CN102757908A - 链霉菌和吲哚倍半萜类化合物及其制备方法和在制备抗菌抗肿瘤药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种链霉菌和吲哚倍半萜类化合物及其制备方法和在制备抗菌抗肿瘤药物中的应用。本发明的链霉菌（Streptomyces sp.）SCSIO 02999能够产生具有抗菌活性的吲哚倍半萜类抗生素dixiamycin A，dixiamycin B，oxiamycin，chloroxiamycin和xiamycin A，这些吲哚倍半萜类抗生素dixiamycin A，dixiamycin B，oxiamycin，chloroxiamycin和xiamycin A具有一定的抑菌作用，能够用于制备抗菌药物，并且dixiamycinA对人乳腺癌细胞MCF7具有细胞毒活性，xiamycinA对人神经胶质瘤SF268具有细胞毒活性，因此能够用于制备抗肿瘤药物。因此本发明为制备具有抗菌和抗肿瘤活性的吲哚倍半萜类抗生素dixiamycinA，dixiamycin B，oxiamycin，chloroxiamycin和xiamycinA的生产制备提供了一种新的方法，为开发高效、低毒的抗菌抗肿瘤药物提供了理想的侯选化合物。
Description
技术领域：
本发明属于工业微生物领域，具体涉及一种能够产生多种吲哚倍半萜类抗生素的海洋来源的链霉菌（Streptomyces sp.）SCSIO 02999，以及该菌生产的吲哚倍半萜类化合物及其制备方法和在制备抗菌抗肿瘤药物中的应用。
背景技术：
近年来，发现新型海洋放线菌资源，并从中筛选新型的活性次生代谢产物成为国际上海洋微生物研究的重要方向。从海洋放线菌中寻找结构新颖、高效、低毒的代谢产物逐渐成为药物寻找的新源泉。
发明内容：
本发明的第一个目的是提供一株海洋来源的链霉菌（Streptomyces sp.）SCSIO 02999，该菌于2012年4月26日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），地址：中国武汉市武汉大学，其保藏编号为：CCTCC NO：M 2012145。
本发明的海洋来源的链霉菌（Streptomyces sp.）SCSIO 02999是从南海(E 109°53.171′,N16°3.576′)水深880的海底沉积物中分离获得的。常规方法提取其16S rRNA，其16S rRNA序列如SEQ ID NO.1所示，将16S rRNA进行BLAST比对，并进行系统发育树分析，系统发育树如图1所示。由此该菌株被鉴定为链霉菌（Streptomyces sp.）SCSIO 02999，该菌于2012年4月26日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），地址：中国武汉市武汉大学，其保藏编号为：CCTCC NO：M 2012145。
本发明发现海洋来源的链霉菌（Streptomyces sp.）SCSIO 02999能够产生多种吲哚倍半萜类抗生素，包括dixiamycin A(1)，dixiamycin B(2)，oxiamycin(3)，chloroxiamycin(4)和xiamycin A(5)。
因此本发明的第二个目的是提供吲哚倍半萜类抗生素，其结构式如式（Ⅰ）所示：
其中化合物1为dixiamycin A，化合物2为dixiamycin B，化合物3为oxiamycin，化合物4为chloroxiamycin。
本发明的第三个目的是提供吲哚倍半萜类抗生素dixiamycin A，dixiamycin B，oxiamycin，chloroxiamycin和xiamycinA的制备方法，其特征在于，所述的dixiamycinA，dixiamycin B，oxiamycin，chloroxiamycin和xiamycin A是从链霉菌（Streptomyces sp.）SCSIO 02999的发酵培养物中分离得到的。
本发明优选通过以下方法从链霉菌（Streptomyces sp.）SCSIO 02999的发酵培养物中制备分离得到dixiamycin A，dixiamycin B，oxiamycin，chloroxiamycin和xiamycin A，其具体步骤如下：
（c）制备链霉菌（Streptomyces sp.）SCSIO 02999的发酵培养物，将该发酵培养物的发酵液和菌丝体分离开，发酵液经丁酮萃取，丁酮层经蒸馏浓缩后得到浸膏A；菌丝体先用甲醇浸提，浸取液回收甲醇后剩余的水混合液再用丁酮萃取，丁酮层经蒸馏浓缩后得到浸膏B；
（d）将浸膏A和浸膏B合并的粗提物经正相硅胶柱层析，用氯仿/甲醇作为洗脱剂，从体积比100/0、100/1、100/2、100/4、100/8、100/16、100/32、100/50、100/100和0/100梯度洗脱，分别收集氯仿/甲醇体积比100/8、100/16、100/32、100/50洗脱的馏分，记为馏分Fr.5、Fr.6、Fr.7、Fr.8；馏分Fr.5经凝胶柱层析，用体积比1∶1的氯仿/甲醇洗脱，收集在TLC上，用体积比10∶1的氯仿/甲醇作为展开剂，Rf值为0.3-0.4和0.6-0.7的馏分Fr.5-1和Fr.5-2，Fr.5-1经纯化得到化合物5，Fr.5-2经纯化得到化合物4；馏分Fr.6经凝胶柱层析，用体积比1∶1的氯仿/甲醇洗脱，收集在TLC上，用体积比15∶1的氯仿/甲醇作为展开剂，Rf值为0.35和0.75的馏分Fr.6-1和Fr.6-2，馏分Fr.6-1经纯化得到化合物1，Fr.6-2经纯化得到化合物3；将馏分Fr.7和Fr.8合并过凝胶柱层析，用体积比1∶1的氯仿/甲醇洗脱，收集在TLC上，用体积比10∶1的氯仿/甲醇作为展开剂，Rf值为0.6的馏分Fr.7-1，馏分Fr.7-1用HPLC跟踪，用中压液相分离得粗品，粗品再经纯化得到化合物2。
所述的（a）步骤的制备链霉菌SCSIO 02999的发酵培养物优选通过以下方法制备：将活化的链霉菌SCSIO 02999接入种子培养基中，28°C，200rpm，培养48h制得种子液，将种子液以10%的接种量接入到发酵培养基中，28°C，200rpm，振荡培养7d，而制得发酵培养物，所述的种子培养基和发酵培养基的配方为，按质量分数100%计，包括可溶性淀粉2%，葡萄糖1%，细菌学蛋白胨0.5%，酵母提取物0.5%，CaCO30.2%，海盐3%，余量为水，pH7.0。
本发明的第四个目的是提供链霉菌（Streptomyces sp.）SCSIO 02999在制备dixiamycin A、dixiamycin B、oxiamycin、chloroxiamycin或xiamycin A中的应用。
本发明通过实验发现dixiamycin A，dixiamycin B，oxiamycin，chloroxiamycin和xiamycinA对大肠杆菌（Escherichia coli ATCC 25922），金黄色葡萄球菌（S.aureus ATCC 29213），枯草芽孢杆菌（B.Subtilis SCSIO BT01）和苏云金芽孢杆菌（B.thuringensis SCSIO BT01）具有一定的抑制作用，特别是dixiamycin A和dixiamycin B对这四株菌的MIC达到了8、8、16、4μg/mL和8、16、16、8μg/mL；对人乳腺癌细胞MCF7、人神经胶质瘤SF268、人非小细胞肺癌细胞NCI-H46和人肝癌肿瘤细胞HepG2具有弱的或没有细胞毒活性。
因此本发明的第五个目的是提供dixiamycin A，dixiamycin B，oxiamycin，chloroxiamycin或xiamycin A在制备抗菌药物中的应用。
本发明的第六个目的是提供dixiamycin A或xiamycin A在制备抗肿瘤药物中的应用。
当为dixiamycinA时，所述的抗肿瘤药物优选为抗人乳腺癌药物。
当为xiamycinA时，所述的抗肿瘤药物优选为抗人神经胶质瘤药物。
本发明的链霉菌（Streptomyces sp.）SCSIO 02999能够产生具有抗菌活性的吲哚倍半萜类抗生素dixiamycin A，dixiamycin B，oxiamycin，chloroxiamycin和xiamycin A，这些吲哚倍半萜类抗生素dixiamycin A，dixiamycin B，oxiamycin，chloroxiamycin和xiamycin A具有一定的抑菌作用，能够用于制备抗菌药物，并且dixiamycin A对人乳腺癌细胞MCF7具有细胞毒活性，xiamycinA对人神经胶质瘤SF268具有细胞毒活性，因此能够用于制备抗肿瘤药物。因此本发明为制备具有抗菌和抗肿瘤活性的吲哚倍半萜类抗生素dixiamycinA，dixiamycin B，oxiamycin，chloroxiamycin和xiamycinA的生产制备提供了一种新的方法，为开发高效、低毒的抗菌抗肿瘤药物提供了理想的侯选化合物。
本发明的链霉菌（Streptomyces sp.）SCSIO 02999于2012年4月26日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），地址：中国武汉市武汉大学，其保藏编号为：CCTCC NO：M 2012145。
附图说明：
图1是链霉菌（Streptomyces sp.）SCSIO 02999基于16S rDNA的系统发育树；
图2是化合物5氧化生产化合物1的反应结果，A.XiamycinA(5)标准品；B.XiamycinA(5)氧化反应结果；C.dixiamycin A(1)和dixiamycin B(2)标准品；
图3是确定N-N键（ωC2,N1,N1′,C2′扭角）旋转能垒的初步扭角扫描图；
图4是轴手性中心翻转的两个最低能量的过渡态，过渡态的相对能量分别为199和201kJ/mol；
图5是化合物1和2的绝对构型的确定，（A）是化合物1在乙腈中的实测ECD谱与用PBE0/6-311G(d,p)的计算出的曲线之间的相互比较（左边图），以及化合物1在乙腈中的实测ECD谱与用PBE0/TZVP计算出的(aR,12S,15S,16S,17R,12′S,15′S,16′S,17′R)这个构象的计算曲线之间的相互比较（右边图）；（B）是化合物2在乙腈中的实测ECD谱与用PBE0/6-311G(d,p)的计算出的曲线之间的相互比较（左边图），以及化合物2在乙腈中的实测ECD谱与用PBE0/TZVP计算出的(aS,12S,15S,16S,17R,12′S,15′S,16′S,17′R)这个构象的计算曲线之间的相互比较（右边图）；（C）是采用-93.1°ωC2,N1,N1′,C2′扭角，利用B3LYP/TZVP（乙腈的连续介质模型）计算出的的化合物1的(aR,12S,15S,16S,17R,12'S,15′S,16′S,17′R)绝对构型结构图；（D）是采用+88.4°ωC2,N1,N1′,C2′扭角，利用B3LYP/TZVP（乙腈的极化连续介质模型）计算出的化合物2的(aS,12S,15S,16S,17R,12′S,15′S,16′S,17′R)绝对构型结构图；
图6是oxiamycin Mosher’s反应结果；
图7：（A）是在乙腈中的极化连续介质模型并利用B3LYP/TZVP计算出的(13R,16R,17R,18S)-oxiamycin的构象及其丰度，（B）是以乙腈为溶剂的化合物3的实测ECD谱及其PBE0/TZVP的真空计算ECD谱的比较；（C）是用BH&HLYP/TZVP计算出的(13R,16R,17R,18S)-化合物3在乙腈中的构象的ECD谱和实测ECD谱的比较；
图8是化合物1-4的部分1H-1HCOSY和HMBC相关；
图9是化合物4和5的CD谱比较。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1
一、链霉菌（Streptomyces sp.）SCSIO 02999的分离和鉴定
本发明的海洋来源的链霉菌（Streptomyces sp.）SCSIO 02999是从南海(E 109°53.171′,N16°3.576′)水深880的海底沉积物中分离获得的。常规方法提取其16S rRNA，其16S rRNA序列如SEQ ID NO.1所示，将16S rRNA进行BLAST比对，并进行系统发育树分析，系统发育树如图1所示。由此该菌株被鉴定为链霉菌（Streptomyces sp.）SCSIO 02999，该菌于2012年4月26日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），地址：中国武汉市武汉大学，其保藏编号为：CCTCC NO：M 2012145。
二、活性代谢产物的分离和制备
1、培养基：按总质量分数100%计，包括可溶性淀粉2%，葡萄糖1%，细菌学蛋白胨0.5%，酵母提取物0.5%，CaCO30.2%，海盐3%，余量为水，pH 7.0。按上述组份和含量混合均匀，然后121℃，灭菌30min。
2、发酵
2.1、种子培养：将活化的链霉菌（Streptomyces sp.）SCSIO 02999接入每瓶含有50mL培养基的250mL的锥形培养瓶中，28°C，200rpm，培养48h制得种子液。
2.2、发酵培养：将种子液以10%的接种量（体积百分比）接入到20L培养基中，28°C，200rpm，振荡培养7d，而制得发酵培养物。
3、萃取：发酵培养物经离心（4000r·min-1，10min）将发酵液和菌丝体分离，发酵液用丁酮萃取3次，合并丁酮萃取液，减压蒸馏浓缩后得到浸膏A（7.89g）；菌丝体先用甲醇在室温下浸提3次，合并提取液，减压回收甲醇后剩余水混合液用丁酮萃取，丁酮萃取液减压蒸馏浓缩后得到浸膏B（4.00g），将浸膏A和浸膏B合并，得到粗提物（11.89g）。
4、活性化合物的提取分离和鉴定
将浸膏A和浸膏B合并的粗提物经正相硅胶柱（柱子50x 3cm，颗粒度，100-200目）分离，用氯仿/甲醇作为洗脱剂，从体积比100/0、100/1、100/2、100/4、100/8、100/16、100/32、100/50、100/100和0/100梯度洗脱，顺序得到10个馏分(Fr.1到Fr.10)。第五个馏分Fr.5（氯仿/甲醇体积比100/8洗脱的馏分）过凝胶Sephadex LH-20柱（120x 3cm,40-70μm），用氯仿/甲醇(体积比1∶1)洗脱，根据TLC检测，用氯仿/甲醇(体积比10∶1)做展开剂展开，将斑点Rf值为0.3-0.4和0.6-0.7的馏分分别合并得2个馏分(Fr.5-1和Fr.5-2)，馏分Fr.5-1和Fr.5-2分别经中压液相纯化(YMC*GEL ODS-A,12nm S-50μm)，用甲醇/水（甲醇体积分数：0~60%，1.5h；60%~60%，0.5h；60%~100%，0.5h，流速为20mL/min）梯度洗脱得到化合物5（保留时间为1.8h）和化合物4（保留时间为2.1h）。第六个馏分Fr.6（氯仿/甲醇体积比100/16洗脱的馏分）过凝胶Sephadex LH-20柱（120x 3cm,4070μm），用氯仿/甲醇(体积比1∶1)洗脱，根据TLC检测，用氯仿/甲醇(体积比15∶1)做展开剂展开，将斑点Rf值为0.35和0.75的馏分分别合并得馏分Fr.6-1和Fr.6-2)，馏分Fr.6-1经中压液相纯化(YMC*GEL ODS-A,12nmS-50μm)，用甲醇/水（甲醇体积分数：0~55%，1.5h；55%~55%，0.5h；55%~100%，0.5h，流速为20mL/min）梯度洗脱得到化合物1（保留时间为1.5h），馏分Fr.6-2经半制备高效液相纯化(YMC*GEL ODS-A,120A S-5μm,250×10mm)，乙腈/水（乙腈体积分数55%，流速为20mL/min）等度洗脱得到化合物3（保留时间为1.6h）。合并Fr.7（氯仿/甲醇体积比100/32洗脱的馏分）和Fr.8（氯仿/甲醇体积比100/50洗脱的馏分）馏分过凝胶Sephadex LH-20柱（120x 3cm,40–70μm）用氯仿/甲醇(体积分数1∶1)洗脱，根据TLC检测，用氯仿/甲醇(体积比10∶1)做展开剂展开，将斑点Rf值为0.6的馏分合并得Fr.7-1，馏分Fr.7-1经中压液相分离(YMC*GEL ODS-A,12nm S-50μm)，用甲醇/水梯度洗脱（甲醇体积分数：0~80%，1.5h；80%~80%，0.5h；80%~100%，0.5h，流速为20mL/min），根据HPLC检测（程序为：A相，10%乙腈/水；B相，90%乙腈/水；5%B到100%B，0-20min；100%B，20-21min；100%B到5%B，21-22min；5%B，22-30min；流速为1.0ml min-1）将含有目标化合物的馏分（保留时间22min）合并得到馏分Fr.7-2-1，馏分Fr.7-2-1经半制备高效液相纯化(YMC*GELODS-A,120A S-5μm,250×10mm)，乙腈/水（乙腈体积分数为55%，流速为2.5mL/min）等梯度洗脱得化合物2（保留时间为1.4h）。
4.1结构分析
化合物1和化合物2都为灰白色粉末，化合物1的UV/vis(in CH3OH)λmax nm(logε):217(5.41),239(5.47)261(5.16),296(5.13)；旋光值为
化合物2的UV/vis(in CH3OH)λmax nm(logε):233(5.33),261(5.16),295(4.92);旋光值为
通过高分辨质谱HRFABMS数据分析得出化合物1和2的分子式为C46H48N2O6（前者m/z为723.3234后者m/z为723.3226,[M-H]-，计算值为723.3434）。1HNMR(500MHz,CDCl3)和13C NMR(125MHz,CDCl3)见表1。通过核磁数据的分析，表明化合物1和2具有同样的平面结构，两者的核磁数据和化合物5的基本相同，但用高效液相色谱分析时，发现这三个化合物物具有明显不同的保留时间，表明这三个化合物的结构是不同的（图2）。把样品溶解在DMSO-d6中做1H NMR，发现化合物5的谱图中有NH的质子信号，但是化合物1和2的谱图中却找不到类似的信号。综上所述，化合物1和2可能是化合物5通过N-N偶联的二聚体。文献中报道吲哚可以被KMNO4的氧化成N-N偶联的二聚体，我们也做了类似的实验，并得到化合物5氧化的产物是化合物1，但是没有化合物2的产生（图2）。因此我们认为化合物1和2应该是通过N-N偶联的阻转构型异构体。
为了确定N-N手性轴翻转的过渡态，我们采用起始旋转角度扫描的方法从化合物1和2的全局最小态(ωC2,N1,N1’，C2’≈-90°or+90°)分别向两个方向扫描，采用15°的步长。通过扫描找到了对应这两个最低能态的几何值，并将该值作为过渡态（TS）计算的开始值。发现旋转能垒分别是199kJ mol-1和201kJ mol-1，见于图3和图4。
为了确定化合物1和2的轴手性，我们经试验测定了这一对位阻非对映异构体的ECD谱，结果表明这两个化合物的ECD谱和它们的单体很相似，而且表明它们并不是对映异构体。这两个化合物的ECD谱相似是基于对称的咔唑环结构，并且表明在这两个化合物中咔唑环结构的趋向是一致的。这两个化合物ECD谱主要的区别在于：化合物2在297nm处有强烈的阳性科顿效应，显示一个肩峰，但是在化合物1的谱中该峰消失，因此通过ECD计算来对它们进行手性区分。
我们采用两种计算方法-真空B3LYP/6-31G(d)和乙腈中的B3LYP/TZVP极化连续介质模型-进一步优化了这两个化合物的起始MMFF构象，获得了每种位阻异构体的单一构象。手性中心的绝对构型被设置为和单体化合物5一致，优化的(aR)和(aS)位阻非对映异构体的二面角分别被分别确定为-93.7°/-93.2°和+89.3°/+88.4°(真空状态/乙腈溶液)。然后，通过6-311G(d,p)的方法计算了化合物1和2的TDDFT ECD谱。计算结果和实际实验结果相一致，都显示化合物1具有(aR)轴手性，而化合物2具有(aS)轴手性。化合物2的ECD谱计算结果也表明其在297nm处有阳性科顿效应。最终化合物1的绝对构型被确定为(+)-(aR,12S,15S,16S,17R,12'S,15′S,16′S,17′R)，化合物2的绝对构型被确定为(+)-(aS,12S,15S,16S,17R,12′S,15′S,16′S,17′R)（图5），具体结构式如式（Ⅱ）所示。由此确定化合物1为dixiamycin A，化合物2为dixiamycin B。
化合物3：灰白色粉末，UV/vis(CH3OH)λmax nm(logε):236(7.37),261(7.42),299(7.47);，
高分辨质谱HRESIMS数据表明该化合物的分子式为C23H24ClNO3(实测值m/z[M-H]-378.1705，计算值378.1704，不饱和度为12。1H NMR(500MHz,CDCl3)和13C NMR(125MHz,CDCl3)见表1。化合物3的1H和13C NMR数据表明该化合物具有与5相似的结构。其区别主要在于，化合物5中C-12的化学位移为δC 36.4，在化合物3中(C-13)变为δC 81.3，表明C-13与氧原子相连，另外C-11的化学位移值在化合物5中为δC 139.9，在化合物3中向低场位移9.2ppm变为δC149.1，表明在化合物3中C-11与C-13通过一个氧原子相连。综上，化合物3的平面结构如式（Ⅱ）所示。该化合物的相对构型通过NOESY谱中H-16与H-18和H-14b与H-23/H-24的相关的确定，绝对构型通过Mosher’s反应确定为(13S,16S,17S,18R)(图6)。另外还用TDDDFT ECD计算的方法确定了该化合物的绝对构型(图7)。由此确定化合物3为oxiamycin，其结构式如式（Ⅱ）所示。
化合物4：灰白色粉末，UV/vis(in CH3OH)λmax nm(log ε):217(4.63),233(4.68),296(4.34);CD(CH3OH,c=1.97×10–2)，高分辨质谱HRESIMS数据表明该化合物的分子式为C23H24ClNO3实测值（m/z 398.1522[M+H]+，420.1344[M+Na]+，计算值分别为398.1523，420.1342)。1H NMR(500MHz,CDCl3)和13C NMR(125MHz,CDCl3)，见表1。从分子式可以看出化合物4应该是化合物5的氯化物。通过比较两者的核磁数据发现化合物5中一个单峰的芳香质子(δH 7.07,H-21)在化合物4中消失了，同时化合物5中一个sp2杂化的次甲基碳(δC 109.1,C-21)在化合物4中变成一个sp2杂化的季碳(δC 116.3,C-21)，另外在HMBC谱中可以看到H-19与C-21,C-20和C-11的相关，这些表明氯原子连接在C-21上(图8)。通过CD谱的比较表明化合物4和5具有同样的绝对构型(图9)。由此确定化合物4为Choloroxiamycin，其结构式如式（Ⅱ）所示。
化合物5：灰白色粉末，UV/vis(in CH3OH)λmax nm(log ε):216(4.85),237(4.96),261(4.60),300(4.34);
质谱数据显示其分子量为363，其1H NMR(500MHz,CD3OD)和13C NMR(125MHz,CD3OD),（见表1）的数据和文献中报道的基本一致（L.Ding,J.Münch,H.Goerls,A.Maier,H.H.Fiebig,W.H.Lin and C.Hertweck,Bioorganic&medicinalchemistry letters,2010,20,6685-6687.），因此化合物5被鉴定为XiamycinA。
表1：化合物1~5的核磁数据归属
实施例2：dixiamycin A，dixiamycin B，oxiamycin，chloroxiamycin和xiamycin A的抗菌活性和细胞毒活性测定
测定了dixiamycinA，dixiamycin B，oxiamycin，chloroxiamycin和xiamycinA对大肠杆菌（Escherichia coli ATCC 25922），金黄色葡萄球菌（S.aureus ATCC 29213），枯草芽孢杆菌（B.Subtilis SCSIO BT01）和苏云金芽孢杆菌（B.thuringensis SCSIO BT01）的抑制活性(MIC)，实验方法参考文献（Y.Xiao,S.Li,S.Niu,L.Ma,G.Zhang,H.Zhang,J.Ju and C.Zhang,Journalof the American Chemical Society，2011,133,1092-1105.），结果如表2所示：
表2：化合物1~5的抗菌活性
由表2表明，dixiamycin A，dixiamycin B，oxiamycin，chloroxiamycin和xiamycin A对大肠杆菌（Escherichia coli ATCC 25922），金黄色葡萄球菌（S.aureusATCC 29213），枯草芽孢杆菌（B.Subtilis SCSIO BT01）和苏云金芽孢杆菌（B.thuringensis SCSIO BT01）具有一定的抑制作用，特别是dixiamycinA和dixiamycin B对这四株菌的MIC达到了8、8、16、4μg/mL和8、16、16、8μg/mL。因此dixiamycin A，dixiamycin B，oxiamycin和chloroxiamycin能够用于制备抗菌药物。
同时还测定了dixiamycin A，dixiamycin B，oxiamycin，chloroxiamycin和xiamycin A对人乳腺癌细胞MCF7、人神经胶质瘤SF268、人非小细胞肺癌细胞NCI-H46和人肝癌肿瘤细胞HepG2的抑制活性(IC50),实验方法参考文献（P.Skehan,R.Storeng,D.Scudiero,A.Monks,J.McMahon,D.Vistica,J.T.Warren,H.Bokesch,S.Kenney and M.R.Boyd,Journal of the NationalCancer Institute,1990,82,1107-1112.），结果如表3所示：
表3：化合物1~5的细胞毒活性
由表3表明，除了dixiamycin A对人乳腺癌细胞MCF7，xiamycin A对人神经胶质瘤SF268具有中等细胞毒活性外，其他都无细胞毒活性。
Claims (10)
1.链霉菌（Streptomyces sp.）SCSIO 02999，保藏编号为：CCTCC NO：M 2012145。
2.吲哚倍半萜类抗生素，其结构式如式（Ⅰ）所示：
其中化合物1为dixiamycin A，化合物2为dixiamycin B，化合物3为oxiamycin，化合物4为chloroxiamycin。
3.一种权利要求2所述的吲哚倍半萜类抗生素dixiamycin A，dixiamycin B，oxiamycin，chloroxiamycin和xiamycin A的制备方法，其特征在于，所述的dixiamycin A，dixiamycinB，oxiamycin，chloroxiamycin和xiamycinA是从权利要求1所述的链霉菌（Streptomycessp.）SCSIO 02999的发酵培养物中分离得到的。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，其具体步骤如下：
（a）制备链霉菌（Streptomyces sp.）SCSIO 02999的发酵培养物，将该发酵培养物的发酵液和菌丝体分离开，发酵液经丁酮萃取，丁酮层经蒸馏浓缩后得到浸膏A；菌丝体先用甲醇浸提，浸取液回收甲醇后剩余的水混合液再用丁酮萃取，丁酮层经蒸馏浓缩后得到浸膏B；
（b）将浸膏A和浸膏B合并的粗提物经正相硅胶柱层析，用氯仿/甲醇作为洗脱剂，从体积比100/0、100/1、100/2、100/4、100/8、100/16、100/32、100/50、100/100和0/100梯度洗脱，分别收集氯仿/甲醇体积比100/8、100/16、100/32、100/50洗脱的馏分，记为馏分Fr.5、Fr.6、Fr.7、Fr.8；馏分Fr.5经凝胶柱层析，用体积比1∶1的氯仿/甲醇洗脱，收集在TLC上，用体积比10∶1的氯仿/甲醇作为展开剂，Rf值为0.3-0.4和0.6-0.7的馏分Fr.5-1和Fr.5-2，Fr.5-1经纯化得到化合物5，Fr.5-2经纯化得到化合物4；馏分Fr.6经凝胶柱层析，用体积比1∶1的氯仿/甲醇洗脱，收集在TLC上，用体积比15∶1的氯仿/甲醇作为展开剂，Rf值为0.35和0.75的馏分Fr.6-1和Fr.6-2，馏分Fr.6-1经纯化得到化合物1，Fr.6-2经纯化得到化合物3；将馏分Fr.7和Fr.8合并过凝胶柱层析，用体积比1∶1的氯仿/甲醇洗脱，收集在TLC上，用体积比10∶1的氯仿/甲醇作为展开剂，Rf值为0.6的馏分Fr.7-1，馏分Fr.7-1用HPLC跟踪，用中压液相分离得粗品，粗品再经纯化得到化合物2。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的（a）步骤的制备链霉菌SCSIO 02999的发酵培养物是通过以下方法制备：将活化的链霉菌SCSIO 02999接入种子培养基中，28°C，200rpm，培养48h制得种子液，将种子液以10%的接种量接入到发酵培养基中，28°C，200rpm，振荡培养7d，而制得发酵培养物，所述的种子培养基和发酵培养基的配方为，按质量分数100%计，包括可溶性淀粉2%，葡萄糖1%，细菌学蛋白胨0.5%，酵母提取物0.5%，CaCO30.2%，海盐3%，余量为水，pH 7.0。
6.权利要求1所述的链霉菌（Streptomyces sp.）SCSIO 02999在制备权利要求2所述的dixiamycin A、dixiamycin B、oxiamycin、chloroxiamycin或xiamycin A中的应用。
7.权利要求2所述的dixiamycin A，dixiamycin B，oxiamycin，chloroxiamycin或xiamycin A在制备抗菌药物中的应用。
8.权利要求2所述的dixiamycinA或xiamycinA在制备抗肿瘤药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，当为dixiamycin A时，所述的抗肿瘤药物为抗人乳腺癌药物。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，当为xiamycin A时，所述的抗肿瘤药物为抗人神经胶质瘤药物。
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