CN102670615B - 化合物6-苄氨基嘌呤用于制备抑制脑组织氧化损伤组合物的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种化合物6-苄氨基嘌呤用于制备抑制脑组织氧化损伤组合物的应用。本申请以大量的实验为基础证实了6-BA对动物脑组织也具有抗氧化损伤作用。可以作为抗脑组织氧化损伤的活性物质，添加到药物、食品或保健品当中，抑制脑组织氧化损伤，延缓衰老抗疲劳，增强脑组织抗氧化损伤能力。其中药物可以采用医学上可接受的任何剂型，用量为900mg/kg.b.w左右。

Description

化合物6-苄氨基嘌呤用于制备抑制脑组织氧化损伤组合物的应用

技术领域

本发明涉及化合物一种化合物6-苄氨基嘌呤用于制备抑制脑组织氧化损伤组合物的应用。

背景技术

氧化损伤的积累是引起机体衰老及疾病发生的主要原因。氧的毒性不是由于氧分子本身的反应能力，而是由于氧分子还原成水的过程中产生的许多中间产物，包括超氧阴离子、过氧化氢分子、羟自由基、氢过氧基、氢过氧化物、烷氧基、烷过氧基和单线态氧，这些中间产物习惯被称为自由基。由于自由基是具有不配对电子的原子、分子或离子，具有得到或失去电子的倾向，因此其性质特别活泼，具有很高的反应活性，极易与其它物质发生反应生成新的自由基或氧化物。在有机体的生命活动过程中，自由基的产生、淬灭、利用和损伤作用是几乎同时进行的对立统一过程。在生理状况下，机体内氧自由基的产生和清除处于动态平衡状态，动物体内有一套完整的防御系统来保护机体不受自由基的伤害。但在病态和衰老的情况下，机体不能有效清除产生的氧自由基，这些过剩的自由基主要通过脂质过氧化作用损伤蛋白质与核酸等生物分子致使组织损伤而发生疾病。

大脑是人体的神经中枢，可以消耗人体需氧量的1/4左右，由于耗氧量大，产生的氧自由基多；过多的自由基，将会造成氧化损伤。因此，脑组织氧化损伤是动物和人体所面临的一个非常常见和严重的问题，它可引起动物和人体的衰老和其他疾病的发生，加重机体的衰老和病变。目前，市场上有许多抗脑组织氧化损伤的物质，但是大多数都有不易提取获得、纯度不高、有效成分不明确、价格高等缺点，给应用带来了很大的麻烦。由此，开发一种来源广，纯度高，成分明确，效果好，安全无毒无害的抗脑组织细胞氧化损伤的物质将是非常迫切且具有重要意义的任务。

发明内容

本发明的目的是提供一种化合物6-苄氨基嘌呤在制备抗脑组织氧化损伤药物上的应用。

所述的组合物为食品、药物或保健品。

所述的脑组织氧化损伤是由氧自由基导致的。

所述化合物6-苄氨基嘌呤用于提高氧化损伤脑组织中的T-SOD活性。

所述化合物6-苄氨基嘌呤用于提高氧化损伤脑组织中的GSH-Px活性。

所述化合物6-苄氨基嘌呤用于降低氧化损伤脑组织中的MDA含量。

6-苄氨基嘌呤(6-Benzylaminopurine，6-BA)，1952年美国wellcome research实验室合成，六十年代日本将其商品化，是第一个人工合成的细胞分裂素。6-BA分子式为C₁₂H₁₁N₅，结构式如下：

纯品为白色结晶，工业品为白色或浅黄色，无臭，熔点235℃，在酸、碱中稳定，光、热不易分解。水中溶解度小，为60毫克/升，在乙醇、酸中溶解度较大。它具有抑制植物叶内叶绿素、核酸、蛋白质的分解，保绿防老；将氨基酸、生长素、无机盐等向处理部位调运等多种效能，具有稳定、廉价和易于使用等特点，且是一种对人、畜安全的植物生长调节剂，因此广泛用在农业、果树和园艺作物从发芽到收获的各个阶段。

6-BA在植物方面的抗氧化抗衰老的作用是非常明显的，在动物和人体上的应用还未见相关报道。本申请以大量的实验为基础证实了6-BA对动物脑组织也具有抗氧化损伤作用。可以作为抗脑组织氧化损伤的活性物质，添加到药物、食品或保健品当中，抑制脑组织氧化损伤，延缓衰老抗疲劳，增强脑组织抗氧化损伤能力。其中药物可以采用医学上可接受的任何剂型，用量为900mg/kg.b.w左右。

附图说明

图1是实施例1对照组(I组)小鼠海马CA3区组织切片显微镜1000倍照片；

图2是实施例1模型组(II组)小鼠海马CA3区组织切片显微镜1000倍照片；

图3是实施例16-BA低剂量组(III组)小鼠海马CA3区组织切片显微镜1000倍照片；

图4是实施例16-BA高剂量组(IV组)小鼠海马CA3区组织切片显微镜1000倍照片。

具体实施方式

以下采用实施例来进一步说明化合物6-苄氨基嘌呤在制备抗脑组织氧化损伤药物上的应用。

实施例

通过试验动物及损伤模型来试验6-苄氨基嘌呤在提高脑组织抗氧化损伤能力方面的作用，D-半乳糖(D-gal)是一种常用的氧自由基诱发剂，摄入小鼠体内会产生氧自由基从而构建小鼠体内的脑组织氧化损伤环境，利用摄入6-苄氨基嘌呤测试其对抑制脑组织氧化损伤的作用。本实施例仅用以说明而非限定本发明的用途，对于其它自由基诱发剂或自然因素的脑组织氧化损伤会起到相同的作用。

1.试验药品和试剂：6-BA，购于厦门星隆达化学试剂有限公司，由美国Sanland公司生产，用0.06mol/L的盐酸配制成1000mg/L、2000mg/L的储备液；丙二醛(MDA)检测试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测试剂盒、总超氧化物歧化酶(T-SOD)检测试剂盒和考马斯亮兰试剂盒，均为南京建成生物工程研究所生产；D-半乳糖(D-gal)：国药集团化学试剂有限公司生产。

2.试验动物：健康昆明系小白鼠，雄性，体重(20.0±2.0)g，购自河南科技大学动物医学院。

3.动物分组和处理：将小鼠随机分为4组，具体分组和处理方法如下，I组为对照组、II组为衰老模型组、III组和IV组为6-BA保护组(III组为低剂量组，IV为高剂量组)。III组和IV组每天分别灌胃20mg·kg^-1和40mg·kg^-1的6-BA，并同时颈背部皮下注射125mg·kg^-1D-gal；II组每天灌胃等量的稀盐酸，颈背部皮下注射125mg·kg^-1的D-gal；I组每天灌胃等量的稀盐酸，颈背部皮下注射与D-gal等量的生理盐水；连续处理6周，每周称重，调节给药量。

处理结束后，小鼠禁食24小时，每组随机抽取10只小鼠，快速脱颈椎处死小鼠。用冷生理盐水漂洗后制成10％的组织匀浆，离心，取上清液，准备检测各项指标。另每组随机抽取3只小鼠，准备制作石蜡切片。

4.试验指标的检测

4.1总蛋白的测定：按说明书的要求，在测定抗氧化酶和MDA之前，先测定10％脑组织匀浆中的总蛋白含量，以考马斯亮兰法，用紫外可见分光光度计在540nm处测定各管吸光度(A)值，按下列公式计算各管的蛋白含量。

蛋白含量(g/L)＝(测定管A值/标准管A值)*标准管浓度(g/L)

4.2T-SOD活力测定：取10％脑组织匀浆，用生理盐水稀释成1％组织匀浆后通过黄嘌呤氧化酶法参照试剂盒说明，用紫外可见分光光度计在550nm处比色，测定吸光度，计算T-SOD活力。

4.3GSH-Px活性测定：取10％脑组织匀浆用生理盐水稀释成0.8％的匀浆液后，通过DTNB法参照试剂盒说明，用紫外可见分光光度计在412nm处比色，测定吸光度，计算GSH-Px活力。

4.4MDA含量测定：取10％脑组织匀浆用生理盐水稀释成5％匀浆液后通过TBA法参照试剂盒说明，用紫外可见分光光度计在532nm处比色，测定吸光度，计算MDA活力。

4.5组织切片的制作：将随机抽取的3只小鼠，分别给予30g/L巴比妥腹腔注射麻醉，通过左心室灌注37℃生理盐水来冲净血液，再灌注4℃的4％多聚甲醛磷酸缓冲液，固定6小时，开颅取脑后，侵入10％甲醛溶液中固定24～48小时。随后经冲洗、脱水、透明、浸腊和包埋后，用切片机对海马部位做连续冠状切片，厚度7～8μm。之后脱蜡行HE染色，再经脱水封片后用显微镜观察并拍照。

4.6数据分析：试验结果均以X±SD表示，并采用SPSS11.5统计软件进行单因素方差分析，组间差异显著性采用Duncan检验法。本专利的X，指的是平均值，SD指标准差。

5.试验结果

5.1脑组织匀浆中T-SOD活力的测定结果

脑组织匀浆T-SOD活力的测定结果见表1。II组即模型组小鼠T-SOD的活力比I组即对照组显著降低，表明D-gal能通过干扰抗氧化酶活力来诱导小鼠衰老。III和IV组脑组织匀浆T-SOD的活力均显著高于II组，表明6-BA能明显提高D-gal致衰老小鼠脑组织中的T-SOD活性。

表1各组小鼠脑匀浆中T-SOD活力(X±S)

注：*与对照组相比，差异显著(P＜0.05)；^Δ与模型组相比差异显著(P＜0.05)

5.2脑组织匀浆中GSH-Px活力的测定结果

脑组织匀浆中GSH-Px活力的检测结果见表2。模型组(II组)的GSH-Px活力为16.21U/mgprot，与空白对照组(I组)27.80U/mgprot相比，显著下降(P＜0.05)。III和IV组，GSH-Px活力分别达到21.56U/mgprot和25.72U/mgprot显著高于模型组(II组)。表明6-BA能明显提高D-半乳糖致衰老小鼠脑组织中的GSH-Px活性。

表2各组小鼠脑组织匀浆中GSH-Px活力情况(X±S)

注：*与对照组相比，差异显著(P＜0.05)；^Δ与模型组相比差异显著(P＜0.05)

5.3脑组织匀浆中MDA含量的测定结果

脑组织匀浆中MDA含量的测定结果见表3。模型对照组(II组)的MDA活力升高达到255.61nmol/mgprot，与空白对照组(I组)142.76nmol/mgprot有显著性差异(P＜0.05)。III和IV组与II组相比，MDA含量显著降低，表明6-BA能明显降低D-gal致衰老小鼠脑组织中MDA的产生量。

表3各组小鼠脑组织匀浆中MDA含量情况(X±S)

注：*与对照组相比，差异显著(P＜0.05)；^Δ与模型组相比差异显著(P＜0.05)。

5.4HE染色观察各组小鼠脑组织形态结构变化

如图1所示，对照组小鼠大脑海马CA3区神经细胞排列紧密而整齐，形态正常，结构完整，细胞核呈圆形，无肿胀，染色均匀。如图2所示模型组小鼠大脑海马CA3区神经元分布稀疏，锥体细胞数量明显减少，排列紊乱，胞体肿胀，胞膜溶解，部分细胞有空泡产生，胞核由正常的圆形变成椭圆形。如图3、4所示6-BA低剂量组和高剂量组小鼠大脑海马CA3区神经细胞排列较模型组整齐，正常细胞数目增多，胞核肿胀现象减弱。证实，6-BA对D-gal引起的海马CA3区神经细胞形态损伤有很好的保护作用。

Claims (8)

1.一种化合物6-苄氨基嘌呤用于制备抑制脑组织氧化损伤组合物的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的组合物为食品、药物或保健品。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的脑组织氧化损伤是由氧自由基导致的。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的脑组织氧化损伤为由D-半乳糖引起的海马CA3区神经细胞形态损伤。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述化合物6-苄氨基嘌呤用于提高氧化损伤脑组织中的总超氧化物歧化酶活性。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述化合物6-苄氨基嘌呤用于提高氧化损伤脑组织中的谷胱甘肽过氧化物酶活性。

7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述化合物6-苄氨基嘌呤用于降低氧化损伤脑组织中的丙二醛含量。

8.根据权利要求5或6或7所述的应用，其特征在于，所述氧化损伤脑组织是由D-半乳糖引起的。

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