CN102746527A - 乐果分子印迹膜的制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种乐果分子印迹膜的制备方法，包括以下步骤：1）、采用相转化法制备聚丙烯腈基膜；2）、乐果分子印迹膜的制备：以乐果作为模板分子，以甲基丙烯酸作为功能单体，以乙二醇二甲基丙烯酸酯作为交联剂，以偶氮二异丁腈作为引发剂，制备而得膜液；将基膜先放入膜液中浸泡，然后再真空密封后于55~65 ℃聚合45~50h；将经上述聚合处理后所得的膜用甲醇和乙酸的混合液洗脱至洗脱液检测不出模板分子为止，得乐果分子印迹膜。本发明还同时提供了上述乐果分子印迹膜的用途：测定液态待测品中乐果的浓度。

Description

乐果分子印迹膜的制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种乐果分子印迹膜的制备方法及其用途。

背景技术

乐果是一种常用的含硫有机膦杀虫剂，属胆碱酯酶抑制剂，是具有触杀和胃毒作用的内吸性杀虫剂和杀螨剂，广泛应用于谷物、棉花、蔬菜，果树等农作物上的螨类、蚜科、粉虱科等多种害虫的防治。而目前文献报道的测定方法有分光光度法、化学发光法、高效毛细管电泳法等。化学发光法通常需要在酸性或碱性条件下水解使其产生化学发光反应，而毛细管电泳法及高效液相色谱法需要昂贵的仪器和经过专业训练的操作人员，所用时间也较长。因此，建立一种测试费用低、操作简便、灵敏度高的测试方法，因此，研究乐果的测定方法对提高农药的利用率及控制用量有着非常重要的意义。

分子印迹技术（Molecular Imprinting technique, MIT）是指为获得在空间和结合位点上与某一分子（模板分子）完全匹配的膜的制备技术，具有很高的特异性和选择性。现有的分子印迹膜都需经干燥、研磨、破碎、筛分等过程，这些过程很容易破坏膜的结合位点，操作费时费力，易造成膜粒子形态不规整。将分子印迹技术与膜分离领域结合制成的分子印迹膜，兼具分子印迹和膜技术的特点，不需要研磨等制备过程，且克服了膜技术中无法实现特定物质选择性分离的缺点，实现了特异地将目标分子从混合物中分离纯化的目的。

目前，乐果子印迹膜的制备并利用其进行乐果分析检测的方法未见报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种对乐果分子有特异性吸附作用的分子印迹膜的制备方法，并利用该分子印迹膜进行乐果的检测。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种乐果分子印迹膜的制备方法，包括以下步骤：

1）、采用相转化法制备聚丙烯腈基膜：

聚丙烯腈干燥处理后与氯化锂按照4~6：1的重量比一同加入N-甲基吡咯烷酮中，于55~65℃搅拌（例如为磁力搅拌），待聚丙烯腈与氯化锂充分溶解后，得溶液；每1g氯化锂配用25~28ml的 N-甲基吡咯烷酮；

溶液经过滤脱泡后于55~65℃静置1.5~2.5h；然后进行刮膜，所得的聚丙烯腈基膜放入去离子水中浸泡30~40h；

2）、乐果分子印迹膜的制备：

以乐果作为模板分子，以甲基丙烯酸（MAA）作为功能单体，以乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)作为交联剂；以偶氮二异丁腈(AIBN)作为引发剂；

将0.5 mmol的乐果溶于4.5~5.5ml的甲醇中，待乐果完全溶解后，得乐果溶液；

在乐果溶液中加入甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯和偶氮二异丁腈，均匀搅拌后，得膜液；用于制备乐果溶液的乐果：甲基丙烯酸：乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)= 1:2~6：38~42的摩尔比；每份由0.5 mmol乐果制备而得的乐果溶液配用35~45 mg的偶氮二异丁腈；

将步骤1）所得浸泡后的聚丙烯腈基膜自然干燥后，得干燥后基膜；将膜液通氮气脱氧，得脱氧后膜液；将干燥后基膜先放入脱氧后膜液中浸泡1.5~2.5h，然后再真空密封后于55~65 ℃聚合45~50h；将经上述聚合处理后所得的膜用甲醇和乙酸的混合液洗脱至洗脱液检测不出模板分子为止（甲醇/乙酸能破坏氢键，快速洗脱模板分子），得乐果分子印迹膜；

甲醇和乙酸的混合液中，甲醇的体积浓度为88~92%。

备注说明：每4.8~5.2g （最佳为5g）聚丙烯腈制备而得的聚丙烯腈基膜配用由0.5 mmol乐果制成的膜液。

备注说明：乐果分子印迹膜可放在甲醇中保存，使用前取出在室温条件下自然干燥（室温下干燥1~2h）。

作为本发明的乐果分子印迹膜的制备方法的改进：刮膜时，控制膜的厚度为100~200μm；从而减少膜的溶胀带来的影响。

本发明还同时提供了上述乐果分子印迹膜的用途：测定液态待测品中乐果的浓度。

本发明还同时提供了一种测定液态待测品中乐果的浓度的方法，包括以下步骤：

1）、绘制标准曲线，依次进行以下步骤：

①、制备钙黄绿素-Pd²⁺反应溶液：

用去离子水配制浓度为1.0*10^-3mol/L的钙黄绿素溶液；

用去离子水配制浓度为1.0*10^-3mol/L的氯化钯溶液；

取钙黄绿素溶液和氯化钯溶液各1ml，然后用去离子水定容至100ml；于室温下反应下3~5小时，得钙黄绿素-Pd²⁺反应溶液；

②、在乐果、钙黄绿素-Pd²⁺反应溶液和pH=7.98的磷酸盐缓冲溶液中加去离子水定容配制成一系列浓度的乐果标准溶液，每10ml的乐果标准溶液中含有1ml钙黄绿素-Pd²⁺反应溶液和1mL的pH=7.98的磷酸盐缓冲溶液；

③、采用荧光分光光度法（全称为：基于钙黄绿素-Pd²⁺荧光探针的荧光分光光度法），在激发波长490nm，发射波长512nm处，检测所述一系列的乐果标准溶液的荧光值，以乐果浓度（mg/L）为横坐标，以荧光值为纵坐标，绘制标准曲线；

2）、获得液态待测品中乐果的浓度，依次进行以下步骤：

①、将液态待测品滤过乐果分子印迹膜；

②、将步骤①所得的乐果分子印迹膜在室温下放置22~26h，使液态待测品中的乐果被乐果分子印迹膜充分吸附；

③、用甲醇和乙酸的混合液对吸附后分子印迹膜进行洗脱，得洗脱液；甲醇和乙酸的混合液中，甲醇的体积浓度为88~92%；

将洗脱液旋干后加入1ml钙黄绿素-Pd²⁺反应溶液和1mL的pH=7.98的磷酸盐缓冲溶液，并用去离子水定容至10ml，得待测液；

④、采用荧光分光光度法，将待测液在激发波长490nm，发射波长512nm处进行检测，得荧光值，代入步骤1）的标准曲线，得待测液的乐果浓度；

⑤、按照液态待测品与待测液的体积比，换算获得液态待测品的乐果浓度。

作为本发明的测定液态待测品中乐果的浓度的方法的改进：

步骤1）中：

配制成乐果浓度分别为0.051 mg/L、 0.102 mg/L、 0.153 mg/L、 0.204 mg/L、0.255 mg/L这一系列的乐果标准溶液；

所得的标准曲线对应的公式为Y=2173.3X-39.685，X代表乐果浓度（mg/L），Y代表荧光值。

在本发明的乐果分子印迹膜的制备方法中：

步骤1）中的聚丙烯腈干燥处理为：将聚丙烯腈于55~65℃ 真空干燥22~26 h ；干燥处理后的聚丙烯腈与氯化锂加入N-甲基吡咯烷酮后，在55~65℃磁力搅拌10~14小时，确保聚丙烯腈与氯化锂充分溶解。用刮刀（例如为200 μm的工字型刮刀）在玻璃板上刮膜，空气中停留一定时间（约1~5分钟）后，将玻璃板浸入一定温度（20~30℃）的去离子水中；待膜成型后，在室温下用去离子水浸泡36 h，中间换一次水。其可在甲醇溶液中保存备用。

备注说明：在本发明中，应当尽量减小膜的厚度，从而减少膜的溶胀带来的影响。因为超滤膜过厚在水中可能产生一定的溶胀，对水通量和截留率产生影响。超滤膜过薄，会导致实际生产的难度。本发明所设定的厚度为100~200μm能同时避免上述缺陷。

在步骤2）中：

发明人通过实验获得了模板分子乐果与功能单体MAA的用量比。功能单体与印迹分子之间存在着匹配性，即功能单体与模板分子之间的非共价作用越强，两者形成的复合物越稳定，其构型在聚合过程中越易保持，制得的分子印迹空穴对印迹分子的识别能力越强。乐果与MAA可选比例为1:2~6的摩尔比，最佳比例为1:4摩尔比，分子印迹膜对乐果的吸附效果最佳。

在甲醇和乙酸的混合液中，最佳为甲醇/乙酸=9/1（v/v）。

将本发明所得的乐果分子印迹膜进行如下的性能检测：

1）、稳定性检测：

将乐果分子印迹膜放入80℃的蒸馏水中加热2 h，结果表明对膜的截留影响并不大，说明本发明的乐果分子印迹膜的耐热性能也较好；

2）、耐酸碱能力检测：

将分子印迹膜分别置于0.1M的HCl、HAc、NaOH溶液浸泡2h后，用蒸馏水清洗干净，测试分子印迹膜分离性能（截留率），研究分子印迹膜的耐酸碱能力。分子印迹膜经酸溶液浸泡后，截留率有所下降，但在弱酸时能基本保持不变，说明分子印迹膜耐酸性较好，但过强酸度还是会使分子印迹膜对乐果的截留率有明显下降；而分子印迹膜无法在碱溶液中稳定存在，在NaOH溶液中发生溶胀，耐碱性较差。

综上所述，本发明制备的乐果分子印迹膜，由于膜材料中存在大量的氰基，遇碱发生水解，使膜材料无法在碱溶液中稳定存在，在NaOH溶液中发生溶胀，耐碱性较差，这是由膜材料本身的性质决定的，因此在实际应用及存储时应避免分子印迹膜长时间暴露于碱性环境中。在中性与弱酸性环境中，膜性能稳定。

在本发明的测定液态待测品中乐果的浓度的方法中，在pH 7.98 磷酸盐缓冲溶液中，Pd²⁺与钙黄绿素形成物质的量比为1:1 的配合物导致荧光试剂钙黄绿素荧光强度猝灭。向上述溶液中加入乐果，乐果与Pd²⁺作用形成比钙黄绿素-Pd²⁺稳定性更强的配合物，而使钙黄绿素游离出来重现荧光，且荧光强度随乐果质量浓度在0.05~0.25 mg/L范围内增加而增大，据此建立了以钙黄绿素-Pd²⁺作为荧光探针法测定乐果的方法；以实样为基体用标准加入法按本发明的方法作回收试验，测得回收率在82%~108%之间。

在本发明的测定液态待测品中乐果的浓度的方法中，将液态待测品滤过乐果分子印迹膜（以下简称分子印迹膜）时，要求分子印迹膜的大小能足够吸附液态待测品中的乐果。经检测，本发明制备所得的直径11 cm的乐果分子印迹膜（厚度为200μm）时，对乐果的最高载样量为50mg。

将液态待测品滤过分子印迹膜，然后静置22~26h，从而使液态待测品中的乐果被分子印迹膜充分吸附。

本发明的测定液体待测品中乐果的浓度的方法中采用了荧光分光光度法，非常灵敏，可以检测低浓度的乐果，检测范围为0.05~0.25mg/L（备注说明：按照本发明所给出的0.051 mg/L、 0.102 mg/L、 0.153 mg/L、 0.204 mg/L、0.255 mg/L的一系列的乐果标准溶液；其对应的检测范围为0.05~0.25mg/L）。

综上所述，本发明采用了将分子印迹膜与荧光检测相结合的方法，充分利用分子印迹膜对乐果分子的特异性吸附和荧光检测的简便与灵敏，从而达到简便、快速、灵敏制备乐果定分子印迹膜并利用其检测乐果的效果。

本发明与常规的乐果检测方法相比有如下优点：

突破了常规分析技术的灵敏度和选择性限制，分子印迹膜具有专一选择性、高度稳定性和使用寿命长等。

本发明所得的乐果分子印迹膜的应用领域包括：

1）、装备到SPE柱中，应用于乐果残留分析的样品前处理过程中；

2）、装配到传感器上，制备出适用于乐果检测分析的传感器设备；

3）、装配到液相色谱填充柱中，制备出适用于乐果检测分析的液相色谱HPLC柱。

与现有技术相比，本发明的乐果分子印迹膜优点在于：制备过程简单，可操作性强，制备成本低廉；所得膜选择性好、富集程度高，可广泛用于环境、生物、食品等样品中乐果残留的前处理过程。

本发明结合分子印迹技术进行样品前处理，以钙黄绿素-Pd²⁺为荧光探针，运用荧光光度法测定乐果的含量。食品中乐果的最大限量为0.05mg/L（此为欧标，国标的最大限量是0.1 mg/L），在0.05~0.25mg/L范围内，本发明的制备的乐果分子印迹膜（MIM）对乐果有较高的吸附率，从而避免了其他物质对乐果检测的干扰。又在0.05~0.25mg/L范围内，乐果的浓度与溶液荧光强度的变化值有很高的线性相关，且相比色谱检测法，有较高的灵敏度和准确度，是一种理想的农药检测方法。

综上所述，本发明较以往的检测方法更易于操作且灵敏度高，在乐果富集、分离和检测方面具有良好的应用前景，并对其他抗生素的分析检测提供了借鉴。

附图说明

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

图1是乐果浓度与荧光强度值的标准曲线。

具体实施方式

实施例1、一种乐果分子印迹膜的制备方法，依次进行以下步骤：

1）、采用相转化法制备聚丙烯腈基膜：

称取5g 聚丙烯腈于60℃ 真空干燥24 h ，与1g 氯化锂一同加入26.5ml 的N-甲基吡咯烷酮中，于60℃ 磁力搅拌过夜（12小时），从而使聚丙烯腈和氯化锂充分溶解。

所得溶液经过滤脱泡，于60℃静置2 h，用200 μm刮刀，在玻璃板上刮膜，控制膜的厚度为100~200μm，空气中停留一定时间（1~5分钟）后，将玻璃板浸入一定温度（20~30℃）的去离子水中。待膜成型后，在室温下用去离子水浸泡36 h，中间换一次去离子水，得浸泡后的聚丙烯腈基膜，其可在甲醇溶液中保存备用。

2）、乐果分子印迹膜的制备：

取乐果0.5mmol溶于5ml甲醇中，边加边振荡。待乐果完全溶解后，然后在所得的溶液中加入甲基丙烯酸（MAA）2mmol、乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA) 20mmol、偶氮二异丁腈(AIBN)40mg，搅拌至完全溶解（即，模板分子：功能单体：交联剂=1:4:40的摩尔比）；得膜液。

将步骤1）所得的浸泡后的聚丙烯腈基膜自然干燥后（室温晾干时间一般为1-2 h，从而使去离子水被挥发；当从甲醇溶液中取出时，在上述晾干时间下甲醇也被挥发）；得干燥后基膜；将膜液通氮气脱氧10min（从而确保膜液中不含氧），得脱氧后膜液；将干燥后基膜浸入上述脱氧后膜液中，浸泡2h后取出；在真空状态下密封后，放入60 ℃环境下聚合48h。

将经上述聚合处理后所得的膜用甲醇和乙酸的混合液（甲醇/乙酸=9/1，v/v）洗脱至洗脱液检测不出模板分子为止（甲醇/乙酸能破坏氢键，快速洗脱模板分子）；得乐果分子印迹膜。

乐果分子印迹膜放在甲醇中保存，使用前取出在室温条件下自然干燥（即，室温晾干1-2 h即可）。

实施例2、一种测定液态待测品中乐果的浓度的方法，依次进行以下步骤：

1）、绘出标准曲线，依次进行以下步骤：

1、用17mg/L的乐果溶液配制系列浓度：①、0.102 mg/L，②、0.204 mg/L，③、0.306 mg/L，④、0.408 mg/L，⑤、0.510 mg/L。

备注：均以去离子水作为溶剂。

2、制备钙黄绿素-Pd²⁺反应溶液：

用去离子水配制浓度为1.0*10^-3mol/L的钙黄绿素溶液；

用去离子水配制浓度为1.0*10^-3mol/L的氯化钯溶液；

取钙黄绿素溶液和氯化钯溶液各1ml，然后用去离子水定容至100ml；于室温下反应下3~5小时，得钙黄绿素-Pd²⁺反应溶液；

3、在10 mL容量瓶中加入pH 7.98的磷酸盐缓冲溶液1.0 mL，钙黄绿素-Pd²⁺反应溶液1.0mL和5.0mL的乐果溶液（步骤1所得5种浓度中的一种），用去离子水定容至10ml后摇匀。

从而得乐果浓度分别为0.051 mg/L、 0.102 mg/L、 0.153 mg/L、 0.204 mg/L、0.255 mg/L这一系列的乐果标准溶液。

4、在激发波长490nm，发射波长512nm处，检测上述一系列的乐果标准溶液荧光值，以乐果浓度（mg/L）为横坐标，以荧光值为纵坐标，绘制标准曲线（如图1）；

所得的标准曲线对应的公式为Y=2173.3X-39.685，X代表乐果浓度（mg/L），Y代表荧光值。

2）、获得液态待测品中乐果的浓度，依次进行以下步骤：

①、将5ml的液态待测品滤过乐果分子印迹膜（直径为11cm，厚度为200μm），

②、将步骤①所得的乐果分子印迹膜室温下放置22~26h，从而使液态待测品中的乐果被乐果分子印迹膜充分吸附；

③、用甲醇和乙酸的混合液（甲醇/乙酸=9/1，v/v）对吸附后分子印迹膜进行洗脱3次，每次的用量为10ml；合并3次的洗脱液旋蒸干，加入pH 7.98的磷酸盐缓冲溶液1.0mL，上述钙黄绿素-Pd²⁺反应溶液1.0mL，去离子水定容至10ml，得待测液；

④、将待测液在激发波长490nm，发射波长512nm处进行检测，得荧光值，代入步骤1）的标准曲线，得待测液的乐果浓度；

⑤、按照液态待测品与待测液的体积比，换算获得液态待测品的乐果浓度。

实验1、将准确标有0.2mg/L的乐果的茶样品（作为液态待测品）5ml按照实施例2进行操作。

待测液在激发波长490nm，发射波长512nm处进行检测，得荧光值为171.125，代入Y=2173.3X-39.685，得待测液的乐果浓度为0.097mg/L；由于待测液为10ml，而液态待测品为5ml，因此得待测品的乐果浓度为0.194mg/L，回收率为97.0%；

实验2、将准确标有0.4mg/L的乐果的茶叶样品（作为液态待测品）5ml按照实施例2进行操作。

待测液在激发波长490nm，发射波长512nm处进行检测，得荧光值为340.643，代入Y=2173.3X-39.685，得待测液的乐果浓度为0.175mg/L；由于待测液为10ml，而液态待测品为5ml，因此得待测品的乐果浓度为0.350mg/L，回收率为87.5%。

对比例1、

将实施例1中的“模板分子与功能单体”的摩尔比由1:4改成1:2，其余同实施例1。

对比例2、

将实施例1中的“模板分子与功能单体”的摩尔比由1:4改成1:6，其余同实施例1。

空白例1、一种空白膜的制备方法，依次进行以下步骤：

1）、采用相转化法制备聚丙烯腈基膜：

同实施例1中聚丙烯腈基膜的制备。

2）、空白膜的制备：

在5ml甲醇中加入甲基丙烯酸（MAA）2mmol、乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA) 20mmol、偶氮二异丁腈(AIBN)40mg，搅拌至完全溶解；得膜液。

将步骤1）所得的浸泡后的聚丙烯腈基膜自然干燥后，得干燥后基膜；将膜液通氮气脱氧10min，得脱氧后膜液；将干燥后基膜浸入上述脱氧后膜液中，浸泡2h，取出。在真空状态下密封后，放入60 ℃环境下聚合48h，就能得到空白膜。

备注说明：此空白膜无需（甲醇/乙酸=9/1，v/v）洗脱，因为空白膜上没有乐果分子。

空白膜放在甲醇中保存，使用前取出在室温条件下自然干燥。

空白例2、将空白例1中的将甲基丙烯酸（MAA）的量改为1mmol，其余同空白例1。

空白例3、将空白例1中的将甲基丙烯酸（MAA）的量改为3mmol。其余同空白例1。

确定上述分子印迹膜对乐果的吸附量的实验结果如表1所示。

表1、 乐果分子印迹聚合物的吸附量

备注说明：利用聚合物吸附前后的浓度差值，可计算出MIPs和NIPs的吸附量Q：Q=(C0-Cv)*V/m。进一步计算特异吸附量△Q和特异因子α：（1）△Q=QMIP-QNIP；（2）α= QMIP/QNIP。其中QMIP为MIPs的饱和吸附量，QNIP为NIPs的饱和吸附量。

对比实验1-1、以对比例1所得的乐果分子印迹膜替代实验1中所用到的乐果分子印迹膜（实施例1所得），其余同实验1。

将完全同实验1的茶样品5ml按照上述方法进行检测：

待测液在激发波长490nm，发射波长512nm处进行检测，得荧光值为145.046，代入Y=2173.3X-39.685，得待测液的乐果浓度为0.085mg/L；由于待测液为10ml，而液态待测品为5ml，因此得待测品的乐果浓度为0.170mg/L，回收率为85.0%。

对比实验1-2、以对比例1所得的乐果分子印迹膜替代实验2中所用到的乐果分子印迹膜（实施例1所得），其余同实验2。

将完全同实验2的茶样品5ml按照上述方法进行检测：

待测液在激发波长490nm，发射波长512nm处进行检测，得荧光值为331.949，代入Y=2173.3X-39.685，得待测液的乐果浓度为0.171mg/L；由于待测液为10ml，而液态待测品为5ml，因此得待测品的乐果浓度为0.342mg/L，回收率为85.5%。

对比实验2-1、以对比例2所得的乐果分子印迹膜替代实验1中所用到的乐果分子印迹膜（实施例1所得），其余同实验1。

将完全同实验1的茶样品5ml按照上述方法进行检测：

待测液在激发波长490nm，发射波长512nm处进行检测，得荧光值为138.526，代入Y=2173.3X-39.685，得待测液的乐果浓度为0.082mg/L；由于待测液为10ml，而液态待测品为5ml，因此得待测品的乐果浓度为0.164mg/L，回收率为82.0%。

对比实验2-2、以对比例2所得的乐果分子印迹膜替代实验2中所用到的乐果分子印迹膜（实施例1所得），其余同实验2。

将完全同实验2的茶样品5ml按照上述方法进行检测：

待测液在激发波长490nm，发射波长512nm处进行检测，得荧光值为318.910，代入Y=2173.3X-39.685，得待测液的乐果浓度为0.165mg/L；由于待测液为10ml，而液态待测品为5ml，因此得待测品的乐果浓度为0.330mg/L，回收率为82.5%。

最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

Claims (5)

1.乐果分子印迹膜的制备方法，其特征是包括以下步骤：

1）、采用相转化法制备聚丙烯腈基膜：

聚丙烯腈干燥处理后与氯化锂按照4~6：1的重量比一同加入N-甲基吡咯烷酮中，于55~65℃搅拌，待聚丙烯腈与氯化锂充分溶解后，得溶液；每1g氯化锂配用25~28ml的 N-甲基吡咯烷酮；

所述溶液经过滤脱泡后于55~65℃静置1.5~2.5h；然后进行刮膜，所得的聚丙烯腈基膜放入去离子水中浸泡30~40h；

2）、乐果分子印迹膜的制备：

以乐果作为模板分子，以甲基丙烯酸作为功能单体，以乙二醇二甲基丙烯酸酯作为交联剂；以偶氮二异丁腈作为引发剂；

将0.5 mmol的乐果溶于4.5~5.5ml的甲醇中，待乐果完全溶解后，得乐果溶液；

在所述乐果溶液中加入甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯和偶氮二异丁腈，均匀搅拌后，得膜液；用于制备乐果溶液的乐果：甲基丙烯酸：乙二醇二甲基丙烯酸酯= 1:2~6：38~42的摩尔比；每份由0.5mmol乐果制备而得的乐果溶液配用35~45 mg的偶氮二异丁腈；

将步骤1）所得浸泡后的聚丙烯腈基膜自然干燥后，得干燥后基膜；将膜液通氮气脱氧，得脱氧后膜液；将干燥后基膜先放入脱氧后膜液中浸泡1.5~2.5h，然后再真空密封后于55~65 ℃聚合45~50h；将经上述聚合处理后所得的膜用甲醇和乙酸的混合液洗脱至洗脱液检测不出模板分子为止，得乐果分子印迹膜；

所述甲醇和乙酸的混合液中，甲醇的体积浓度为88~92%。

2.根据权利要求1所述的乐果分子印迹膜的制备方法，其特征是：所述刮膜时，控制膜的厚度为100~200μm；从而减少膜的溶胀带来的影响。

3.如权利要求1或2所得的乐果分子印迹膜的用途，其特征是：测定液态待测品中乐果的浓度。

4.测定液态待测品中乐果的浓度的方法，其特征是包括以下步骤：

1）、绘制标准曲线，依次进行以下步骤：

①、制备钙黄绿素-Pd²⁺反应溶液：

用去离子水配制浓度为1.0*10^-3mol/L的钙黄绿素溶液；

用去离子水配制浓度为1.0*10^-3mol/L的氯化钯溶液；

取钙黄绿素溶液和氯化钯溶液各1ml，然后用去离子水定容至100ml；于室温下反应下3~5小时，得钙黄绿素-Pd²⁺反应溶液；

②、在乐果、钙黄绿素-Pd²⁺反应溶液和pH=7.98的磷酸盐缓冲溶液中加去离子水定容配制成一系列浓度的乐果标准溶液，每10ml的乐果标准溶液中含有1ml钙黄绿素-Pd²⁺反应溶液和1mL的pH=7.98的磷酸盐缓冲溶液；

③、采用荧光分光光度法，在激发波长490nm，发射波长512nm处，检测所述一系列的乐果标准溶液的荧光值，以乐果浓度为横坐标，以荧光值为纵坐标，绘制标准曲线；

2）、获得液态待测品中乐果的浓度，依次进行以下步骤：

①、将液态待测品滤过乐果分子印迹膜；

②、将步骤①所得的乐果分子印迹膜在室温下放置22~26h，使液态待测品中的乐果被乐果分子印迹膜充分吸附；

③、用甲醇和乙酸的混合液对吸附后分子印迹膜进行洗脱，得洗脱液；所述甲醇和乙酸的混合液中，甲醇的体积浓度为88~92%；

将洗脱液旋干后加入1ml钙黄绿素-Pd²⁺反应溶液和1mL的pH=7.98的磷酸盐缓冲溶液，并用去离子水定容至10ml，得待测液；

④、采用荧光分光光度法，将待测液在激发波长490nm，发射波长512nm处进行检测，得荧光值，代入步骤1）的标准曲线，得待测液的乐果浓度；

⑤、按照液态待测品与待测液的体积比，换算获得液态待测品的乐果浓度。

5.根据权利要求4所述的测定液态待测品中乐果的浓度的方法，其特征是：

所述步骤1）中：

配制成乐果浓度分别为0.051 mg/L、 0.102 mg/L、 0.153 mg/L、 0.204 mg/L、0.255 mg/L这一系列的乐果标准溶液；

所得的标准曲线对应的公式为Y=2173.3X-39.685，X代表乐果浓度（mg/L），Y代表荧光值。

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