CN102731630A

CN102731630A - 一种具有透皮能力的抗氧化短肽

Info

Publication number: CN102731630A
Application number: CN2012102506150A
Authority: CN
Inventors: 张舒羽; 曹建平
Original assignee: Suzhou University
Current assignee: Suzhou University
Priority date: 2012-07-19
Filing date: 2012-07-19
Publication date: 2012-10-17
Anticipated expiration: 2032-07-19
Also published as: CN102731630B

Abstract

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种具有透皮能力的抗氧化短肽。该具有透皮能力的抗氧化短肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。该短肽一方面具有清除羟基自由基和超氧自由基的能力，另一方面具有透皮能力，能透过皮肤角质层，进入表皮和真皮层中的细胞中。该短肽具有人工合成方便、能够通过表皮给药等特点，能够有效治疗皮肤损伤。

Description

一种具有透皮能力的抗氧化短肽

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种具有透皮能力的抗氧化短肽。

背景技术

放射性皮肤损伤是肿瘤放射治疗、骨髓移植预处理、放射性核事故之后常见的并发症。放射线杀死细胞的机理有直接作用和间接作用两种，直接作用是射线作用于细胞DNA，引起细胞DNA的断裂后细胞死亡；间接作用是在射线的激发下，引起水的电离，产生自由基，活性的自由基攻击DNA、蛋白质等生物大分子后，形成不可逆损伤，造成细胞死亡。射线通过皮肤时产生的自由基是放射性皮肤损伤发生的主要原因。在射线的激发下，形成的高能自由基会攻击生物体内的重要分子，如核酸、蛋白质等，引起细胞功能的紊乱甚至细胞的凋亡。在电离辐射作用下，生物体细胞内的的自由基数量会由于能量的激发而大大增加。因而如能采用能清除自由基和抗氧化的透皮短肽进行透皮给药，则能有效的预防或治疗放射性皮肤损伤。此外，皮肤烧伤后的氧自由基上调是引起烧伤溃疡主要原因。因而如能找到一种更好的介导蛋白质透皮的肽段，并具有抗氧化、清除自由基等功能，则有望预防和治疗多种皮肤相关损疾病。

人的皮肤分为表皮、真皮和皮下组织。表皮外是由死细胞组成的角质层覆盖。角质层的功能是对皮肤进行物理性、机械性、化学性以及生物性的保护，能够阻挡绝大多数大分子物质的进入，使其免受有害物质的损伤，保持其功能的完整性。但是角质层这一屏障也阻止了表皮和真皮组织对通过表皮补给的外源营养物质和药物的吸收。

透皮促渗剂是一类是指可以加快外用药物穿透皮肤的化合物，如吡咯酮类、氮酮、萜类、氨基酸脂类等等。然而迄今为止还没有一种完全理想的透皮促渗剂。现有的透皮促渗化合物一方面持续时间短，易被代谢掉；另一方面，透皮效果不理想，高浓度时具有皮肤毒性。尤其对于蛋白质等生物大分子透皮几乎没有作用。

正是由于大分子蛋白质和多肽类药物均系亲水性大分子，几乎不能透过皮肤角质层的亲脂性屏障。即使在透皮促渗剂的帮助下，分子量大于500Da的蛋白质分子也难以透过角质层，再加上表皮的不通透性，因此，长期以来，具有生物活性的大分子蛋白质的透皮给药一直没有解决。如何使得具有重要价值的生物大分子能够通过表皮途径给药成为研究的难点与热点。采用物理方法介导蛋白质透皮研究广泛，包括超声、电击、微针等方法，但是由于对设备具有依赖性，难以得到大规模应用。

近年来采用短肽介导的蛋白质透皮引起了广泛的关注。譬如ChenYongping等人采用噬菌体展示的方法筛选到了一段名为TD-1的肽段，该肽段序列为“ACSSSPSKHCG”，能介导蛋白质透过皮肤进入血液。（Chen,Y.,Shen,Y.,Guo,X.,Zhang,C.,Yang,W.,Ma,M.,Liu,S.,Zhang,M.and Wen,L.P.(2006)Transdermal protein delivery by a coadministered peptide identified viaphage display.Nat Biotechnol,24,455-60.）。该短肽与胰岛素混合后能携带胰岛素穿过小鼠皮肤，进入血液，并发挥了治疗糖尿病小鼠的降血糖作用。Lopes等人曾报道TAT和YARA结构域与P20结构域偶联后能进入皮肤，但是进入皮肤的量很少（Lopes,L.B.,Brophy,C.M.,Furnish,E.,Flynn,C.R.,Sparks,O.,Komalavilas,P.,Joshi,L.,Panitch,A.and Bentley,M.V.(2005)Comparativestudy of the skin penetration of protein transduction domains and a conjugatedpeptide.Pharm Res,22,750-7.）。

因此，提供一种具有透皮能力的抗氧化短肽，具有重要的现实意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种具有透皮能力的抗氧化短肽。该具有透皮能力的抗氧化短肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。该短肽一方面具有清除羟基自由基和超氧自由基的能力，另一方面具有透皮能力，能透过皮肤角质层，进入表皮和真皮层中的细胞中。该短肽具有人工合成方便、能够通过表皮给药等特点。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种具有透皮能力的抗氧化短肽，其氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示。

作为优选，本发明提供的一种具有透皮能力的抗氧化短肽经化学修饰。

作为优选，本发明提供的一种具有透皮能力的抗氧化短肽所经的化学修饰为FITC修饰、罗丹明修饰或Fam修饰。

本发明提供的一种具有透皮能力的抗氧化短肽的等电点为11.04。

本发明提供的一种具有透皮能力的抗氧化短肽的分子量为2692.44Da。

本发明还提供了氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽作为透皮制剂的应用。

作为优选，该短肽的等电点为11.04。

作为优选，该短肽的分子量为2692.44Da。

本发明还提供了氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽用于制备治疗皮肤损伤药物中的应用。

作为优选，皮肤损伤为放射性皮肤损伤。

本发明还提供了一种治疗皮肤损伤的药物，其包括氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示的短肽及药学上可接受的辅料。

作为优选，本发明提供的一种治疗皮肤损伤的药物中，短肽经化学修饰。

作为优选，本发明提供的一种治疗皮肤损伤的药物中，短肽所经的化学修饰为FITC修饰、罗丹明修饰或FAM修饰。

作为优选，该短肽的等电点为11.04。

作为优选，该短肽的分子量为2692.44Da。

作为优选，该药物为水浸剂、粉剂、洗剂、酊剂、油剂、乳剂、软膏、硬膏或气雾剂。

本发明提供一种具有透皮能力的抗氧化短肽。该具有透皮能力的抗氧化短肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。该短肽一方面具有清除羟基自由基和超氧自由基的能力，另一方面具有透皮能力，能透过皮肤角质层，进入表皮和真皮层中的细胞中。该短肽具有人工合成方便、能够通过表皮给药等特点，能够有效治疗皮肤损伤。

附图说明

图1示氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽的HPLC谱图；其中保留时间为10.980min的峰为氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽，其峰面积百分数为93.84%；

图2示氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽经FITC标记后的进细胞作用；其中，图2（a）示对照组的白光图，图2（b）示试验组的白光图；图2（c）示对照组的荧光图，图2（d）示试验组的荧光图；图2（e）示对照组的白光荧光重合图，图2（f）示试验组的白光荧光重合图；

图3示氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽的透皮作用；其中，图3（a）示对照组的白光图，图3（b）示试验组的白光图，箭头指示该短肽可进入真皮组织中；图3（c）示对照组的荧光图，图3（d）示试验组的荧光图，箭头指示该短肽可进入真皮组织中；

图4示氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽经罗丹明标记后的进细胞作用；其中，图4（a）示对照组的白光图，图4（b）示试验组的白光图；图4（c）示对照组的荧光图，图4（d）示试验组的荧光图；图4（e）示对照组的白光荧光重合图，图4（f）示试验组的白光荧光重合图。

具体实施方式

本发明公开了一种具有透皮能力的抗氧化短肽，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明提供的一种具有透皮能力的抗氧化短肽中所用原料及试剂均可由市场购得。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1

短肽的清除羟自由基作用检测：

采用fmoc法合成氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽（由上海默悉生物科技有限公司合成）。合成采用高效液相色谱（HPLC）鉴定，氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽的纯度为93.84%（图1所示）。该短肽溶于磷酸缓冲液（PBS，pH=7.4），中，配成浓度为150μmol/L的多肽溶液。采用南京建成生物工程有限公司的羟自由基测定试剂盒检测该短肽溶液抑制羟基自由基的能力。根据该试剂盒所述方法，3ml反应体系中加入200μL多肽溶液。37摄氏度反应1小时，以抑制反应体系中H₂O₂浓度降低1mmol/L为一个抑制羟自由基的单位(U)。结果显示本发明的短肽抑制羟基自由基的能力为40837.9U/mmol。

短肽的清除超氧自由基作用检测：

氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽溶于磷酸缓冲液（PBS，pH=7.4），中，配成浓度为150μmol/L的多肽溶液。采用南京建成生物工程有限公司的超氧自由基测定试剂盒检测该短肽溶液抑制羟基自由基的能力。根据该试剂盒所述方法，3ml反应体系中加入200μL多肽溶液。37摄氏度反应40分钟，以1mg维生素C所抑制的超氧阴离子自由基变化值为一个活性单位(U)。结果显示本发明的短肽抑制超氧阴离子自由基的能力为2364.52U/mmol，显著高于序列为GAADFASLPTGLFL的无关对照多肽（抑制超氧阴离子自由基的能力为55.02U/mmol）。

FITC修饰短肽的清除羟自由基作用检测：

采用fmoc法合成N端采用FITC标记的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽（由上海默悉生物科技有限公司合成）。合成采用高效液相色谱（HPLC）鉴定，氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽的纯度为91.75%。该短肽溶于磷酸缓冲液（PBS，pH=7.4），中，配成浓度为150μmol/L的多肽溶液。采用南京建成生物工程有限公司的羟自由基测定试剂盒检测该短肽溶液抑制羟基自由基的能力。根据该试剂盒所述方法，3ml反应体系中加入200μL多肽溶液。37摄氏度反应1小时，以抑制反应体系中H₂O₂浓度降低1mmol/L为一个抑制羟自由基的单位(U)。结果显示本发明的短肽抑制羟基自由基的能力为46161.3U/mmol。

FITC修饰短肽的清除超氧自由基作用检测：

FITC修饰的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽溶于磷酸缓冲液（PBS，pH=7.4），中，配成浓度为150μmol/L的多肽溶液。采用南京建成生物工程有限公司的超氧自由基测定试剂盒检测该短肽溶液抑制羟基自由基的能力。根据该试剂盒所述方法，3ml反应体系中加入200μL多肽溶液。37摄氏度反应40分钟，以1mg维生素C所抑制的超氧阴离子自由基变化值为一个活性单位(U)。结果显示本发明的短肽抑制超氧阴离子自由基的能力为2611.45U/mmol。

短肽的进细胞作用检测：

采用fmoc法合成N端采用FITC标记的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽（由上海默悉生物科技有限公司合成）。合成后的短肽溶于磷酸缓冲液（PBS，pH=7.4），中，配成浓度为500μmol/L的溶液。体外培养的HaCaT细胞，生长到密度为用50％时，在培养基中加入20μL浓度为150μmol/L的多肽溶液，4小时后弃掉培养液，用PBS漂洗三次，去除游离的荧光多肽置于共聚焦荧光显微镜下拍照。结果显示加入本发明短肽的细胞内的细胞质和细胞核中均能能观察到绿色荧光信号（图2所示），而在加入了无关对照（FITC标记的GAADFASLPTGLFL短肽）的细胞中没有绿色荧光，这表明该短肽具有进入细胞的功能。

短肽的透皮作用检测：

将FITC标记的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽溶于磷酸缓冲液（PBS，pH=7.4），中，配成浓度为500μmol/L的溶液。10周龄的SD大鼠臀部剔去毛发后，在表皮上涂抹上述蛋白溶液。两小时后处死动物，取涂抹处皮肤，进行冰冻切片后在荧光显微镜下观察。试验结果表明在涂抹了上述短肽的大鼠皮肤切片中，真皮区域的皮肤附属器中能明显观察到荧光信号，表明该短肽可进入真皮组织中（图3，箭头所示），显著优于Lopes等人报道的TAT蛋白的透皮能力（荧光蛋白仅能渗透至表皮）；而在涂抹对照蛋白的皮肤切片中观察不到荧光的存在（图3所示）。

短肽的透皮后清除自由基作用检测：

将FITC标记的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽溶于磷酸缓冲液（PBS，pH=7.4），中，配成浓度为500μmol/L的溶液。10周龄的SD大鼠臀部剔去毛发后，涂抹上述蛋白溶液。两小时后处死动物，取涂抹处皮肤组织匀浆。匀浆后的蛋白进行蛋白质浓度定量。同时采用南京建成生物工程有限公司的羟自由基测定试剂盒检测大鼠皮肤匀浆抑制羟基自由基的能力。根据该试剂盒所述方法，3ml反应体系中加入200μL大鼠皮肤匀浆溶液。37摄氏度反应1小时，以抑制反应体系中H₂O₂浓度降低1mmol/L为一个抑制羟自由基的单位(U)。结果显示大鼠皮肤涂抹了FITC标记的本发明的多肽后皮肤组织抑制羟基自由基的能力为12.60U/mg皮肤组织，高于未涂抹该蛋白的皮肤组织（抑制羟自由基能力为9.57U/mg皮肤组织）和涂抹了氨基酸序列为YGRKKRRQRRR的TAT蛋白的皮肤组织（抑制羟自由基能力为7.71U/mg皮肤组织），表明该短肽具有透皮后增加皮肤组织清除自由基能力的作用。

实施例2

罗丹明修饰的短肽的清除羟自由基作用检测：

采用fmoc法合成N端采用罗丹明标记的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽（由上海默悉生物科技有限公司合成）。合成采用高效液相色谱（HPLC）鉴定，氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽的纯度为92.69%。该短肽溶于磷酸缓冲液（PBS，pH=7.4），中，配成浓度为150μmol/L的多肽溶液。采用南京建成生物工程有限公司的羟自由基测定试剂盒检测该短肽溶液抑制羟基自由基的能力。根据该试剂盒所述方法，3ml反应体系中加入200μL多肽溶液。37摄氏度反应1小时，以抑制反应体系中H₂O₂浓度降低1mmol/L为一个抑制羟自由基的单位(U)。结果显示本发明的短肽抑制羟基自由基的能力为39754.6U/mmol。

罗丹明修饰的短肽的清除超氧自由基作用检测：

N端采用罗丹明标记的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽溶于磷酸缓冲液（PBS，pH=7.4），中，配成浓度为150μmol/L的多肽溶液。采用南京建成生物工程有限公司的超氧自由基测定试剂盒检测该短肽溶液抑制羟基自由基的能力。根据该试剂盒所述方法，3ml反应体系中加入200μL多肽溶液。37摄氏度反应40分钟，以1mg维生素C所抑制的超氧阴离子自由基变化值为一个活性单位(U)。结果显示本发明的短肽抑制超氧阴离子自由基的能力为2063.7U/mmol。

短肽的进细胞作用检测：

采用fmoc法合成N端采用罗丹明标记的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽（由上海默悉生物科技有限公司合成）。合成后的短肽溶于磷酸缓冲液（PBS，pH=7.4），中，配成浓度为500μmol/L的溶液。体外培养的HaCaT细胞，生长到密度为用50％时，在培养基中加入20μL浓度为150μmol/L的多肽溶液，4小时后弃掉培养液，用PBS漂洗三次，去除游离的荧光多肽后置于共聚焦荧光显微镜下拍照。结果显示加入本发明短肽的细胞内的细胞质和细胞核中均能能观察到绿色荧光信号（图4所示），而在加入了无关对照（罗丹明标记的GAADFASLPTGLFL短肽）的细胞中没有红色荧光，这表明该短肽具有进入细胞的功能。

短肽的透皮作用检测：

将罗丹明标记的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽溶于磷酸缓冲液（PBS，pH=7.4），中，配成浓度为500μmol/L的溶液。10周龄的SD大鼠臀部剔去毛发后，涂抹上述蛋白溶液。两小时后处死动物，取涂抹处皮肤，进行冰冻切片后在荧光显微镜下观察。试验结果表明在涂抹了上述短肽的大鼠皮肤切片中，真皮区域的皮肤附属器中能明显观察到荧光信号，表明该短肽可进入真皮组织中，显著优于Lopes等人报道的TAT蛋白的透皮能力；而在涂抹对照蛋白的皮肤切片中观察不到荧光的存在。

短肽的透皮后清除自由基作用检测：

将罗丹明标记的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽溶于磷酸缓冲液（PBS，pH=7.4），中，配成浓度为500μmol/L的溶液。10周龄的SD大鼠臀部剔去毛发后，涂抹上述蛋白溶液。两小时后处死动物，取涂抹处皮肤组织匀浆。匀浆后的蛋白进行蛋白质浓度定量。同时采用南京建成生物工程有限公司的羟自由基测定试剂盒检测大鼠皮肤匀浆抑制羟基自由基的能力。根据该试剂盒所述方法，3ml反应体系中加入200μL大鼠皮肤匀浆溶液。37摄氏度反应1小时，以抑制反应体系中H₂O₂浓度降低1mmol/L为一个抑制羟自由基的单位(U)。结果显示大鼠皮肤涂抹了罗丹明标记的本发明的多肽后皮肤组织抑制羟基自由基的能力为11.07U/mg皮肤组织，高于未涂抹该蛋白的皮肤组织（抑制羟自由基能力为9.57U/mg皮肤组织）和涂抹了氨基酸序列为YGRKKRRQRRR的TAT蛋白的皮肤组织（抑制羟自由基能力为7.71U/mg皮肤组织），表明该短肽具有透皮后增加皮肤组织清除自由基能力的作用。

实施例3

FAM修饰的短肽的清除羟自由基作用检测：

采用fmoc法合成N端采用FAM修饰的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽（由上海默悉生物科技有限公司合成）。合成采用高效液相色谱（HPLC）鉴定，氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽的纯度为93.04%。该短肽溶于磷酸缓冲液（PBS，pH=7.4），中，配成浓度为150μmol/L的多肽溶液。采用南京建成生物工程有限公司的羟自由基测定试剂盒检测该短肽溶液抑制羟基自由基的能力。根据该试剂盒所述方法，3ml反应体系中加入200μL多肽溶液。37摄氏度反应1小时，以抑制反应体系中H₂O₂浓度降低1mmol/L为一个抑制羟自由基的单位(U)。结果显示本发明的短肽抑制羟基自由基的能力为42747.6U/mmol。

FAM修饰的短肽的清除超氧自由基作用检测：

N端采用FAM修饰氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽溶于磷酸缓冲液（PBS，pH=7.4），中，配成浓度为150μmol/L的多肽溶液。采用南京建成生物工程有限公司的超氧自由基测定试剂盒检测该短肽溶液抑制羟基自由基的能力。根据该试剂盒所述方法，3ml反应体系中加入200μL多肽溶液。37摄氏度反应40分钟，以1mg维生素C所抑制的超氧阴离子自由基变化值为一个活性单位(U)。结果显示本发明的短肽抑制超氧阴离子自由基的能力为2064.2U/mmol。

短肽的进细胞作用检测：

采用fmoc法合成N端采用FAM标记的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽（由上海默悉生物科技有限公司合成）。合成后的短肽溶于磷酸缓冲液（PBS，pH=7.4），中，配成浓度为500μmol/L的溶液。体外培养的HaCaT细胞，生长到密度为用50％时，在培养基中加入20μL浓度为150μmol/L的多肽溶液，4小时后弃掉培养液，用PBS漂洗三次，去除游离的荧光多肽置于共聚焦荧光显微镜下拍照。结果显示加入本发明短肽的细胞内的细胞质和细胞核中均能能观察到绿色荧光信号，而在加入了无关对照（FAM标记的GAADFASLPTGLFL短肽）的细胞中没有绿色荧光，这表明该短肽具有进入细胞的功能。

短肽的透皮作用检测：

将FAM标记的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽溶于磷酸缓冲液（PBS，pH=7.4），中，配成浓度为500μmol/L的溶液。10周龄的SD大鼠臀部剔去毛发后，涂抹上述蛋白溶液。两小时后处死动物，取涂抹处皮肤，进行冰冻切片后在荧光显微镜下观察。试验结果表明在涂抹了上述短肽的大鼠皮肤切片中，真皮区域的皮肤附属器中能明显观察到荧光信号，表明该短肽可进入真皮组织中，显著优于Lopes等人报道的TAT蛋白仅能进入表皮组织的透皮能力；而在涂抹对照蛋白的皮肤切片中在真皮组织内观察不到绿色荧光的存在。

短肽的透皮后清除自由基作用检测：

将FAM标记的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽溶于磷酸缓冲液（PBS，pH=7.4），中，配成浓度为500μmol/L的溶液。10周龄的SD大鼠臀部剔去毛发后，涂抹上述蛋白溶液。两小时后处死动物，取涂抹处皮肤组织匀浆。匀浆后的蛋白进行蛋白质浓度定量。同时采用南京建成生物工程有限公司的羟自由基测定试剂盒检测大鼠皮肤匀浆抑制羟基自由基的能力。根据该试剂盒所述方法，3ml反应体系中加入200μL大鼠皮肤匀浆溶液。37摄氏度反应1小时，以抑制反应体系中H₂O₂浓度降低1mmol/L为一个抑制羟自由基的单位(U)。结果显示大鼠皮肤涂抹了FAM标记的本发明的多肽后皮肤组织抑制羟基自由基的能力为11.54U/mg皮肤组织，高于未涂抹该蛋白的皮肤组织（抑制羟自由基能力为9.57U/mg皮肤组织）和涂抹了氨基酸序列为YGRKKRRQRRR的TAT蛋白的皮肤组织（抑制羟自由基能力为7.71U/mg皮肤组织），表明该短肽具有透皮后增加皮肤组织清除自由基能力的作用。

实施例4

从全国选取200例癌症患者，均经活检病理组织确诊。男性患者108例，女性患者92例，年龄19～70岁，均采用直线加速器或电子速行根治性放疗。

将200例患者随机分为试验组和对照组。试验组100例，其中男性患者54例，女性患者46例；对照组100例，其中男性患者54例，女性患者46例。试验组和对照组患者的年龄、性别、营养状况、皮肤照射次数及照射剂量等均无显著差异。

对照组：

从第1次放疗后开始，按常规换药程序，清洗放疗局部，用庆大霉素加维生素B₁₂湿敷30min后，局部涂擦溃疡粉，每天2次，直至放疗结束后2周。

试验组：

在第1次放疗后将合成的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽与凡士林按照1：99（质量分数）混合，均匀涂抹在照射皮肤上，范围超出照射皮肤1cm，涂抹厚度为1～2mm，轻轻按摩促使皮肤吸收，每天2次，直至放疗结束后2周。

观察记录患者皮肤反应的时间、程度、深度、疼痛减轻时间及皮肤愈合时间。

放射性皮肤损伤分级标准：根据美国放射肿瘤学协作组（RTOG）急性放射性皮肤损伤分级标准。

0级，无变化；

Ⅰ级，表现为皮肤滤泡样暗红色斑、脱皮、干性脱皮、出汗减少；

Ⅱ级，触痛性或鲜红色斑或片状湿性脱皮或中毒水肿；

Ⅲ级，表现为皮肤褶皱以外的部位融合性湿性脱皮或凹陷性水肿；

Ⅳ级，溃疡、出血、坏死。

试验结果见表1、表2。

表1放射性皮肤损伤情况

组别	例数(例)	0级(例)	Ⅰ级(例)	Ⅱ级(例)	Ⅲ级(例)	Ⅳ级（例）
							试验组	100	7	73	16	4	0
对照组	100	0	19	30	44	7

试验组与对照组中0级、Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级的患者例数具有极显著差异（P＜0.01）。

本发明提供的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽能够极显著治疗放射性皮肤损伤。

表2放射性皮肤疼痛减轻时间及皮肤愈合时间

组别	例数（例）	疼痛减轻时间(d)	皮肤愈合时间(d)
				试验组	100	1.1±0.3	4.5±2.1
对照组	100	6.5±1.2	9.7±3.7

试验组涂擦氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽后，受损皮肤表现氢解湿润，无明显痛感，较大创面敷以湿纱布，1～2d有新生肉芽组织形成，病变愈合时间为2～7d，平均4.5d，愈合后皮肤弹性佳。对照组服药后表现皮肤干燥，需每天湿敷3次以上以保持皮肤湿润，创面大者痛感明显，新生肉芽组织形成多在4d以后，病变愈合时间再5～13d，平均9.7d，愈合后皮肤弹性差。

试验组与对照组中患者皮肤疼痛减轻时间和皮肤愈合时间均具有极显著差异（P＜0.01）。

实施例5含有氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽的水浸剂的制备

取氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽，添加常规辅料，按照常规方法制得水浸剂。

实施例6含有氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽的粉剂的制备

取氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽，添加常规辅料，按照常规方法制得粉剂。

实施例7含有氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽的洗剂的制备

取氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽，添加常规辅料，按照常规方法制得洗剂。

实施例8含有氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽的洗剂的制备

实施例9含有氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽的酊剂的制备

取氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽，添加常规辅料，按照常规方法制得酊剂。

实施例10含有氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽的油剂的制备

取氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽，添加常规辅料，按照常规方法制得油剂。

实施例11含有氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽的乳剂的制备

取氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽，添加常规辅料，按照常规方法制得乳剂。

实施例12含有氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽的软膏的制备

取氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽，添加常规辅料，按照常规方法制得软膏。

实施例13含有氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽的硬膏的制备

取氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽，添加常规辅料，按照常规方法制得硬膏。

实施例14含有氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽的气雾剂的制备

取氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽，添加常规辅料，按照常规方法制得气雾剂。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种具有透皮能力的抗氧化短肽，其特征在于，其氨基酸序列如SEQID NO:1所示。

2.根据权利要求1所述的抗氧化短肽，其特征在于，所述抗氧化短肽经化学修饰。

3.氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽作为透皮制剂的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，所述短肽经化学修饰。

5.氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的短肽用于制备治疗皮肤损伤药物中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，所述短肽经化学修饰。

7.一种治疗皮肤损伤的药物，其特征在于，其包括氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示的短肽及药学上可接受的辅料。

8.根据权利要求7所述的药物，所述短肽经化学修饰。

9.根据权利要求7或8所述的药物，其特征在于，其为水浸剂、粉剂、洗剂、酊剂、油剂、乳剂、软膏、硬膏或气雾剂。