CN102614030A

CN102614030A - 一种实验动物灌注固定的装置及其应用

Info

Publication number: CN102614030A
Application number: CN2012101134907A
Authority: CN
Inventors: 补娟; 朱沂; 党辉; 王明远; 史深
Original assignee: Peoples Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region
Current assignee: Peoples Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region
Priority date: 2012-04-18
Filing date: 2012-04-18
Publication date: 2012-08-01
Anticipated expiration: 2032-04-18
Also published as: CN102614030B

Abstract

本发明公开一种实验动物灌注固定装置及其应用，所述的支架支撑水槽及右侧设置的液体泵放置台，水槽和液体泵放置台为同一底面的一体，水槽底部四周向中心的排水孔方向倾斜，在水槽内设置灌注台，灌注台的台面正前面向操作者倾斜，灌注台上方安装化验水嘴及聚光灯，水槽正上方设置有机玻璃罩及排气扇；有机玻璃罩固定排气扇，有机玻璃罩连接排气管，液体泵放置台用于放置液体泵，液体泵通过液体泵控制踏板电缆与液体泵控制踏板连接；输液软管分别插入生理盐水罐和固定液罐两个供液单元内，液体泵内置两个供液单元，输液软管及三通管与灌注针相连接，本发明具有构造简单、使用方便、安全、一人可操作，工作效率高等特点，具有广泛应用价值。

Description

一种实验动物灌注固定的装置及其应用

技术领域

本发明涉及一种实验动物灌注装置的技术领域，特别是涉及一种实验动物灌注固定装置及其应用的技术领域。

背景技术

在实验动物组织病理学实验研究中，特别是进行原位杂交和免疫组化研究，为避免或减少死后组织形态及结构发生变化，常于动物处死前，采用灌注固定法。良好的固定可防止组织细胞的自溶与腐败，保持细胞内蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分与生活时相仿；应用灌注固定法，可将固定液及时注入血管，经血管分支到达整个组织，使组织得到充分的固定，故在进行组织分子病理学研究中，大多采用灌注固定方法。

目前广大科研人员在使用灌注固定法时多采用注射器或输液瓶与注射针组合的简易装置，但在实践中我们发现该简易装置存在诸多问题：

（1）简易灌注装置无法提供对实验者的必要保护：灌注固定法使用的灌注固定液多为甲醛或多聚甲醛，实验者操作时直接接触甲醛蒸汽，会对人体产生严重的危害且不符合实验室安全防护规范的要求。

（2）手工控制注射器不易控制压力大小：灌注固定法使用注射器与注射针组合的简易装置操作时，压力由操作者手工控制，压力过小：灌注效果不佳；压力过大：会造成组织损坏（如血管破裂，心脏爆裂）。使用输液瓶与注射针组合的简易装置操作时，对大鼠及兔能够适用，但小鼠或沙鼠由于血管细小该装置压力明显偏小，不能确保灌注效果。

（3）简易装置操作时需要至少两人同时配合操作：使用注射器与注射针组合的简易装置操作时通常需要两人以上同时配合操作，解剖灌注、控制注射器压力各需一人来完成。

发明内容

针对现有技术中在使用灌注固定法时多采用注射器或输液瓶与注射针组合简易装置存在诸多弊端及技术缺陷的现状，本发明目的在于提供一种实验动物灌注固定装置及其应用，具有构造简单、使用方便、安全、一人可操作，工作效率高等特点。

本发明解决其技术问题是采取以下技术方案实现的：

本发明通过在水槽内设置灌注台，灌注台的台面正前面向操作者倾斜度，水槽底部四周向排水孔方向倾斜度，有利于废液快速排放；灌注台上方安装化验水嘴及聚光灯，水槽上方设置有机玻璃罩及排气扇，并连接排气管用于收集、排放有害气体，水槽右侧位置放置液体泵放置台，用于放置液体泵，液体泵内置生理盐水罐和固定液罐两个供液单元，液体泵通过液体泵控制踏板电缆与液体泵控制踏板连接，该控制踏板上的两个踏板分别控制两个供液单元的液体泵出，泵出液体通过输液软管及三通管与灌注针相连接，用于灌注操作。

本发明具体提供一种实验动物灌注固定装置，包括由排气管、排气扇、有机玻璃罩、化验水嘴、灌注台、水槽、排水孔、支架、聚光灯、灌注针、三通管、输液软管、液体泵、生理盐水罐、固定液罐、液体泵放置台、液体泵控制踏板电缆、液体泵控制踏板组成；其中，支架支撑水槽及右侧设置的液体泵放置台，水槽和液体泵放置台为同一底面的一体，水槽底部四周向中心的排水孔方向倾斜5度，在水槽内设置灌注台，灌注台的台面正前面向操作者倾斜5度，灌注台上方安装化验水嘴及聚光灯，水槽正上方设置有机玻璃罩及排气扇；有机玻璃罩固定排气扇，有机玻璃罩连接排气管，液体泵放置台用于放置液体泵，液体泵内置生理盐水罐和固定液罐两个供液单元，液体泵通过液体泵控制踏板电缆与液体泵控制踏板连接；输液软管分别插入生理盐水罐和固定液罐两个供液单元内，输液软管及三通管与灌注针相连接。

同时，本发明提供一种实验动物灌注固定装置在实验动物灌注中的应用；通过将配制好的生理盐水及固定液分别装入生理盐水罐和固定液罐；打开排气扇、聚光灯电源；根据灌注动物类型调试好设备压力，轻踏液体泵控制踏板，泵出生理盐水，使输液软管及灌注针内充满液体、排净空气；将动物麻醉后置于灌注台，迅速打开胸腔，暴露心脏，剪开右心耳，用灌注针从左心室刺入插进升主动脉，轻踏液体泵控制踏板，泵出生理盐水，开始灌注，同时打开化验水嘴使水流冲洗流出的血液；待右心耳流出液体呈浅红色时转换为固定液，继续灌注，达到灌注效果后拔出灌注针，进行组织取材。从而达到使用方便、安全、一人可操作，工作效率高等特点。

本发明提供的实验动物灌注固定装置具有以下有益效果：

1、本发明提供的实验动物灌注固定装置设计了抽排风装置和有机玻璃罩，最大程度保护实验人员的健康；

2、本发明提供的实验动物灌注固定装置使用液体泵泵出生理盐水及固定液，压力可根据实验动物类型进行调节，保证灌注效果；

3、本发明提供的实验动物灌注固定装置中灌注台及水槽底部斜面设计，有利于废液快速排放；

4、本发明提供的实验动物灌注固定装置使用液体泵脚踏板控制，使原本需要两人以上的操作一人即可轻松完成。

附图说明

图1为本发明的结构示意图。

图中，1—排气管、2—排气扇、3—有机玻璃罩、4—化验水嘴、5—灌注台、6—水槽、7—排水孔、8—支架、9—聚光灯、10—灌注针、11—三通管、12—输液软管、13—液体泵、14—生理盐水罐、15—固定液罐、16—液体泵放置台、17—液体泵控制踏板电缆、18—液体泵控制踏板。

具体实施方式

下面结合附图和实施例，对本发明做进一步地详细描述。

实施例一：实验动物灌注固定装置及其应用

参见附图1所示，一种实验动物灌注固定装置，包括由排气管（1）、排气扇（2）、有机玻璃罩（3）、化验水嘴（4）、灌注台（5）、水槽（6）、排水孔（7）、支架（8）、聚光灯（9）、灌注针（10）、三通管（11）、输液软管（12）、液体泵（13）、生理盐水罐（14）、固定液罐（15）、液体泵放置台（16）、液体泵控制踏板电缆（17）、液体泵控制踏板（18）组成；其中，支架（8）支撑水槽（6）及右侧设置的液体泵放置台（16），水槽（6）和液体泵放置台（16）为同一底面的一体，水槽（6）底部四周向中心的排水孔（7）方向倾斜5度，在水槽（6）内设置灌注台（5），灌注台的台面正前面向操作者倾斜5度，灌注台（5）上方安装化验水嘴（4）及聚光灯（9），水槽（6）正上方设置有机玻璃罩（3）及排气扇（2）；有机玻璃罩（3）固定排气扇（2），有机玻璃罩（3）连接（1）排气管，液体泵放置台（16）用于放置液体泵（13），液体泵（13）内置生理盐水罐（14）和固定液罐（15）两个供液单元，液体泵（13）通过液体泵控制踏板电缆（17）与液体泵控制踏板（18）连接；输液软管（12）分别插入生理盐水罐（14）和固定液罐（15）两个供液单元内，输液软管（12）及三通管（11）与灌注针（10）相连接。

本发明提供了实验动物灌注固定装置的运行方式，通过在水槽（6）内设置灌注台（5），灌注台的台面正前面向操作者倾斜5度，水槽（6）底部四周向排水孔方向倾斜5度，有利于废液快速排放；灌注台（5）上方安装化验水嘴（4）及聚光灯（9），水槽（6）上方设置有机玻璃罩（3）及排气扇（2），并连接排气管（1）用于收集、排放有害气体，水槽（6）右侧位置放置液体泵放置台（16），用于放置液体泵（13），液体泵内置生理盐水罐（14）和固定液罐（15）两个供液单元，液体泵（13）通过液体泵控制踏板电缆（17）与液体泵控制踏板（18）连接，该控制踏板上的两个踏板分别控制两个供液单元的液体泵出，泵出液体通过输液软管（12）及三通管（11）于灌注针（10）相连接，用于灌注操作。

本发明中，设计抽排风装置和有机玻璃罩，最大程度保护实验人员的健康。

本发明中，使用液体泵泵出生理盐水及固定液，压力可根据实验动物类型进行调节，保证灌注效果。

本发明中，在灌注台及水槽底部斜面设计，有利于废液快速排放。

本发明中，使用液体泵脚踏板控制，使原本需要两人以上的操作一人即可轻松完成。

进一步，本发明提供了实验动物灌注固定装置在实验动物灌注固定中的应用。通过将配制好的生理盐水及固定液分别装入生理盐水罐（14）和固定液罐（15）；打开排气扇（2）、聚光灯（9）电源；根据灌注动物类型调试好设备压力，轻踏液体泵控制踏板（18），泵出生理盐水，使输液软管（12）及灌注针（10）内充满液体、排净空气；将动物麻醉后置于灌注台（5），迅速打开胸腔，暴露心脏，剪开右心耳，用灌注针（10）从左心室刺入插进升主动脉，轻踏液体泵控制踏板（18），泵出生理盐水，开始灌注，同时打开化验水嘴（4）使水流冲洗流出的血液；待右心耳流出液体呈浅红色时转换为固定液，继续灌注，达到灌注效果后拔出灌注针（10），进行组织取材。从而达到使用方便、安全、一人可操作，工作效率高等特点。

实施例二：灌注固定装置在大鼠局灶性淋巴滞留性脑病模型研究中的应用

雄性SD大鼠经麻醉后，颅顶部备皮、消毒，正中纵行切开头皮2 cm，30%双氧水腐蚀骨膜暴露前囟，在前囟旁开颅，钻孔直径3~5 mm，至硬脑膜表面，揭开硬脑膜，暴露脑表面动脉，用3/8 带针医用尼龙线分离备线，半结扎动脉，术后缝合头皮，建立局灶性淋巴滞留性脑病动物模型，术后24h使用本灌注固定装置进行经心脏灌注取脑。首先将生理盐水与4%多聚甲醛分别装入生理盐水罐（14）和固定液罐（15）；打开排气扇（2）、聚光灯（9）电源；调试好设备压力，轻踏液体泵控制踏板（18），泵出生理盐水，使输液软管（12）及灌注针（10）内充满液体、排净空气；将大鼠麻醉后置于灌注台（5），迅速打开胸腔，暴露心脏，剪开右心耳，用灌注针（10）从左心室刺入插进升主动脉，轻踏液体泵控制踏板（18），泵出生理盐水，开始灌注，同时打开化验水嘴（4）使水流冲洗流出的血液；待右心耳流出液体呈浅红色时转换为4%多聚甲醛固定液，继续灌注，达到灌注效果后拔出灌注针（10），剥取大鼠脑组织，采用15%和30%蔗糖溶液梯度脱水，浸入液氮预冷的异戊烷内速冻。速冻后组织复温至-20℃，用冰冻切片机进行尾状核区冠状面切片，切片厚度10μm，HE染色后在光镜下观察并照相。

实施例三：灌注固定装置在哮喘豚鼠模型肺组织超微结构研究中的应用

雄性豚鼠（250～500 g），以质量浓度为1kg/L卵蛋白溶液按100 mg/kg腹腔注射致敏，3周后以质量浓度为0.1kg/L卵蛋白溶液雾化吸入，建立哮喘豚鼠模型，待豚鼠出现气促、口唇紫绀、呼吸困难甚至抽搐等症状，即可使用本灌注固定装置经心脏灌注取材，首先将生理盐水与1%锇酸二甲胂酸钠缓冲固定液分别装入生理盐水罐（14）和固定液罐（15）；打开排气扇（2）、聚光灯（9）电源；调试好设备压力，轻踏液体泵控制踏板（18），泵出生理盐水，使输液软管（12）及灌注针（10）内充满液体、排净空气；将豚鼠麻醉后置于灌注台（5），迅速打开胸腔，暴露心脏，切开右心室，用灌注针（10）迅速插入肺动脉干，轻踏液体泵控制踏板（18），泵出生理盐水，开始灌注，同时打开化验水嘴（4）使水流冲洗流出的血液；生理盐水灌注完成后转换为1%锇酸二甲胂酸钠缓冲固定液，继续灌注，达到灌注效果后拔出灌注针（10）。将灌注完毕的肺脏自胸腔中取出，沿指向肺门方向，切取截面约2mm x 10mm的组织条，将其浸没于1%锇酸二甲胂酸钠缓冲固定液内，置于4℃冰箱中，1h后再用0.1mol/L，二甲胂酸盐缓冲液液冲洗2次，每次8min。最后使用透射电镜观察及摄片。

实施例四：灌注固定装置在猫腰骶背根节全切模型研究中的应用

成年雄性猫（1.5~2.5kg），麻醉后施行腰1到骶2(L₁~S₂)背根节切除术，建立猫腰骶背根节全切模型，2周后麻醉动物，使用使用本灌注固定装置进行腹主动脉灌注，首先将生理盐水与Zamboni固定液分别装入生理盐水罐（14）和固定液罐（15）；打开排气扇（2）、聚光灯（9）电源；调试好设备压力，轻踏液体泵控制踏板（18），泵出生理盐水，使输液软管（12）及灌注针（10）内充满液体、排净空气；将猫麻醉后置于灌注台（5），迅速打开腹腔，分离腹主动脉周围的组织及脂肪，用灌注针（10）迅速插入腹主动脉，同时剪开腹主静脉，轻踏液体泵控制踏板（18），泵出生理盐水，开始灌注，同时打开化验水嘴（4）使水流冲洗流出的血液；待静脉流出的血会明显变淡，转换为4%多聚甲醛固定液，继续灌注，达到灌注效果后拔出灌注针（10）。剖取脊髓L₆节段，置于相同固定液中保存，供免疫组化实验使用。

实施例五：灌注固定装置在人肝癌细胞原位种植裸鼠肝癌模型研究中的应用

8周龄裸鼠腹腔注射麻醉后，右上腹切口1~2cm，逐层分离暴露肝右叶，注入浓缩人肝癌细胞0.08~0.1ml，平均细胞数5×10⁶个，逐层缝合，建立人肝癌细胞原位种植裸鼠肝癌模型。模型建立后行血管造影术，造影后，使用本灌注固定装置经心脏灌注取材，首先将生理盐水与4%多聚甲醛分别装入生理盐水罐（14）和固定液罐（15）；打开排气扇（2）、聚光灯（9）电源；调试好设备压力，轻踏液体泵控制踏板（18），泵出生理盐水，使输液软管（12）及灌注针（10）内充满液体、排净空气；将裸鼠麻醉后置于灌注台（5），迅速打开胸腔，暴露心脏，剪开右心耳放血，用灌注针（10）从左心室刺入插进升主动脉，轻踏液体泵控制踏板（18），泵出生理盐水，开始灌注，同时打开化验水嘴（4）使水流冲洗流出的血液；待右心耳流出液体呈浅红色时转换为4%多聚甲醛固定液，继续灌注，达到灌注效果后拔出灌注针（10），打开腹腔取出肝脏置于4%多聚甲醛中保存，供病理学及免疫组化实验使用。

实施例六：灌注固定装置在兔蛛网膜下腔出血动物模型研究中的应用

日本长耳大白兔（2.0~3.0kg），枕部剃毛，消毒后于枕部中线作2.5cm切口，锐性分离直达寰枕筋膜，用18号套管针穿刺枕大池，当穿破环枕筋膜时停止进针，退出针芯。取自体股动脉的非抗凝血1.5ml，以0.5ml/s的速度缓慢注人枕大池内。退出套管针，局部压迫后，缝合切口，建立兔蛛网膜下腔出血动物模型，48h后使用本灌注固定装置经心脏灌注取材，首先将生理盐水与4%多聚甲醛分别装入生理盐水罐（14）和固定液罐（15）；打开排气扇（2）、聚光灯（9）电源；调试好设备压力，轻踏液体泵控制踏板（18），泵出生理盐水，使输液软管（12）及灌注针（10）内充满液体、排净空气；将兔麻醉后置于灌注台（5），打开胸腔，剥开心包膜，暴露心脏，将下腔静脉和腹主动脉用动脉夹夹闭，剪开右心耳放出血液，再将灌注针（10）从左心室插入主动脉，轻踏液体泵控制踏板（18），泵出生理盐水，开始灌注，同时打开化验水嘴（4）使水流冲洗流出的血液；待右心耳流出液体呈浅红色时转换为4%多聚甲醛固定液，继续灌注，达到灌注效果后拔出灌注针（10），开颅取延髓桥脑组织用电镜固定液固定，采用常规电镜标本制作方法，经清洗、脱水、浸透、包埋和修块后作超薄切片，在透射电镜下观察。

如上所述，即可较好地实现本发明，上述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通工程技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明确定的保护范围内。

Claims

1.一种实验动物灌注固定装置，包括由排气管、排气扇、有机玻璃罩、化验水嘴、灌注台、水槽、排水孔、支架、聚光灯、灌注针、三通管、输液软管、液体泵、生理盐水罐、固定液罐、液体泵放置台、液体泵控制踏板电缆、液体泵控制踏板组成，其特征在于，所述的支架支撑水槽及右侧设置的液体泵放置台，水槽和液体泵放置台为同一底面的一体，水槽底部四周向中心的排水孔方向倾斜，在水槽内设置灌注台，灌注台的台面正前面向操作者倾斜，灌注台上方安装化验水嘴及聚光灯，水槽正上方设置有机玻璃罩及排气扇；有机玻璃罩固定排气扇，有机玻璃罩连接排气管，液体泵放置台用于放置液体泵，液体泵内置生理盐水罐和固定液罐两个供液单元，液体泵通过液体泵控制踏板电缆与液体泵控制踏板连接；输液软管分别插入生理盐水罐和固定液罐两个供液单元内，输液软管及三通管与灌注针相连接。

2.如权利要求1所述的实验动物灌注固定装置，其特征在于，所述的水槽底部四周向中心的排水孔方向倾斜度为5度。

3.如权利要求1所述的实验动物灌注固定装置，其特征在于，所述的灌注台的台面正前面向操作者倾斜度为5度。

4.一种如权利要求1至3任意所述的实验动物灌注固定装置在实验动物灌注固定中的应用。