CN102670507A

CN102670507A - 7-乙基-10-羟基喜树碱长循环热敏脂质体及制备方法

Info

Publication number: CN102670507A
Application number: CN2011100531685A
Authority: CN
Inventors: 吴小明
Original assignee: SUZHOU FAMO BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: SUZHOU FAMO BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2011-03-07
Filing date: 2011-03-07
Publication date: 2012-09-19

Abstract

本发明属于医药技术领域，涉及一种7-乙基-10-羟基喜树碱长循环热敏脂质体冻干粉针及制备方法。其特征是含有：7-乙基-10-羟基喜树碱1％-30％，磷脂10％-90％，十八胺0％-10％，冻干保护剂0％-70％，辅料G 0％-50％，抗氧化剂0.001％-50％，胆固醇0％-30％，热敏辅料H0％-50％，缓冲液适量。本发明的7-乙基-10-羟基喜树碱长循环热敏脂质体水溶性及稳定性提高、毒性降低。

Description

7-乙基-10-羟基喜树碱长循环热敏脂质体及制备方法

技术领域

本发明技术领域涉及抗肿瘤药物新剂型的设计与制备，提供了一种7-乙基-10-羟基喜树碱长循环热敏脂质体及制备方法。

背景技术

7-乙基-10-羟基喜树碱是伊立替康的活性代谢产物，属于拓扑异构酶I抑制剂。伊立替康是辉瑞(Pfizer)旗下的产品，商品名为Camptosar，2000年FDA批准其为晚期结肠癌的一线治疗药物。体外细胞毒性试验表明，对某些肿瘤细胞系，7-乙基-10-羟基喜树碱的抗肿瘤活性是伊立替康的1000倍以上。虽然7-乙基-10-羟基喜树碱具有很强的抗肿瘤活性，但其在大部分生物相容和药剂学上可接受的溶剂中都不溶解，限制了其发展。

脂质体是指由磷脂为膜材及附加剂组成的封闭囊泡，具有双分子层结构。其结构类似生物膜，可包封水溶性和脂溶性药物，具有提高药物稳定性，减少药物用量，降低毒性，减轻免疫反应，延缓释放，降低体内消除速度，改变药物在体内分布等优点。作为药物载体，脂质体可用于肿瘤、感染性疾病、心血管疾病和皮肤病等的治疗。基于脂质体的独特性能，对其研究一直没有停止过，国外已上市的脂质体有阿霉素、柔红霉素、阿糖胞苷、两性霉素B、益康唑、长效阿霉素等，并有多个脂质体处于临床或临床前研究中。长循环脂质体是用高分子物质修饰或包覆的脂质体制剂，由于脂质体表面被修饰或包覆上高分子物质，其立体位阻保护脂质体不被血液中的调理素识别、摄取，从而使脂质体的清除速度减慢，在血液中的滞留时间明显延长，有利于肿瘤组织及病理部位对药物的吸收。热敏脂质体在高于生理温度的条件下可有效地将药物释放到靶部位，包封抗肿瘤药物的热敏脂质体与肿瘤热疗相结合治疗肿瘤的效果更好：①在脂质体的相转变温度附近提高药物的选择性释放；②热疗使肿瘤外周血循环增强，微血管和组织细胞渗透性增强，使抗肿瘤药物在网状内皮系统的蓄积增加；③使肿瘤细胞对脂质体释放的药物更易接受和渗入，促进药物扩散和内吞进入肿瘤细胞，减少肿瘤细胞的耐药性。

单纯热敏脂质体和单纯长循环脂质体都有不足：热敏脂质体虽然有明确的“被动”靶向性，但在血液中滞留时间短，未到达加热靶区部位时已部分被破坏，影响了治疗效果；而单纯长循环脂质体只是在体内滞留时间较长，但不具有在特定部位释药的“被动”靶向性。为了取长补短，我们制备了7-乙基-10-羟基喜树碱长循环热敏脂质体，这种长循环热敏脂质体既具有热敏性，又具有在生物体内稳定的长循环性，是真正意义的“靶向”制剂。

将7-乙基-10-羟基喜树碱制备成长循环热敏脂质体是解决其临床给药困难，给药时易产生副作用的一种有效途径，从而可以解决相应问题：

1.解决了7-乙基-10-羟基喜树碱溶解度低的问题。

2.有效的提高了7-乙基-10-羟基喜树碱的治疗指数和患者的耐受性。

发明内容

本发明的目的是为了解决7-乙基-10-羟基喜树碱在大部分生物相容和药剂学上可接受的溶剂中溶解度低和副作用大的问题，而制备了长循环热敏脂质体。

本发明通过以下措施实现：

7-乙基-10-羟基喜树碱长循环热敏脂质体的配方包括：7-乙基-10-羟基喜树碱1％-30％，磷脂10％-90％，十八胺0％-10％，冻干保护剂0％-70％，辅料G 0％-50％，抗氧化剂0.001％-50％，胆固醇0％-30％，热敏辅料H 0％-50％，缓冲液适量。

其磷脂采用天然磷脂或合成磷脂中的一种或几种。天然磷脂为蛋黄磷脂、大豆磷脂或各种动物来源的磷脂；合成磷脂为氢化卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱。

其冻干保护剂包括甘露醇、葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、海藻糖。

其辅料G为聚乙二醇或聚山梨醇酯或二硬脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000共聚物。

其抗氧剂为半胱氨酸、丙二醇、蛋氨酸、丁羟基茴香醚、丁羟基甲苯、二硫代氨基苯甲酸类、二叔丁基对甲酚、甘油、枸橼酸、焦亚硫酸钠、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、磷酸及其盐、硫代硫酸钠、硫二丙酸、没食子酸丙酯、苹果酸、羟基香豆素、氢醌、山梨醇、叔丁基对羟基茴香醚、维生素E、亚磷酸及其盐、亚硫酸氢盐、亚硫酸盐中的一种或一种以上的混合物。

其热敏辅料H选自单棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二亚油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰胆碱、聚己内酯、聚乳酸、聚氧乙烯脂肪酸醚、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚乙交酯丙交酯、肉豆蔻酰溶血磷脂酰胆碱中的一种或一种以上的混合物。

其缓冲盐溶液为醋酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、氨-氯化铵缓冲液、巴比妥缓冲液、枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液、甲酸钠缓冲液、邻苯二甲酸盐缓冲液、磷酸-三乙胺缓冲液、硼砂-氯化钙缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、乙醇-醋酸缓冲液中的一种或一种以上的混合物。

本发明的制备方法包括薄膜分散法、冻融法、冷冻干燥法、逆向蒸发法、注入法以及以上任意两种或多种结合使用的方法。

我们研究了实施例1中样品的药物代谢动力学特性。选取成年雄性健康SD大鼠10只，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，随机分成2组。以8mg/kg的剂量分别经尾静脉缓慢注射给予7-乙基-10-羟基喜树碱长循环热敏脂质体冻干粉针和7-乙基-10-羟基喜树碱，于给药后0.25、0.5、1、2、4、8、12、16、24h经眼眶取血，HPLC方法检测各时间点血药浓度。大鼠体内的药时曲线数据用中国药理学会数学药理委员会编制的3p97药代动力学软件进行处理。结果表明，7-乙基-10-羟基喜树碱长循环热敏脂质体冻干粉针和7-乙基-10-羟基喜树碱静脉注射的消除半衰期(t_1/2)分别为13.8h和1.39h，前者是后者的9.93倍，AUC前者是后者的3.37倍，与对照组比较，两者均具有显著性差异(P＜0.05)。由此说明7-乙基-10-羟基喜树碱长循环热敏脂质体冻干粉针改变了其在大鼠体内的药物动力学特性，增加了7-乙基-10-羟基喜树碱亲脂性和在体内的滞留时间，为提高疗效和降低毒副作用提供了实验依据。

本发明的有益效果表现在：增加了7-乙基-10-羟基喜树碱亲脂性和在体内的滞留时间；提高了7-乙基-10-羟基喜树碱的治疗指数和患者的耐受性。

具体实施方式

实施例1

处方：

制备工艺：

取处方量7-乙基-10-羟基喜树碱、大豆卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰甘油、二硬脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000共聚物、胆固醇、α-生育酚溶解于无水乙醇，再加入含有十八胺的少量PBS溶液，40-45℃真空旋转拉膜，用10mL含3％乳糖的pH5.0PBS水化，水浴超声，过纳米机循环6次，过孔径0.22μm的微孔滤膜，然后分装到西林瓶中，-18℃预冻24h，转移至冷冻干燥机中冷冻干燥，即得。

实施例2

处方：

制备工艺：

取处方量7-乙基-10-羟基喜树碱、蛋黄卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰甘油、二硬脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000共聚物、胆固醇、α-生育酚置于茄形瓶中，加入适量的三氯甲烷和甲醇的混合溶液(3∶1)溶解，再加入含有十八胺的少量PBS溶液，旋转蒸发仪中水浴减压除去有机溶剂，加入适量PBS(pH7.4)-乳糖溶液，50℃，旋转水化30min，减压脱气，置于高压均质机中，依次通过200nm、100nm、80nm的聚碳酸酯膜，冷冻干燥，即得。

实施例3

处方：

制备工艺：

将处方量7-乙基-10-羟基喜树碱、注射用豆磷脂、维生素E、胆固醇、二棕榈酰磷脂酰胆碱溶解于氯仿∶甲醇(2∶1)中并倒入梨形瓶，再加入含有十八胺的少量缓冲液溶液，60℃水浴条件下旋转蒸干有机溶剂，使在玻璃瓶壁上形成干膜，将处方量PEG4000溶解在200mL含蔗糖的缓冲溶液中，倒入梨形瓶中在40转/秒，室温条件下旋转水化直至将瓶壁上的干膜完全洗脱下来为止，并将所得粗混悬液在室温条件下水化1小时。所得粗混悬液依次通过0.8μm微孔滤膜1次，0.45μm微孔滤膜3次，0.22μm微孔滤膜3次，0.1μm微孔滤膜3次，得最终混悬液，装瓶，罐封氮气，冷冻干燥，即得。

实施例4

处方：

制备工艺：

将处方量7-乙基-10-羟基喜树碱、卵磷脂、胆固醇、二硬脂酰磷脂酸胆碱、半胱氨酸溶解于氯仿∶甲醇(3∶1)中并倒入梨形瓶，再加入含有十八胺的缓冲盐溶液，超声使成均匀乳，旋转蒸发仪上减压除尽有机溶剂，使成凝胶，涡流振荡间隔减压蒸馏，得白色均匀脂质体溶液，再用含有PEG4000的乳糖-缓冲溶液定容至300mL，再通过加压过膜(0.22μm)整粒除热原，分装至西林瓶中冷冻干燥，即得。

实施例5

处方：

制备工艺：

将处方量7-乙基-10-羟基喜树碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、维生素E溶解于氯仿∶甲醇(2∶1)中并倒入梨形瓶，再加入含有十八胺的少量缓冲盐溶液，超声使成均匀乳，旋转蒸发仪上减压除尽有机溶剂，使成凝胶，涡流振荡间隔减压蒸馏，得白色均匀脂质体溶液，将处方量PEG4000溶解在200mL含麦芽糖的缓冲溶液中，再通过加压过膜(0.22μm)整粒除热原，分装至西林瓶中冷冻干燥，即得。

实施例6

处方：

制备工艺：

将处方量7-乙基-10-羟基喜树碱、氢化卵磷脂、苹果酸、胆固醇、聚乙交酯丙交酯溶解于氯仿∶甲醇(2∶1)中并倒入梨形瓶，再加入含有十八胺的少量缓冲盐溶液，在30转/秒，60℃水浴条件下旋转蒸干有机溶剂，使在玻璃瓶壁上形成干膜，将处方量PEG4000、甘露醇溶解在500mL缓冲盐溶液中，倒入梨形瓶中在40转/秒，室温条件下旋转水化直至将瓶壁上的干膜完全洗脱下来为止，并将所得粗混悬液在室温条件下水化1小时。所得粗混悬液依次通过0.8μm微孔滤膜1次，0.45μm微孔滤膜3次，0.22μm微孔滤膜3次，0.1μm微孔滤膜3次，得最终混悬液，装瓶，罐封氮气，冷冻干燥，即得。

实施例7

处方：

制备工艺：

将处方量7-乙基-10-羟基喜树碱、卵磷脂、胆固醇、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、维生素E溶解于氯仿∶甲醇(2∶1)中并倒入梨形瓶，再加入含有十八胺的少量缓冲盐溶液，超声使成均匀乳，旋转蒸发仪上减压除尽有机溶剂，使成凝胶，涡流振荡间隔减压蒸馏，得白色均匀脂质体溶液，将处方量聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯溶解在200mL含麦芽糖的缓冲溶液中，再通过加压过膜(0.22μm)整粒除热原，分装至西林瓶中冷冻干燥，即得。

Claims

1.7-乙基-10-羟基喜树碱长循环热敏脂质体，其特征是含有：7-乙基-10-羟基喜树碱1％-30％，磷脂10％-90％，十八胺0％-10％，冻干保护剂0％-70％，辅料G 0％-50％，抗氧化剂0.001％-50％，胆固醇0％-30％，热敏辅料H 0％-50％，缓冲液适量。

2.根据权利要求1所述的7-乙基-10-羟基喜树碱长循环热敏脂质体，其特征在于：所述磷脂为天然磷脂或合成磷脂中的一种或几种。

3.根据权利要求2所述的7-乙基-10-羟基喜树碱长循环热敏脂质体，其特征在于：所述天然磷脂为蛋黄磷脂、大豆磷脂或各种动物来源的磷脂；合成磷脂为氢化卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱。

4.根据权利要求1所述的7-乙基-10-羟基喜树碱长循环热敏脂质体，其特征在于：所述的冻干保护剂为：单糖、双糖或多糖，单糖为甘露醇、葡萄糖，双糖为乳糖、蔗糖、麦芽糖，多糖为海藻糖。

5.根据权利要求1所述的7-乙基-10-羟基喜树碱长循环热敏脂质体，其特征在于：所述的辅料G为聚乙二醇或聚山梨醇酯或二硬脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000共聚物。

6.根据权利要求1所述的7-乙基-10-羟基喜树碱长循环热敏脂质体，其特征在于：所述的抗氧化剂为半胱氨酸、丙二醇、蛋氨酸、丁羟基茴香醚、丁羟基甲苯、二硫代氨基苯甲酸类、二叔丁基对甲酚、甘油、枸橼酸、焦亚硫酸钠、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、磷酸及其盐、硫代硫酸钠、硫二丙酸、没食子酸丙酯、苹果酸、羟基香豆素、氢醌、山梨醇、叔丁基对羟基茴香醚、维生素E、亚磷酸及其盐、亚硫酸氢盐、亚硫酸盐中的一种或一种以上的混合物。

7.根据权利要求1所述的7-乙基-10-羟基喜树碱长循环热敏脂质体，其特征在于：所述的热敏辅料H选自单棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二亚油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酸胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰胆碱、聚己内酯、聚乳酸、聚氧乙烯脂肪酸醚、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚乙交酯丙交酯、肉豆蔻酰溶血磷脂酰胆碱中的一种或一种以上的混合物。

8.根据权利要求1所述的7-乙基-10-羟基喜树碱长循环热敏脂质体，其特征在于：所述的缓冲液为醋酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、氨-氯化铵缓冲液、巴比妥缓冲液、枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液、甲酸钠缓冲液、邻苯二甲酸盐缓冲液、磷酸-三乙胺缓冲液、硼砂-氯化钙缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、乙醇-醋酸缓冲液中的一种或一种以上的混合物。