖水，将饼肥置于可透气性包装体内并将置于可透气性包装体内的饼肥置于红糖水中或直接将饼肥溶于红糖水中，调节pH值为6~8，置于阴凉通风处，密封保存，得含饼肥的红糖水溶液；

(2)将含饼肥的红糖水溶液在25~30℃条件下发酵7~15天，每天早晚各搅拌含饼肥的红糖水溶液5~10分钟，直至完成发酵过程，得红褐色溶液，过滤即得含多种微生物的抗香蕉枯萎病发酵液。

在上述步骤中：

本发明步骤(1)中所述饼肥优选为豆粕、花生饼和菜籽饼中的一种或几种。

本发明步骤(1)中所述的可透气性包装体为纱布袋或编织袋。

根据需要使用的发酵液的用量来确定是直接将饼肥溶于红糖水中还是先将饼肥置于可透气性包装体中，再将可透气性包装体置于红糖水中，如发酵液用量较少时，可以直接将饼肥溶于红糖水中，若用于大面积蕉园时，则先将饼肥置于可透气性包装体中，再将包装体置于红糖水中。

本发明中的营养基质通过发酵，获得含大量拮抗微生物的发酵液，这种发酵方法得到微生物的原理主要为有机质与红糖发酵过程本身产生，经常规分离筛选鉴定发现，其产生的微生物均为植株促生微生物或拮抗微生物（尖孢镰刀菌），主要种类有：苏云金芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、腊样芽孢杆菌、梭形芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌以及施氏假单孢菌属、耐寒短杆菌属等，易于繁殖定植，克服了单一菌株发酵有益微生物数量少，繁殖系数低，发酵条件复杂等因素制约的缺陷。

本发明抗香蕉枯萎病发酵液的使用方法可以参考如下：将发酵液以每株香蕉10~15ml，稀释50~100倍液对香蕉进行喷施或灌根，可有效防控香蕉枯萎病。

并且，在发酵完成后，过滤后的滤渣还可以使用，包装体内剩余的发酵过的饼肥中含有丰富的有机质，也可以再次使用，具体使用过程参考如下：将过滤后的滤渣以及袋中剩余的有机质按每株0.2~0.5kg施入香蕉根围，可以为植株提供有机质营养，促进植株生长，增强植株抗性。

本发明的最后一个目的是通过如下技术方案来实现的：上述抗香蕉枯萎病发酵液在制备具有抗香蕉枯萎病的药物中的应用。

本发明具有如下优点：

(1)本发明抗香蕉枯萎病发酵液采用的营养基质原料来源方便，价格低廉；

(2)本发明制备获得的抗香蕉枯萎病发酵液可随喷灌或滴灌设施施入，省时、省工；

(3)本发明制备获得的抗香蕉枯萎病发酵液浓度适中，是复合20余株香蕉枯萎病拮抗菌发酵液，实施例9中的实验结果表明，在已经严重发病（当季发病率30%以上）的地块，香蕉枯萎病发病率可控制在10%以下，如果连年施用，可以起到改良土壤，控制香蕉枯萎病的发生的作用；

(4)本发明以发酵液发酵后的抑菌活性高低为标准，综合降低成本、节约能源、简化工艺、提高效率等因素，筛选出优化的基质红糖中C/N、发酵条件和发酵方法；

(5)本发明中的抗香蕉枯萎病发酵液中含丰富有机质和氨基酸，能够促进香蕉生长，健壮植株，结合所含拮抗微生物的多种生防作用，从而达到防治香蕉枯萎病的效果；

(6)本发明中的抗香蕉枯萎病发酵液还可以起到改良土壤、改善土壤理化性质、增强土壤肥力的作用，特别是多年连续施用效果更佳。

附图说明

图1是实施例1中制备获得的发酵液中分离到的多株拮抗菌；

图2是实施例8中的盆栽防控效果；

图3是实施例9中的大田试验效果图，其中左侧为对照处理，右侧为发酵液处理。

具体实施实例

实施例1

本实施例提供的抗香蕉枯萎病发酵液，根据豆粕本身的C/N比以及红糖的含碳量，豆粕的含氮量，调节培养基质的C/N为15:1，饼肥和红糖的总重量与水的重量比为1：4，计算后得出：豆粕105g，红糖145g，水1000mL。

上述抗香蕉枯萎病发酵液的制备方法如下：

(1)将红糖溶于1000mL水中，将豆粕溶于红糖水中，调节红糖水的pH值为7.0，置于阴凉通风处，密封保存，得含饼肥的红糖水溶液；

(2)将含饼肥的红糖水溶液每天早晚各搅拌5~10分钟，其余时间调节温度许为29±1℃密封发酵15天，过滤得红褐色溶液剂为发酵完成的发酵液。

发酵液中微生物的分离与计数

采用平板稀释涂布法，采用平板稀释涂布法，稀释度（10^-1～10^-3），采用PDA培养基对真菌的进行分离；LB培养基对细菌的进行分离；高氏一号培养基对放线菌的进行分离，分离前加入质量百分含量为3%重铬酸钾抑制细菌、真菌的生长。用移液器分别吸取上述不同稀释度的溶液100μL，滴加于培养基平板上，用L型玻棒涂布均匀，稍晾干，倒置培养皿，于25～28℃温箱中培养3天，根据平板上长出的菌落的颜色、形态、大小等，将不同的真菌、细菌和放线菌的单菌落挑出到培养基（真菌为PDA培养基，细菌为LB培养基、放线菌为高氏一号培养基）上纯化培养，  采用平板对峙培养法初筛拮抗菌株，初筛共获得23株，（见图1）采用稀释涂布法检测计数发酵液中活菌数为4.88×10⁸CFU/mL菌液。

本实施例发酵方法得到微生物的原理主要为有机质与红糖发酵过程本身产生，微生物来源简单，经分离筛选鉴定实验，其产生的微生物均为植株促生微生物或拮抗微生物（尖孢镰刀菌）主要种类有：苏云金芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、腊样芽孢杆菌、梭形芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌以及施氏假单孢菌属、耐寒短杆菌属等，易于繁殖定植，克服了单一菌株发酵有益微生物数量少，繁殖系数低，发酵条件复杂等因素制约的缺陷。

可以将抗香蕉枯萎病发酵液以每株香蕉10~15mL，稀释50~100倍液对香蕉进行喷施或灌根，可有效防控香蕉枯萎病。

并且，将过滤后的滤渣以及袋中剩余的有机质按每株0.2~0.5kg施入香蕉根围，可以为植株提供有机质营养，促进植株生长，增强植株抗性。

实施例2

本实施例提供的抗香蕉枯萎病发酵液，根据花生饼本身的C/N比，以及红糖的含碳量，花生饼的含氮量，调节培养基质的C/N为20:1，并使饼肥与红糖的总重量与水的重量比为1：4，计算后得出：花生饼88g，红糖162g，水1000mL。

上述抗香蕉枯萎病发酵液的制备方法如下：

(1)将红糖溶于1000mL水中，将花生饼装入纱布袋后，将装有花生饼的纱布袋溶于红糖水中或者直接将饼肥溶于红糖水中（视发酵的总液量多少而定，一般发酵溶液较少时可以直接将饼肥溶于红糖，若用于大面积蕉园的发酵液可以采用前一种方法），调节红糖水的pH值为7.0，置于阴凉透风处，密封保存，得含饼肥的红糖水溶液；

(2)将含饼肥的红糖水溶液每天早晚各搅拌5~10分钟，其余在常温条件下（28～30℃）密封发酵15天，过滤得红褐色溶液剂为发酵完成的发酵液。

发酵液中微生物的分离与计数方法同实施例1，采用稀释涂布法检测计数发现，发酵液中菌量为4.61×10⁷CFU/mL以上。

可以将抗香蕉枯萎病发酵液以每株香蕉10~15mL，稀释50~100倍液对香蕉进行喷施或灌根，可有效防控香蕉枯萎病。

并且，将过滤后的滤渣以及袋中剩余的有机质按每株0.2~0.5kg施入香蕉根围，可以为植株提供有机质营养，促进植株生长，增强植株抗性。

实施例3

本实施例提供的抗香蕉枯萎病发酵液，根据菜籽饼本身的C/N比，以及红糖的含碳量，菜籽饼的含氮量，采用常规方法调节培养基质的C/N为25:1，并使饼肥与红糖的总重量与水的重量比为1：4，计算得出菜籽饼95g，红糖155g，水1000mL。

上述抗香蕉枯萎病发酵液的制备方法如下：

(1)将红糖溶于1000mL水中，将菜籽饼溶于红糖水中，调节红糖水的pH值为6.0，置于阴凉透风处，密封保存，得含饼肥的红糖水溶液；

(2)将含饼肥的红糖水溶液每天早晚各搅拌5~10分钟，其余时间常温条件下（28～30℃）密封发酵15天，过滤得红褐色溶液剂为发酵完成的发酵液。

发酵液中微生物的分离与计数方法同实施例1，采用稀释涂布法检测计数发现，发酵液中菌量为1.28×10⁸CFU/mL。

可以将抗香蕉枯萎病发酵液以每株香蕉10~15mL，稀释50~100倍液对香蕉进行喷施或灌根，可有效防控香蕉枯萎病。

并且，将过滤后的滤渣以及袋中剩余的有机质按每株0.2~0.5kg施入香蕉根围，可以为植株提供有机质营养，促进植株生长，增强植株抗性。

实施例4

本实施例提供的抗香蕉枯萎病发酵液，根据菜籽饼的C/N,以及红糖的含碳量，菜籽饼的含氮量，采用常规方法调节培养基质的C/N为22:1，并使饼肥与红糖的总重量与水的重量比为1：4，计算后得出，菜籽饼108g，红糖142g，水1000mL。

上述抗香蕉枯萎病发酵液的制备方法如下：

(1)将红糖溶于1000mL水中，将菜籽饼装入纱布袋后，将装有菜籽饼的纱布袋溶于红糖水中,或者直接将饼肥溶于红糖水中（视发酵的总液量多少而定，一般发酵溶液较少时可以直接将饼肥溶于红糖，若用于大面积蕉园的发酵液可以采用前一种方法）调节红糖水的pH值为7，置于阴凉透风处，密封保存，得含饼肥的红糖水溶液；

(2)将含饼肥的红糖水溶液每天早晚各搅拌5~10分钟，其余时间在常温下（28～30℃）密封发酵15天，过滤得红褐色溶液剂为发酵完成的发酵液。

发酵液中微生物的分离与计数方法同实施例1，采用稀释涂布法检测计数发现，发酵液中菌量为3.53×10⁷CFU/mL以上。

可以将抗香蕉枯萎病发酵液以每株香蕉10~15mL，稀释50~100倍液对香蕉进行喷施或灌根，可有效防控香蕉枯萎病。

并且，将过滤后的滤渣以及袋中剩余的有机质按每株0.2~0.5kg施入香蕉根围，可以为植株提供有机质营养，促进植株生长，增强植株抗性。

实施例5

本实施例提供的抗香蕉枯萎病发酵液，根据花生饼的C/N,以及红糖的含碳量，花生饼的含氮量，采用常规方法调节培养基质的C/N为22:1，并使饼肥与红糖的总重量与水的重量比为1：4，计算后得出：花生饼79g，红糖171g，水1000mL。

上述抗香蕉枯萎病发酵液的制备方法如下：

(1)将红糖溶于1000ml水中，将花生饼装入纱布袋后，将装有花生饼的纱布袋溶于红糖水中，调节红糖水的pH值为7.0，置于阴凉透风处，密封保存，得含饼肥的红糖水溶液；

(2)将含饼肥的红糖水溶液每天早晚各搅拌5-10分钟，其余时间在常温下（28～30℃）密封发酵15天，过滤得红褐色溶液剂为发酵完成的发酵液。

发酵液中微生物的分离与计数方法同实施例1，采用稀释涂布法检测计数发现，发酵液中菌量为3.66×10⁷CFU/mL以上。

可以将抗香蕉枯萎病发酵液以每株香蕉10~15mL，稀释50~100倍液对香蕉进行喷施或灌根，可有效防控香蕉枯萎病。

并且，将过滤后的滤渣以及袋中剩余的有机质按每株0.2~0.5kg施入香蕉根围，可以为植株提供有机质营养，促进植株生长，增强植株抗性。

实施例6

本实施例提供的抗香蕉枯萎病发酵液，根据豆粕的C/N,以及红糖的含碳量，花生饼的含氮量，采用常规方法调节培养基质的C/N为22:1，并使饼肥与红糖的总重量与水的重量比为1/4，计算后得出：豆粕70kg，红糖180kg，水1000L。

发酵使用大型发酵罐，将按比例配制好的含饼肥的红糖水溶液置于发酵罐中，调节pH为7.0，调节温度为28℃，搅拌速度为180rpm，通气量≥50％，发酵7天，即得抗香蕉枯萎病发酵液。

上述抗香蕉枯萎病发酵液的制备方法以及抗香蕉枯萎病发酵液的使用方法参考实施例1。

实施例7

发酵液CN比配方的筛选

本实例以花生饼为发酵有机质原料，根据花生饼的C/N,以及红糖的含碳量，花生饼的含氮量，采用常规方法调节培养基质的C/N分别为10、15、20、25、30，并使饼肥与红糖的总重量与水的重量比为1：4，按照实例1~6的发酵方法，分别得到了5种不同CN比的发酵液，采用平板稀释涂布法检测含菌量。

将上述5种不同的发酵液进行盆栽防效试验，

试验地点：中国热带农业科学院热带生物技术研究所温室大棚。

试验品种：巴西蕉，购自中国热带农业科学院种苗组培中心，苗高20cm左右，生长健壮、五叶一心，无病虫害。

病原菌：尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种Fusarium oxysopoyumf.sp.cubence race 4（FOC4)，由华南农业大学资源环境学院植物病理系姜子德教授提供。  将FOC4接种在PDA培养基上，25℃下恒温培养10d，把孢子洗入无菌水中配成浓度为5×10⁶个/mL孢子悬浮液，供接种用。

供试土壤：砖红壤，采自海口市龙华区。

发酵液：上述五种不同的发酵液。

试验处理：处理一C/N为10:1的发酵液＋病原菌处理；处理二C/N为15:1的发酵液＋病原菌处理；处理三C/N为20:1的发酵液＋病原菌处理；处理四C/N为25:1的发酵液＋病原菌处理；处理五C/N为30:1的发酵液＋病原菌处理；对照为只接种病原菌的处理，每个处理20株蕉苗。

试验方法：选取大小长势一致的香蕉幼苗，移栽至高10cm、直径12cm的塑料盆中。移栽5天后，按不同处理施入发酵液(稀释50倍)，每盆100mL，CK施入等量清水，每隔7天再重复施入发酵液，共施3次。第3次施入发酵液后7天，以伤根接种法接入FOC4。试验期间，各处理盆栽管理措施均一致。病原菌接种后每隔5 d观察蕉苗发病情况，待对照的发病率达到50％以上时调查各处理的病情指数，并计算相对防效。

试验结果如表1所示，C/N为15、20、25三个处理的发酵液处理其对枯萎病的相对防效均在42％以上，且含菌量的数量级为10⁷，而C/N为10，30时其相对防效分别为21.04％，16.90％，且含菌量的数量级在10⁵。由此得出，发酵液配方中C/N应控制在15~25之间。

表1  不同发酵液处理对香蕉苗期枯萎病的防治效果与发酵液的含菌量

实施例8

发酵液的盆栽试验：

试验地点：中国热带农业科学院热带生物技术研究所温室大棚。

试验品种：巴西蕉，购自中国热带农业科学院种苗组培中心，苗高20cm左右，生长健壮、五叶一心，无病虫害。

病原菌：尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种Fusarium oxysopoyumf.sp.cubence race 4（FOC4)，由华南农业大学资源环境学院植物病理系姜子德教授提供。将FOC4接种在PDA培养基上，25℃下恒温培养10d，把孢子洗入无菌水中配成浓度为5×10⁶个/mL孢子悬浮液，供接种用。

供试土壤：砖红壤，采自海口市龙华区。

发酵液：实施例1，2，3中的抗香蕉枯萎病发酵液

试验处理：（1）对照1：不施病原菌，不施发酵液；（2）对照2：施病原菌，不施发酵液；（3）发酵液处理：施病原菌，施发酵液。

试验方法：选取大小长势一致的香蕉幼苗，移栽至高10cm、直径12cm的塑料盆中。移栽5天后，按不同处理施入发酵液(稀释50倍)，每盆100mL，CK施入等量清水，每隔7天再重复施入发酵液，共施3次。第3次施入发酵液后7天，以伤根接种法接入FOC4。试验期间，各处理盆栽管理措施均一致。病原菌接种后每隔5d观察蕉苗发病情况，记录发病症状，并于病原菌接种后第0、1、3、5、7天取幼苗由上至下第2位叶进行相关生理指标的测定。

试验结果：经跟踪调查发病情况发现，在幼苗移栽后35天病原菌对照开始表现明显枯萎病发病症状，因此分别选取第35d、45d、55d、65d的香蕉幼苗测定其发病指数，并以第65d病情指数计算防病效果。移栽后第65天时，病原菌对照的病情指数达到52.54，实例1发酵液处理的病情指数为20.14，实例2发酵液处理的病情指数为21.20，实例3发酵液处理的病情指数为23.54，与对照相比差异均达到极显著水平，相对防效达分别为61.3%、59.65%、55.19％（见附图2）。检测生理指标发现，发酵液处理与病原菌处理相比，植株株高（地面至植株生长点的高度）、鲜重（电子天平称量）、根系活力（邹琦，植物生理学实验指导.北京：中国农业出版社）、叶绿素含量（高俊凤，孙群，梁宗锁等.植物生理学实验技术西安：世界图书出版社,2000）的变化参与下表2，可溶性糖（王学奎.植物生理生化实验原理和技术(第二版)[M].北京:高等教育出版社,2006.）、可溶性蛋白（王学奎.植物生理生化实验原理和技术(第二版)[M].北京:高等教育出版社,2006.）、游离脯氨酸（王学奎.植物生理生化实验原理和技术(第二版)[M].北京:高等教育出版社,2006.）等三种渗透调节物质的积累量的变化参阅下表3。SOD（王学奎.植物生理生化实验原理和技术(第二版)[M].北京:高等教育出版社,2006.）、POD（张志良，翟伟菁.植物生理学实验指导[M].北京：高等教育出版社，2003）、CAT（王学奎.植物生理生化实验原理和技术(第二版)[M].北京:高等教育出版社,2006）、PPO（陈志谊，许志刚，陆芳等.拮抗细菌B-916对水稻植株的抗性诱导作用[J].西南农业学报，2001，14:44-48）、PAL（陈志谊，许志刚，陆芳等.拮抗细菌B-916对水稻植株的抗性诱导作用[J].西南农业学报，2001，14:44-48）五种植物保护酶的活性变化参阅下表4。MDA含量（赵世杰,许长成,邹琦.植物组织水中丙二醛测定方法的改进[J].植物生理学通讯,1994,30(3):207-210）及相对电导率（李合生.（主编）.植物生理生化试验原理和技术[M].北京：高等教育出版社，2000）变化参阅下表4。结果表明，本发明中的抗香蕉枯萎病发酵液处理可以促进植株生长发育并显著提高植株抗性降低发病率。

表2  发酵液处理后植株生理指标的变化情况

注：表中数据为与对照相比各种发酵液处理后，植株株高、鲜重、根系活力、叶绿素含量上升的百分率。

表3  发酵液处理后植株三种渗透调节物质的积累量变化情况

注：表中数据为与对照相比各种发酵液处理后，三种渗透调节物质的积累量上升的百分率。

表4  发酵液处理后植株保护酶及MDA含量、电导率变化情况

注：表中数据为与对照相比各种发酵液处理后，五种植物保护酶活性上升的百分率，以及MDA含量和相对电导率下降的百分率。

实施例9

抗香蕉枯萎病发酵液的大田试验

试验地点：海南省临高县南宝镇上年香蕉枯萎病发病率大于30%的蕉园。

试验面积：60亩

试验品种：巴西蕉

发酵液：实施例1中的抗香蕉枯萎病发酵液

试验处理：试验共设置两个处理，分别为处理一，发酵液处理和处理二，对照（未施用发酵液）处理，其中处理一面积为55亩，处理二面积为5亩。

试验方法：处理一从苗期开始每隔15天采用滴灌管道将稀释50倍的实施例1抗香蕉枯萎病发酵液灌入根围，或者采用人工方法灌根，每次每株灌根量为1000mL。同时将发酵后有机质残渣埋入根围，每隔60天处理一次，每次每株施入量为0.3kg。对照为不进行任何处理。其他香蕉日常施肥等管理措施相同，但要增加有机肥的施用量，保证全生育期每株香蕉有机肥用量应不少于5kg。待收获期调查各处理的发病率。

试验结果：对照处理发病率达58%，发酵液处理发病率分别为8.5%，相对防效达到85.3%，防控效果显著见表5。（见附图3）

表5  大田试验中各处理的发病情况统计表

以上实施例对本发明不同的实施过程进行了详细的阐述，但是本发明的实施方式并不仅限于此。所述技术领域的普通技术人员依据本发明中公开的内容，均可实现本发明的目的。

Claims (6)

1.一种抗香蕉枯萎病发酵液，其特征是含以下培养基质：饼肥、红糖和水，其中饼肥和红糖的总重量与水的总重量比为1:4，培养基质的C/N比为15~25：1。

2.根据权利要求1所述的抗香蕉枯萎病的发酵液，其特征是：所述饼肥为豆粕、花生饼和菜籽饼中的一种或几种。

3.权利要求1或2所述的抗香蕉枯萎病发酵液的制备方法，其特征是含以下步骤：

(1)将红糖溶于水中得红糖水，将饼肥置于可透气性包装体内并将置于可透气性包装体内的饼肥置于红糖水中或直接将饼肥溶于红糖水中，调节pH值为6~8，置于阴凉通风处，密封保存，得含饼肥的红糖水溶液；

(2)将含饼肥的红糖水溶液在25~30℃条件下发酵7~15天，并不时搅拌保持通气至完成发酵过程，得红褐色溶液，过滤即得含多种微生物的抗香蕉枯萎病发酵液。

4.根据权利要求3所述的抗香蕉枯萎病发酵液的制备方法，其特征是：步骤(1)中所述饼肥为豆粕、花生饼和菜籽饼中的一种或几种。

5.根据权利要求3所述的抗香蕉枯萎病发酵液的制备方法，其特征是：步骤(1)中所述的可透气性包装体为纱布袋或编织袋。

6.权利要求1或2所述的抗香蕉枯萎病发酵液在制备具有抗香蕉枯萎病的药物中的应用。

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