CN102690769A - 一种高效降解粪便的复合微生物菌剂及其制备方法与应用 - Google Patents

一种高效降解粪便的复合微生物菌剂及其制备方法与应用 Download PDF

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CN102690769A CN2012101787142A CN201210178714A CN102690769A CN 102690769 A CN102690769 A CN 102690769A CN 2012101787142 A CN2012101787142 A CN 2012101787142A CN 201210178714 A CN201210178714 A CN 201210178714A CN 102690769 A CN102690769 A CN 102690769A
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展宁
杨瑞
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Abstract

本发明涉及一种高效降解粪便的复合微生物菌剂及其制备方法与应用，复合微生物菌剂是由枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、嗜热脂肪地芽孢杆菌、米曲霉、长柄木霉、嗜热侧孢霉、细黄链霉菌经固体发酵制得。该复合微生物菌剂能够缩短粪便发酵时间，有效杀死粪便中的幼虫、卵、病原体，同时提高发酵后物料中有机质、全氮、全磷、全钾的含量。

Description

一种高效降解粪便的复合微生物菌剂及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及一种高效降解粪便的复合微生物菌剂及其制备方法与应用，属于微生物发酵技术领域。
技术背景
随着养殖业集约化程度的提高和生产规模的不断扩大，畜禽数量飞速增加导致粪便的排放量也随之提高，大量的畜禽粪便不经处理就排放到环境中，不仅污染了环境，而且也会导致病原菌的扩散，严重危害了畜禽和人类的健康。
畜禽粪便中含有丰富的粗蛋白、粗纤维、粗脂肪、矿物质及氮、磷、钾等营养成分，是生产质优有机肥的廉价原料。传统的堆肥技术存在肥效低、有害微生物杀灭不彻底、发酵时间长、环境污染严重等现象。利用微生物发酵技术，通过往粪便中添加有益微生物菌可以对粪便进行杀菌、除臭、降解等一系列无害化处理，从而制得优质生物有机肥。
中国专利文献CN 102093975A（申请号：201010584414.5）公开了一种快速降解有机废弃物的复合菌剂及应用,所述的复合菌剂,由功能菌剂和特征菌剂按照体积比为2～4∶1的比例复混制备而成的液态菌剂,应用于城市固体废弃物和禽畜粪便处理,以及污泥减量的技术领域。该复合菌剂可以增强堆体中总微生物区系和木质纤维素降解菌的活性，可以处理污水，但对于禽畜粪便类处理速度和效果并不理想。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种高效降解粪便的复合微生物菌剂及其制备方法与应用。
一种高效降解粪便的复合微生物菌剂，其特征在于，是由枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）CICC10088、蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）CICC20515、巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）CICC120611、嗜热脂肪地芽孢杆菌（Geobacillus stearothermophilus）CICC22975、米曲霉（Asperqillus oryzae）CICC41474、长柄木霉（Trichoderma viride）ACCC30150、嗜热侧孢霉（Thermophilic sporotrichum）ACCC30346、细黄链霉菌（Streptomyces microflavus）CICC11006经固体发酵制得。
根据本发明优选的，上述复合微生物菌剂每克含有：是由枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）CICC10088活菌数108～1010个、蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）CICC20515活菌数108～1010个、巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）CICC120611活菌数107～109个、嗜热脂肪地芽孢杆菌（Geobacillus stearothermophilus）CICC22975活菌数107～109个、米曲霉（Asperqillusoryzae）CICC41474孢子数107～109个、长柄木霉（Trichoderma viride）ACCC30150孢子数107～109个、嗜热侧孢霉（Thermophilic sporotrichum）ACCC30346孢子数107～109个、细黄链霉菌（Streptomyces microflavus）CICC11006孢子数107～109个。
所述枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）CICC10088、蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）CICC20515、巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）CICC120611、米曲霉（Asperqillus oryzae）CICC41474、细黄链霉菌（Streptomyces microflavus）CICC11006、嗜热脂肪地芽孢杆菌（Geobacillus stearothermophilus）CICC22975均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心；
所述长柄木霉（Trichoderma viride）ACCC30150、嗜热侧孢霉（Sporotrichum thermophilic）ACCC30346均购自中国农业微生物菌种保藏管理中心。
上述复合微生物菌剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）将枯草芽孢杆菌CICC10088接种于LB液体培养基，在30～37℃条件下液体培养18~24h，然后按10~20wt%的接种量接种于固体培养基A中，在30～37℃培养3~5天，制得含有枯草芽孢杆菌CICC10088活菌数8～15×109个/g的固体菌剂A；
（2）将蜡状芽孢杆菌CICC20515接种于LB液体培养基，在30～37℃条件下液体培养18~24h，然后按10~20wt%的接种量将蜡状芽孢杆菌接种于固体培养基B中，在30～37℃培养3~5天，制得含有蜡状芽孢杆菌CICC20515活菌数8～15×109个/g的固体菌剂B；
（3）将巨大芽孢杆菌CICC120611接种于LB液体培养基，在30～37℃条件下液体培养18~24h，然后按10~20wt%的接种量将巨大芽孢杆菌接种于固体培养基C中，在30～37℃培养3~5天，制得含有巨大芽孢杆菌CICC120611活菌数1～10×109个/g的固体菌剂C；
（4）将嗜热脂肪地芽孢杆菌CICC22975接种于LB液体培养基，在55～60℃条件下液体培养18~24h，然后按10~20wt%的接种量将嗜热脂肪地芽孢杆菌接种于固体培养基D中，在55～60℃培养3~5天，制得含有嗜热脂肪地芽孢杆菌CICC22975活菌数1～10×109个/g的固体菌剂D；
（5）将米曲霉CICC41474接种于PDA固体培养基，在25～30℃条件下固体培养48～72h，加入无菌水调整孢子浓度到108个/ml，然后按10~20wt%的接种量将米曲霉接种于固体培养基E中，在25～30℃培养5~7天，制得含有米曲霉CICC41474孢子数1～3×109个/g的固体菌剂E；
（6）将长柄木霉ACCC30150接种于PDA固体培养基，在25～30℃条件下固体培养48～72h，加入无菌水调整孢子浓度到108个/ml，然后按10~20wt%的接种量将长柄木霉接种于固体培养基F中，在25～30℃培养5~7天，制得含有长柄木霉ACCC30150孢子数1～3×109个/g的固体菌剂F；
（7）将细黄链霉菌CICC11006接种于PDA固体培养基，在25～30℃条件下固体培养48～72h，加入无菌水调整孢子浓度到108个/ml，然后按10~20wt%的接种量将细黄链霉菌接种于固体培养基G中，在25～30℃培养5~7天，制得含有细黄链霉菌CICC11006孢子数0.5～1.5×109个/g的固体菌剂G；
（8）将嗜热侧孢霉ACCC30346接种于PDA固体培养基，在40～45℃条件下固体培养48～72h，加入无菌水调整孢子浓度到108个/ml，然后按10~20wt%的接种量将嗜热侧孢霉接种于固体培养基H中，在40～45℃培养5~7天，制得含有嗜热侧孢霉ACCC30346孢子数0.5～1.5×109个/g的固体菌剂H；
（9）取1～3重量份步骤（1）制得的固体菌剂A、1～3重量份步骤（2）制得的固体菌剂B、1～3重量份步骤（3）制得的固体菌剂C、1～3重量份步骤（4）制得的固体菌剂D、1～3重量份步骤（5）制得的固体菌剂E、1～3重量份步骤（6）制得的固体菌剂F、1～3重量份步骤（7）制得的固体菌剂G和1～3重量份步骤（8）制得的固体菌剂H进行混合，制得复合微生物菌剂。
根据本发明优选的，所述固体培养基A、固体培养基B、固体培养基C和固体培养基D组分相同，均采用如下原料混合、经灭菌后制得，原料均为重量份：
麸皮粉600～800份，稻壳100～300份，玉米面60～100份，豆粕粉10～30份，(NH4)2SO44～6份，MgSO4·7H2O 0.4～0.6份，KH2PO4 0.4～0.6份，石灰粉16～20份，水1000～1200份，pH 7.0～8.0。
根据本发明优选的，所述固体培养基E和固体培养基G组分相同，均采用如下原料混合、经灭菌后制得，原料均为重量份：
秸秆粉500～700份，麸皮粉300～500份，(NH4)2SO4 10～30份，KH2PO4 0.5～1.5份，MgSO4·7H2O 0.4～0.6份，水1500～2500份，pH6.0~6.5。
根据本发明优选的，所述固体培养基F，采用如下原料混合、经灭菌后制得，原料均为重量份：
麸皮粉200～400份，玉米面600～800份，过磷酸钙3～5份，水400～700份，pH6.0~6.5。
根据本发明优选的，所述固体培养基H采用如下原料混合、经灭菌后制得，原料均为重量份：
麸皮粉300～400份，甘蔗渣600～700份，(NH4)2SO4 10～30份，KH2PO4 1～3份，MgSO4·7H2O 0.4～0.6份，水1000～2000份，pH 6.0~6.5。
上述LB液体培养基和PDA固体培养基均为本领域常用培养基，LB液体培养基组分如下：
酵母膏5g，蛋白胨10g，NaCl 10g，加蒸馏水至1000ml，用NaOH和HCl调节pH7.0~7.2，分装灭菌；
PDA固体培养基组分如下：
马铃薯汁1000ml，葡萄糖20g，琼脂20g，溶化后分装灭菌；
上述复合微生物菌剂在降解粪便中的应用。
上述应用，步骤如下：
（1）将粪便置于发酵槽中，按照粪便30wt%～50wt%的量添加植物纤维，调节水份至40～60wt%，得到预处理物料；
（2）按照预处理物料重量2～3%的量称取复合微生物菌剂，添加到步骤（1）制得的预处理物料中，混合均匀，发酵过程中通过搅拌使物料温度维持在70℃以下，发酵15～30天，含水量降至15～25%，便得到优质有机肥。
上述步骤（1）中的植物纤维为：作物秸秆、稻壳、木屑。
上述操作步骤如无特别说明，均按本领域常规操作。
有益效果
（1）所述复合微生物菌剂利用微生物腐熟，能够缩短粪便发酵时间，有效杀死粪便中的幼虫、卵、病原体，同时提高发酵后物料中有机质、全氮、全磷、全钾的含量；
（2）所述复合微生物菌剂为固体形态，单位原料中含菌量高，微生物在干燥情况下以芽孢和孢子的形式存在，可长期保存，利于分装、运输及贮存；
（3）所述复合微生物菌剂制备工艺简单，生产过程不需要大型设备，生产成本低，对环境污染低。
具体实施方法
下面结合实施例对本发明做进一步阐述，但本发明所保护范围不限于此。
生物材料
实施例中所述枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）CICC10088、蜡状芽孢杆菌（Bacilluscereus）CICC20515、巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）CICC120611、米曲霉（Asperqillusoryzae）CICC41474、细黄链霉菌（Streptomyces microflavus）CICC11006、嗜热脂肪地芽孢杆菌（Geobacillus stearothermophilus）CICC22975均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心；
所述长柄木霉（Trichoderma viride）ACCC30150、嗜热侧孢霉（Sporotrichum thermophilic）ACCC30346均购自中国农业微生物菌种保藏管理中心。
实施例中所述培养基原料均为本领域常用原料，均可市场购得。
实施例1
高效降解粪便的复合微生物菌剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）将枯草芽孢杆菌CICC10088接种于LB液体培养基，在30℃条件下液体培养24h，然后按10wt%的接种量接种于固体培养基A中，在37℃培养3天，制得含有枯草芽孢杆菌CICC10088活菌数10×109个/g的固体菌剂A；
（2）将蜡状芽孢杆菌CICC20515接种于LB液体培养基，在30℃条件下液体培养24h，然后按10wt%的接种量将蜡状芽孢杆菌接种于固体培养基B中，在30℃培养3天，制得含有蜡状芽孢杆菌CICC20515活菌数8×109个/g的固体菌剂B；
（3）巨大芽孢杆菌CICC120611接种于LB液体培养基，在30℃条件下液体培养24h，然后按10wt%的接种量将巨大芽孢杆菌接种于固体培养基C中，在30℃培养3天，制得含有巨大芽孢杆菌CICC120611活菌数2×109个/g的固体菌剂C；
（4）嗜热脂肪地芽孢杆菌CICC22975接种于LB液体培养基，在55℃条件下液体培养24h，然后按10wt%的接种量将嗜热脂肪地芽孢杆菌接种于固体培养基D中，在55℃培养3天，制得含有嗜热脂肪地芽孢杆菌CICC22975活菌数2×109个/g的固体菌剂D；
（5）将米曲霉CICC41474接种于PDA固体培养基，在28℃条件下固体培养60h，加入无菌水调整孢子浓度到108个/ml，然后按10wt%的接种量将米曲霉接种于固体培养基E中，在28℃培养5天，制得含有米曲霉CICC41474孢子数1.5×109个/g的固体菌剂E；
（6）将长柄木霉ACCC30150接种于PDA固体培养基，在30℃条件下固体培养72h，加入无菌水调整孢子浓度到108个/ml，然后按15wt%的接种量将长柄木霉接种于固体培养基F中，在30℃培养7天，制得含有长柄木霉ACCC30150孢子数1.5×109个/g的固体菌剂F；
（7）细黄链霉菌CICC11006接种于PDA固体培养基，在30℃条件下固体培养60h，加入无菌水调整孢子浓度到108个/ml，然后按10wt%的接种量将细黄链霉菌接种于固体培养基G中，在30℃培养7天，制得含有细黄链霉菌CICC11006孢子数109个/g的固体菌剂G；
（8）将嗜热侧孢霉ACCC30346接种于PDA固体培养基，在45℃条件下固体培养60h，加入无菌水调整孢子浓度到108个/ml，然后按10wt%的接种量将嗜热侧孢霉接种于固体培养基H中，在45℃培养7天，制得含有嗜热侧孢霉ACCC30346孢子数109个/g的固体菌剂H；
（9）取相等重量步骤（1）制得的固体菌剂A、步骤（2）制得的固体菌剂B、步骤（3）制得的固体菌剂C、步骤（4）制得的固体菌剂D、步骤（5）制得的固体菌剂E、步骤（6）制得的固体菌剂F、步骤（7）制得的固体菌剂G和步骤（8）制得的固体菌剂H进行混合，制得复合微生物菌剂。
所述固体培养基A、固体培养基B、固体培养基C和固体培养基D组分相同，均采用如下原料混合、经灭菌后制得：
麸皮粉80kg，稻壳10kg，玉米面8kg，豆粕粉2kg，(NH4)2SO4 0.5kg，MgSO4·7H2O 0.05kg，KH2PO4 0.05kg，石灰粉1.8kg，水100L，pH 7.4。
所述固体培养基E和固体培养基G组分相同，均采用如下原料混合、经灭菌后制得：
秸秆粉60kg，麸皮粉40kg，(NH4)2SO4 2kg，KH2PO4 0.1kg，MgSO4·7H2O 0.05kg，水200L，pH 6.0。
所述固体培养基F，采用如下原料混合、经灭菌后制得，原料均为重量份：
麸皮粉30kg，玉米面70kg，过磷酸钙0.4kg，水50L，pH 6.0。
所述固体培养基H采用如下原料混合、经灭菌后制得，原料均为重量份：
麸皮粉35kg，甘蔗渣65kg，(NH4)2SO4 2kg，KH2PO4 0.2kg，MgSO4·7H2O 0.05kg，水150L，pH 6.0。
经检测，制得的降解粪便的复合微生物菌剂中，每克复合微生物菌剂含有：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）活菌数1.25×109个、蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）活菌数109个、巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）活菌数2.5×108个、嗜热脂肪地芽孢杆菌（Geobacillusstearothermophilus）活菌数2.5×108个、米曲霉（Asperqillus oryzae）孢子数1.87×108个、长柄木霉（Trichoderma viride）孢子数1.87×108个、细黄链霉菌（Streptomyces microflavus）孢子数1.25×108个、嗜热侧孢霉（Sporotrichum thermophilic）孢子数1.25×108个。
实施例2
采用如实施例1所述的方法，不同之处在于，步骤（9）固体菌剂A、固体菌剂B、固体菌剂C、固体菌剂D、固体菌剂E、固体菌剂F、固体菌剂G和固体菌剂H的混合重量比为3﹕1﹕3﹕1﹕3﹕1﹕3﹕1。
经检测，制得的降解粪便的复合微生物菌剂中，每克复合微生物菌剂含有：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）活菌数1.87×109个、蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）活菌数5×108个、巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）活菌数3.57×108个、嗜热脂肪地芽孢杆菌（Geobacillusstearothermophilus）活菌数1.25×108个、米曲霉（Asperqillus oryzae）孢子数2.81×108个、长柄木霉（Trichoderma viride）孢子数9.37×107个、细黄链霉菌（Streptomyces microflavus）孢子数1.87×108个、嗜热侧孢霉（Sporotrichum thermophilic）孢子数6.25×107个。
实施例3
采用如实施例1所述的方法，不同之处在于步骤（9）固体菌剂A、固体菌剂B、固体菌剂C、固体菌剂D、固体菌剂E、固体菌剂F、固体菌剂G和固体菌剂H的混合重量比为2﹕1﹕1﹕1﹕2﹕1﹕1﹕1。
经检测，制得的降解粪便的复合微生物菌剂中，每克复合微生物菌剂含有：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）活菌数2×109个、蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）活菌数8×108个、巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）活菌数2×108个、嗜热脂肪地芽孢杆菌（Geobacillusstearothermophilus）活菌数2×108个、米曲霉（Asperqillus oryzae）孢子数3×108个、长柄木霉（Trichoderma viride）孢子数1.5×108个、细黄链霉菌（Streptomyces microflavus）孢子数108个、嗜热侧孢霉（Sporotrichum thermophilic）孢子数108个。
实施例4
上述复合微生物菌剂在降解猪粪便中的应用，步骤如下：
（1）将300kg猪粪便与100kg玉米秸秆置于发酵槽中，调节水份至55wt%，得到预处理物料；
（2）称取8kg复合微生物菌剂，添加到步骤（1）制得的处理粪便中，混合均匀，发酵过程中通过搅拌使物料温度维持在70℃以下，发酵20天左右，含水量降至20%左右，臭气消失，便得到优质有机肥。
按上述方法分别对实施例1、实施例2和实施例3制得的复合微生物菌剂进行试验，分别为处理1、处理2、处理3。
粪便在降解过程中，温度变化显示了微生物对粪便的作用效果，在发酵过程中，每隔一段时间记录粪便的发酵温度，结果如表1所示。
种子发芽指数（GI）是用来检测堆肥对植物有无毒性，当GI大于50%时就可以认为基本无毒，当达到80%以上就可以认为对植物没有毒性。具体方法如下：培养皿内垫一张滤纸，均匀放入20颗黄瓜种子，加入堆肥浸提液（样品按固液比1：5浸提30min）5.0mL，在30℃黑暗的生化培养箱中恒温保湿培养48h后，测定发芽率和根长，根据式（1）计算种子的发芽指数，以蒸馏水作空白对照。
发芽指数（GI）=（处理发芽率×处理根长）/（空白发芽率×空白根长）×100%  （1）
在发酵过程中每隔一段时间记录粪便的发芽指数，结果如表3所示。
待发酵结束后，采用农业标准NY525-2002测定含水量、有机质、全氮、全磷、全钾的含量，结果如表5所示。
实施例5
上述复合微生物菌剂在降解鸡粪便中的应用，步骤如下：
（1）将300kg鸡粪便与140kg杂木屑置于发酵槽中，调节水份至55wt%，得到预处理物料；
（2）称取9kg复合微生物菌剂，添加到步骤（1）制得的处理粪便中，混合均匀，发酵过程中通过搅拌使物料温度维持在70℃以下，发酵20天左右，含水量降至20wt%左右，臭气消失，便得到优质有机肥。
按上述方法分别对实施例1、实施例2和实施例3制得的复合微生物菌剂进行试验，分别为处理4、处理5、处理6。
检测方法与实施例4相同，实验结果如表2、表4、表6所示。
对照例1
（1）将300kg猪粪便与100kg玉米秸秆置于发酵槽中，调节水份至55wt%进行发酵，发酵过程中通过搅拌使物料温度维持在70℃以下，发酵30天左右。
检测方法与实施例4相同，实验结果如表1、表3、表5所示。
对照例2
参照中国专利文献CN 102093975A中实施例1所记载的技术方案配制对比菌剂，按照本申请实施例4的方法施用上述对比菌剂。
检测方法与实施例4相同，实验结果如表1、表3、表5所示。
对照例3
（1）将300kg鸡粪便与140kg玉米秸秆粉置于发酵槽中，调节水份至55wt%进行发酵，发酵过程中通过搅拌使物料温度维持在70℃以下，发酵30天左右。
检测方法与实施例5相同，实验结果如表2、表4、表6所示。
对照例4
参照中国专利文献CN 102093975A中实施例1所记载的技术方案配制对比菌剂，按照本申请实施例5的方法施用上述对比菌剂。
实验结果如表2、表4、表6所示。
结果检测
表1不同处理猪粪便对发酵温度的影响（℃）
  时间(天)   处理1   处理2   处理3   对照例1   对照例2
  2   36   35   36   30   35
  4   51   53   55   43   49
  8   61   62   65   48   60
  12   67   68   69   52   63
  15   66   66   67   59   68
  18   62   63   62   64   64
  21   55   53   53   67   57
  25   44   40   41   61   45
  30   35   34   33   45   36
从表1中可以看出在堆肥期间观察不同处理猪粪便发酵温度的差异。使用本发明所述复合微生物菌剂处理猪粪便较对照组起热快，均在堆肥第4天温度迅速上升，并在第12天达到最高温，利用CN 102093975A中所述菌剂的对照例2起热较慢，在堆肥第15天达到最高温，由此说明本发明所述复合微生物菌剂起热速度快于专利CN 102093975A中所述菌剂。
表2不同处理鸡粪便对发酵温度的影响（℃）
  时间(天)   处理4   处理5   处理6   对照例3   对照例4
  2   34   36   35   30   34
  4   52   51   53   42   47
  8   62   61   63   51   60
  12   67   67   68   54   64
  15   65   64   65   57   68
  18   63   62   63   63   66
  21   55   52   52   68   58
  25   42   40   43   60   48
  30   33   31   32   48   35
从表2中可以看出在堆肥期间观察不同处理鸡粪便发酵温度的差异。使用本发明所述复合微生物菌剂处理猪粪便较对照组起热快，均在堆肥第4天温度迅速上升，并在第12天达到最高温，利用CN 102093975A中所述菌剂的对照例2起热较慢，在堆肥第15天达到最高温，由此说明本发明所述复合微生物菌剂起热速度快于专利CN 102093975A中所述菌剂。
表3不同处理猪粪便对种子发芽指数的影响（%）
  时间(天)   处理1   处理2   处理3  对照例1  对照例2
  0   45   45   45  45  45
  3   38   39   39  39  39
  6   33   32   33  35  37
  10   55   58   60  51  57
  15   70   71   72  55  68
  20   80   81   81  61  71
  25   84   86   87  72  79
  30   88   89   90  80  83
从表3中可以看出，用本发明所述复合微生物菌剂处理的猪粪便在第15天种子发芽势达到70%，在第20天达到80%以上，比专利CN 102093975A中所述菌剂对照例多于十个以上百分点，说明本发明所述复合微生物菌剂比专利CN 102093975A中所述菌剂脱毒效果更加迅速，处理效果更好。
表4不同处理鸡粪便对种子发芽指数的影响（%）
  时间(天)   处理4   处理5   处理6  对照例3  对照例4
  0   48   48   48  48  48
  3   40   41   41  45  44
  6   47   49   50  36  35
  10   58   68   61  51  55
  15   71   70   70  55  68
  20   80   83   81  61  75
  25   84   86   87  72  81
  30   90   90   91  80  85
从表4中可以看出，用本发明所述复合微生物菌剂处理的鸡粪便在第20天达到80%以上，比专利CN 102093975A中所述菌剂对照例多五个百分点以上，并且本发明菌剂处理的鸡粪便最终种子发芽指数达90%，明显高于两个对照，说明本发明所述复合微生物菌剂比专利CN 102093975A中所述菌剂脱毒效果更加迅速，处理效果更加好。
表5不同处理猪粪便营养成分的比较
 组别   含水量  有机质   全氮   全磷   全钾
 处理1   21%     42   1.64   1.56   1.50
 处理2   20%     43   1.66   1.54   1.51
 处理3   23%     44   1.70   1.62   1.52
 对照例1   31%     38   1.59   1.46   1.42
 对照例2   23%     40   1.66   1.54   1.48
如表5所示，使用本发明所述复合微生物菌剂处理猪粪便的各营养成份总体是均优于两个对照例，说明本发明所述复合微生物菌剂的作用效果优于专利CN 102093975A中所述菌剂。
表6不同处理鸡粪便营养成分的比较
  组别   含水量   有机质   全氮   全磷   全钾
  处理4   22%   46   1.80   1.48   1.60
  处理5   21%   47   1.81   1.42   1.58
  处理6   20%   47   1.83   1.46   1.57
  对照例3   30%   43   1.70   1.37   1.50
  对照例4   24%   45   1.78   1.40   1.55
如表6所示，使用本发明所述复合微生物菌剂处理鸡粪便的各营养成份总体是均优于两个对照例，说明本发明菌剂的作用效果优于专利CN 102093975A中所述菌剂。

Claims (10)

1.一种高效降解粪便的复合微生物菌剂，其特征在于，是由枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）CICC10088、蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）CICC20515、巨大芽孢杆菌（Bacillusmegaterium）CICC120611、嗜热脂肪地芽孢杆菌（Geobacillus stearothermophilus）CICC22975、米曲霉（Asperqillus oryzae）CICC41474、长柄木霉（Trichoderma viride）ACCC30150、嗜热侧孢霉（Thermophilic sporotrichum）ACCC30346、细黄链霉菌（Streptomyces microflavus）CICC11006经固体发酵制得。
2.如权利要求1所述的复合微生物菌剂，其特征在于，每克复合微生物菌剂含有：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）CICC10088活菌数108～1010个、蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）CICC20515活菌数108～1010个、巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）CICC120611活菌数107～109个、嗜热脂肪地芽孢杆菌（Geobacillus stearothermophilus）CICC22975活菌数107～109个、米曲霉（Asperqillus oryzae）CICC41474孢子数107～109个、长柄木霉（Trichodermaviride）ACCC30150孢子数107～109个、嗜热侧孢霉（Thermophilic sporotrichum）ACCC30346孢子数107～109个、细黄链霉菌（Streptomyces microflavus）CICC11006孢子数107～109个。
3.根据权利要求1或2所述复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）将枯草芽孢杆菌CICC10088接种于LB液体培养基，在30～37℃条件下液体培养18~24h，然后按10~20wt%的接种量接种于固体培养基A中，在30～37℃培养3~5天，制得含有枯草芽孢杆菌CICC10088活菌数8～15×109个/g的固体菌剂A；
（2）将蜡状芽孢杆菌CICC20515接种于LB液体培养基，在30～37℃条件下液体培养18~24h，然后按10~20wt%的接种量将蜡状芽孢杆菌接种于固体培养基B中，在30～37℃培养3~5天，制得含有蜡状芽孢杆菌CICC20515活菌数8～15×109个/g的固体菌剂B；
（3）将巨大芽孢杆菌CICC120611接种于LB液体培养基，在30～37℃条件下液体培养18~24h，然后按10~20wt%的接种量将巨大芽孢杆菌接种于固体培养基C中，在30～37℃培养3~5天，制得含有巨大芽孢杆菌CICC120611活菌数1～10×109个/g的固体菌剂C；
（4）将嗜热脂肪地芽孢杆菌CICC22975接种于LB液体培养基，在55～60℃条件下液体培养18~24h，然后按10~20wt%的接种量将嗜热脂肪地芽孢杆菌接种于固体培养基D中，在55～60℃培养3~5天，制得含有嗜热脂肪地芽孢杆菌CICC22975活菌数1～10×109个/g的固体菌剂D；
（5）将米曲霉CICC41474接种于PDA固体培养基，在25～30℃条件下固体培养48～72h，加入无菌水调整孢子浓度到108个/ml，然后按10~20wt%的接种量将米曲霉接种于固体培养基E中，在25～30℃培养5~7天，制得含有米曲霉CICC41474孢子数1～3×109个/g的固体菌剂E；
（6）将长柄木霉ACCC30150接种于PDA固体培养基，在25～30℃条件下固体培养48～72h，加入无菌水调整孢子浓度到108个/ml，然后按10~20wt%的接种量将长柄木霉接种于固体培养基F中，在25～30℃培养5~7天，制得含有长柄木霉ACCC30150孢子数1～3×109个/g的固体菌剂F；
（7）将细黄链霉菌CICC11006接种于PDA固体培养基，在25～30℃条件下固体培养48～72h，加入无菌水调整孢子浓度到108个/ml，然后按10~20wt%的接种量将细黄链霉菌接种于固体培养基G中，在25～30℃培养5~7天，制得含有细黄链霉菌CICC11006孢子数0.5～1.5×109个/g的固体菌剂G；
（8）将嗜热侧孢霉ACCC30346接种于PDA固体培养基，在40～45℃条件下固体培养48～72h，加入无菌水调整孢子浓度到108个/ml，然后按10~20wt%的接种量将嗜热侧孢霉接种于固体培养基H中，在40～45℃培养5~7天，制得含有嗜热侧孢霉ACCC30346孢子数0.5～1.5×109个/g的固体菌剂H；
（9）取1～3重量份步骤（1）制得的固体菌剂A、1～3重量份步骤（2）制得的固体菌剂B、1～3重量份步骤（3）制得的固体菌剂C、1～3重量份步骤（4）制得的固体菌剂D、1～3重量份步骤（5）制得的固体菌剂E、1～3重量份步骤（6）制得的固体菌剂F、1～3重量份步骤（7）制得的固体菌剂G和1～3重量份步骤（8）制得的固体菌剂H进行混合，制得复合微生物菌剂。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述固体培养基A、固体培养基B、固体培养基C和固体培养基D组分相同，均采用如下原料混合、经灭菌后制得，原料均为重量份：
麸皮粉600～800份，稻壳100～300份，玉米面60～100份，豆粕粉10～30份，(NH4)2SO44～6份，MgSO4·7H2O 0.4～0.6份，KH2PO40.4～0.6份，石灰粉16～20份，水1000～1200份，pH 7.0～8.0。
5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述固体培养基E和固体培养基G组分相同，均采用如下原料混合、经灭菌后制得，原料均为重量份：
秸秆粉500～700份，麸皮粉300～500份，(NH4)2SO410～30份，KH2PO40.5～1.5份，MgSO4·7H2O 0.4～0.6份，水1500～2500份，pH6.0~6.5。
6.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述固体培养基F，采用如下原料混合、经灭菌后制得，原料均为重量份：
麸皮粉200～400份，玉米面600～800份，过磷酸钙3～5份，水400～700份，pH6.0~6.5。
7.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述固体培养基H采用如下原料混合、经灭菌后制得，原料均为重量份：
麸皮粉300～400份，甘蔗渣600～700份，(NH4)2SO410～30份，KH2PO41～3份，MgSO4·7H2O0.4～0.6份，水1000～2000份，pH 6.0~6.5。
8.权利要求1所述复合微生物菌剂在降解粪便中的应用。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，步骤如下：
（1）将粪便置于发酵槽中，按照粪便30wt%～50wt%的量添加植物纤维，调节水份至40～60wt%，得到预处理物料；
（2）按照预处理物料重量2～3%的量称取复合微生物菌剂，添加到步骤（1）制得的预处理物料中，混合均匀，发酵过程中通过搅拌使物料温度维持在70℃以下，发酵15～30天，含水量降至15～25%，便得到优质有机肥。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述步骤（1）中的植物纤维为：作物秸秆、稻壳、木屑。
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