CN102697574A - 一种腹腔压力升高的大鼠模型的构建方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及动物模型的构建方法，其步骤如下：第一步，准备实验动物，第二步，麻醉并切口，第三步，插管并连接输液和监测装置，第四步，恒定狭窄门静脉主干，第五步，缝合切口并套腹部束缚带，第六步，抽血降压至休克，第七步，休克后复苏，第八步，成功构建模型。本发明包含了失血性休克、大量液体复苏、损害控制手术等一系列腹腔高压症发生发展的相关因素，与临床实际中的发病过程一致，为研究腹腔高压症提供一种符合临床实际、稳定可靠的构建方法，应用该方法所获得的实验研究数据也更客观、准确，该构建方法可广泛用于研究腹腔高压症的发病机制、机体的病理生理改变、治疗效果评价等。

Description

一种腹腔压力升高的大鼠模型的构建方法

技术领域

本发明涉及动物模型的构建方法，具体涉及一种腹腔压力升高的大鼠模型的构建方法。

背景技术

腹腔高压症是各种原因导致腹腔压力升高的状态，并引起的心、肺、脑、胃肠、肾等多脏器、多系统病理生理改变的一种临床综合征。Malbrain等在调查研究后发现，在重症护理病房收治的患者中，高达32.1%的病人为腹腔高压症；并且在重症护理病房中腹腔高压症所导致的病人的死亡率达30%－50%。

构建合理的动物模型是深入研究腹腔高压症的基础，过去曾先后研发出数种动物模型的构建方法，而这些构建方法大都采取向动物腹腔内灌注某一种液体（如乳酸钠林格液、生理盐水、聚乙二醇、琥珀酰明胶等）或某一种气体（如空气、二氧化碳、氮气等）的方式来达到升高腹腔压力的目的，也有少数构建方法通过在腹腔内放置充气气球或者在腹部套扎压力充气带来升高腹腔内压力。但这些构建方法都存在着实验动物的腹腔内压力升高过快，实验动物不具备础病变，与临床实际中的继发性腹腔高压症发生情况不一致，由此所获得的实验数据与实际出入较大等问题。

2010年3月，Shah等报道了一种新的腹腔高压症的猪模型的构建方法，其通过股动脉放血导致失血性休克、不全性阻断门静脉、实施液体复苏后而引起腹腔压力升高，并最终形成腹腔高压症。较其它构建方法而言，该构建方法所制作的动物模型更符合临床实际。但该方法是使用猪来实施，存在着实验动物体型巨大、操作不便，完成实验需要一个手术团队，实验耗费巨大等不足之处，不适合广泛应用研究。因此，需要另辟蹊径，探索另外的动物模型及构建方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种腹腔压力升高的大鼠模型的构建方法，该构建方法中所使用的实验动物获取方便、成本低廉，构建方法操作简单、易于实施，按照该方法所构建的动物模型中的实验动物具备有基础病变，腹腔压力升高缓慢，与临床中的继发性腹腔高压症的发生情况一致，真实地模拟了实际中继发性腹腔高压症的发生、发展的相关变化，所获得的实验数据更加客观、准确。

本发明所述的一种腹腔压力升高的大鼠模型的构建方法，其步骤如下：

第一步，准备实验动物：挑选SD大鼠8只，雌雄不限，体重230－240g/只，实验前动物禁食12h，自由饮水；

第二步，麻醉并切口：向实验动物—SD大鼠腹腔注射质量百分浓度为1.5％的戊巴比妥钠溶液，注射剂量为30mg/kg，使SD大鼠麻醉；SD大鼠麻醉后仰卧，并固定其四肢于小动物操作台上；在SD大鼠的双侧腹股沟部分别作长度为3cm的左侧腹股沟切口和右侧腹股沟切口，寻找并钝性分离左侧股动脉、左侧股静脉和右侧股动脉、右侧股静脉；

第三步，插管并连接输液和监测装置：在SD大鼠的右侧股静脉插入导管，该导管与输液泵连接，用于输液；在SD大鼠的左侧股动脉插入导管，该导管与台式水银血压计连接，用于监测平均动脉压；在SD大鼠的左侧股静脉插入导管，并继续插入3.5cm至下腔静脉内，该导管与台式水柱计连接，用于间接测量腹腔内的压力；

第四步，恒定狭窄门静脉主干：从实验动物—SD大鼠胸部的剑突下端向下作长度为3cm的上腹部正中线直切口，在肝脏中部下缘处寻找门静脉主干，找到后钝性分离门静脉主干；将8号钝头针平行放置于游离的门静脉主干旁，用直径为0.15mm的丝线同时结扎8号钝头针和门静脉主干，勒紧8号钝头针和门静脉主干，旋转拔出8号钝头针，制成仅环绕门静脉主干的丝线环，完成门静脉主干的恒定狭窄的制作；

第五步，缝合切口并套腹部束缚带：用直径为0.3mm的丝线紧密地缝合SD大鼠的腹部切口；解开SD大鼠双侧前肢的固定，从SD大鼠的头部套入腹部束缚带，将腹部束缚带置于剑突与后肢之间，并重新固定SD大鼠的双侧上肢；此时SD大鼠的腹壁与腹部束缚带间还存留有一定的间隙；

第六步，抽血降压至休克：制作门静脉主干恒定狭窄1h后，用5ml注射器通过左侧股动脉插管缓慢抽血，抽血速度维持在1ml/min，直到抽血至休克，SD大鼠的平均动脉压降至40毫米汞柱，并将平均动脉压维持于该压力水平2h；如果休克期间SD大鼠的平均动脉压升高，则继续通过左侧股动脉插管抽血；如果平均动脉压降低，则通过左侧股动脉插管回输部分血液；

第七步，休克后复苏：实验动物—SD大鼠休克2h后，经右侧股静脉插管缓慢回输全部的所抽血液，输血速度为0.5ml/min；输血结束后，由连接输液泵通过右侧股静脉输入乳酸钠林格液，输液速度为30ml/h；                            

第八步，成功构建模型：持续输入乳酸钠林格液4h后，当连接台式水柱计的指示到达15.96cm水柱时，腹腔高压症的大鼠模型构建成功，此时SD大鼠的腹部因腹腔脏器水肿及腹腔积液会导致腹腔膨胀扩张，扩张后的腹壁与腹部束缚带已经紧密贴合。

所述的复苏液体为乳酸钠林格液，其成份为每100ml液体中含氯化钙0.02g,氯化钾0.03g，氯化钠0.6g，乳酸钠0.31g。

所述的8号钝头针为直径为0.8mm的直针头，预先去掉针尖。

所述的腹部束缚带的规格为周长15cm，宽6cm，由柔软，无弹性，无延展性的材料制作。

该构建方法通过股动脉放血致休克来模拟实际中因意外伤害致机体的大量出血后引起的失血性休克；该构建方法通过开腹制作门静脉主干恒定狭窄来模拟实际抢救伤员时的损害控制手术－腹腔填塞止血及肝周填塞止血致门静脉扭曲；该构建方法通过大量输入乳酸钠林格液来模拟实际中失血性休克后抢救复苏中的过量液体复苏；该构建方法通过腹部套腹部束缚带来模拟实际中失血性休克后过量液体复苏致腹壁水肿，腹壁的顺应性下降，活动受限。

本发明与向腹腔内灌注某一种液体来升高腹腔压力的构建方法相比，该方法避免了灌注腹腔的液体与实验动物机体间的物质交换；

本发明与向腹腔内灌注某一种气体来升高腹腔压力的构建方法相比，该方法避免了灌注腹腔的气体与实验动物机体内环境间的相互反应；

本发明与在腹腔内放置充气气球或者在腹部套扎充气带来升高腹腔压力的这些构建方法相比，该方法构建的实验动物模型的腹腔内压力分布均匀；

本发明与其它的构建方法相比，该构建方法是基于失血性休克后大量液体复苏致肠道水肿、液体缓慢渗漏至腹腔引起的腹腔内压力缓慢升高，与临床中患者腹腔压力升高的过程一致；

本发明与先前构建的猪模型相比，该动物模型制作简单，不需要手术团队即可完成，所使用的实验动物获取方便、成本低廉，实验耗费少，可批量实施研究；

本发明与其它的构建方法相比，该方法包含了失血性休克、大量液体复苏、损害控制手术等一系列腹腔高压症发生发展的相关因素，与临床实际中的发病过程一致，为研究腹腔高压症提供一种符合临床实际、稳定可靠的构建方法，应用该方法所获得的实验研究数据也更客观、准确，该构建方法可广泛用于研究腹腔高压症的发病机制、机体的病理生理改变、治疗效果评价等。

附图说明

图1是钝性分离SD大鼠双侧的股动脉、股静脉的示意图；

图2是分别在SD大鼠左侧的股动脉和股静脉及右侧的股静脉插管的示意图；

图3是作长度为3cm的上腹部正中线直切口的示意图；

图4是寻找门静脉主干的示意图；

图5是用直径为0.15mm的丝线同时结扎8号钝头针和门静脉主干的示意图；

图6是门静脉主干的恒定狭窄的示意图；

图7是缝合腹部切口后套腹部束缚带的示意图；

图8是腹腔高压症的大鼠模型构建成功的示意图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明作进一步的说明。

本发明所述的一种腹腔压力升高的大鼠模型的构建方法，其步骤如下：

第一步，准备实验动物：挑选SD大鼠8只，雌雄不限，体重230－240g/只，实验前动物禁食12h，自由饮水；

第二步，麻醉并切口：向实验动物—SD大鼠1腹腔注射质量百分浓度为1.5％的戊巴比妥钠溶液，注射剂量为30mg/kg，使SD大鼠1麻醉；SD大鼠麻醉后仰卧，并固定其四肢于小动物操作台上；在SD大鼠的双侧腹股沟部分别作长度为3cm的左侧腹股沟切口3和右侧腹股沟切口2，寻找并钝性分离左侧股动脉5、左侧股静脉7和右侧股动脉4、右侧股静脉6，参见图1；

第三步，插管并连接输液和监测装置：在SD大鼠1的右侧股静脉6插入导管，该导管与输液泵9连接，用于输液；在SD大鼠1的左侧股动脉5插入导管，该导管与台式水银血压计10连接，用于监测平均动脉压；在SD大鼠1的左侧股静脉7插入导管，并继续插入3.5cm至下腔静脉8内，该导管与台式水柱计11连接，用于间接测量腹腔内的压力，参见图2；

第四步，恒定狭窄门静脉主干：从实验动物—SD大鼠1胸部的剑突12下端向下作长度为3cm的上腹部正中线直切口13，参见图3；在肝脏14中部下缘处寻找门静脉主干15，参见图4；找到后钝性分离门静脉主干15；将8号钝头针17平行放置于游离的门静脉主干15旁，用直径为0.15mm的丝线16同时结扎8号钝头针17和门静脉主干15，参见图5；勒紧8号钝头针17和门静脉主干15，缓慢旋转拔出8号钝头针17，制成仅环绕门静脉主干的丝线环18，此时门静脉主干15的内径便为0.8mm，完成门静脉主干的恒定狭窄的制作，参见图6；

第五步，缝合切口并套腹部束缚带：用直径为0.3mm的丝线紧密地缝合SD大鼠1的腹部切口19，参见图7；解开SD大鼠双侧前肢的固定，从SD大鼠1的头部套入腹部束缚带20，将腹部束缚带20置于剑突19与后肢之间，参见图7；并重新固定SD大鼠1的双侧前肢；此时SD大鼠1的腹壁21与腹部束缚带20间还存留有一定的间隙；

第六步，抽血降压至休克：制作门静脉主干恒定狭窄1h后，用5ml注射器通过左侧股动脉5插管缓慢抽血，抽血速度维持在1ml/min，直到抽血至休克，SD大鼠1的平均动脉压降至40毫米汞柱，并将平均动脉压维持于该压力水平2h；如果休克期间SD大鼠的平均动脉压升高，则继续通过左侧股动脉5插管抽血；如果平均动脉压降低，则通过左侧股动脉5插管回输部分血液；

第七步，休克后复苏：实验动物—SD大鼠休克2h后，经右侧股静脉6插管缓慢回输全部的所抽血液，输血速度为0.5ml/min；输血结束后，由连接输液泵9通过右侧股静脉6输入乳酸钠林格液，输液速度为30ml/h；                            

第八步，成功构建模型：持续输入乳酸钠林格液4h后，当连接台式水柱计11的指示到达15.96cm水柱时，腹腔高压症的大鼠模型构建成功，此时SD大鼠的腹部因腹腔脏器水肿及腹腔积液会导致腹腔膨胀扩张，扩张后的腹壁21与腹部束缚带20已经紧密贴合参见图8。

所述的复苏液体为乳酸钠林格液，其成份为每100ml液体中含氯化钙0.02g,氯化钾0.03g，氯化钠0.6g，乳酸钠0.31g。

所述的8号钝头针17为直径为0.8mm的直针头，预先去掉针尖。

所述的腹部束缚带20的规格为周长15cm，宽6cm，由柔软，无弹性，无延展性的材料制作。

Claims (4)

1.一种腹腔压力升高的大鼠模型的构建方法，其步骤如下：

第一步，准备实验动物：挑选SD大鼠8只，雌雄不限，体重230－240g/只，实验前动物禁食12h，自由饮水；

第二步，麻醉并切口：向实验动物—SD大鼠（1）腹腔注射质量百分浓度为1.5％的戊巴比妥钠溶液，注射剂量为30mg/kg，使SD大鼠麻醉；SD大鼠麻醉后仰卧，并固定其四肢于小动物操作台上；在SD大鼠的双侧腹股沟部分别作长度为3cm的左侧腹股沟切口（3）和右侧腹股沟切口（2），寻找并钝性分离左侧股动脉（5）、左侧股静脉（7）和右侧股动脉（4）、右侧股静脉（6）；

第三步，插管并连接输液和监测装置：在SD大鼠的右侧股静脉（6）插入导管，该导管与输液泵（9）连接，用于输液；在SD大鼠的左侧股动脉（5）插入导管，该导管与台式水银血压计（10）连接，用于监测平均动脉压；在SD大鼠的左侧股静脉（7）插入导管，并继续插入3.5cm至下腔静脉（8）内，该导管与台式水柱计（11）连接，用于间接测量腹腔内的压力；

第四步，恒定狭窄门静脉主干：从实验动物—SD大鼠胸部的剑突（12）下端向下作长度为3cm的上腹部正中线直切口（13），在肝脏（14）中部下缘处寻找门静脉主干（15），找到后钝性分离门静脉主干（15）；将8号钝头针（17）平行放置于游离的门静脉主干（15）旁，用直径为0.15mm的丝线（16）同时结扎8号钝头针（17）和门静脉主干（15），勒紧8号钝头针（17）和门静脉主干（15），旋转拔出8号钝头针（17），制成仅环绕门静脉主干的丝线环（18），完成门静脉主干的恒定狭窄的制作；

第五步，缝合切口并套腹部束缚带：用直径为0.3mm的丝线紧密地缝合SD大鼠的腹部切口（19）；解开SD大鼠双侧前肢的固定，从SD大鼠的头部套入腹部束缚带（20），将腹部束缚带（20）置于剑突（19）与后肢之间（参见图7），并重新固定SD大鼠的双侧前肢；此时SD大鼠的腹壁（21）与腹部束缚带（20）间还存留有一定的间隙；

第六步，抽血降压至休克：制作门静脉主干恒定狭窄1h后，用5ml注射器通过左侧股动脉（5）插管缓慢抽血，抽血速度维持在1ml/min，直到抽血至休克，SD大鼠的平均动脉压降至40毫米汞柱，并将平均动脉压维持于该压力水平2h；如果休克期间SD大鼠的平均动脉压升高，则继续通过左侧股动脉（5）插管抽血；如果平均动脉压降低，则通过左侧股动脉（5）插管回输部分血液；

第七步，休克后复苏：实验动物—SD大鼠休克2h后，经右侧股静脉（6）插管缓慢回输全部的所抽血液，输血速度为0.5ml/min；输血结束后，由连接输液泵（9）通过右侧股静脉（6）输入乳酸钠林格液，输液速度为30ml/h；                            

第八步，成功构建模型：持续输入乳酸钠林格液4h后，当连接台式水柱计（11）的指示到达15.96cm水柱时，腹腔高压症的大鼠模型构建成功，此时SD大鼠的腹部因腹腔脏器水肿及腹腔积液会导致腹腔膨胀扩张，扩张后的腹壁（21）与腹部束缚带（20）已经紧密贴合。

2. 根据权利要求1所述的腹腔压力升高的大鼠模型的构建方法，其特征是：所述的复苏液体为乳酸钠林格液，其成份为每100ml液体中含氯化钙0.02g，氯化钾0.03g，氯化钠0.6g，乳酸钠0.31g。

3. 根据权利要求1所述的腹腔压力升高的大鼠模型的构建方法，其特征是：所述的8号钝头针（17）为直径为0.8mm的直针头，预先去掉针尖。

4. 根据权利要求1所述的腹腔压力升高的大鼠模型的构建方法，其特征是：所述的腹部束缚带（20）的规格为周长15cm，宽6cm，由柔软，无弹性，无延展性的材料制作。

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