CN102603763A - 一种从威灵仙中提取木脂素类化合物的方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种从威灵仙中提取木脂素类化合物的方法及应用。包括：（1）将威灵仙进行水煮；或采用有机溶剂提取；或采用乙醇水溶液提取；或采用甲醇水溶液提取；（2）提取物浓缩后，使用大孔吸附树脂、离子交换树脂、硅胶层析法、中压制备色谱、半制备或制备RP-HPLC法进行纯化。本发明研究发现植物威灵仙中富含结构多样的木脂素类化合物。该类化合物可通过树脂吸附、膜过滤、溶剂萃取、柱色谱、高效液相色谱分离等方法得到富集或者纯化。从威灵仙中提取得到的含木脂素类化合物的组分或者纯的化合物有抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗虫、抗氧化、抗风湿、保肝、抑制植物生长等作用，在生物医药领域具有重要应用前景。

Description

一种从威灵仙中提取木脂素类化合物的方法及应用

技术领域

本发明涉及中草药威灵仙的提取分离方法及用途。

背景技术

威灵仙（Clematis chinensis Osbeck），属毛茛科植物。它性温，味辛、咸，有毒，具有祛风除湿、通络止痛的功效，且有镇静、抗菌、消炎、抗癌和利尿等作用，还能促进胆汁的分泌，因此在临床治疗上，威灵仙常被用于治疗痛风顽痹、肢体麻木、筋脉拘挛，减弱风湿痹痛、诸骨鲠咽，减少水肿、降血压和治疗外伤等。

据文献报道，威灵仙中含原白头翁素、白头翁素、白头翁内酯、甾醇、糖类、皂苷、氨基酸及生物碱、有机酸、蒽醌等物质。如：Kizu等在威灵仙中分离到三萜皂苷；Song等分离到2个不常见的大环糖苷clemochinenoside A和B。此外，从威灵仙的根部提取物中分离得到一系列三萜甙。威灵仙的低极性挥发油包含有有机酸、有机酸酯、苯丙素、倍半萜、酚类等主要成分。威灵仙总皂苷具有抗肿瘤及抗炎镇痛的作用，而且在抗免疫性炎症方面有较强活性。威灵仙中所发现的大多数皂苷的苷元均为齐墩果酸，其具有清热、消炎、抑菌、强心、利尿和抑制S₁₈₀瘤株生成的作用。

我们对威灵仙的化学成分进行了系统的研究，发现在威灵仙中含有结构多样性的木脂素类化合物，其中松脂素（pinoresinol）含量较高。松脂素是植物里的一个重要活性成分，是植物实现自我保护的重要化学物质，该物质还具有抗真菌、抗虫、抗炎和抗氧化的作用。

    木脂素是一类天然酚类化合物，其结构是两个苯丙素单元的二聚体。木脂素在有些植物中的含量并不高。木脂素的提取和分离目前还没有形成系统、规范的方法，尤其是缺乏适合于批量或者规模化制备的方法。木脂素也是一类很重要的生物活性物质，具有广泛的生物活性，如抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗虫、抗氧化、抗风湿、保肝、抑制植物生长等。我们首次发现威灵仙中富含结构多样性的木脂素类活性化合物，因此，以威灵仙为药用原材料，研究与开发创新药物，前景广阔。而且，以木脂素类化合物的组成和含量分析可作为威灵仙药材质量检测和所制成的中成药质量控制的方法。

发明内容

本发明以植物威灵仙（Clematis chinensis）、或者是以威灵仙为药用原材料制备抗风湿等药物的残液、残渣中提取、富集或者纯化木脂素类化合物的工艺方法，以及它们在抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗虫、抗氧化、保肝、抑制植物生长等药物领域的新用途。

一种从威灵仙中提取木脂素类化合物的方法，包括：

 （1）将威灵仙进行水煮；

或采用有机溶剂提取；

或采用乙醇水溶液提取；

或采用甲醇水溶液提取；

（2）提取物浓缩后，使用大孔吸附树脂、离子交换树脂、硅胶层析法、中压制备色谱、半制备或制备RP-HPLC法进行纯化。纯的化合物的结构可以通过NMR、MS、IR、UV等波谱数据的综合解析确定。

上述有机溶剂优选为乙醇、甲醇、丁醇或乙酸乙酯。

上述提取方法可以辅以加热、超声或者微波，以提高提取效率。

从威灵仙中提取得到的木脂素类化合物主要含有如下结构特点：

 

  

  

   

(1)         (2)         (3)          (4)         (5)

(6)

以上结构的木脂素类化合物还可以与糖基结合形成糖苷类化合物。

富集或者纯化得到的木脂素类化合物在抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗虫、抗氧化、抗风湿、保肝、抑制植物生长等药物研制领域有新用途。可与药学可以接受的辅料制成注射剂、片剂、丸剂、胶囊剂、溶液、悬浮剂和乳剂等剂型，研制成新型药物。

以木脂素类化合物的组成和含量分析可作为威灵仙药材质量检测和所制成的中成药质量控制的方法。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。

实施例1： 植物威灵仙（Clematis chinensis）中木脂素类化合物的提取与纯化

a. 取新鲜晒干的威灵仙，碾碎。用50%的乙醇回流1小时，提取3次，合并提取液。

b.低温旋转蒸发除去乙醇，残余水层用乙酸乙酯提取3次，合并乙酸乙酯提取液，低温旋转蒸发至干。

c. 乙酸乙酯提取物经硅胶柱层析分离，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱，收集石油醚-乙酸乙酯3：1(V/V)至石油醚-乙酸乙酯1：2(V/V)的组分，该收集组分主要含木脂素类化合物。

d. 含木脂素类化合物的组分，经反相C18制备型高效液相色谱分离，以甲醇-水70：30(V/V)可将各个木脂素类化合物得到有效分离、纯化。

e. 将得到的纯木脂素类化合物测定NMR、MS、IR、UV等，鉴定结构。

实施例2：

a. 威灵仙药材碾碎，加水煮沸1小时，连续水提3次。水提液过滤弃去残渣，收集清液。

b. 水提清液用D101树脂吸附。用水、水-乙醇9：1（V/V）、水-乙醇7：3（V/V）、水-乙醇5：5（V/V）、水-乙醇3：7（V/V）、水-乙醇1：9（V/V）、乙醇洗脱，收集70%~100%乙醇洗脱组分，该组分含有木脂素类化合物。

c. 含木脂素类化合物的组分用反相C18制备高效液相色谱分离，以乙腈-水60：40（V/V）恒流洗脱，可制备得到系列纯的木脂素类化合物。

d. 纯化得到的几种主要的木脂素化合物的结构和核磁共振（NMR）实验数据列于如下表1。

表1   几种主要化合物结构和核磁共振数据

表1   几种主要化合物结构和核磁共振数据（续）

Claims (4)

1.一种从威灵仙中提取木脂素类化合物的方法，其特征在于包括：

 （1）将威灵仙进行水煮；

或采用有机溶剂提取；

或采用乙醇水溶液提取；

或采用甲醇水溶液提取；

（2）提取物浓缩后，使用大孔吸附树脂、离子交换树脂、硅胶层析法、中压制备色谱、半制备或制备RP-HPLC法进行纯化。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂为乙醇、甲醇、丁醇或乙酸乙酯。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取方法辅以加热、超声或者微波。

4.权利要求1所得提取物木脂素类化合物在制备抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗虫、抗氧化、抗风湿、保肝或抑制植物生长药物中的应用。