CN102659876B - 从紫花碎米荠中提取的黄酮苷及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及从紫花碎米荠中提取的黄酮苷及其制备方法，可有效解决从紫花碎米荠中提取黄酮苷的问题，该黄酮苷为山柰酚-3-O-[2′′-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6′′-O-(2′′′′-O-阿魏酰基-β-D-葡萄糖基)]-β-D-吡喃葡萄糖苷，分子式是C43H48O24，提取方法是，将干燥紫花碎米荠地上部分用丙酮组织破碎提取，提取液减压回收，真空干燥后得到干粉，干粉用水溶解，离心，上清液上大孔吸附树脂柱，依次用水、甲醇冲柱至洗脱液流出无色，收集洗脱液，减压回收，真空干燥后得到干粉，用水溶解，离心，上清液上凝胶柱，用水冲柱，经薄层色谱检识合并含有目标成分的流份，得到组分A，分离纯化，即得，本发明化合物促进脾淋巴细胞和胸腺淋巴细胞的增殖，具有免疫调节作用，制备方法先进、科学，操作方便，可靠性强。

Description

从紫花碎米荠中提取的黄酮苷及其制备方法
技术领域
本发明涉及医药，特别是一种从紫花碎米荠中提取的黄酮苷及其制备方法。
背景技术
紫花碎米荠是碎米荠属(Cardamine)植物紫花碎米荠(Cardamine tangutorum)的干燥地上部分，分布于河北、山西、陕西、甘肃、青海、四川、云南等省。生于海拔2100-4400米的高山山沟草地及林下阴湿处。紫花碎米荠在民间以全草食用；亦供药用，其味辛，性温，具有清热利湿，平肝潜阳的功效，可用于治疗黄水疮；花治筋骨疼痛。
紫花碎米荠在我国分布广泛，资源十分丰富，并且具有显著和多样的临床作用和药理活性。紫花碎米荠为何具有药用价值，其活性成分如何提取，至今未见有公开报导。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种从紫花碎米荠中提取的黄酮苷及其制备方法，可有效解决从紫花碎米荠中提取黄酮苷，并通过采用MTT法检测该化合物对Con A刺激后的脾淋巴细胞和胸腺淋巴细胞增殖的影响，以观察该化合物的免疫调节作用，为进一步的研究奠定基础的问题。
本发明解决的技术方案是，该提取的黄酮苷为山柰酚-3-O-[2″-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6″-O-(2″″-O-阿魏酰基-β-D-葡萄糖基)]-β-D-吡喃葡萄糖苷，分子式是C43H48O24，结构式如图1所示；
其比旋光度为[α]D20-17(c,0.12,MeOH)，其制备方法是：将干燥紫花碎米荠地上部分，室温（15-25℃）下在闪式提取器中用紫花碎米荠重量10-12倍的体积浓度为50%丙酮组织破碎提取三次，每次15-20分钟，合并提取液，于45℃减压回收溶剂，真空干燥后得到干粉，干粉用水溶解，离心，上清液上大孔吸附树脂（Diaion HP-20）柱，用水冲柱至洗脱液流出无色、用体积浓度10%甲醇冲柱至洗脱液流出无色、用体积浓度20%甲醇冲柱至洗脱液流出无色、最后用体积浓度30%甲醇冲柱至洗脱液流出无色，收集30%甲醇洗脱液，减压回收溶剂，真空干燥后得到干粉，用水充分溶解，离心，上清液上凝胶（Toyopearl HW-40C）柱，用水冲柱，经薄层色谱检识合并含有目标成分的流份，得到组分A，组分A依次通过凝胶ToyopearlHW-40C柱、凝胶Sephadex LH-20柱、硅胶柱、MCI Gel CHP-20柱，反复分离纯化，得到黄色固体，然后，采用MTT法检测该化合物对Con A刺激后的脾淋巴细胞和胸腺淋巴细胞增殖活性的影响，发现具有较强的促增殖作用。
本发明是一种从紫花碎米荠中提取的化合物，具有免疫调节作用，其制备方法新颖独特，先进、科学，操作方便，经对河南、河北、山西的紫花碎米荠样品按上述方法经反复应用制备，并通过MTT法检测促增殖活性，均取得了相同或相近似的结果，表明本发明可靠性强，有效解决了对各地从紫花碎米荠中提取山柰酚-3-O-[2″-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6″-O-(2″″-O-阿魏酰基-β-D-葡萄糖基)]-β-D-吡喃葡萄糖苷，为紫花碎米荠的应用提供了有利的技术手段和药用价值，经济和社会效益巨大。
附图说明
图1为山柰酚-3-O-[2″-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6″-O-(2″″-O-阿魏酰基-β-D-葡萄糖基)]-β-D-吡喃葡萄糖苷的结构图。
图2为山柰酚-3-O-[2″-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6″-O-(2″″-O-阿魏酰基-β-D-葡萄糖基)]-β-D-吡喃葡萄糖苷的主要HMBC相关图。
图3为山柰酚-3-O-[2″-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6″-O-(2″″-O-阿魏酰基-β-D-葡萄糖基)]-β-D-吡喃葡萄糖苷的1H-NMR图谱。
图4为山柰酚-3-O-[2″-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6″-O-(2″″-O-阿魏酰基-β-D-葡萄糖基)]-β-D-吡喃葡萄糖苷的13C-NMR图谱。
图5为山柰酚-3-O-[2″-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6″-O-(2″″-O-阿魏酰基-β-D-葡萄糖基)]-β-D-吡喃葡萄糖苷的HSQC图谱。
图6为山柰酚-3-O-[2″-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6″-O-(2″″-O-阿魏酰基-β-D-葡萄糖基)]-β-D-吡喃葡萄糖苷的HMBC图谱。
图7为山柰酚-3-O-[2″-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6″-O-(2″″-O-阿魏酰基-β-D-葡萄糖基)]-β-D-吡喃葡萄糖苷的1H-1H COSY图谱。
图8为山柰酚-3-O-[2″-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6″-O-(2″″-O-阿魏酰基-β-D-葡萄糖基)]-β-D-吡喃葡萄糖苷的TOCSY图谱。
图9为山柰酚-3-O-[2″-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6″-O-(2″″-O-阿魏酰基-β-D-葡萄糖基)]-β-D-吡喃葡萄糖苷的IR图谱。
图10为山柰酚-3-O-[2″-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6″-O-(2″″-O-阿魏酰基-β-D-葡萄糖基)]-β-D-吡喃葡萄糖苷的HR-ESI-MS图谱。
图11为山柰酚-3-O-[2″-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6″-O-(2″″-O-阿魏酰基-β-D-葡萄糖基)]-β-D-吡喃葡萄糖苷对ConA刺激的脾淋巴细胞和胸腺淋巴细胞增殖的影响。
具体实施方式
以下结合实施例及相关试验对本发明的具体实施方式作详细说明。
本发明所用的紫花碎米荠经鉴定为十字花科(Cruciferae)碎米荠属(Cardamine)植物紫花碎米荠(Cardamine tangutorum)。柱层析填料Diaion HP-20、MCI Gel CHP-20为日本三菱化学公司生产，Toyopearl HW-40为日本TOSOH公司生产，Sephadex LH-20为Parmacia Biotech公司生产，柱层析所用硅胶H由青岛海洋化工厂生产(160-200目)，薄层层析硅胶为青岛海洋化工厂生产(颗粒范围10-40μm)，以0.5%CMC-Na制板，阴干，105℃活化0.5h。RPMI-1640培养基购自Gibco Invitrogen公司，MTT、DMSO为Amresco公司产品。
核磁共振由DPX-400(400MHz for 1H-NMR and 100MHz for 13C-NMR)核磁共振仪测定，TMS为内标，由郑州大学分析测试中心代测。质谱仪型号为APEX II，红外分光光度计型号为Shimadzu FTIR-8201，均由河南省科学院化学研究所代测。N-1000型旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司），SHB-95B型循环水式多用真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司），DFZ-3型真空干燥箱（上海医用恒温设备厂），闪式提取器由北京金鼐科技发展有限公司提供。二氧化碳培养箱（REVCO），倒置显微镜（NIKON ECLIPSE TS100），超净工作台（江苏苏净集团），酶标仪（BIO-RAD Model 680），微量加样器（Nichipet EXPLUS）。
实验动物清洁级Balb/c小鼠，雄性，8-10周龄，体重(20±2)g[河南省实验动物中心，合格证号:SCXK(豫)2010-0002]。
实施例1
将河南产干燥紫花碎米荠地上部分2.5kg，室温20℃下在闪式提取器中用紫花碎米荠重量10倍的体积浓度为50%丙酮组织破碎提取三次，每次18分钟，合并提取液，于45℃减压回收溶剂，真空干燥后得到干粉，干粉用水溶解，离心，上清液上大孔吸附树脂Diaion HP-20柱，用水冲柱至洗脱液流出无色，用体积浓度10%甲醇冲柱至洗脱液流出无色，用体积浓度20%甲醇冲柱至洗脱液流出无色，最后用体积浓度30%甲醇冲柱至洗脱液流出无色，收集30%甲醇洗脱液，减压回收溶剂，真空干燥后得到干粉8.9g，用水充分溶解，离心，上清液上凝胶Toyopearl HW-40C柱，用水冲柱，经薄层色谱检识合并含有目标成分的流份，得到组分A，组分A依次通过凝胶Toyopearl HW-40C柱、凝胶Sephadex LH-20柱、硅胶柱、MCI Gel CHP-20柱，最后反复分离纯化，得到山柰酚-3-O-[2″-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6″-O-(2″″-O-阿魏酰基-β-D-葡萄糖基)]-β-D-吡喃葡萄糖苷11mg。
取实施例1所得的化合物，经试验证明，可显著促进胸腺淋巴细胞和脾淋巴细胞的增殖，具有免疫调节作用，有关试验情况如下：
称取0.1mg该化合物，加入RPMI-1640完全培养液(FBS：10%，5.5×10-3mg·mL-1β-二巯基乙醇，100U·mL-1青霉素和100μg·mL-1链霉素)超声溶解，0.22μm孔径滤膜过滤除菌，4℃冰箱保存备用；各组均分为空白组；ConA(终浓度为5μg·mL-1)刺激组；低、中、高剂量组；配成的药物终浓度为0.1、1、10μg·mL-1，将Balb/c小鼠颈椎脱臼致死，无菌取出胸腺、脾脏分别放入盛有含青霉素(100U·mL-1)和链霉素(100μg·mL-1)的冷PBS的培养皿中，用注射器针芯轻轻将其研碎，200目筛网过滤，离心，分别收集细胞；红细胞裂解液裂解红细胞2次，1500r·min-1，离心10min；分别用冷RPMI-1640不完全培养液洗涤细胞2次，细胞重悬于RPMI-1640完全培养液中，备用；分别以3×104个/孔和4×104个/孔的浓度接种于96孔板内；加入不同浓度的用药组，每孔终体积为200μL，37℃、5%CO2培养箱孵育；胸腺淋巴细胞体外培养24h，脾淋巴细胞体外培养48h，均在培养结束前4h，每孔加入MTT溶液（5ug/ml）20ul，37℃继续培养4h，小心吸净培养液，每孔加入150ul DMSO,震荡5~10分钟，使结晶物完全溶解；以DMSO调零，用酶标仪在570nm下测定各孔吸光度(OD)值，可间接反映活细胞数量，用以检测淋巴细胞的功能。
细胞增殖(%)=(给药组OD570nm-对照组OD570nm)/对照组OD570nm×100%，采用SPSS 13.0统计软件分析，数据均用平均数±标准差
Figure BDA00001637032200041
表示，组间比较采用单因素方差分析。
结果显示，ConA刺激后，该化合物可显著促进胸腺淋巴细胞和脾淋巴细胞的增殖，具有免疫调节作用，与空白组相比有极显著差异（P<0.01），与ConA组相比有极显著差异（P<0.01），且呈剂量依赖性；该化合物同样可显著促进脾淋巴细胞的增殖，与空白组相比有极显著差异（P<0.01），与ConA组相比同样具有极显著差异（P<0.01）。
实施例2
将河北产干燥紫花碎米荠地上部分2.0kg，室温23℃下在闪式提取器中用紫花碎米荠重量11倍的体积浓度为50%丙酮组织破碎提取三次，每次20分钟，合并提取液，于45℃减压回收溶剂，真空干燥后得到干粉，干粉用水溶解，离心，上清液上大孔吸附树脂Diaion HP-20柱，用水冲柱至洗脱液流出无色，用体积浓度10%甲醇冲柱至洗脱液流出无色，用体积浓度20%甲醇冲柱至洗脱液流出无色，最后用体积浓度30%甲醇冲柱至洗脱液流出无色，收集30%甲醇洗脱液，减压回收溶剂，真空干燥后得到干粉8.1g，用水充分溶解，离心，上清液上凝胶Toyopearl HW-40C柱，用水冲柱，经薄层色谱检视合并含有目标成分的流份，得到组分A，组分A依次通过凝胶Toyopearl HW-40C柱、凝胶Sephadex LH-20柱、硅胶柱、MCI Gel CHP-20柱，最后反复分离纯化，得到山柰酚-3-O-[2″-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6″-O-(2″″-O-阿魏酰基-β-D-葡萄糖基)]-β-D-吡喃葡萄糖苷12mg。
取实施例2所得的化合物，经试验证明，可显著促进胸腺淋巴细胞和脾淋巴细胞的增殖，具有免疫调节作用，有关试验情况如下：
称取0.1mg该化合物，加入RPMI-1640完全培养液(FBS：10%，5.5×10-3mg·mL-1β-二巯基乙醇，100U·mL-1青霉素和100μg·mL-1链霉素)超声溶解，0.22μm孔径滤膜过滤除菌，4℃冰箱保存备用；各组均分为空白组；ConA(终浓度为5μg·mL-1)刺激组；低、中、高剂量组；配成的药物终浓度为0.1、1、10μg·mL-1；将Balb/c小鼠颈椎脱臼致死，无菌取出胸腺、脾脏分别放入盛有含青霉素(100U·mL-1)和链霉素(100μg·mL-1)的冷PBS的培养皿中，用注射器针芯轻轻将其研碎，200目筛网过滤，离心，分别收集细胞；红细胞裂解液裂解红细胞2次，1500r·min-1，离心10min；分别用冷RPMI-1640不完全培养液洗涤细胞2次，细胞重悬于RPMI-1640完全培养液中，备用；分别以3×104个/孔和4×104个/孔的浓度接种于96孔板内；加入不同浓度的用药组，每孔终体积为200μL，37℃、5%CO2培养箱孵育；胸腺淋巴细胞体外培养24h，脾淋巴细胞体外培养48h，均在培养结束前4h，每孔加入MTT溶液（5ug/ml）20ul，37℃继续培养4h，小心吸净培养液，每孔加入150ul DMSO,震荡5~10分钟，使结晶物完全溶解；以DMSO调零，用酶标仪在570nm下测定各孔吸光度(OD)值，可间接反映活细胞数量，用以检测淋巴细胞的功能。
细胞增殖(%)=(给药组OD570nm-对照组OD570nm)/对照组OD570nm×100%，采用SPSS 13.0统计软件分析，数据均用平均数±标准差
Figure BDA00001637032200051
表示，组间比较采用单因素方差分析。
结果显示，ConA刺激后，该化合物可显著促进胸腺淋巴细胞和脾淋巴细胞的增殖，具有免疫调节作用，与空白组相比有极显著差异（P<0.01），与ConA组相比有极显著差异（P<0.01），且呈剂量依赖性；该化合物同样可显著促进脾淋巴细胞的增殖，与空白组相比有极显著差异（P<0.01），与ConA组相比同样具有极显著差异（P<0.01）。
实施例3
将山西产干燥紫花碎米荠地上部分1.5kg，室温25℃下在闪式提取器中用紫花碎米荠重量12倍的体积浓度为50%丙酮组织破碎提取三次，每次20分钟，合并提取液，于45℃减压回收溶剂，真空干燥后得到干粉，干粉用水溶解，离心，上清液上大孔吸附树脂Diaion HP-20柱，用水冲柱至洗脱液流出无色，用体积浓度10%甲醇冲柱至洗脱液流出无色，用体积浓度20%甲醇冲柱至洗脱液流出无色，最后用体积浓度30%甲醇冲柱至洗脱液流出无色，收集30%甲醇洗脱液，减压回收溶剂，真空干燥后得到干粉7.5g，用水充分溶解，离心，上清液上凝胶Toyopearl HW-40C柱，用水冲柱，经薄层色谱检视合并含有目标成分的流份，得到组分A，组分A依次通过凝胶Toyopearl HW-40C柱、凝胶Sephadex LH-20柱、硅胶柱、MCI Gel CHP-20柱，最后反复分离纯化，得到山柰酚-3-O-[2″-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6″-O-(2″″-O-阿魏酰基-β-D-葡萄糖基)]-β-D-吡喃葡萄糖苷10mg。
取实施例3所得的化合物，经试验证明，可显著促进胸腺淋巴细胞和脾淋巴细胞的增殖，具有免疫调节作用，有关试验情况如下：
称取0.1mg该化合物，加入RPMI-1640完全培养液(FBS：10%，5.5×10-3mg·mL-1β-二巯基乙醇，100U·mL-1青霉素和100μg·mL-1链霉素)超声溶解，0.22μm孔径滤膜过滤除菌，4℃冰箱保存备用；各组均分为空白组；ConA(终浓度为5μg·mL-1)刺激组；低、中、高剂量组；配成的药物终浓度为0.1、1、10μg·mL-1；将Balb/c小鼠颈椎脱臼致死，无菌取出胸腺、脾脏分别放入盛有含青霉素(100U·mL-1)和链霉素(100μg·mL-1)的冷PBS的培养皿中，用注射器针芯轻轻将其研碎，200目筛网过滤，离心，分别收集细胞；红细胞裂解液裂解红细胞2次，1500r·min-1，离心10min；分别用冷RPMI-1640不完全培养液洗涤细胞2次，细胞重悬于RPMI-1640完全培养液中，备用；分别以3×104个/孔和4×104个/孔的浓度接种于96孔板内；加入不同浓度的用药组，每孔终体积为200μL，37℃、5%CO2培养箱孵育；胸腺淋巴细胞体外培养24h，脾淋巴细胞体外培养48h，均在培养结束前4h，每孔加入MTT溶液（5ug/ml）20ul，37℃继续培养4h，小心吸净培养液，每孔加入150ul DMSO,震荡5~10分钟，使结晶物完全溶解；以DMSO调零，用酶标仪在570nm下测定各孔吸光度(OD)值，可间接反映活细胞数量，用以检测淋巴细胞的功能。
细胞增殖(%)=(给药组OD570nm-对照组OD570nm)/对照组OD570nm×100%，采用SPSS 13.0统计软件分析，数据均用平均数±标准差
Figure BDA00001637032200061
表示，组间比较采用单因素方差分析。
结果显示，ConA刺激后，该化合物可显著促进胸腺淋巴细胞和脾淋巴细胞的增殖，具有免疫调节作用，与空白组相比有极显著差异（P<0.01），与ConA组相比有极显著差异（P<0.01），且呈剂量依赖性；该化合物同样可显著促进脾淋巴细胞的增殖，与空白组相比有极显著差异（P<0.01），与ConA组相比同样具有极显著差异（P<0.01）。
本发明所得的化合物在结构上经对比研究和经光谱学分析，确定为山柰酚-3-O-[2″-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6″-O-(2″″-O-阿魏酰基-β-D-葡萄糖基)]-β-D-吡喃葡萄糖苷，分子式是C43H48O24，结构式如图1所示，属黄酮苷类，该化合物被称为从紫花碎米荠中提取的一种黄酮苷，有关对比研究和光谱分析资料如下：
山柰酚-3-O-[2″-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6″-O-(2″″-O-阿魏酰基-β-D-葡萄糖基)]-β-D-吡喃葡萄糖苷，黄色固体，其比旋光度为[α]D20-12(c,0.12,MeOH)；易溶于甲醇；FeCl3-K3[Fe(CN)6]试剂喷雾后加热显淡蓝色，提示该化合物中含有羟基；茴香醛-浓硫酸喷雾后加热显黄色(105℃)；HR-ESI-MS m/z:972.2473[M+Na+H]+(计算值:972.2512)，提示分子式为C43H48O24；UV：λmax MeOHnm(logε):269、327nm；IR(KBr)υmaxcm-1:3403，2925，1654，1604，,1178，1076；1H-NMR谱中，低场区，δ8.13(2H,d,J=8.8Hz,H-2′,6′)，6.85(2H,d,J=8.8Hz,H-3′,5′)为AA′BB′系统的氢质子信号；δ6.19(1H,d,J=1.3Hz,H-6)，6.43(1H,d,J=1.3Hz,H-8)为苯环间位取代的氢质子信号；δ7.21(1H,d,J=1.1Hz,H-2″″′)，7.02(1H,d,J=1.1,8.0Hz,H-6″″′)，6.85(1H,d,J=8.0Hz,H-5″″′)为ABX系统的氢质子信号；δ7.54(1H,d,J=15.8Hz,H-7″″′)，6.16(1H,d,J=15.8Hz,H-8″″′)提示存在一个反式双键，δ3.95(3H,s)处为一个甲氧基氢信号，推测含有一个阿魏酸的结构片段；另外，在δ2.86-5.35有21个氢质子信号，提示结构中可能含有三个糖，包括三个糖的端基氢的信号δ5.35(1H,d,J=7.5Hz,H-1″)，4.72(1H,d,J=6.9Hz,H-1″″)，4.39(1H,d,J=8.0Hz,H-1″′)；13C-NMR谱中，共出现43个碳信号，推测可能为黄酮苷类化合物，其中15个为母核上的碳信号，18个为糖上的碳信号，10个阿魏酰基上的碳信号。
通过TOCSY，HSQC，HMBC对各个碳氢的数据进行了归属，TOCSY和HSQC谱指认了三个糖的端基氢所对应的碳信号，其中δ5.35(1H,d,J=7.5Hz,H-1″)与δ101.5相关，δ4.72(1H,d,J=6.9Hz,H-1″′)与δ104.6相关，δ4.39(1H,d,J=8.0Hz,H-1″″)与δ101.9相关；HMBC谱显示δ8.13(H-2′,6′)与158.8(C-2)，161.7(C-4′)有远程相关；δ6.85(H-3′,5′)与122.5(C-1′)，161.7(C-4′)有远程相关；δ6.43(H-8)与100.6(C-6)，105.5(C-10)，158.5(C-9)，163.0(C-5)有远程相关；δ6.19(H-6)与95.4(C-8)，105.5(C-10)，167.0(C-7)，163.0(C-5)有远程相关；H-2″″与C-9″″′有远程相关，提示阿魏酰基连在Glc″″的2位上；H-1″″与C-6″有远程相关，提示Glc″″的1位连在Glc″的6位上；H-1″′与C-2″有远程相关，提示Glc″′的1位连在Glc″的2位上；此外，末端葡萄糖的端基氢H-1″与山柰酚母核3位碳(δ134.8)有远程相关，说明末端葡萄糖端基氢与黄酮醇3位羟基缩合成苷；且与已知化合物2山柰酚-3-(2″,6″-二-O-β-D-葡萄糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷结构相似，通过比较两者的波谱数据进一步确认了糖链的连接顺序；综上所述，该化合物结构确定为山柰酚-3-O-[2″-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6″-O-(2″″-O-阿魏酰基-β-D-葡萄糖基)]-β-D-吡喃葡萄糖苷；经文献检索未见报道，确定其为从紫花碎米荠中提取的化合物，属于黄酮苷类。
下表为化合物山柰酚-3-O-[2″-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6″-O-(2″″-O-阿魏酰基-β-D-葡萄糖基)]-β-D-吡喃葡萄糖苷的1H-NMR(400MHz,CD3OD)和13C-NMR(100MHz,CD3OD)数据
Figure BDA00001637032200071
Figure BDA00001637032200081
Figure BDA00001637032200091
注：该图给出了该化合物的碳氢归属，证明结构解析的正确性。
上述经不同地域的紫花碎米荠经反复多次提取和测试，均取得了相同或相近似的结果，证明本发明方法稳定可靠，可有效用于从紫花碎米荠中提取黄酮苷，即山柰酚-3-O-[2″-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6″-O-(2″″-O-阿魏酰基-β-D-葡萄糖基)]-β-D-吡喃葡萄糖苷，可有效用于制备促进胸腺淋巴细胞和脾淋巴细胞的增殖、具有免疫调节作用药物，实现在制备具有免疫调节作用药物中的应用，为紫花碎米荠的应用提供了有利的技术手段和药用价值，是药物上的创新，经济和社会效益巨大。

Claims (1)

1.一种从紫花碎米荠中提取的黄酮苷在制备促进脾淋巴细胞、胸腺淋巴细胞的增殖和具有免疫调节作用药物中的应用,该黄酮苷为山柰酚-3-O-[2″-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6″-O-(2″″-O-阿魏酰基-β-D-葡萄糖基)]-β-D-吡喃葡萄糖苷，分子式是C43H48O24，结构式为：
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