CN102687730A - 防治植物病毒病的生物复配制剂及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于防治植物病毒病的生物复配制剂及其应用。其目的是为了提供一种最大限度的发挥极细链格孢激活蛋白和氨基寡糖素各自的药效，使药剂的活性有很大提高，更有效地防治植物病毒病发生的生物药剂。本发明由浓度为1000mg/L的极细链格孢激活蛋白母液和浓度为1000mg/L的氨基寡糖素母液按体积比1∶(0.5～2.0)复配而成，当体积比为1∶1时该复配制剂的活性最高，防治效果最好。

Description

防治植物病毒病的生物复配制剂及其应用

技术领域

本发明涉及一种生物制剂及其应用，特别是涉及一种用于防治植物病毒病的生物复配制剂及其应用。

背景技术

病毒是一类无细胞结构的极其微小的专性寄生物，必须用电镜才能观察到它的形态。植物病毒的形态多呈球形或杆状，它不是一个细胞体，而是个微粒，称为病毒粒体。这种粒体是核酸和蛋白质两种物质组成的，核酸位于中心或中轴，蛋白质包围在核酸外面。病毒用自我复制(利用寄主活细胞的各种原料)的方法进行繁殖，由病毒侵染植物引起的病害称为病毒病。植物病毒感染植物后，对植物细胞的影响与动物病毒一样，会打乱植物细胞的正常代谢活动，使植物的生长和发育遭到破坏，从而降低农作物的产量和品质。受害植物通常表现为变色、坏死、畸形等症状。植物病毒除借带毒的繁殖材料如接穗、鳞茎、块根、块茎等传播外，主要是通过昆虫，以及螨类、土壤中的真菌、线虫等媒介体传播。据统计，每年由于病毒病的危害，全世界的粮食损失为200亿美元。

微生物蛋白农药是一种新型生物农药，无毒无残留，环境友好，能激活植物的一系列代谢调控反应，从而使植物对病虫害产生抗性，促进植物生长，提高作物品质，增加作物产量。

极细链格孢激活蛋白主要是通过提高植物自身的免疫系统而激活植物对于植物病毒病的抗性。氨基寡糖素是一类开发较早的生物农药，在植物与病原菌的相互作用中，病原菌分泌的细胞壁降解酶通过水解植物细胞壁而释放出寡糖信号分子，并以极低浓度传达给植物受侵染的信息，诱导植物编码植保素和其他防御化合物合成酶基因的表达，启动植物细胞的防御反应。这两种生物农药对植物病毒病来说具有较好的防治结果，但从生产实践中讲，还是期望有更高防治效果并且使用成本较低、用量较少的药剂出现。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种防治植物病毒病效果更好、用量较少、使用成本较低的生物复配制剂，及其在植物病毒病防治上的应用。

本发明一种防治植物病毒病的生物复配制剂，由浓度为1000mg/L的极细链格孢激活蛋白母液和浓度为1000mg/L的氨基寡糖素母液按体积比1∶(0.5～2.0)复配而成，其中极细链格孢激活蛋白母液是将极细链格孢激活蛋白含量为10％的极细链格孢激活蛋白母药用0.1％的吐温-80水溶液稀释制得，氨基寡糖素母液是将氨基寡糖素含量为7.5％的氨基寡糖素母药用0.1％的吐温-80水溶液稀释制得。

其中所述的极细链格孢激活蛋白母药由中国农科院植保所廊坊农药中试厂提供，氨基寡糖素母药由辽宁省大连凯飞化学股份有限公司提供。

上述生物复配制剂，优选极细链格孢激活蛋白母液和氨基寡糖素母液的体积比为1∶1。

本发明的生物复配制剂可用于防治植物病毒病。

上述生物复配制剂在防治植物病毒病中的应用，优选在防治番茄黄化曲叶病毒病、水稻条纹病毒病或烟草花叶病毒病中的应用。

本发明的有益效果：通过将极细链格孢激活蛋白母液和氨基寡糖素母液按一定比例进行复配，得到一种复配制剂，该制剂可最大限度的发挥极细链格孢激活蛋白和氨基寡糖素各自的药效，使药剂的活性有了很大提高，药剂的使用剂量和使用成本有了很大的降低。比这两种母药单独使用更有效地防治植物病毒病的发生，特别是在番茄黄化曲叶病毒病(TYLCV)、水稻条纹病毒病(RSV)、烟草花叶病毒病(TMV)的防治上具有更好的防治效果。

具体实施方式

下面结合本发明具体的试验过程，进一步阐述本发明。

实施例1：本发明对番茄黄化曲叶病毒病的防治效果试验

步骤一、药液的配制

母液的制备：10％极细链格孢激活蛋白母药、7.5％氨基寡糖素母药分别用0.1％的吐温-80水溶液稀释，先分别配制成1000mg/L单剂母液，然后再分别以体积比1∶1、1∶2、2∶1、2∶3、3∶2的比例复配成五组复配剂母液，备用。

浓度的设定：根据药剂活性分别将极细链格孢激活蛋白单剂母液、氨基寡糖素单剂母液、五组复配剂母液分别用0.1％的吐温-80水溶液配置成10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L和160mg/L 5个系列浓度的药液，每个浓度的药液设置3个重复试验。

步骤二、供试靶标

供试靶标为中国番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus，TYLCV)，因该属病毒在自然条件下只能由烟粉虱(Bemisia tabaci)以持久方式传播。

传毒介体的筛选：2008年4～5月从南方重病区中采集烟粉虱若虫，在感病品种上进行饲养，交配后单头雌虫单独产卵，再采用斑点免疫结合法检测雌虫带毒情况，保留带毒雌虫的后代，饲养2～3代后获得烟粉虱群体，选择带毒率大于50％的群体分别饲养，获得TYLCV传毒介体烟粉虱，连续5代监测其群体带毒率均大于50％，备用。

步骤三、防治效果的试验

选用感病品种：将感病品种播于1000mL烧杯中，每杯播种25株苗。待秧苗长至3叶时进行接种，接种前2d淘汰病弱苗，挑选生长一致的幼苗20株，用防虫网盖好用于接种，备用。

药剂处理：用喷雾法将药剂均匀喷洒于备用的番茄苗叶面至全部润湿，待药液自然风干后备用。每处理3盆，4次重复，并设只含溶剂和表面活性剂而不含有效成分的处理作空白对照。

接种与培养：保护性试验一般为药剂处理后24h左右进行接种；治疗性药剂一般在药剂处理前24h接种。采用传毒介体烟粉虱接种，接种时间48h，接种强度4头/株和番茄接种龄期3～4叶龄。按有效接种虫量4头/株将2～4龄接入杯中，每天赶虫2次以确保被测番茄苗均匀获毒。接种后移走全部烟粉虱，再将番茄苗移栽至塑料小盆内培养。接种后在每天连续光照/黑暗各12h交替(光照强度为5000Lux～20000Lux)、温度为18～20℃的条件下培养7d。接种7d后开始调查病害，每隔1天调查1次，共调查15次。

调查：待空白对照病叶率达到50％以上时，分级调查各处理发病情况，每处理至少调查30片叶。采用如下分级方法。

0级：整株健康无黄化曲叶；1级：轻度矮化。株高为健株株高的1～4/5左右；3级：矮化。株高为健株株高的4/5～2/3左右，顶部典型黄化曲叶；5级：明显矮化。株高为健株株高的2/3～1/2左右，顶部典型黄化曲叶；7级：明显矮化。株高为健株株高的1/2～1/3左右，整株典型症状；9级：严重矮化。株高为健株株高的1/3以下，整株典型症状，或提早枯死。

步骤四、数据统计与分析

计算方法：

根据调查结果，按公式(1)、(2)计算各处理浓度对供试靶标的病情指数和防治效果。

病情指数按公式(1)计算，单位为百分率(％)。

$X=\frac{\mathrm{\Σ}(N_i\×i)}{N\×9}\×100$ ...................................(1)

式中：X——病情指数；N_i——各级病叶数；i——各级相对级数值；N_i——调查总叶数。

防治效果按公式(2)计算。

$P=\frac{\mathrm{CK}-\mathrm{PT}}{\mathrm{CK}}\×100$ .........................(2)

式中：P——防治效果，单位为百分率(％)；

CK——空白对照病情指数；PT——药剂处理病情指数.

对药剂混剂联合毒力测定，根据孙云沛法计算混剂的共毒系数(CTC)，评价混剂的联合作用类型：

孙云沛法：根据共毒系数(CTC)来评价药剂混用的增效作用，即CTC≤80为拮抗作用，80＜CTC＜120为相加作用，CTC≥120为增效作用。共毒系数(CTC)按式(3)、(4)、(5)计算：

$\mathrm{ATI}=\frac{S}{M}\×100$ ....................(3)

式中：ATI——混剂实测的毒力指数；S——标准药剂的LD₅₀，单位为毫克每升(mg/L)；M——供试混剂的LD₅₀，单位为毫克每升(mg/L)。

TTI＝TI_A×P_A+TI_B×P_B.....................(4)

式中：TTI——混剂的理论毒力指数；TI_A——A药剂的毒力指数；

P_A——A药剂在混剂中的百分含量，单位为百分率(％)；

TI_B——B药剂的毒力指数；P_B——B药剂在混剂中的百分含量，单位为百分率(％)。

$\mathrm{CTC}=\frac{\mathrm{ATI}}{\mathrm{TTI}}\×100$ ..................(5)

式中：CTC——共毒系数；ATI——混剂实测毒力指数；

TTI——混剂理论毒力指数。

结果与分析：

根据调查结果(见表1-2)，计算试验药剂的杀菌效果、毒力回归方程，结果见表1-1。

统计分析：用PBT数据处理系统软件进行分析，根据各药剂浓度对数值及对应的防治效果的几率值作回归分析，计算各药剂的LD₅₀值及其95％置信限。对药剂混剂联合毒力测定，根据孙云沛法计算混剂的共毒系数(CTC)，评价混剂的联合作用类型。

结论：

根据室内毒力测定结果，极细链格孢激活蛋白和氨基寡糖素对番茄黄化曲叶病毒病菌的室内毒力回归方程分别为：Y＝1.2495X+3.1953，Y＝1.0578X+3.5542，根据回归方程计算出极细链格孢激活蛋白和氨基寡糖素分别对番茄黄化曲叶病毒病菌的LD₅₀分别为27.8221mg/L，23.2711mg/L；而两者复配配比对番茄黄化曲叶病毒病菌的共毒系数(CTC)最高的是激活蛋白∶氨基寡糖(1∶1)组合，为493.9979，其次为激活蛋白∶氨基寡糖(1∶2)组合，为394.5271，其余三组共毒系数均大于120。可见极细链格孢激活蛋白与氨基寡糖素复配对番茄黄化曲叶病毒病菌均表现为增效，尤其是激活蛋白∶氨基寡糖(1∶1)组合对番茄黄化曲叶病毒病更敏感，活性高。

表1-1.极细链格孢激活蛋白与氨基寡糖素单剂及复配制剂对番茄黄化曲叶病毒病菌的室内毒力测定结果

表1-2：不同配比的极细链格孢激活蛋白和氨基寡糖素对番茄黄化曲叶病毒病盆栽喷雾法生物测定试验结果(14d)

实施例2：本发明对水稻条纹病毒病的防治效果试验

本试验步骤同实施例1基本相同，不同之处在于：

供试靶标为水稻条纹病毒病(Rice stripe virus，RSV)，由灰飞虱(Laodel ph xstriatellus Fallén)传播的一种病毒病菌。

步骤三中，接种与培养：采用RSV传毒介体灰飞虱Hai’an群体(H群体)接种，水稻接种龄期为0.5～1.5叶龄。

调查：采用如下分级方法：0级，无症状；1级，有轻微黄绿色斑驳症状，病叶不卷曲，植株生长正常；3级，病叶上褪绿扩展相连成不规则黄白色或黄绿色条斑，病叶不卷曲或略有卷曲，生长基本正常；5级，病叶严重褪绿，病叶卷曲呈捻转状，少数病叶出现黄化枯萎症状；7级，部分病叶卷曲呈捻转状，叶片黄化但未枯死，植株呈假枯心状；9级，大部分病叶卷曲呈捻转状，叶片黄化枯死，植株呈假枯心状或整株枯死。

步骤四中，根据调查结果(见表2-2)，计算试验药剂的杀菌效果、毒力回归方程，结果见表2-1。

结论：根据室内毒力测定结果，植物激活蛋白和氨基寡糖素对水稻条纹病毒病菌的室内毒力回归方程分别为：Y＝3.6482+1.0752X，Y＝4.1026+1.0095X根据回归方程计算出植物激活蛋白和氨基寡糖素分别对水稻条纹病毒病菌的LD50分别为18.0796mg/L，7.7443mg/L；而两者复配配比对水稻条纹病毒病菌的共毒系数(CTC)最高的是激活蛋白∶氨基寡糖(1∶1)组合，为494.0419，其次为激活蛋白∶氨基寡糖(1∶2)组合，为405.3408，其余三组共毒系数均大于120。可见植物激活蛋白与氨基寡糖素复配对水稻条纹病毒病菌均表现为增效，尤其是激活蛋白∶氨基寡糖(1∶1)组合对水稻条纹病毒病更敏感，活性高。

表2-1.植物激活蛋白与氨基寡糖素单剂及复配制剂对水稻条纹病毒病菌的室内毒力测定结果

表2-2：不同配比的极细链格孢激活蛋白和氨基寡糖素对水稻条纹病毒病盆栽喷雾法生物测定试验结果(14d)

实施例3：本发明对烟草花叶病毒病的防治效果试验

本试验步骤同实施例1基本相同，不同之处在于：

供试靶标为中国烟草普通花叶病毒(Tobacco mosaic virus，TMV)株系，带毒烟叶汁液经纯化后备用。

步骤三中，接种与培养：采用人工摩擦接种，接种时间24h，烟草接种龄期3～4叶龄。

调查：采用如下分级方法：

0级：全株无病；

1级：心叶脉明或轻微花叶，植株无明显矮化；

3级：1/3叶片花叶但不变形，或植株矮化为正常株高的3/4以上；

5级：1/3-1/2叶片花叶，或少数叶片变形、或主脉变黑，或植株矮化为正常株高的2/3-3/4；

7级：1/2-2/3叶片花叶、变形或主侧脉坏死，或植株矮化为正常株高的1/2-2/3以上；

9级：全株叶片花叶、严重变形或坏死，或植株矮化为正常株高的1/2以上。

步骤四中，根据调查结果(见表3-2)，计算试验药剂的杀菌效果、毒力回归方程，结果见表3-1。

结论：

根据室内毒力测定结果，极细链格孢激活蛋白和氨基寡糖素对烟草花叶病毒病菌的室内毒力回归方程分别为：Y＝1.0752X+3.6482，Y＝1.2314X+3.6946根据回归方程计算出极细链格孢激活蛋白和氨基寡糖素分别对烟草花叶病毒病菌的LD50分别为18.0796mg/L，11.4856mg/L；而两者复配配比对烟草花叶病毒病菌的共毒系数(CTC)最高的是激活蛋白∶氨基寡糖(1∶1)组合，为421.9000，其次为激活蛋白∶氨基寡糖(1∶2)组合和(2∶3)组合，分别为395.8233和348.0549，其余两组共毒系数均大于120。可见极细链格孢激活蛋白与氨基寡糖素复配对烟草花叶病毒病菌均表现为增效，尤其是激活蛋白∶氨基寡糖(1∶1)组合对烟草花叶病毒病更敏感，活性高。

表3-1.极细链格孢激活蛋白与氨基寡糖素单剂及复配制剂对烟草花叶病毒病菌的室内毒力测定结果

表3-2：不同配比的极细链格孢激活蛋白和氨基寡糖素对烟草花叶病毒病盆栽喷雾法生物测定试验结果(14d)

以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (4)

1.一种防治植物病毒病的生物复配制剂，其特征在于：由浓度为1000mg/L的极细链格孢激活蛋白母液和浓度为1000mg/L的氨基寡糖素母液按体积比1∶(0.5～2.0)复配而成，其中极细链格孢激活蛋白母液是将极细链格孢激活蛋白含量为10％的极细链格孢激活蛋白母药用0.1％的吐温-80水溶液稀释制得，氨基寡糖素母液是将氨基寡糖素含量为7.5％的氨基寡糖素母药用0.1％的吐温-80水溶液稀释制得。

2.根据权利要求1所述的生物复配制剂，其特征在于：由所述极细链格孢激活蛋白母液和氨基寡糖素母液按体积比1∶1复配而成。

3.权利要求1或2所述的生物复配制剂在防治植物病毒病中的应用。

4.根据权利要求3所述的生物复配制剂在防治植物病毒病中的应用，其特征在于：所述植物病毒病为番茄黄化曲叶病毒病、水稻条纹病毒病或烟草花叶病毒病。