CN102599610A

CN102599610A - 一种迷迭香提取物的制备方法

Info

Publication number: CN102599610A
Application number: CN2012100680186A
Authority: CN
Inventors: 向小四
Original assignee: CHANGSHA YAYING BIO-TECH Co Ltd
Current assignee: CHANGSHA YAYING BIO-TECH Co Ltd
Priority date: 2012-03-15
Filing date: 2012-03-15
Publication date: 2012-07-25

Abstract

本发明公开了一种迷迭香提取物的制备方法，该方法以植物迷迭香为原料，以一定工艺条件制备迷迭香提取物，该提取物含有多种抗氧化成分，包括一定比例的鼠尾草酸、鼠尾草酚、迷迭香酚、熊果酸、迷迭香酸等，经碘量比色法测定迷迭香提取物抗氧化活性和电子顺磁共振技术研究该提取物清除·OH自由基活性，发现具有显著的抗氧化作用。本发明还公开了使用该方法制备的迷迭香提取物在制备食品添加剂抗氧化剂中的应用。

Description

一种迷迭香提取物的制备方法

技术领域

本发明涉及一种植物提取物的制备方法，尤其涉及一种迷迭香提取物的制备方法。

背景技术

迷迭香（Rosemary officinal L.）原产于地中海沿岸，主产于西班牙、土耳其、法国、南斯拉夫等国，属唇形科常绿灌木植物。近年来由于对其优良的抗氧化性能的发现，目前在美国、印度等地有大规模种植。中国于1981年由中科院从西班牙引种进来，许多地方也有规模种植。

迷迭香在欧洲作为食用调香佐料应用已有千余年的历史了，其安性已经得到全世界的广泛认可。但作为抗氧化剂的应用还只是近十年的历史。由于其抗氧化性能高，安全性可靠，热稳定性好，生产成本低，安全无污染，目前有逐步取代人工合成抗氧剂的趋势。

现今在全世界使用量最大的抗氧化剂还是化学合成品，主要是BHA、BHT和TBHQ，特别是TBHQ应用量最大，由于其抗氧化性能比较BHA和BHT要高得多，被广泛用在油脂及含油脂产品中，在中国同类产品中，其市场份额更是占到80%以上。

随着人们生活水平的日益提高，食品的安全性问题越来越引起人们的重视。大剂量的动的实验表明，BHA、BHT和TBHQ能引起非常明显的肝肿大，及一些消化道疾病，BHT还使肝微粒体酶活性增加。美国FDA早在1977年就取消了BHT的安全认可，日本于1972年就作出食品中禁止使用BHA的决定，现在已经对TBHQ作了明确的限制性使用规定，许多北欧国家也相继对上述化学合成抗氧化剂作了禁止性使用规定，西欧国家对其使用量作了极其严格的规定，如TBHQ在食品中使用量不得超过0.02%等。

从上述发达国家的规定可以看出，化学合成的食品抗氧化剂即将走入历史，取代它们的将是安全、高效、价格低廉的天然抗氧化剂，能替代TBHQ的天然抗氧化剂将有广阔的市场。

对于迷迭香的研究，最早起源于1952年，J.R.chipaul首先对三十余种香料植物中抗氧化性能进行了比较和筛选，发现迷迭香有最佳的抗氧化效果，1969年开如鉴定出其中抗氧化有效成分Carnosol，1982年发现效果更强的有效成分Rosemanol，随后几年先后鉴定出了十几种有效成分。中国于1987年由西安医学院赵新先生首先研究了迷迭香中有效成分Carnosol对清除人体自由基的作用，结果证明效果明显。我们进一步的研究表明，当有效成分Carnosic acid的含量达50%以上时，其抗氧化效果就可以超过TBHQ，成为效果最佳的抗氧化剂，为替代TBHQ市场提供了实验依据。

国内有一些天然抗氧化剂产品，但大都包装成产品提取物，不作为抗氧化产品，如葡萄籽提取物、松树皮提取物、甘草提取物等。只有茶多酚算是很成功的抗氧化剂产品，但我们研究比较发现，95%以上含量的茶多酚（高规格产品），其抗氧化效果确无法与20%含量的迷迭香产品相比，更不用说替代TBHQ了，天然维生素A只有与大量增效剂合并使用，才能有抗氧化价值，而且价格还不菲。其它提取物由于抗氧化性能很一般，油溶性又不好，无法作为抗氧化剂使用。以上产品由于各种各样的原因，无法得到市场的广泛认同，也就无法替代很高效的TBHQ的市场了。

发明内容

本发明旨提供一种迷迭香提取物的制备方法，用该方法制备的迷迭香提取物具有显著的抗氧化作用。

为达到上述目的，本发明提供的技术方案为:

一种迷迭香提取物的制备方法，包括如下步骤：

（1）迷迭香精油的提取；

（2）迷迭香脂溶性成分和水溶性成分的分离提取；

其中，步骤（1）所述的迷迭香精油提取可以采用水蒸气蒸馏法或正己烷提取法提取；

其中，步骤（2）所述的迷迭香脂溶性成分和水溶性成分的分离提取是先将经步骤（1）提取后所得的残渣用50％的乙醇超声波提取40 min，过滤，重复一次，并将两次滤液合并，备用；然后采用水溶解法分离、石油醚萃取法或浓缩法来分离脂溶性成分和水溶性成分。

以下对本发明作出进一步说明：

1 迷迭香精油的提取

1.1水蒸气蒸馏法

1.1.1将迷迭香干叶去杂，粉碎，用水蒸气蒸馏方法提取挥发油．称取准备好的迷迭香干叶置于圆底烧瓶中，加入10倍量的水，共水蒸馏，蒸馏时间3 h．油水分离，得直接粗油，用无水硫酸钠脱水，得直接精油；馏出水用等体积石油醚萃取，分离后，用无水硫酸钠干燥，回收石油醚，得到萃取精油．则可得迷迭香总精油。

1.2 溶剂提取法

取迷迭香干药材用正己烷回流连续提取6 h，过滤正己烷提取液，回收正己烷得黄色迷迭香精油。

迷迭香脂溶性成分和水溶性成分的分离提取

上述步骤1所得残渣用50％的乙醇超声波提取40 min后过滤，重复一次。将2次滤液合并，备用。

2.1 水溶解法分离

2.1.1 样品的制备：取上述提取液浓缩至膏状，在60℃真空干燥得粉末，测得总酚含量。

2.1.2 溶剂用量的选择：称取干燥后的样品，分别按料1：60加水超声波溶解，在3 000 r／min下离心20 min，将上清液和沉淀分离后，真空干燥，称重。

2.1.3 取干燥后的粉末加8倍量水超声波溶解，离心分离20 min后真空干燥。分别测定所得水溶性和脂溶性抗氧化剂的得率。

2.2 石油醚萃取法

2.2.1 萃取次数的选择：取提取液于分液漏斗中，用石油醚萃取2次，将萃取物60℃真空干燥6 h。测定每次萃取后所得脂溶性部分的重量。

2.2.2 取提取液，用适量石油醚萃取两次，将萃取物和萃余液浓缩后真空干燥。分别测定所得水溶性和脂溶性抗氧化剂的得率。

2.3 浓缩法分离

2.3.1 浓缩倍数的选择：将提取液浓缩4倍后，于3 000 r／min下离心20 min后置于冰箱中冷藏24 h，然后再离心1次，将上清液继续置于冰箱中，沉淀真空干燥。

2.3.2 取500 mL提取液，浓缩4倍后置于冰箱中冷藏24 h，然后再离心1次，将沉淀和上清液浓缩后真空干燥。分别测定所得水溶性和脂溶性抗氧化剂的得率。经测定所得提取物里抗氧化剂含量达60%以上。

经实验证明，上述迷迭香提取物具有显著的抗氧化作用，结果如下：

1 碘量比色法测定迷迭香提取物抗氧化活性

1.1 天然提取物的添加与均质处理

准确称取按以上工艺制备的提取物，分别加人适量的乙醇使之溶解，然后分别按油质量的0．02％，0．06％，0．10％，0．14％混入油中，搅拌均匀。

1.2样品的加速氧化

采用水浴高温诱导菜籽油发生过氧化反应，将已添加好抗氧化物的油脂置于恒温水浴锅中(60℃左右)条件下加速氧化。

1.3抗氧化性能的测定

1.3.1碘量滴定法测定油脂POV

准确称取试样1．0000g于碘量瓶中，并向其中加入20mL V(三氯甲烷)： (冰乙酸)=2：3混合液溶解，使试样完全溶解后，加入0．5mL饱和碘化钾溶液，立即加塞密封，并轻轻震荡0．5min。然后在暗处放置10min。然后加入50mL蒸馏水，摇匀，立即用硫代硫酸钠标准溶液(0．002mol／L)滴定至淡黄色，加入0．5mL 0．5％淀粉指示液，继续滴至蓝色消失为终点。平行测定2次，同时做空白实验。

1.3.2碘量比色法测定油脂POV

1.3.2.1标准曲线绘制

取已标定的KI—I：标准溶液1.00mL，于50mL 具塞试管中，并向其中加入5mL三氯甲烷一冰乙酸 (2：3)，分别加入1．0mL 1％淀粉溶液，加水定容至50mL，静置5min，待分层后，取上层清液在1cm比色皿中，以零管作参比，在波长为585nm条件下测定其吸光度，根据碘量一吸光度绘制标准曲线。

1.3.2.2油脂POV的测定

精密称取试样0．0001g于50mL具塞试管中，加入5．00mL三氯甲烷一冰乙酸(2：3)溶解后，加入0．50mL饱和KI混匀，加盖摇匀30s，并置于暗处反应5min。取出加水稀释，加入lmL 1％淀粉溶液，加水定容至50ml轻轻摇匀，静置30min，取上清液于1cm比色皿中，在波长为585nm处以空白作参比，测定其吸光度。

由实验结果得出在滴定法中相同浓度下各物质的抗氧化性强弱顺序为：迷迭香抗氧化剂>空白。

本发明的提取物是以植物迷迭香为原药, 用有机溶剂分步萃取所获得的提取物，经碘量比色法测定迷迭香提取物抗氧化活性和电子顺磁共振技术研究该提取物清除·OH自由基活性，发现其具有显著的抗氧化作用。用本发明的方法制备的迷迭香提取物能够应用于食品添加剂抗氧化剂中。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

收集迷迭香嫩茎及叶片，自然荫干后粉碎，取粉碎后原料50g，加人250ml有机溶剂，热w流2小时，过滤，添加溶剂，重复抽提2次，蒸干溶剂，热水洗涤，干燥，称10g干燥后产品溶于100ml 乙醇(60℃)，加人20g活性炭，在60℃下搅拌15分钟过滤,40℃干燥粉碎得淡黄色粉末状抗氧化剂。各种溶剂提取的抗氧化剂的收率及抗氧化效果如下：

实施例2

电子顺磁共振技术研究迷迭香水溶性成分清除·OH自由基活性

1 样品处理称取100 g迷迭香干叶，10倍量水加热回流提取，过滤，将滤液干燥得浸膏。

1.1 样品液配制称取1g浸膏，超声波定容，配成10 ms／m1的溶液，并进行稀释，依次得到5．0，2．5，1．0，0．5 mg／ml的样品液。

1.2 ·OH自由基产生体系0．05 mol／L PBS(pH=7.4)溶液，1.0 mmol／LFeSO4(NH4)₂S0₄，0.9 mol／L DMPO，6％H₂O₂。将以上4种溶液和样品液或去离子水(空白对照)各10 注入Eppendorf管，记录反应时间，并立即混合均匀，将反应液打入石英毛细管，外加保护管放入谐振腔进行测定。

1.3 EPR测试参数中心磁场(CF)：3 480 G，扫描宽度(SW)：500 G，扫描时间(sT)：5.12s，调制幅度(MA)：1G，调制频率(MF)：100 kHz，微波功率(MP)：20 mW，测试温度(T)：室温。

2 结果

清除率E=(h₀-h_i)／h₀。h_i为含样品体系中·OH自由基的信号强度测量值；h₀为空白体系中·OH自由基的信号强度测量值。各浓度样品的·OH自由基清除率如下：

由上可知迷迭香水溶性成分清除·OH自由基的效果较好，在样品浓度为2．5 mg／ml时，自由基清除率可达73.5％。

上述实施例仅仅是为清楚的说明本发明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其他不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。

Claims

1.一种迷迭香提取物的制备方法，包括如下步骤：

（1）迷迭香精油的提取；

（2）迷迭香脂溶性成分和水溶性成分的分离提取；

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）所述的迷迭香精油是将迷迭香干叶以水蒸气蒸馏法提取后用石油醚萃取，回收石油醚所得。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）所述的迷迭香精油是将迷迭香干药材以正己烷回流连续提取6 h，过滤正己烷提取液，回收正己烷所得。

4.用权利要求1所述的方法制备的迷迭香提取物在食品添加剂抗氧化剂中的应用。