CN102640730B - 昆虫病原线虫的活体繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
昆虫病原线虫的活体繁殖方法，它涉及一种昆虫病原线虫的活体培养方法。本发明的目的要解决现有采用黄粉虫繁殖线虫产量低的问题。方法：首先剪两张中速定性滤纸垫在培养皿A的皿盖中，再放入斜纹夜蛾幼虫，然后采用侵染期线虫的水悬液浸润中速定性滤纸，再将培养皿A的皿底扣在培养皿A的皿盖上，至斜纹夜蛾幼虫全部死亡，然后移去培养皿A皿底，并将培养皿A皿盖置于培养皿B中，然后向培养皿B与培养皿A之间的空隙中注入无菌水，并恒温培养至无菌水中出现侵染期线虫为止，然后每天收集有侵染期线虫的无菌水，并补充无菌水，即完成昆虫病原线虫的活体繁殖。本发明主要用于活体繁殖昆虫病原线虫。
Description
技术领域
本发明涉及一种昆虫病原线虫的活体培养方法。
背景技术
昆虫病原线虫（Entomopathogenic Nematode，EPN）是害虫的重要天敌，具有广泛的寄主昆虫，是目前害虫生物防治的重要手段。由于昆虫病原线虫能够低成本、高效地大量培养，它的繁殖技术在不断地发展，从活体培养法到离体培养法，从离体培养中的无菌培养法到单菌培养法，单菌培养法又分为固相培养法和液相培养法，使其走向工厂化生产规模。但在实验室研究时一直采用Whitetrap活体繁殖法，即利用线虫的趋水性，当线虫耗尽了寄主体内的有机质时，侵染期线虫(IJs)从寄主尸体内钻出，向水源移动，将含有线虫的水收集起来即得到扩繁后的大量线虫。寄主昆虫多数采用大蜡螟（Galleria mellonella Linnaeus）和黄粉虫（Tenebrio molitor），但用大蜡螟成本较高，用黄粉虫繁殖出来的线虫产量低（Lowtek法1g黄粉虫可繁殖Hb-1和Sc-2线虫2.03×104条和3.53×104条），致病力差。
发明内容
本发明的目的要解决现有采用黄粉虫繁殖线虫存在产量低的问题，而是提供昆虫病原线虫活体繁殖方法。
一种昆虫病原线虫的活体繁殖方法，具体是按以下步骤完成的：首先按培养皿A的皿盖大小裁剪两张中速定性滤纸，并垫在培养皿A的皿盖中，再将8～12头5龄斜纹夜蛾幼虫放在培养皿A皿盖中的中速定性滤纸上，然后采用0.4mL～0.6mL的5500条/mL～6500条/mL侵染期线虫的水悬液浸润培养皿A皿盖中的中速定性滤纸，再将培养皿A的皿底扣在培养皿A的皿盖上，至8～12头5龄斜纹夜蛾幼虫全部死亡，然后移去培养皿A皿底，并将培养皿A皿盖置于培养皿B中，然后向培养皿B与培养皿A之间的空隙中注入无菌水，且无菌水的高度低于培养皿A皿盖上沿，并在24℃～26℃下恒温培养至无菌水中出现侵染期线虫为止，然后每天收集有侵染期线虫的无菌水，且收集后补充无菌水，每次补充的无菌水的高度低于培养皿A上沿，即完成昆虫病原线虫的活体繁殖。
本发明优点：采用本发明生产异小杆线虫Heterorhabditis bacteriophora-NJ和斯氏线虫Steinernema carpocapsae-All，每克寄主繁殖出的侵染期病原线虫数的产量与大蜡螟的产量分别高27%～29%和21%～23%，斜纹夜蛾体积大，体内有机质含量高，繁殖出的线虫产量高，价格又低，降低了活体繁殖成本，通过成本核算可知繁殖上述两种线虫的成本均降低53%以上，且病原线虫对寄主昆虫的致病力没有下降。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式是一种昆虫病原线虫的活体繁殖方法，具体是按以下步骤完成的：
首先按培养皿A的皿盖大小裁剪两张中速定性滤纸，并垫在培养皿A的皿盖中，再将8～12头5龄斜纹夜蛾幼虫放在培养皿A皿盖中的中速定性滤纸上，然后采用0.4mL～0.6mL的5500条/mL～6500条/mL侵染期线虫的水悬液浸润培养皿A皿盖中的中速定性滤纸，再将培养皿A的皿底扣在培养皿A的皿盖上，至8～12头5龄斜纹夜蛾幼虫全部死亡，然后移去培养皿A皿底，并将培养皿A皿盖置于培养皿B中，然后向培养皿B与培养皿A之间的空隙中注入无菌水，且无菌水的高度低于培养皿A皿盖上沿，并在24℃～26℃下恒温培养至无菌水中出现侵染期线虫为止，然后每天收集有侵染期线虫的无菌水，且收集后补充无菌水，每次补充的无菌水的高度低于培养皿A上沿，即完成昆虫病原线虫的活体繁殖。
采用本实施方式生产异小杆线虫Heterorhabditis bacteriophora-NJ和斯氏线虫Steinernemacarpocapsae-All，每克寄主繁殖出的侵染期病原线虫数的产量与大蜡螟的产量分别高27%～29%和21%～23%，斜纹夜蛾体积大，体内有机质含量高，繁殖出的线虫产量高，价格又低，降低了活体繁殖成本，通过成本核算可知繁殖上述两种线虫的成本均降低53%以上，且病原线虫对寄主昆虫的致病力没有下降。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：所述的5500条/mL～6500条/mL侵染期线虫的水悬液中的线虫为异小杆线虫Heterorhabditis bacteriophora-NJ和斯氏线虫Steinernema carpocapsae-All。其他与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二之一不同点是：所述培养皿A的直径为60mm，所述培养皿B的直径为90mm。其他与具体实施方式一或二相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同点是：向培养皿B与培养皿A之间的空隙中注入无菌水的量为9mL～11mL。其他与具体实施方式一至三相同。
采用下述试验验证本发明效果：
试验一：一种昆虫病原线虫的活体繁殖方法，具体是按以下步骤完成的：
首先按直径为60mm培养皿A的皿盖大小裁剪两张中速定性滤纸，并垫在直径为60mm培养皿A的皿盖中，再将10头5龄斜纹夜蛾幼虫放在直径为60mm培养皿A皿盖中的中速定性滤纸上，然后采用0.5mL的6000条/mL侵染期线虫的水悬液浸润直径为60mm培养皿A皿盖中的中速定性滤纸，再将直径为60mm培养皿A的皿底扣在直径为60mm培养皿A的皿盖上，至10头5龄斜纹夜蛾幼虫全部死亡，然后移去直径为60mm培养皿A皿底，并将直径为60mm培养皿A皿盖置于直径为90mm培养皿B中，然后向直径为90mm培养皿B与直径为60mm培养皿A之间的空隙中注入无菌水，且无菌水的高度低于直径为60mm培养皿A皿盖上沿，并在25℃下恒温培养至无菌水中出现侵染期线虫为止，然后每天收集有侵染期线虫的无菌水，且收集后补充无菌水，每次补充的无菌水的高度低于直径为60mm培养皿A上沿，即完成昆虫病原线虫的活体繁殖。
本试验所述的6000条/mL侵染期线虫的水悬液中的线虫为异小杆线虫Heterorhabditisbacteriophora-NJ。
通过计算可知：本试验每克斜纹夜蛾幼虫能繁殖出约5.6万条异小杆线虫Heterorhabditisbacteriophora-NJ。
试验二：一种昆虫病原线虫的活体繁殖方法，具体是按以下步骤完成的：
首先按直径为60mm培养皿A的皿盖大小裁剪两张中速定性滤纸，并垫在直径为60mm培养皿A的皿盖中，再将10头5龄斜纹夜蛾幼虫放在直径为60mm培养皿A皿盖中的中速定性滤纸上，然后采用0.5mL的6000条/mL侵染期线虫的水悬液浸润直径为60mm培养皿A皿盖中的中速定性滤纸，再将直径为60mm培养皿A的皿底扣在直径为60mm培养皿A的皿盖上，至10头5龄斜纹夜蛾幼虫全部死亡，然后移去直径为60mm培养皿A皿底，并将直径为60mm培养皿A皿盖置于直径为90mm培养皿B中，然后向直径为90mm培养皿B与直径为60mm培养皿A之间的空隙中注入无菌水，且无菌水的高度低于直径为60mm培养皿A皿盖上沿，并在25℃下恒温培养至无菌水中出现侵染期线虫为止，然后每天收集有侵染期线虫的无菌水，且收集后补充无菌水，每次补充的无菌水的高度低于直径为60mm培养皿A上沿，即完成昆虫病原线虫的活体繁殖。
本试验所述的6000条/mL侵染期线虫的水悬液中的线虫为斯氏线虫Steinernemacarpocapsae-All。
通过计算可知：本试验每克斜纹夜蛾幼虫能繁殖出约6.9万条斯氏线虫Steinernemacarpocapsae-All。
Claims (2)
1.一种昆虫病原线虫的活体繁殖方法，其特征在于昆虫病原线虫的活体繁殖方法是按以下步骤完成的：
首先按直径为60mm培养皿A的皿盖大小裁剪两张中速定性滤纸，并垫在直径为60mm培养皿A的皿盖中，再将10头5龄斜纹夜蛾幼虫放在直径为60mm培养皿A皿盖中的中速定性滤纸上，然后采用0.5mL的6000条/mL侵染期线虫的水悬液浸润直径为60mm培养皿A皿盖中的中速定性滤纸，再将直径为60mm培养皿A的皿底扣在直径为60mm培养皿A的皿盖上，至10头5龄斜纹夜蛾幼虫全部死亡，然后移去直径为60mm培养皿A皿底，并将直径为60mm培养皿A皿盖置于直径为90mm培养皿B中，然后向直径为90mm培养皿B与直径为60mm培养皿A之间的空隙中注入无菌水，且无菌水的高度低于直径为60mm培养皿A皿盖上沿，并在25℃下恒温培养至无菌水中出现侵染期线虫为止，然后每天收集有侵染期线虫的无菌水，且收集后补充无菌水，每次补充的无菌水的高度低于直径为60mm培养皿A上沿，即完成昆虫病原线虫的活体繁殖；所述的6000条/mL侵染期线虫的水悬液中的线虫为异小杆线虫Heterorhabditis bacteriophora-NJ。
2.一种昆虫病原线虫的活体繁殖方法，其特征在于昆虫病原线虫的活体繁殖方法是按以下步骤完成的：
首先按直径为60mm培养皿A的皿盖大小裁剪两张中速定性滤纸，并垫在直径为60mm培养皿A的皿盖中，再将10头5龄斜纹夜蛾幼虫放在直径为60mm培养皿A皿盖中的中速定性滤纸上，然后采用0.5mL的6000条/mL侵染期线虫的水悬液浸润直径为60mm培养皿A皿盖中的中速定性滤纸，再将直径为60mm培养皿A的皿底扣在直径为60mm培养皿A的皿盖上，至10头5龄斜纹夜蛾幼虫全部死亡，然后移去直径为60mm培养皿A皿底，并将直径为60mm培养皿A皿盖置于直径为90mm培养皿B中，然后向直径为90mm培养皿B与直径为60mm培养皿A之间的空隙中注入无菌水，且无菌水的高度低于直径为60mm培养皿A皿盖上沿，并在25℃下恒温培养至无菌水中出现侵染期线虫为止，然后每天收集有侵染期线虫的无菌水，且收集后补充无菌水，每次补充的无菌水的高度低于直径为60mm培养皿A上沿，即完成昆虫病原线虫的活体繁殖；所述的6000条/mL侵染期线虫的水悬液中的线虫为斯氏线虫Steinernema carpocapsae-All。
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