CN102631405A - 一种复方芹菜素纳米乳抗高血压药物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种复方芹菜素纳米乳抗高血压药物，其原料及其质量百分比为：芹菜素1％～15％、表面活性剂5％～35％、助表面活性剂1％～20％，油1％～20％，茺蔚子水提物0.5％～10％，决明子水提物0.5％～10％，其余成分为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100％。本纳米乳乳滴颗粒小、分布均匀、粘度小、流动性好。芹菜素制备成纳米乳剂型后，明显增加了透过血脑屏障的能力、显著提高了原药的生物利用度，延长了药物的半衰期，减少给药次数；纳米乳提高了芹菜素的药物溶解及渗透能力，增加芹菜素的稳定性；而且与茺蔚子和决明子的水提物复配后，具有明显的协同作用，药物疗效发挥更加充分。

Description

一种复方芹菜素纳米乳抗高血压药物

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种抗高血压药物芹菜素的新剂型，特别涉及一种复方芹菜素纳米乳抗高血压药物。

背景技术

[0002] 芹菜素的化学结构为4,5,7-三羟黄酮，其4,5,7位置的三个羟基和C₂C₃双键决定了其独特的药理学效应和生物学特性。芹菜素来源伞形科植物旱芹(Apium graveolens var.dulce)叶；卷柏科卷柏(Selaginella tamariscina)全草；柏科圆柏(Sabina chinensis)叶。

Zhang等发现，芹菜素在浓度大于1时对由高K 引起去除内皮细胞的小鼠主动脉环收缩有明显松弛作用[IC₅₀为(12.0±1.1)μM]。苯肾上腺素对无论有无内皮细胞的离体主动脉环都有稳定的收缩作用，芹菜素以剂量(1～12.5μM)依赖方式对由苯肾上腺素引起的主动脉环收缩产生松弛作用，对内皮细胞完整的主动脉环松弛作用的IC₅₀为(3.7±0.5)，对去除内皮细胞的主动脉环松弛作用的IC₅₀为(8.2+0.9)0M ，撤除芹菜素后苯肾上腺素引起的收缩作用可以完全恢复。芹菜素还以剂量依赖方式抑制由12,13-二丁酸佛波醇引起去除内皮细胞的主动脉环收缩[IC₅₀为(34.6±1.2)]。在加入芹菜素30min后,由乙酰胆碱引起的血管松弛明显加强[5μM 芹菜素的IC5o为(0.12±0.07)μM，2.5μM芹菜素的IC₅₀为(0.68±0.24)]。进一步研究发现，芹菜素抑制由苯肾上腺素和高K引起的血管收缩，而对佛波醇引起血管收缩的舒张作用较弱。芹菜素可能不影响蛋白激酶C介导的血管收缩作用，而是诱导生成某种内皮细胞源性刺激因子，从而产生内皮细胞依赖的血管松弛作用。

经研究，芹菜素有保护心脏的作用以及治疗帕金森氏症的功效。现代芹菜品种是从原产地中海沼泽地区的野生种驯化而来。野生芹菜的茎，叶含蛋白质成分，远超过栽培品种的芹菜。 

 野生芹菜首先被应用在医学上，在公元前九世纪荷马史诗<<奥德赛>>中首次提到。中国人是在公元七世纪，从尼泊尔统治者送来的礼品中得到了芹菜这种植物。然而，直至中世纪，芹菜才作为蔬菜广泛食用。大约在十八世纪在欧洲开始被用作生蔬菜食用，十九世纪初引到美国。

 中华大地的芹菜分为旱芹和水芹。旱芹生于旱地；水芹营养丰富，清香扑鼻。旱芹口感较差，但药用功能较强，如脾胃虚弱。

 芹菜应尽可能的食用叶子，因为叶子中矿物质、维生素的含量，明显的较叶柄中的含量要丰富的多。叶柄含水份高，热量低（17千卡/100g）;种子含蛋白质、脂肪、维生素、钙、磷、镁、钾、铁和锌，热量高（392千卡/100克）。

 芹菜中还含有芹菜元，佛手苷内酯、糖类、有机酸等，含有的挥发油中有一种α-芹子烯，对人脑中枢神经有安定和抗痉挛作用;挥发油中另一种叫丁基苯酸是旱芹菜特殊气味的来源。水芹中含有多种游离氨基酸、芳香油、甘露糖及多种维生素，常食不但可增进食欲，还有促进血液循环和健脑作用。芹菜在欧美，认为可消除水肿，因为吃了芹菜有利尿作用。

 芹菜中有重要成分芹菜元，又叫芹菜素，能降压和影响中枢神经。关于降压机制，初步认为是透过头动脉体和主动脉弓的化学感受器的反射作用而引起的。血管灌输试验，证明芹菜元还有一定的扩张末梢血管的作用，这与降压作用也有一定关系。

 灌胃芹菜元700mg/kg能明显降低大鼠癫痫发作的程度和次数，延长潜伏期。脑形态学研究，芹菜元对大脑顶叶皮层细胞，胶质细胞，和小脑细胞有一定的保护作用。芹菜元能对抗小鼠腹腔注射震颤素引起的中枢性震颤。大鼠口服芹菜元能对抗可卡因引起的兴奋。

现在市场上已有如芹菜素混悬液剂的降压药物，虽然口服后能从胃肠道吸收，但吸收速度慢、吸收不完全，另外片剂中药物的溶出速率慢，生物利用度差，再加上芹菜素本身作用缓慢，使得芹菜素的药效无法迅速得到利用。

发明内容

针对现有技术中存在的缺陷与不足，本发明的目的在于提供一种分布均匀，稳定性好，生物利用度高，疗效显著的复方芹菜素纳米乳抗高血压药物。

实现上述发明目的的技术方案是：一种复方芹菜素纳米乳抗高血压药物，其粒径在20.1～59.7nm之间，平均粒径为42.7nm。各原料及其质量百分比为：

芹菜素                                1％～15％

表面活性剂                            5％～35％

助表面活性剂                          1％～20％

油                                    1％～20％

茺蔚子水取物                          0.5％～10％

决明子水取物                          0.5％～10％

其余成分为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100％。

以正常大鼠在给药前后血压变化情况，观察茺蔚子的降压作用。空白对照组给予相应量的蒸馏水，阳性对照组给予硝苯吡啶0.003g/kg；实验组给予茺蔚子醇提液的乙醚、乙酸乙酯、正丁醇和水萃取物，剂量为0.216 g/ mL；灌胃给药，连续10 d；采用颈动脉插管法，分别观察并记录最后1次给药后10、20、30、45、60 min时的血压变化。结果：茺蔚子水层对正常大鼠有明显降压作用(P＜0.05)，正丁醇层、乙酸乙酯层、乙醚层均可使正常大鼠收缩压降低(P＞0.05)，对舒张压无明显影响，但有一定降低趋势。结论：茺蔚子水溶性成分对正常大鼠降压作用明显，水层中主要含生物碱类成分，生物碱可能是茺蔚子降压作用的主要化学成分。

决明子为豆科一年生草本植物决明或小决明的干燥成熟种子。降压作用：决明子水浸液、醇-水浸液、醇浸液对麻醉犬、猫、兔等皆有降压作用。在慢性实验中，煎剂每日2g（生药）/kg，无降压作用。决明子注射液0.05g/100g体重静脉注入可使自发遗传性高血压大鼠收缩压明显降低，同时也使舒张压显著降低，其降压效果、降压幅度、作用时间均优于静脉注射利血平0.3mg/kg组大鼠。对高脂血症的影响：含7%决明子的高脂饮料喂养小鼠2星期，决明子不能影响血清总胆固醇（TC）水平，但能明显升高血清高密度脂蛋白-胆固醇（HDL-C）含量及提高HDL-C/TC比值，即明显改善体内胆固醇的分布状况，而有利于预防动脉粥样硬化。决明子散有降低实验性高脂血症大鼠血浆总胆固醇和三酰甘油（甘油三酯）的作用，使之分别比模型组降低29%和73%，还能降低肝中三酰甘油和抑制血小板聚集的作用，其值分别比模型组降低49%和59%。有资料证明决明中蒽醌类化合物具有降血脂作用。

本复方纳米乳所述的表面活性剂用非离子表面活性剂聚氧乙烯醚-40氢化蓖麻油（Cremophor RH 40），蓖麻油聚氧乙烯醚40（EL40）、吐温80或泊洛沙姆188中的任意一种或任意一种与span80的混合物。这些表面活性剂对人体低毒、安全、无刺激。

所述的油是大豆油、菜籽油、三乙酸甘油酯、棕榈酸异辛酯、油酸、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯（IPM）或乙酸乙酯等可食用油类中的任意一种或几种的混合物。安全、无毒。

为了达到更好的效果，本发明在上述表面活性剂中加入助表面活性剂无水乙醇、1,2-丙二醇、丙三醇、聚乙二醇200（PEG200）、聚乙二醇400（PEG400）或聚乙二醇600（PEG600）中的任意一种，或几种的混合物。

本发明中助表面活性剂在复方芹菜素纳米乳的构建中同样是很好的药物助溶剂，本发明在药物中加入刺激性小的助表面如乙醇、1,2-丙二醇、丙三醇或聚乙二醇200，聚乙二醇400，聚乙二醇600，除了助溶作用外，助表面活性剂主要是为了调整表面活性剂的亲水亲油平衡值（HLB），使得油水界面张力进一步降低，增大界膜的油水性和刚性。助表面活性剂掺入到界面膜中，促进曲率半径很小膜的形成，扩大复方芹菜素纳米乳的乳区面积。

本发明的复方芹菜素纳米乳，一方面极大的提高了芹菜素的溶解度，减少了药物在体内的首过效应，促进药物的胃肠道吸收。芹菜素在水中极难溶解，使药物的转运及吸收变得困难，纳米乳基质为芹菜素提供了良好的溶解环境。口服时可经淋巴吸收，克服首过效应和分子通过胃肠道时的屏障；另一方面通过复配茺蔚子水提物及决明子水提物，使得本药物降压更平稳，效果更持久。

本发明的复方芹菜素纳米乳与现有技术相比，具有以下优点：

1.本发明的芹菜素抗高血压纳米乳的药物粒径在20.1～59.7nm之间，平均粒径为42.7nm，是将芹菜素溶于油相，加入表面活性剂和助表面活性剂，用溶解茺蔚子水提物及决明子水提物的蒸馏水滴定到均匀、透明的纳米乳体系。形成的复方芹菜素纳米乳含芹菜素达6.1％。

2.本发明的芹菜素抗高血压纳米乳分布均匀，体系透明、稳定性好，有较低的表面张力，油包水型纳米乳具有良好的流动性。

3.本发明的芹菜素抗高血压纳米乳给药后迅速被网状内皮细胞吞噬，使药物迅速起效，并维持恒定的血药浓度及药理效应，提高药物的生物利用度，减少药物的用量和使用次数。

4.本发明的芹菜素抗高血压纳米乳通过中西药结合，发挥两者优点，一方面降压迅速、起效快，另一刚面药效稳定、作用持久，符合高效安全的治疗标准。

5.本发明的芹菜素抗高血压纳米乳药效稳定，生耗能低。

6.本发明制成纳米乳后可制成口服液直接服用、也可经胶囊包封或经冻干粉技术等处理。

附图说明

图1 为本发明复方芹菜素纳米乳电镜照片。

图2为本发明复方芹菜素纳米乳粒径分析曲线图。

具体实施方式

发明人给出具体制备方法实施例及使用药效试验来进一步说明本发明药物的效果。

试验例1 本发明复方芹菜素纳米乳抗高血压药物粒径大小分析

本发明的最优配比经透射电子显微镜检测（图1），液滴呈类球形，分散性好，无粘连；经马尔文粒度分析仪检测（图2）其直径分布在20.1～59.7nm之间，平均粒径为42.7nm。

试验例2本发明复方芹菜素纳米乳抗高血压药物稳定性分析

通过以下离心试验、光稳定性试验、温度稳定性试验等观察本发明复方芹菜素纳米乳抗高血压药物的稳定性，观察本发明是否有分层、浑浊或晶体析出等不稳定现象。

1. 高速离心试验

取适量制备好的本发明复方芹菜素纳米乳抗高血压药物于离心管中，以10 000r/min的转速离心15 min，离心试验后，本发明复方芹菜素纳米乳抗高血压药物依然保持离心前的澄清透明，未见分层、浑浊或晶体析出等不稳定现象。

2. 光稳定性试验

将适量制备好的复方芹菜素纳米乳抗高血压药物装入透明好的无色、透明玻璃瓶中，密封，放置于正常光照条件下10d，分别于1d、2d、4d、6d、8d、10d取样观察。结果表明复方芹菜素纳米乳抗高血压药物每份样品均保持澄清透明，未见分层、浑浊或晶体析出等不稳定现象。

3. 温度稳定性试验

将适量制备好的复方芹菜素纳米乳抗高血压药物装入透明好的无色、透明玻璃瓶中，密封，放置于4℃、室温（25℃）和40℃三中温度条件下留样考察各30d，每隔5d取样观察。结果表明，复方芹菜素纳米乳抗高血压药物在此三种温度条件下均保持澄清透明，未见分层、浑浊或晶体析出等不稳定现象。

4. 长期稳定性试验

将3批纳米乳密封于棕色玻璃瓶内，置于(25±2)℃、相对湿度(60±5)％条件下12个月，分别于 0、3、6、9和12个月时取样，考察纳米乳的性状及含量变化，并参考文献统计分析方法，计算复方芹菜素纳米乳抗高血压药物的有效期。试验结果表明在长期试验条件下，复方芹菜素纳米乳抗高血压药物的外观一直保持澄明、均一，未见分层、色变、絮凝和破乳等现象；体系中的芹菜素含量随时间延长而逐渐降低，其含量—时间变化曲线提供的线性回归方程，计算出复方芹菜素纳米乳抗高血压药物的有效期为34.14个月。

试验例3 大鼠尾部测压法测定复方芹菜素纳米乳抗高血压药物的药效（与市售芹菜素混悬液对比）

SHR大鼠3只随机分为3组,每组10只，分别设为SHR阳性对照组、芹菜素混悬液组、复方芹菜素纳米乳组分别给予芹菜素混悬液、复方芹菜素纳米乳各20 mg/kg·d，溶于饮水中，均从饮水中给药,1次/d，连续14周。WKY6只为正常对照组，对照组不给药物，饮水不限。

测量各组大鼠尾动脉血压。鼠龄为6周时(即用药前) 测压1次,鼠龄7周(用药后1 周)测压1次，以后每隔两周测1次血压,直到实验结束。结果见表1。

表1 各组大鼠SBP的比较 (x±s，n=6)

组别	收缩压(mmHg)
		阳性对照	199.0±10.3
芹菜素混悬液	151.4±11.5
		复方芹菜素纳米乳	130.4±9.5
WKY正常对照组	124.6±5.7

结果显示，复方芹菜素纳米乳与阳性对照组和芹菜素混悬液比较，差异均极显著，表明芹菜素不但能显著降低阳性大鼠的血压，而且降压效果与芹菜素混悬液相比效果更好。

试验例4 毒性试验

1.毒理研究项目及结论：

本发明产品严格按照新药非临床安全性评价方法与市售芹菜素混悬液剂对比进行了急性毒性试验，重复给药毒性试验、遗传毒性试验（包括Ames 试验、小鼠骨髓微核试验、体外培养哺乳动物细胞染色体突变试验）、生殖毒性试验（一般生殖毒性试验、致畸敏感期毒性试验、围产期毒性试验）、致癌试验、免疫毒性试验和局部刺激性试验，试验结果如下。

本品对小鼠急性毒性实验结论：与市售芹菜素混悬液剂对比，复方芹菜素纳米乳未出现剂量内不良反应及死亡。

本发明产品的Ames试验、小鼠精子畸形试验和睾丸染色体畸变试验等遗传毒性试验的结果均为阴性。

大鼠30d 喂养本发明产品的结果表明：与市售芹菜素混悬液剂对比，在试验期内，复方芹菜素纳米乳剂量内各实验组动物生长发育良好，体重、摄食量、血常规、血生化、脏器系数等指标均在正常范围内，病理组织学检查亦未见异常。

本品长期毒性实验结论：与市售芹菜素混悬液剂对比，在试验期内，复方芹菜素纳米乳剂量内，本药品在连续灌胃给药三个月未见大鼠不良反应，各项检查指标均在正常范围内，病理检查其主要脏器及靶器官均未见该药引起的中毒性病理改变。

实施例1

精确称取EL40 24g，乙酸乙酯10g，芹菜素6.1g，1,2-丙二醇12g在室温（25℃）条件下搅拌均匀，然后向其中缓慢滴入已溶解茺蔚子提取物及决明子提取物的蒸馏水。随着蒸馏水量的增加，体系黏稠度增大，当蒸馏水量使得体系由油包水变为水包油型纳米乳时，体系粘稠度从最粘稠的状态变稀，此时产生的是无色透明的复方芹菜素纳米乳，茺蔚子水提物4.2g，决明子水提物4.8g，蒸馏水38.9g。此实施例为复方芹菜素纳米乳的最佳配比。

以下实施例步骤同实施例1：

实施例2

芹菜素7g，吐温80 28g，肉豆蔻酸异丙酯12g，乙醇12g，茺蔚子水提物4g，决明子水提物4g，蒸馏水33g。

实施例3

芹菜素6g，RH40 28g，油酸10g， PEG400 3g，茺蔚子水提物5g，决明子水提物7g，蒸馏水41g。

实施例4

芹菜素6g，EL40氢化蓖麻油 28g，油酸乙酯 7g，丙三醇5g，茺蔚子水提物3.5g，决明子水提物6.5g，蒸馏水44g。

实施例5

芹菜素8g，泊洛沙姆188 24g，肉豆蔻酸异丙酯10g， PEG200 12g，茺蔚子水提物6g，决明子水提物4g，蒸馏水34g。

实施例6

芹菜素8g，RH40 21g，大豆油10g，聚乙二醇600 14g，茺蔚子水提物5g，决明子水提物4g，蒸馏水38g。

实施例7

芹菜素1g，吐温80 5g，肉豆蔻酸异丙酯1g，乙醇1g，茺蔚子水提物10g，决明子水提物10g，蒸馏水72g。

实施例8

芹菜素3g，RH40 10g，油酸3g， PEG400 3g，茺蔚子水提物5g，决明子水提物7g，蒸馏水69g。

实施例9

芹菜素5g，EL40 15g，油酸乙酯 7g，丙三醇5g，茺蔚子水提物8g，决明子水提物6g，蒸馏水54g。

实施例10

芹菜素7g，泊洛沙姆188 20g，肉豆蔻酸异丙酯10g， PEG200 20g，茺蔚子水提物6g，决明子水提物4g，蒸馏水33g。

实施例11

芹菜素9g，RH40 25g，大豆油13g，聚乙二醇600 14g，茺蔚子水提物5g，决明子水提物7g，蒸馏水37g。

实施例12

芹菜素12g，吐温80 30g，肉豆蔻酸异丙酯17g，乙醇10g，茺蔚子水提物4g，决明子水提物4g，蒸馏水23g。

实施例13

芹菜素15g，RH40 35g，油酸20g， PEG400 3g，茺蔚子水提物0.5g，决明子水提物0.5g，蒸馏水26g。 

Claims (2)

1.一种复方芹菜素纳米乳抗高血压药物，其特征在于，其原料及其质量百分比为：

芹菜素                                1％～15％

表面活性剂                            5％～35％

助表面活性剂                          1％～20％

油                                    1％～20％

茺蔚子水取物                          0.5％～10％

决明子水取物                          0.5％～10％

其余成分为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100％；

所述的表面活性剂为聚氧乙烯醚-40氢化蓖麻油，蓖麻油聚氧乙烯醚40、吐温80或泊洛沙姆188中的任意一种或任意一种与span80的混合物；

所述的油为大豆油、菜籽油、三乙酸甘油酯、棕榈酸异辛酯、油酸、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯或乙酸乙酯等可食用油类中的任意一种或几种的混合物；

所述的助表面活性剂为无水乙醇、1,2-丙二醇、丙三醇、聚乙二醇200、聚乙二醇400或聚乙二醇600中的任意一种，或几种的混合物。

2.根据权利要求1所述的复方芹菜素纳米乳抗高血压药物，其特征在于，该药的粒径介于20.1～59.7nm之间。

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