CN102731817B - 头孢拉定分子印迹膜的制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种头孢拉定分子印迹膜的制备方法，包括以下步骤：1）采用相转化法制备聚丙烯腈基膜；2）头孢拉定分子印迹膜的制备：以头孢拉定作为模板分子，以甲基丙烯酸作为功能单体，以乙二醇二甲基丙烯酸酯作为交联剂；以偶氮二异丁腈作为引发剂；利用头孢拉定、四丁基氢氧化铵和甲醇等，制得滤液；在滤液中加入甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯和偶氮二异丁腈，均匀搅拌后，得膜液；将步骤1）所得的聚丙烯腈基膜放入上述膜液中浸泡，然后依次进行聚合和洗脱，得头孢拉定分子印迹膜。 该头孢拉定分子印迹膜能用于测定液态待测品中头孢拉定的浓度。本发明还同时提供了一种测定液态待测品中头孢拉定的浓度的方法。

Description

头孢拉定分子印迹膜的制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种头孢拉定分子印迹膜的制备及其用途。

背景技术

头孢拉定（Cephrading, Velosef）又称先锋霉素Ⅵ、头孢菌素Ⅵ等，是第一代半合成头孢菌素，抗菌范围广，口服吸收好，血药浓度较高，特点是耐β内酰胺酶，对耐药性金黄色葡萄球菌及其他多种对光谱抗生素耐药的杆菌等有迅速而可靠地杀菌作用。主要以原形经尿排泄，尿中浓度较高。临床主要用于呼吸道、泌尿道、皮肤和软组织等的感染。中国药典2005版采用HPLC测定头孢拉定胶囊含量，而目前文献报道的测定方法有分光光度法、化学发光法、高效毛细管电泳法、旋光法及紫外分光光度法等。但分光光度法灵敏度不高，化学发光法通常需要在酸性或碱性条件下水解使其产生化学发光反应，而毛细管电泳法及高效液相色谱法需要昂贵的仪器和经过专业训练的操作人员，所用时间也较长。头孢拉定为我国临床医疗的常备药品，因其用量大，排泄量也较大，不易降解，易在环境中积累，造成抗生素污染。因此，建立一种测试费用低、操作简便、灵敏度高的测试方法，将对药物的代谢研究和质量控制提供有效手段。

分子印迹技术（Molecular Imprinting technique, MIT）是指为获得在空间和结合位点上与某一分子（模板分子）完全匹配的聚合物的制备技术，具有很高的特异性和选择性。现有的分子印迹聚合物都需经干燥、研磨、破碎、筛分等过程，这些过程很容易破坏聚合物的结合位点，操作费时费力，易造成聚合物粒子形态不规整。将分子印迹技术与膜分离领域结合制成的分子印迹膜，兼具分子印迹和膜技术的特点，不需要研磨等制备过程，且克服了膜技术中无法实现特定物质选择性分离的缺点，实现了特异地将目标分子从混合物中分离纯化的目的。

目前，头孢拉定分子印迹膜的制备并利用其进行头孢拉定分析检测的方法未见报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种对头孢拉定分子有特异性吸附作用的分子印迹膜的制备方法，并利用该分子印迹膜进行头孢拉定浓度的检测。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种头孢拉定分子印迹膜的制备方法，包括以下步骤：

1）、采用相转化法制备聚丙烯腈基膜：

聚丙烯腈干燥处理后与氯化锂按照4~6：1的重量比一同加入N-甲基吡咯烷酮中，于55~65℃搅拌（例如为磁力搅拌），待聚丙烯腈与氯化锂充分溶解后，得溶液；每1g氯化锂配用25~28ml的 N-甲基吡咯烷酮，

溶液经过滤脱泡后于55~65℃静置1.5~2.5h；然后进行刮膜，得聚丙烯腈基膜；所得的聚丙烯腈基膜放入去离子水中浸泡30~40h；

2）、头孢拉定分子印迹膜的制备：

以头孢拉定作为模板分子，以甲基丙烯酸（MAA）作为功能单体，以乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)作为交联剂；以偶氮二异丁腈(AIBN)作为引发剂；

在0.5 mmol的头孢拉定中滴加90~110μl的四丁基氢氧化铵后再加入4.5~5.5ml的甲醇，待头孢拉定完全溶解后，再加入1~2 g的无水硫酸镁搅拌1.5~2.5h；过滤，得滤液；

注：无水硫酸镁的作用是去除头孢拉定中的结晶水；

在滤液中加入甲基丙烯酸（MAA）、乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)和偶氮二异丁腈(AIBN)，均匀搅拌后（搅拌至偶氮二异丁腈溶解后），得膜液；用于制备滤液的头孢拉定：甲基丙烯酸（MAA）：乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)= 1:2~6：18~22的摩尔比；每份由0.5 mmol头孢拉定制备而得的滤液配用35~45 mg的偶氮二异丁腈(AIBN)；

将步骤1）所得浸泡后的聚丙烯腈基膜自然干燥后，得干燥后基膜；将膜液通氮气脱氧（8~12min），得脱氧后膜液；将干燥后基膜先放入脱氧后膜液中浸泡1.5~2.5h，然后，再真空密封后于55~65 ℃聚合45~50h；将经上述聚合处理后所得的膜用甲醇和乙酸的混合液洗脱至洗脱液检测不出模板分子为止，得头孢拉定分子印迹膜；

甲醇和乙酸的混合液中，甲醇的体积浓度为88~92%。

备注说明：每4.8~5.2g 聚丙烯腈制备而得的聚丙烯腈基膜配用由0.5 mmol头孢拉定制成的膜液。

所得的头孢拉定分子印迹膜可放在甲醇中保存，使用前取出干燥（即，使甲醇被挥发）。

作为本发明的头孢拉定分子印迹膜的制备方法的改进：刮膜时，控制膜的厚度为100~200μm；从而减少膜的溶胀带来的影响。

备注说明：在本发明中，应当尽量减小膜的厚度，从而减少膜的溶胀带来的影响。因为超滤膜过厚在水中可能产生一定的溶胀，对水通量和截留率产生影响。超滤膜过薄，会导致实际生产的难度。本发明所设定的厚度为100~200μm能同时避免上述缺陷。

本发明同时提供了所得的头孢拉定分子印迹膜的用途：测定液态待测品中头孢拉定的浓度。

本发明同时提供了一种测定液态待测品中头孢拉定的浓度的方法，包括以下步骤：

1）、绘制标准曲线，依次进行以下步骤：

①、将荧光素用pH 5.8的磷酸盐缓冲液配制成浓度为0.9×10^-6mol/L~1.1×10^-6mol/L的荧光素溶液；

②、用头孢拉定、荧光素溶液和用于定容的液体配制一系列的头孢拉定标准溶液，每10ml的头孢拉定标准溶液中含有2ml荧光素溶液；

③、采用荧光法，在激发波长484nm，发射波长512nm处，检测上述一系列的头孢拉定标准溶液荧光值，以头孢拉定浓度（mg/L）为横坐标，以荧光值为纵坐标，绘制标准曲线；

2）、获得液态待测品中头孢拉定的浓度，依次进行以下步骤：

①、将液态待测品滤过头孢拉定分子印迹膜；

②、将步骤①所得的头孢拉定分子印迹膜在室温下放置22~26h，使液态待测品中的头孢拉定分子被头孢拉定分子印迹膜充分吸附；

③、用甲醇和乙酸的混合液对吸附后分子印迹膜进行洗脱，得洗脱液，甲醇和乙酸的混合液中，甲醇的体积浓度为88~92%；

将洗脱液旋干后加入2ml荧光素溶液（同步骤1）的①所得的荧光素溶液），并加入用于定容的液体定容至10ml，得待测液；

④、采用荧光法，将待测液在激发波长484nm，发射波长512nm处进行检测，得荧光值，代入步骤1）的标准曲线，得待测液的头孢拉定浓度；

⑤、按照液态待测品与待测液的体积比，换算获得液态待测品的头孢拉定浓度。

作为本发明的测定液态待测品中头孢拉定的浓度的方法的改进：

步骤1）中：

配制成头孢拉定浓度分别为0、0.5、1、2、3、4、5mg/L的一系列的头孢拉定标准溶液；

所得的标准曲线对应的公式为Y=20.935X-0.8246，X代表头孢拉定浓度mg/L，Y代表荧光值。

作为本发明的测定液态待测品中头孢拉定的浓度的方法的进一步改进：用于定容的液体为去离子水和/或pH 5.8的磷酸盐缓冲液。

在本发明的头孢拉定分子印迹膜的制备方法中：

1）、步骤1）中的聚丙烯腈干燥处理为：将聚丙烯腈于55~65℃ 真空干燥22~26 h ；

干燥处理后的聚丙烯腈与氯化锂加入N-甲基吡咯烷酮后，在55~65℃磁力搅拌10~14小时，确保聚丙烯腈与氯化锂充分溶解。用刮刀（例如为200 μm的工字型刮刀）在玻璃板上刮膜，空气中停留一定时间（约1~5分钟）后，将玻璃板浸入一定温度（20~30℃）的去离子水中；待膜成型后，在室温下用去离子水浸泡30~40 h，中间换一次去离子水。

其可在甲醇溶液中保存备用。

2）、在步骤2）中：

发明人经过大量的实验发现，头孢拉定-四丁基氢氧化铵盐除了在乙腈中溶解度较差外，在其他溶剂中均有良好的溶解度；溶解速率顺序为甲醇>氯仿>DMSO>二氯甲烷>DMAC>乙腈。从溶剂的挥发性考虑，最好选用甲醇或DMSO。因四丁基氢氧化铵是甲醇溶液，并且甲醇与水极性相近，可抑制聚合物由于环境极性改变所引起的溶胀，能够更好的测试实际样品。因此本发明的头孢拉定分子印迹膜的制备方法的步骤2）中选用甲醇作为溶剂。

发明人通过实验获得了作为模板分子的头孢拉定与作为功能单体的MAA的用量比。功能单体与印迹分子之间存在着匹配性，即功能单体与模板分子之间的非共价作用越强，两者形成的复合物越稳定，其构型在聚合过程中越易保持，制得的分子印迹空穴对印迹分子的识别能力越强。在大量实验的基础上，我们得知：头孢拉定与MAA可选比例（摩尔比）为1:2~6，最佳比例为1:4，分子印迹聚合物对头孢拉定的吸附效果最佳。

在本发明的测定液态待测品中头孢拉定浓度的方法中：

1）、将液态待测品滤过头孢拉定分子印迹膜（以下简称分子印迹膜）时，要求分子印迹膜的大小能足够吸附液态待测品中的头孢拉定。经检测，本发明制备所得的直径11 cm的头孢拉定分子印迹膜（厚度为200μm）时，对头孢拉定的最高载样量为150mg。

将液体待测品滤过分子印迹膜，然后静置22~26h，从而使头孢拉定被分子印迹膜充分吸附。

2）、在甲醇和乙酸的混合液中，最佳为甲醇/乙酸=9/1（v/v）。

3）、所用的荧光素是具有光致荧光特性的染料，在蓝光或紫外线照射下，发出明亮的黄绿色荧光，其能通过市购的方式获得，例如可购自上海阿拉丁试剂有限公司生产的Cas：2321-07-5，批号B1216018的荧光素。

4）、本发明将荧光素用pH 5.8的磷酸盐缓冲液配制成浓度为0.9×10^-6mol/L~1.1×10^-6mol/L的荧光素溶液；

采用该荧光素溶液配制成的一系列的头孢拉定标准溶液在一个小时内荧光值稳定，即头孢拉定标准溶液在一个小时内进行测定，测得的值都是稳定的。

将本发明所得的头孢拉定分子印迹膜进行如下的性能检测：

1）、稳定性检测：

将头孢拉定分子印迹膜放入80℃的蒸馏水中加热2 h，结果表明对膜的截留影响并不大，说明本发明的头孢拉定分子印迹膜的耐热性能也较好；

2）、耐酸碱能力检测：

将分子印迹膜分别置于0.1M的HCl、HAc、NaOH溶液浸泡2h后，用蒸馏水清洗干净，测试分子印迹膜分离性能（截留率），研究分子印迹膜的耐酸碱能力。分子印迹膜经酸溶液浸泡后，截留率有所下降，但在弱酸时能基本保持不变，说明分子印迹膜耐酸性较好，但过强酸度还是会使分子印迹膜对头孢拉定的截留率有明显下降；而分子印迹膜无法在碱溶液中稳定存在，在NaOH溶液中发生溶胀，耐碱性较差。

综上所述，本发明制备的头孢拉定分子印迹膜，由于聚合物材料中存在大量的羧基，遇碱发生反应，使膜材料无法在碱溶液中稳定存在，在NaOH溶液中发生溶胀，耐碱性较差，这是由聚合物材料本身的性质决定的，因此在实际应用及存储时应避免分子印迹膜长时间暴露于碱性环境中。在中性与弱酸性环境中，膜性能稳定。

本发明的测定待测品中头孢拉定的浓度的方法中采用了荧光分光光度法，非常灵敏，可以检测低浓度的头孢拉定，最低检测限为0.5 mg/L。备注说明：当采用本发明检测法中所设定的系列浓度的头孢拉定标准溶液时，检测限为0.5- 5mg/L。

综上所述，本发明采用了将分子印迹膜与荧光检测相结合的方法，充分利用分子印迹膜对头孢拉定分子的特异性吸附和荧光检测的简便与灵敏，从而达到简便、快速、灵敏制备头孢拉定分子印迹膜并利用其检测头孢拉定。

本发明与常规的头孢拉定检测方法相比有如下优点：

1）、简化了样品的前处理手段，克服了抗生素样品复杂、干扰物多、浓度波动范围大的缺点；

2）、突破了常规分析技术的灵敏度和选择性限制，分子印迹膜具有专一选择性、高度稳定性和使用寿命长等。

综上所述，本发明较以往的检测方法更易于操作且灵敏度高，在头孢拉定富集、分离和检测方面具有良好的应用前景，并对其他抗生素的分析检测提供了借鉴。

附图说明

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

图1是荧光法检测头孢拉定的标准曲线。

图2是紫外分光光度法测定的标准曲线。

具体实施方式

实施例1、一种头孢拉定分子印迹膜的制备方法，依次进行以下步骤：

1）、采用相转化法制备聚丙烯腈基膜：

称取5g 聚丙烯腈于60℃ 真空干燥24 h ，与1g 氯化锂一同加入26.5ml 的N-甲基吡咯烷酮中，于60℃ 磁力搅拌过夜（12小时），从而使聚丙烯腈和氯化锂充分溶解。

所得溶液经过滤脱泡，60℃静置2 h，用200 μm刮刀，在玻璃板上刮膜，控制膜的厚度为200 μm，空气中停留一定时间（1~5 分钟）后，将玻璃板浸入一定温度（20~30 ℃）的去离子水中。待膜成型后，在室温下用去离子水浸泡36 h，中间换一次去离子水，得浸泡后的聚丙烯腈基膜。

备注说明：浸泡后的聚丙烯腈基膜可保存于甲醇中，用时取出室温干燥1-2 h即可。

2）、头孢拉定分子印迹膜的制备：

取头孢拉定0.5 mmol逐滴加入100μl四丁基氢氧化铵后溶于5ml甲醇中，边加边振荡。待头孢拉定完全溶解后，加适量（1~2 g）无水硫酸镁，搅拌2h，滤去硫酸镁（从而实现去除水分）。然后在所得的滤液中加入甲基丙烯酸（MAA）2 mmol、乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA) 10 mmol、偶氮二异丁腈(AIBN)40mg，均匀搅拌后（搅拌至偶氮二异丁腈溶解后）；得膜液。

将步骤1）所得的全部的浸泡后的聚丙烯腈基膜自然干燥（室温晾干时间一般为1-2 h，从而使去离子水被挥发；当从甲醇溶液中取出时，在上述晾干时间下甲醇也被挥发）后，得干燥后基膜；将膜液通氮气脱氧10min（从而确保膜液中不含氧），得脱氧后膜液；将干燥后基膜浸入上述脱氧后膜液中，浸泡2h后取出；在真空状态下密封后，放入60 ℃环境下聚合48h。

将经上述聚合处理后所得的膜用甲醇和乙酸的混合液（甲醇/乙酸=9/1，v/v）洗脱至洗脱液检测不出模板分子（头孢拉定）为止（甲醇/乙酸能破坏氢键，快速洗脱模板分子）；得头孢拉定分子印迹膜。

该头孢拉定分子印迹膜可放在甲醇中保存，使用前取出干燥（即，室温晾干1-2 h即可）。

实施例2、一种测定液态待测品中头孢拉定的浓度的方法，依次进行以下步骤：

1）、绘出标准曲线，依次进行以下步骤：

①、将荧光素用pH 5.8的磷酸盐缓冲液配制成浓度为1×10^-6mol/L的荧光素溶液；

②、在7个容量瓶中分别加入一定量（或者不加）的头孢拉定溶液（以去离子水作为溶剂），在每个容量瓶中加2ml荧光素溶液，再用去离子水定容至10ml；从而配制成头孢拉定浓度分别为0、0.5、1、2、3、4、5mg/L的一系列的头孢拉定标准溶液；配制完毕后即刻进行下述步骤③。

③、采用荧光法，在激发波长484nm，发射波长512nm处，检测上述一系列的头孢拉定标准溶液荧光值，以头孢拉定浓度为横坐标，以荧光值为纵坐标，绘制标准曲线（如图1）；

所得的标准曲线对应的公式为Y=20.935X-0.8246，X代表头孢拉定浓度mg/L，Y代表荧光值。

2）、获得液态待测品中头孢拉定的浓度，依次进行以下步骤：

①、将5ml的液态待测品滤过头孢拉定分子印迹膜（直径为11mm，厚度为200μm），

②、将步骤①所得的头孢拉定分子印迹膜在室温下放置24h，从而使液态待测品中的头孢拉定被充分吸附；

③、用甲醇和乙酸的混合液（甲醇/乙酸=9/1，v/v）对吸附后分子印迹膜进行洗脱3次，每次的用量为5 ml；合并3次的洗脱液旋蒸干后，加入2ml荧光素溶液，并用去离子水定容至10ml，得待测液；

④、采用荧光法，将待测液在激发波长484nm，发射波长512nm处进行检测，得荧光值，代入步骤2）的标准曲线，得待测液的头孢拉定浓度；

⑤、按照液态待测品与待测液的体积比，换算获得液态待测品的头孢拉定浓度。

实验1、在事先经HPLC检测未含有头孢拉定的尿样中加入头孢拉定，从而配制成头孢拉定浓度为4 mg/L的尿样作为液态待测品；按照实施例2的方法进行检测，即，将5ml的液态待测品滤过头孢拉定分子印迹膜（直径11cm）。

待测液在激发波长484nm，发射波长512nm处进行检测，得荧光值40.77，代入Y=20.935X-0.8246，得待测液的头孢拉定浓度为1.987mg/L。

因此液态待测品中的头孢拉定浓度=1.987 mg/L*10ml /5ml =3.974 mg/L。

实验2、在事先经HPLC检测未含有头孢拉定的尿样中加入头孢拉定，从而配制成头孢拉定浓度为0.5 mg/L的尿样作为液态待测品；按照实施例2的方法进行检测，即，将5ml的液态待测品滤过头孢拉定分子印迹膜（直径11cm）。

待测液在激发波长484nm，发射波长512nm处进行检测，得荧光值4.33，代入Y=20.935X-0.8246，得待测液的头孢拉定浓度为0.246mg/L。

因此液态待测品中的头孢拉定浓度=0.246 mg/L*10ml /5ml =0.492 mg/L。

空白例1、一种空白膜的制备方法，依次进行以下步骤：

1）、采用相转化法制备聚丙烯腈基膜：

同实施例1。

2）、空白膜的制备：

在5ml甲醇中加入甲基丙烯酸（MAA）2 mmol、乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA) 10 mmol、偶氮二异丁腈(AIBN)40mg，均匀搅拌后（搅拌至偶氮二异丁腈溶解后）；得膜液。

将步骤1）所得的浸泡后的聚丙烯腈基膜自然干燥后，得干燥后基膜；将膜液通氮气脱氧10min，得脱氧后膜液；将干燥后基膜全部浸入上述脱氧后膜液中，浸泡2h，取出；在真空状态下密封后，放入60 ℃环境下聚合48h。得空白膜，该空白膜即为非印迹聚合物（NIP1）。

非印迹聚合物（NIP1）可放在甲醇中保存，使用前取出干燥（即，室温晾干1-2 h即可）。

对比例1、将实施例1中的“模板分子：功能单体”的摩尔比（即头孢拉定：MAA的摩尔比）由1:4改成1:2，其余同实施例1。

对比例2、将实施例1中的“模板分子：功能单体”的摩尔比由1:4改成1:6，其余同实施例1。

空白例2、将空白例1中的甲基丙烯酸（MAA）由2 mmol改成1mmol，其余同空白例1。

空白例3、将空白例1中的甲基丙烯酸（MAA）由2 mmol改成3mmol，其余同空白例1。

确定头孢拉定与MAA的最佳比例的实验步骤及结果如下：

实验方法步骤：

模板分子（头孢拉定）与功能单体（MAA）用量比的考察：

制备一系列头孢拉定分子印迹聚合物（MIPs）与非印迹聚合物（NIPs），其中模板分子与功能单体的摩尔比分别为1:2、1:4、1:6，其他用量均不变。采用饱和吸附法，评价制备的3组分子印迹聚合物对模板分子的识别能力。称取MIPs和NIPs各20mg分别置于具塞锥形瓶中，并分别加入浓度为200mg/L头孢拉定水溶液中5mL，于往复式水浴恒温振荡器中15℃条件下振荡24h。以3000r/min离心15min，离心后取上清液0.5mL，紫外分光光度法检测其浓度。

紫外分光光度标准曲线：配制25、50、100、150、200mg/L的头孢拉定标准溶液，在260nm出检测吸光度，画出标准曲线，如图2。紫外分光光度法用于检测浓度较高的头孢拉定溶液，在紫外260nm处吸收最强。检测限位25-200mg/L。

利用聚合物吸附前后的浓度差值，可计算出MIPs和NIPs的吸附量Q：Q=(C0-Cv)*V/m。进一步计算特异吸附量△Q和特异因子α：（1）△Q=QMIP-QNIP；（2）α= QMIP/QNIP。其中QMIP为MIPs的饱和吸附量，QNIP为NIPs的饱和吸附量。最后，选择特异性吸附能力最强的聚合物，得出最佳制备比例，用于后续测定。

实验结果：

采用饱和吸附实验对所制备的分子印迹聚合物的识别能力进行测定，评价不同比例功能单体的聚合物的吸附性能（见表1）。特异性吸附量(△Q)揭示了聚合物对模板分子的选择性，由表1可知，吸附性能最好的是1:4的MIP2（实施例1所得），该聚合物对头孢拉定的△Q为9.86mg/g，其次为MIP3（对比例2所得）和MIP1（对比例1所得），△Q分别为7.85mg/g与5.34 mg/g。

功能单体与印迹分子之间存在着匹配性，即功能单体与模板分子之间的非共价作用越强，两者形成的复合物越稳定，其构型在聚合过程中越易保持，制得的分子印迹空穴对印迹分子的识别能力越强。结果表明当头孢拉定与MAA比例为1:4时，分子印迹聚合物对头孢拉定的吸附效果最佳。

表1、头孢拉定分子印迹聚合物的吸附量

最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

Claims (6)

1.头孢拉定分子印迹膜的制备方法，其特征是包括以下步骤：

1）、采用相转化法制备聚丙烯腈基膜：

聚丙烯腈干燥处理后与氯化锂按照4~6：1的重量比一同加入N-甲基吡咯烷酮中，于55~65℃搅拌，待聚丙烯腈与氯化锂充分溶解后，得溶液；每1g氯化锂配用25~28ml的 N-甲基吡咯烷酮；

所述溶液经过滤脱泡后于55~65℃静置1.5~2.5h；然后进行刮膜，所得的聚丙烯腈基膜放入去离子水中浸泡30~40h；

2）、头孢拉定分子印迹膜的制备：

以头孢拉定作为模板分子，以甲基丙烯酸作为功能单体，以乙二醇二甲基丙烯酸酯作为交联剂；以偶氮二异丁腈作为引发剂；

在0.5 mmol的头孢拉定中滴加90~110μl的四丁基氢氧化铵后再加入4.5~5.5ml的甲醇，待头孢拉定完全溶解后，再加入1~2 g的无水硫酸镁搅拌1.5~2.5h；过滤，得滤液；

在所述滤液中加入甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯和偶氮二异丁腈，均匀搅拌后，得膜液；用于制备滤液的头孢拉定：甲基丙烯酸：乙二醇二甲基丙烯酸酯= 1:2~6：18~22的摩尔比；每份由0.5 mmol头孢拉定制备而得的滤液配用35~45 mg的偶氮二异丁腈；

将步骤1）所得浸泡后的聚丙烯腈基膜自然干燥后，得干燥后基膜；将膜液通氮气脱氧，得脱氧后膜液；将干燥后基膜先放入脱氧后膜液中浸泡1.5~2.5h，然后，再真空密封后于55~65 ℃聚合45~50h；将经上述聚合处理后所得的膜用甲醇和乙酸的混合液洗脱至洗脱液检测不出模板分子为止，得头孢拉定分子印迹膜；

所述甲醇和乙酸的混合液中，甲醇的体积浓度为88~92%。

2.根据权利要求1所述的头孢拉定分子印迹膜的制备方法，其特征是：所述刮膜时，控制膜的厚度为100~200μm；从而减少膜的溶胀带来的影响。

3.如权利要求1或2所得的头孢拉定分子印迹膜的用途，其特征是：测定液态待测品中头孢拉定的浓度。

4.利用如权利要求1或2所得的头孢拉定分子印迹膜测定液态待测品中头孢拉定的浓度的方法，其特征是包括以下步骤：

1）、绘制标准曲线，依次进行以下步骤：

①、将荧光素用pH 5.8的磷酸盐缓冲液配制成浓度为0.9×10^-6mol/L~1.1×10^-6mol/L的荧光素溶液；

②、用头孢拉定、荧光素溶液和用于定容的液体配制一系列的头孢拉定标准溶液，每10ml的头孢拉定标准溶液中含有2ml荧光素溶液；

③、采用荧光法，在激发波长484nm，发射波长512nm处，检测所述一系列的头孢拉定标准溶液荧光值，以头孢拉定浓度为横坐标，以荧光值为纵坐标，绘制标准曲线；

2）、获得液态待测品中头孢拉定的浓度，依次进行以下步骤：

①、将液态待测品滤过头孢拉定分子印迹膜；

②、将步骤①所得的头孢拉定分子印迹膜在室温下放置22~26h，使液态待测品中的头孢拉定分子被头孢拉定分子印迹膜充分吸附；

③、用甲醇和乙酸的混合液对吸附后分子印迹膜进行洗脱，得洗脱液，所述甲醇和乙酸的混合液中，甲醇的体积浓度为88~92%；

将洗脱液旋干后加入2ml荧光素溶液，加入用于定容的液体定容至10ml，得待测液；

④、采用荧光法，将待测液在激发波长484nm，发射波长512nm处进行检测，得荧光值，代入步骤1）的标准曲线，得待测液的头孢拉定浓度；

⑤、按照液态待测品与待测液的体积比，换算获得液态待测品的头孢拉定浓度。

5.根据权利要求4所述的测定液态待测品中头孢拉定的浓度的方法，其特征是：

所述步骤1）中：

配制成头孢拉定浓度分别为0、0.5、1、2、3、4、5mg/L这一系列的头孢拉定标准溶液；

所得的标准曲线对应的公式为Y=20.935X-0.8246，X代表头孢拉定浓度mg/L，Y代表荧光值。

6.根据权利要求5所述的测定液态待测品中头孢拉定的浓度的方法，其特征是：用于定容的液体为去离子水和/或pH 5.8的磷酸盐缓冲液。

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