CN102755380A - 一种治疗脑损伤及神经退行性病变的组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于治疗脑损伤及神经退行性病变恢复期及后遗症的药物组合物，它是通过将丹参总酚酸与黄芩苷提取物配伍组合应用，具有明显改善局部微环境，改善肢体活动和认知功能的作用。药理实验证实，本发明的组合物能够调控血管生成相关因子的表达，改善局部微环境。促进神经干细胞增殖，并可诱导其向神经元方向定向分化，促进功能性神经再生。本发明的中药有效成分组合物可以被制备成任何一种治疗脑损伤及神经退行性病变的药物制剂。
Description
技术领域
本发明属于中药制药技术领域，涉及一种改善微环境促进神经再生，治疗脑损伤及神经退行性病变的药物组合物及其应用。更具体的说是通过将丹参总酚酸与黄芩苷提取物配伍组合，制备具有改善局部微环境，促进神经再生，改善肢体功能，改善认知功能的药物组合物。
背景技术
脑损伤及神经退行性疾病主要包括脑出/缺血损伤、中风、缺血性痴呆、阿尔茨海默病、帕金森病以及脑外伤等，具有致残率高、死亡率高、复发率高以及并发症多的特点。脑损伤后早期一般都伴随脑内神经元缺失、意识、语言、肢体功能以及学习记忆能力下降等症状。后遗症期主要表现为病情平稳，失去的功能不再有明显好转。中药及其有效成分常用于脑损伤及神经退行性疾病的治疗。中药及其有效成分不仅可以在脑损伤早期改善血液循环，保护神经细胞及提高神经元的抗损伤能力，对于脑损伤恢复期及后遗症的治疗也具有明确的疗效。
近年研究表明，成年动物或人中枢神经系统多区域存在着具有多向分化潜能的神经干细胞，至少在几个确定的区域内神经再生贯穿整个生命过程。神经干细胞具有自我更新，多潜能分化等特点，可以补充替代损伤的神经细胞，为神经损伤修复提供了新策略。然而在正常情况下脑内神经干细胞的数目太少，中枢神经系统内神经再生的发生频率很低。虽然几种伤害性刺激，比如缺血、外伤、神经变性等能够引起内源性神经干细胞的增殖，但新生的神经干细胞数目较少，神经分化比例也较低，并不足以产生自我修复效果。这就使人们不得不寄希望于通过外源性干预促进脑损伤后神经再生。基于神经干细胞的神经再生过程主要涉及以下几个步骤：（1）通过不断自我更新和增殖获得足够数目的神经干细胞以补充缺失的组织细胞；（2）通过使神经干细胞向特定类型的神经细胞诱导分化以补充脱失的神经细胞；（3）通过促进新生的神经细胞存活并建立功能性联系以达到促进神经功能重建的目的。
祖国医学在治疗脑损伤及神经退行性疾病方面具有丰富的理论知识和临床经验，结合代医学对神经损伤修复关键环节的认识，可以从中药及其有效成分中快速发现治疗神经损伤疾病的药物。研究表明，人参皂苷、阿魏酸、丹酚酸B等中药有效成分不仅可以改善局部微环境，还可以直接作用于神经干细胞促进其增殖。清热类中药有效成分黄芩苷可以特异性诱导神经干细胞向神经元分化。然而神经干细胞的增殖与分化是相互矛盾的，药物单纯的促进神经干细胞增殖不仅不能有效的得到一定数目的神经元，还增加了罹患肿瘤的风险；而一味的促进神经干细胞分化，也就抑制了神经干细胞的增殖，同样得不到足够数目的神经元以替代损伤的神经细胞。本发明的丹参总酚酸与黄芩苷提取物配伍组合物不仅可以改善微环境，还在维持足够数目神经干细胞的前提下，提高神经元分化的比例，促进神经再生达到治疗脑损伤及神经退行性疾病的目的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种药物组合物，特别涉及丹参总酚酸与黄芩苷提取物配伍，可用于改善脑内微环境，促进神经再生，改善肢体肢体功能，改善认知功能。
本发明的中药有效成分组合物可以被制备成任何一种治疗脑损伤及神经退行性病变的制剂。
为实现上述目的，本发明通过以下技术方案来实现：
一种用于治疗脑损伤及神经退行性病变后神经损伤修复及再生的药物组合物，其特征在于：它是由下述重量份数的组份组成：
丹参总酚酸1-100份，黄芩苷提取物0.5-200份，其中丹参总酚酸含有大于70%重量的丹酚酸B，黄芩苷提取物含有大于90%重量的黄芩苷。
本发明优选的组合物丹参总酚酸：黄芩苷提取物的重量份数比为1-50：50-1。
本发明优选的组合物丹参总酚酸：黄芩苷提取物的重量份数比为10-30：5-30。
本发明优选的组合物丹参总酚酸：黄芩苷提取物的重量份数比为30:10
本发明优选的组合物的重量份数比为：丹参总酚酸10份，黄芩苷提取物20份。
进一步优选为：丹参总酚酸1-50份，黄芩苷提取物1-50份。
进一步优选为：丹参总酚酸5-40份，黄芩苷提取物2-35份。
进一步优选为：丹参总酚酸10-30份，黄芩苷提取物5-30份。
进一步优选为：丹参总酚酸15-25份，黄芩苷提取物15-25份。
进一步优选为：丹参总酚酸1份，黄芩苷提取物4份
进一步优选为：丹参总酚酸20份，黄芩苷提取物20份。
本发明所述的药物组合物，其它是注射液、凝胶剂、滴鼻剂、颗粒剂、片剂、胶囊、口服液或滴丸。
本发明药物组分的用量也是经过发明人进行大量摸索总结得出的，各组分用量为在下述重量份范围相对现有技术均产生了更优的技术效果：
本发明所述制备的药物，是用上述丹参总酚酸和黄芩苷提取物的配伍作为药物活性成分制备成的药物组合物。
本发明的药物组合物，根据需要可以含有药物可接受的载体，其中丹参总酚酸和黄芩苷提取物的配伍作为药物活性成分，其在组合物中所占的重量百分比可以是0.1%-99.9%，其余为药物可接受的载体。
对于以片剂或胶囊的形式口服，可以将本发明的组合物与无毒性的、药学可接受的赋形剂例如粘合剂(例如，预胶化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如，乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山梨糖醇和其他还原糖和非还原糖、微晶纤维素、硫酸钙或磷酸氢钙)；润滑剂(例如，硬脂酸镁、滑石或硅石、硬脂酸、硬脂酰延胡索酸钠、甘油二十二烷酸酯、硬脂酸钙等)；崩解剂(例如，土豆淀粉或淀粉羟乙酸钠)；或润湿剂(例如，月桂硫酸钠)、着色和调味剂、明胶、增甜剂、天然和合成胶(例如阿拉伯胶、西黄蓍胶或海藻酸盐)、缓冲盐、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。
对于液体剂型的口服施用，可以将本发明的组合物与无毒性的、药学可接受的惰性载体(例如乙醇、甘油、水)、悬浮剂(例如，山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用脂)、乳化剂(例如，卵磷脂或阿拉伯胶)、非水性载体(例如，杏仁油、油性酯、乙醇或分馏植物油)、防腐剂(例如，尼泊金甲酯或丙酯，或山梨酸)等混合。也可以加入稳定剂例如抗氧化剂(BHA、BHT、没食子酸丙酯、抗坏血酸钠、柠檬酸)，以稳定该剂型。
本发明的药物组合物可以是任何一种药剂学常规剂型，如：注射剂、凝胶剂、颗粒剂、片剂、喷雾剂、胶囊、口服液、滴丸等。
本发明的药物组合物具有以下医药用途：制备治疗缺血性脑损伤、中风、神经损伤、血管性痴呆、阿尔茨海默病、帕金森病、抑郁、癫痫以及外伤导致的神经损伤等药物；制备血管新生诱导剂包括心、脑血管新生的诱导剂。
本发明所述丹参总酚酸也可以按如下的方法制备：
取丹参饮片，加水浸泡提取，收集提取液并酸化，静置，过滤，收集滤液，经大孔树脂纯化，乙醇梯度洗脱，并将洗脱液浓缩干燥，制得丹参总酚酸，其中丹酚酸B占丹参总酚酸总重量的重量百分比大于70%。
本发明所述黄芩苷提取物也可以按如下的方法制备：
取黄芩饮片，加水煎煮，过滤后合并滤液，向上清液中加入盐酸，调整PH值为1.0左右，静置，沉淀物烘干，制得黄芩苷提取物，其中黄芩苷占黄芩苷提取物总重量的重量百分比大于90%。
本发明进一步公开了丹参总酚酸与黄芩苷提取物配伍的组合物在治疗缺血性脑损伤、中风恢复期及后遗症以及血管性痴呆药物中的应用。包括组合物在治疗脑神经损伤药物中的应用；组合物在治疗阿尔茨海默病、帕金森病、抑郁症药物中的应用；组合物在治疗血管新生诱导剂药物中的应用；组合物在治疗脑血管新生诱导剂药物中的应用。 其中优选的组合物丹参总酚酸：黄芩苷提取物的重量份数比为1-50：50-1；优选的组合物丹参总酚酸：黄芩苷提取物的重量份数比为10-30：5-30；优选的组合物丹参总酚酸：黄芩苷提取物的重量份数比为30:10；优选的组合物的重量份数比为：丹参总酚酸10份，黄芩苷提取物20份。
所述的各种治疗用途是通过以下实验证明的：
（1）本发明丹参总酚酸与黄芩苷提取物组合物对体外神经再生的影响
体外培养神经干细胞，加入药物进行干预，实验设置空白对照组、丹参总酚酸组，黄芩苷提取物组，丹参总酚酸：黄芩苷提取物（1:60、1:50、1:40、5:35、10:30、20:20、30:10、35:5、40:1、50:1、60:1）配伍组，药物作用72小时，撤去药物后使其贴壁并诱导神经干细胞分化，分化3天后，固定细胞，进行MAP-2（神经元标志物）免疫荧光化学染色，标记神经干细胞分化后的神经元，荧光显微镜下计数各组神经元绝对数目，考察丹参总酚酸与黄芩苷提取物配伍对体外神经再生的影响，并明确其协同作用。
结果显示：丹参总酚酸和黄芩苷提取物在体外以1:50-50:1范围内各组配伍神经元绝对数目均显著高于单独应用黄芩苷提取物和丹参总酚酸组，结果提示丹参总酚酸与黄芩苷提取物在1:50-50:1范围内配伍具有协同促进神经再生的作用。当丹参总酚酸与黄芩苷提取物以1：60或60:1比例配伍时，与对照组比较神经元数目显著减少（结果见表1）。
表1丹参总酚酸与黄芩苷提取物配伍对体外神经再生的影响（ 
n=12）
（2）本发明丹参总酚酸与黄芩苷提取物组合物对缺血性中风模型大鼠的治疗作用
取雄性SD大鼠，复制大鼠大脑四动脉结扎缺血损伤模型，同时腹腔注射BrdU标记增殖神经元。实验设置正常对照组、模型组、丹参总酚酸组（40mg/kg）、黄芩苷提取物组（80mg/kg）以及配伍组（40 mg/kg丹参总酚酸+80mg/kg黄芩苷提取物）。连续给药28天，利用Morris水迷宫，检测各组实验动物学习记忆能力。考察丹参总酚酸与黄芩苷提取物的协同作用，同时考察二者配伍对海马区域新生神经元的影响。
逃避潜伏时间越短表明实验动物的学习记忆能力越强。结果显示，丹参总酚酸与黄芩苷提取物配伍促进神经再生具有协同作用：二者配伍可以协同作用降低模型大鼠的平均逃避潜伏时间（结果见表2），增加其在原平台象限停留时间和海马区域BrdU（增殖细胞标志物）和NeuN（神经元标志物）双阳性细胞数目，增加海马区域微血管数目（结果见表3）。
表2丹参总酚酸和黄芩苷提取物配伍对脑损伤大鼠学习能力的影响（
n=10）
表3丹参总酚酸和黄芩苷提取物配伍治疗中风模型大鼠的协同作用（
n=10）
（3）本发明丹参总酚酸与黄芩苷提取物组合物对局灶性脑损伤大鼠的治疗作用
取雄性SD大鼠，复制大脑中动脉栓塞模型，实验设置正常对照组、模型组、丹参总酚酸组（40 mg/kg）、黄芩苷提取物组（100mg/kg）以及配伍组（40mg/kg丹参总酚酸+100mg/kg黄芩苷提取物）。术后7天处死动物，迅速分离大脑海马，提取RNA，检测VEGF、bFGF、PDGF、BDNF相关mRNA的表达。
结果显示，丹参总酚酸和黄芩苷提取物配伍应用可以协同作用，显著升高bFGF、NGF、PDGF、BDNF mRNA表达。结果见表4。
表4丹参总酚酸和黄芩苷提取物配伍对微环境相关生长因子
mRNA表达的影响（
n=6）
（4）本发明丹参总酚酸与黄芩苷提取物组合物对抑郁模型大鼠的治疗作用
取SD大鼠，复制慢性应激大鼠抑郁模型，实验设置正常对照组、模型组、丹参总酚酸组（50mg/kg）、黄芩苷提取物组（200mg/kg）以及配伍组（50mg/kg丹参总酚酸+200mg/kg黄芩苷提取物），连续给药28天后，Morris水迷宫检测药物对模型大鼠学习记忆能力的影响。考察丹参总酚酸与黄芩苷提取物配伍的协同作用。
结果显示，丹参总酚酸和黄芩苷提取物配伍可以协同作用，改善抑郁模型大鼠5-HT分泌（结果见表5）。
表5丹参总酚酸和黄芩苷提取物配伍对抑郁大鼠5-HT分泌的影响（
, n=6）
（5）本发明丹参总酚酸与黄芩苷提取物组合物对快速老化小鼠的治疗作用
取快速老化痴呆模型小白鼠SAMP8（7月龄）和同品系正常小白鼠（SAMR1），实验设置正常对照组、模型组、丹参总酚酸组（10mg/kg）、黄芩苷提取物组（100mg/kg）以及配伍组（10mg/kg丹参总酚酸+100mg/kg黄芩苷提取物），连续给药28天后，Morris水迷宫检测各组实验小鼠发现逃生平台的潜伏时间，考察药物对模型小鼠的学习记忆能力的影响。考察丹参总酚酸与黄芩苷提取物配伍的协同作用。
逃避潜伏时间越短表明实验动物的学习记忆能力越强。结果显示，丹参总酚酸和黄芩苷提取物配伍协同作用可以显著降低模型小鼠的逃避潜伏时间，改善自然衰老小鼠学习记忆能力（结果见表6）。
表6丹参总酚酸和黄芩苷提取物配伍对自然衰老小鼠
逃避潜伏时间的影响（
, n=6）
（6）本发明丹参总酚酸与黄芩苷提取物组合物对帕金森病模型小鼠的治疗作用
取C57BL/6小鼠，腹腔注射MPTP复制实验性帕金森病小鼠模型，实验设置正常对照组、模型组、丹参总酚酸组（30 mg/kg）、黄芩苷提取物组（200mg/kg）以及配伍组（30mg/kg丹参总酚酸+200mg/kg黄芩苷提取物）。连续给药7天后，取脑组织，检测各组纹状体多巴胺神经递质的含量。考察丹参总酚酸与黄芩苷提取物配伍的协同作用。
结果显示，丹参总酚酸和黄芩苷提取物配伍协同作用可以显著提高多巴胺神经递质的含量，改善实验性帕金森模型小鼠症状（结果见表7）。
表7丹参总酚酸和黄芩苷提取物配伍对帕金森病小鼠
多巴胺神经递质的影响（
, n=6）
本发明所公开的用于治疗脑损伤及神经退行性病变组合物所具有的积极效果在于：
它是通过将丹参总酚酸与黄芩苷提取物配伍组合应用，具有明显改善局部微环境，改善肢体活动和认知功能的作用。药理实验证实，本发明的组合物能够调控血管生成相关因子的表达，改善局部微环境。促进神经干细胞增殖，并可诱导其向神经元方向定向分化，促进功能性神经再生。
具体实施方式：
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明，下述各实施例仅用于说明本发明而并非对本发明的限制。
实施例 1
本发明组合物的处方：
丹参总酚酸50重量份，黄芩苷提取物0.5重量份，淀粉20重量份，微晶纤维素10重量份，硬脂酸镁2重量份。
丹参总酚酸的提取包括以下制备步骤：
取丹参饮片，按其重量的8倍量加水，80℃浸泡2小时，提取两次，合并提取液，调整PH值为1，静置6小时，过滤，收集滤液，经D101大孔树脂纯化，先用水洗脱除去多糖，乙醇梯度洗脱，收集60%乙醇的洗脱液，并将该洗脱液浓缩干燥，制得丹参总酚酸，其中丹参总酚酸含有72%重量的丹酚酸B；
黄芩苷提取物的提取包括以下制备步骤：
取黄芩饮片，按其质量的12倍量加水煎煮2小时，过滤，药渣再加入10倍药材质量的水煎煮1小时，过滤后合并滤液，离心沉降，待药液澄清后得到上清液，35℃向上清液中加入盐酸，调整PH值为1.0左右，40℃保温2小时后常温下静置36小时，沉淀物烘干，制得黄芩苷提取物，其中黄芩苷含量为92.5%；分别取将上述制得的丹参总酚酸50重量份、黄芩苷提取物1重量份混匀，再加入淀粉20重量份、微晶纤维素10重量份混匀，加入粘合剂乙醇，制粒，干燥，加入润滑剂硬脂酸镁2重量份，压制成片，装入胶囊。
实施例 2
本发明组合物的处方：
丹参总酚酸1重量份，黄芩苷提取物50重量份，淀粉20重量份
丹参总酚酸的提取包括以下制备步骤：
取丹参饮片，按其重量的10倍量加水，50℃浸泡4小时，提取两次，合并提取液，调整PH值静置2小时，过滤，收集滤液，经D101大孔树脂纯化，先用水洗脱除去多糖，乙醇梯度洗脱，收集70%乙醇的洗脱液，并将该洗脱液浓缩干燥，制得丹参总酚酸，其中丹参总酚酸含有75%重量的丹酚酸B；
黄芩苷提取物的提取包括以下制备步骤：
取黄芩饮片，按其质量的10倍量加水煎煮1小时，过滤，药渣再加入8倍药材质量的水煎煮1小时，过滤后合并滤液，离心沉降，待药液澄清后得到上清液，40℃向上清液中加入盐酸，调整PH值为1.0左右，40℃保温一小时后常温下静置24小时，沉淀物烘干，制得黄芩苷提取物，其中黄芩苷含量为91%；分别取将上述制得的丹参总酚酸5重量份、黄芩苷提取物30重量份混匀，再加入淀粉20重量份混匀，加入粘合剂乙醇，制粒，干燥，装入胶囊。
实施例 3
本发明组合物的处方：
丹参总酚酸10重量份，黄芩苷提取物20重量份，聚乙二醇6000 ，20重量份。
丹参总酚酸的提取包括以下制备步骤：
取丹参饮片，按其重量的14倍量加水，90℃浸泡3小时，提取两次，合并提取液，调整PH值为1，静置2小时，过滤，收集滤液，经D101大孔树脂纯化，先用水洗脱除去多糖，乙醇梯度洗脱，收集80%乙醇的洗脱液，并将该洗脱液浓缩干燥，制得丹参总酚酸，其中丹参总酚酸含有78%重量的丹酚酸B；
黄芩苷提取物的提取包括以下制备步骤：
取黄芩饮片，按其质量的8倍量加水煎煮3小时，过滤，药渣再加入10倍药材质量的水煎煮1小时，过滤后合并滤液，离心沉降，待药液澄清后得到上清液，40℃向上清液中加入盐酸，调整PH值为1.0左右，40℃保温一小时后常温下静置20小时，沉淀物烘干，制得黄芩苷提取物，其中黄芩苷含量为94%；
分别取将上述制得的丹参总酚酸10重量份和黄芩苷提取物20重量份混匀，再加入聚乙二醇6000 ，20重量份混匀，滴制成滴丸。
实施例 4
本发明组合物的处方：
| 实施例 | 丹参总酚酸重量份 | 黄芩苷提取物重量份 |
| A | 1 | 50 |
| B | 1 | 40 |
| C | 1 | 30 |
| D | 5 | 35 |
| E | 10 | 30 |
| F | 20 | 20 |
| G | 30 | 10 |
| H | 35 | 5 |
| I | 40 | 1 |
| G | 50 | 1 |
| K | 60 | 10 |
| L | 50 | 200 |
| M | 1 | 1 |
| N | 30 | 200 |
| O | 40 | 80 |
| P | 200 | 30 |
制备方法：
丹参总酚酸的提取包括以下制备步骤：取丹参饮片，按其重量的8倍量加水，80℃浸泡2.5小时，提取两次，合并提取液，调整PH值为1，静置6小时，过滤，收集滤液，经D101大孔树脂纯化，先用水洗脱除去多糖，乙醇梯度洗脱，收集60%乙醇的洗脱液，并将该洗脱液浓缩干燥，制得丹参总酚酸，其中丹参总酚酸含有75.6%重量的丹酚酸B。
黄芩苷提取物的提取包括以下制备步骤：
取黄芩饮片，按其质量的12倍量加水煎煮2小时，过滤，药渣再加入10倍药材质量的水煎煮1小时，过滤后合并滤液，离心沉降，待药液澄清后得到上清液，35℃向上清液中加入盐酸，调整PH值为1.0左右，40℃保温2小时后常温下静置36小时，沉淀物烘干，制得黄芩苷提取物，其中黄芩苷含量为93.5%。
Claims (10)
1.一种用于治疗脑损伤及神经退行性病变后神经损伤修复及再生的药物组合物，其特征在于：它是由下述重量份数的组份组成：
丹参总酚酸1-100份，黄芩苷提取物0.5-200份，其中丹参总酚酸含有大于70%重量的丹酚酸B，黄芩苷提取物含有大于90%重量的黄芩苷。
2.权利要求1所述的药物组合物，其中所述组合物丹参总酚酸：黄芩苷提取物的重量份数比为1-50：50-1。
3.权利要求1所述的药物组合物，其中所述组合物丹参总酚酸：黄芩苷提取物的重量份数比为10-30：5-30。
4.权利要求1所述的药物组合物，其中所述组合物丹参总酚酸：黄芩苷提取物的重量份数比为30:10。
5.权利要求1所述的药物组合物，其中所述组合物的重量份数比为：丹参总酚酸10份，黄芩苷提取物20份。
6.权利要求1所述的药物组合物，其中所述组合物的重量份数比为：丹参总酚酸1份，黄芩苷提取物4份。
7. 权利要求1-6任意一项所述的药物组合物，其它是注射液、凝胶剂、滴鼻剂、颗粒剂、片剂、胶囊、口服液或滴丸。
8.权利要求1-6任意一项所述组合物在制备治疗缺血性脑损伤、中风恢复期及后遗症以及血管性痴呆药物中的应用。
9.权利要求1-6任意一项所述组合物在制备治疗脑神经损伤，包括阿尔茨海默病、帕金森病、抑郁症药物中的应用。
10. 权利要求1-6任意一项所述组合物在制备治疗脑血管新生诱导剂药物中的应用。
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2011
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20121031 |