CN102559883A - 前列腺癌变前期PTEN和PHLPP1的mRNA水平原位杂交检测试剂盒及检测方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种原位杂交检测试剂盒，包括杂交探针和标记物。还公开使用本试剂盒原位杂交检测与前列腺癌早期病理演变有密切相关的磷酸酶张力蛋白同源物基因（PTEN）和蛋白磷酸酶（PHLPP1）的mRNA方法，包括以下步骤：（1）在杂交探针与靶序列可形成稳定杂交复合体的条件下，将底物中待测RNA与杂交探针接触，形成杂交复合体；和（2）检测所述杂交复合体。本发明的试剂盒和检测方法可在mRNA水平上检测PTEN和PHLPP1基因的表达量，比影像医学和现有的临床生化检测指标更早期，能实现真正的癌变前期mRNA水平筛查，同时，本发明的检测方法简单方便，成本低,便于县区级医院推广应用。

Description

前列腺癌变前期PTEN和PHLPP1的mRNA水平原位杂交检测试剂盒及检测方法和应用

技术领域

本发明涉及生物检测领域，更具体地说，是涉及与癌前变的mRNA表达改变(病理演变过程)的相关检测技术。

背景技术

根据国内外权威机构提供的资料，我国每年癌症的新增人数260万，死亡人数近210万，患者700多万，全球每年新增癌症患者800万，死亡人数接近800万，患者约有8400多万人，到2020年以上人数将翻一番，这是一组可怕的数字。癌症诊治成本越来越高，按癌症患者的年治疗费用20万（贫穷地区可能偏高，发达地区可能远远高出20万），700多万患者，每年的花费是1.4万亿人民币，扣除成本35%约4千亿，每年约有1万亿人民币白白消耗了。而且，癌症患者大部分会在治疗后不久死亡。因此，现有的临床癌症诊治模式一定要改变，本发明的创新点是提前做到预防性筛查，然后及时介入预防性调控和预防性治疗，做到基因水平癌症的治未病。

2005年美国卫生研究院、癌症研究院、疾控中心等八家单位做了一个年度报告，对1972年发起的抗癌大战进行回顾，报告认为人类在抗癌大战中是失败，结论是癌症死亡率没有降低，其列举出造成抗癌大战失败的几个因素是：1.肿瘤细胞异质性（多态性）；2.肿瘤细胞耐药性；3.抗癌药物设计思路不完善（动物模型设计不科学）等。同时，该报告中亦提出应重新审视现有诊治癌症的措施。

本发明人在长期研究中发现，导致癌症死亡率不降的重要原因是不能做到真正的早期诊断。依照现有的临床医学影像（B超、CT、核磁共振成像等）及和其它生化（癌抗原、癌胚抗原、糖类激素、细胞膜因子、细胞核因子、细胞流式技术）指标来诊断癌症，都是肿瘤形成后诊断，前者要有组织学变化或已有占位性病变，后者大部分是肿瘤形成后所分泌、释放、或肿瘤的标记物。传统临床观念认为占位性癌块在2公分下是属于早期癌症的诊断，这一概念值得认真讨论，2公分以下癌块属早期这一界定科学性是不够严谨的，从细胞学角度来分析，1公分的肿块约有一亿个肿瘤细胞，2公分的肿块其三维空间的细胞叠加数远不止2亿个肿瘤细胞，从癌变前期到单克隆癌细胞产生及形成2公分的癌块，其病理演变过程相当长，可能是5年或10年、甚至是10年以上（特殊病例除外），很难证实的是在这个病理演变过程中，肿块是癌症唯一的发生地和单独的病灶，可能癌细胞早已迁移到其它组织或器官生长。临床研究早已证实，一旦形成肿块的同时，其它癌细胞通过不同途径迁移到其它部位克隆生长，一旦切除原发灶后，其它器官复发灶或多发癌块灶先后形成。因此，在临床上以2公分以下的癌肿块大小来界定早期与否，不够严谨（有些病例，在发现原发病灶时，同时发现转移病灶，不在我们表述的内容中），其实这时已经是晚期诊断和晚期治疗，这是导致癌症死亡率不降的真正原因。

随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开，为了寻求更早期的诊断癌症、治疗癌症、以及预防癌症，已取得长足进步。至今，我们已有可能在基因的一级转录功能产物（mRNA水平）上做更精确的早期筛查和诊断，在癌变前期或癌细胞形成（单克隆）前,就可以做到早期预测和筛查。本发明采用核酸原位杂交技术，选择多组临床标本（癌症病人、高危人群、家属史人群、正常对照），对PTEN和PHLPP1基因与前列腺癌的早期预警进行检测分析。

前列腺癌症是性生殖系最常见的恶性肿瘤，据报道仅次于肺癌，在男性是癌症死亡的第二位。随年龄而增长，其发病率有明显的地区差异，欧美地区较高。根据世界卫生组织的数据，每年有近百万人被诊断为前列腺癌患者，是男性中第二常见的癌症。虽然前列腺癌的高发区主要在西方发达国家，但是近些年来，在包括中国在内的发展中国家和地区前列腺癌的发病率也有逐年上升之势。如何更早期筛查前列腺癌变前期的一些有临床意义的mRNA靶标，明确mRNA与前列腺癌发病机制，是目前临床迫切需要的。PSA血清值目前在美国和全球被视为前列腺癌筛检的标准，不过，虽然PSA筛检已经显着增加了前列腺癌的侦测，但仍有诸多缺点，比如PSA值在良性的男性也会升高，前列腺恶性病灶的专一性较差，血清PSA会在许多非癌症的情况下增高，从而导致误诊及不比要的活检。据称美国每年有超过一百万男子会做前列腺活检，其中大多数是因为其血清PSA浓度有所增加。研究人员发现，在那些已知血清PSA浓度增加的男性中，在活检之前进行PTEN和PHLPP1尿液或血液筛检可能显着地改善对癌症的预测。本发明对临床通常应用检测蛋白的方法进行改进，采用检测基因一级转录功能产物mRNA，检测PTEN和PHLPP1的mRNA表达量变化比蛋白检测和DNA检测科学，DNA可能只是分析突变情况，蛋白有时会迟表达或不表达。这一发明实施标志了前列腺癌检测技术的一个改进，因为目前的做法仅仅是检测血清中的PSA是否增加。因此需要其它专一性和敏感性较佳的检测方法。PTEN基因是近年来发现的一种抑癌基因，该基因的突变、失活与多种肿瘤的发生发展密切相关。研究表明在近一半的前列腺癌患者中均存在PTEN基因突变。冷泉港实验室的助理教授Lloyd Trotman在过去的研究中发现不同于其他大多数抑癌基因，PTEN基因单拷贝缺失可导致肿瘤形成，双拷贝缺失则会启动细胞进入衰老程序。当细胞发生PTEN基因双拷贝缺失时，只有同时发生另一个抑癌基因p53突变，细胞才能突破这一安全机制导致前列腺癌发生。在这篇新文章中，冷泉港实验室的研究人员进一步筛查了细胞中与可能PTEN基因协同作用导致前列腺癌恶化的基因。过去的研究证实PTEN蛋白可通过对原癌基因编码蛋白AKT的磷酸化作用来抑制前列腺癌细胞增殖。近期亦有研究报道PHLPP1也是AKT的活性抑制子。基于这些研究发现，冷泉港的研究人员将研究焦点集中到了PHLPP1基因上。研究人员随后证实在前列腺癌中PHLPP1也可发挥重要的抑癌作用。Phlpp1基因双拷贝缺失的小鼠形成了前列腺癌前病变。当研究人员成功地构建出Pten和Phlpp1双基因缺陷小鼠时，借助这一模型小鼠研究人员清楚地解开了PTEN 和PHLPP1之间的关系。他们证实PTEN 和PHLPP1双基因缺失可导致Akt活性过度激活，进而激活p53介导的安全机制诱导细胞进入衰老程序。尽管这一反应延迟了疾病的发展，然而通过自发性灭活p53细胞最终将突破这一安全机制导致前列腺癌恶化。

在随后对前列腺癌患者的样品分析中，研究人员发现所有的原发性前列腺癌样品均没有PHLPP1 和 PTEN双重缺失，而在转移性肿瘤中却存在这两个基因的高频率双重缺失。从而验证了在小鼠模型中的研究发现。新研究证实了PTEN和PHLPP1抑癌基因突变与前列腺癌恶化之间存在着密切的联系，这一发现为确定前列腺癌患者的临床分级，判断治疗预后提供了重要的指标，并为开发出新型的个体化的治疗药物及策略指明了方向。

将PTEN和PHLPP1的mRNA作为早期筛查前列腺癌变前期有非常重要的临床诊断意义。PTEN和PHLPP1的mRNA在前列腺癌变前期及癌变过程中表达降低和零表达。他作于前列癌变前期筛查、及前列腺癌术的复发、转移预警也有非常重要的临床意义。

发明人在长期的研究中，得出了一种新理念，癌症和其它临床的重大疾病的临床诊治模式一定要改变，不能只停留现在治已病（发病后诊治），要做到预防性诊治，做到治已病，只有这样才能降低重大疾病的发病率和死亡率，降低社会成本和医疗成本。因此，发明人在开发和生产重大疾病的mRNA水平筛查试剂盒及治疗药物中，在理论和技术上都做了创新。特别是筛选临床标本（正常人群、癌症高危人群、癌症好发人群、肿瘤患者），突破了正常组织与肿瘤组织比较的一贯性研发思路，来寻找和开发癌前变的mRNA水平，与癌症早期基因病理生理学演变密切相关，而且临床意义非常重要靶标，将临床上肿瘤形成后诊治模式变成肿瘤的预防性诊治，争取了肿瘤诊治的时间和空间，达到预防癌症。

目前对PTEN和PHLPP1基因的研究都采用高通量基因芯片技术，而这些方法多用于科研方面，不适应临床应用，特别是个性化的应用在我国现阶段条件尚不成熟。根据现有的文献资料PTEN和PHLPP1基因mRNA水平的检测技术及试剂盒未见报道。

本发明人在针对创新性发明的要求，设计了不同数据例组（前列腺癌患者、高危人群和家属发病史人员、正常对照人）例组，用原位杂交技术进行检测，结果表明以上前列腺癌症病人PTEN和PHLPP1基因都低表达或零表达，高危人群有不同程度表达15-25%,家属发病史人员有几例呈低表达，正常人都是高表达。表明PTEN和PHLPP1基因前列腺癌变前期筛查的重要标志物。

原位杂交技术（in situ hybridization）是将分子生物学与细胞化学技术结合起来，以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异性核酸分子的技术。其原理是使含有特异序列、经过标记的核酸单链（即探针），在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交，再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测，从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。

原位杂交的探针是已知序列的分子或序列未知但分子已知的核酸分子（虽不明确该分子全部序列，但已知其针对何靶分子），探针的种类按核酸性质不同又可分为DNA探针、cDNA探针、cRNA探针和合成寡核苷酸探针。为了便于示踪，探针必须用一定的手段加以标记，以利于以后的检测。常用的标记物包括放射性核素和非放射性标记物两大类。常用的同位素标记物有³H、³⁵S、¹²⁵I和³²P。同位素标记物虽然有灵敏性高、背底较为清晰等优点，但是由于放射性同位素对人和环境均会造成伤害，近来有被非同位素取代的趋势。非同位素标记物中目前最常用的有生物素、地高辛和荧光素三种。检测这些标记物的方法都是极其灵敏的。

根据所用探针及所要检测核酸的不同又可分为DNA-DNA,RNA-DNA,RNA-RNA杂交。但不论哪一种形式的杂交，都必须经过五大过程，即组织细胞的固定，预杂交、杂交、冲洗和显示。本发明采用RNA-RNA的杂交方式，合成的探针（mRNA）和检测的靶mRNA是采用碱基互补（杂交互补）的原理，同时经过长时间研究和观察，启动和中止处得残基对检测的结果没有影响（因为，发明人采用的mRNA序列都超过600bp以上）。

鉴于目前临床上癌症的诊断（影像医学和生化指标物都是肿瘤形成后的诊断）是晚期诊断，治疗也是晚期治疗，导致死亡率不降的医治模式。本发明的初衷是想改变目前临床上重大疾病的诊治模式，从治已病变成预防性治未病，达到预防性诊治，将目前影像医学手段和众多生化标记物无法检测到癌前变mRNA水平量化改变技术，做了创新性的技术突破，提供癌前变mRNA水平筛查技术。使临床上有了一项新的癌前变mRNA水平真正早期筛查的技术，为临床癌症的诊治争取时间和空间。

发明内容

本发明的目的首先是提供一种原位杂交检测试剂盒，其包含原位杂交检测探针和标记物。 

其次，本发明还要提供上述试剂盒用于与前列腺癌变前期筛查及术复发、转移早期预警相关的原位杂交检测方法。

为实现本发明的目的，本发明的技术方案如下：

本发明首先提供一种原位杂交检测试剂盒，其包括杂交探针和标记物，其中，所述的杂交探针分别是SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示序列，为PTEN和PHLPP1基因的中间一段序列，SEQ ID NO.1从PTEN基因的1300到2100bp序列长度，SEQ ID NO.2从PHLPP1基因的2000到2900bp序列长度。PTEN基因位于染色体10q23.3"，如SEQ ID NO.3所示序列，CDS： 1032..2243bp，PHLPP1基因如SEQ ID NO.4所示序列，CDS是246..5399bp，位于染色体18q21.33"。（在探针标记过程中如果基因序列太长，超过1000bp以上，我们会用CDS的序列来设计探针，如果CDS的序列也超过1000bp以上，会采用基因的中间一段碱基序列来合成探针，碱基序列不少于500bp，探针合成后要做序列检测，并对功能进行临床意义的分析）。

本发明试剂盒的一个优选方案是，所述的标记物选自放射性物质、化学发光或显色物质、生物素、金属鲎、荧光素、酶及纳米材料。

本发明试剂盒的一个优选方案是还包括杂交液。

本发明试剂盒的一个优选方案是还包括增强剂。

本发明试剂盒的一个优选方案是还包括显色剂。

本发明的癌变前期PTEN和PHLPP1基因筛查试剂盒应用价值在于，能在mRNA水平，对前列腺癌变前期筛查，及癌变后或术后复发、转移、扩散发生预警，进一步配合临床治疗。

本发明还提供一种PTEN和PHLPP1基因原位杂交的检测方法，包括以下步骤： 

（1）在上面所述的杂交探针与靶序列可形成稳定杂交复合体的条件下，将底物中待测RNA与杂交探针接触，形成杂交复合体；和

（2）检测所述杂交复合体。

本发明所述的检测方法，其中优选地是，所述的可形成稳定杂交复合体的条件为：核酸杂交的温度为42℃；核酸杂交的时间为16－24小时。

本发明所述的检测方法，其中优选地是，所述的底物选用人的血液白细胞标本或其它器官组织细胞标本。更优选地是，所述的血液标本或其它器官组织细胞标本来自癌症患者、癌症高危人群、癌症好发家族、健康人。

本发明所述的检测方法，其中优选地是，所述的癌症高危人群、癌症好发家族、前列腺癌患者。

本发明的检测试剂盒是采用核酸杂交技术和组化免疫方法相结合，以PTEN和PHLPP1基因的一级转录功能产物mRNA为检测对象，合成探针是PTEN和PHLPP1基因的RNA序列，检测的底物是人体血液标本白细胞或组织细胞的RNA的表达量。原位杂交技术的显示方法能提供PTEN和PHLPP1基因的半定量或定量表达程度判定。根据杂交后免疫组化显色判定以上基因的表达量，正常人PTEN和PHLPP1基因高表达，即大量显色，PTEN和PHLPP1基因在癌症病人和正常人有显着差异，该基因的表达量比正常人表达量都低，大部分零表达。

本发明的诊断试剂盒的组份是由杂交探针，杂交液，显色剂，增效剂等组成。本试剂盒的核酸杂交原理是分子生物学业内人士均熟知，具体操作步骤是标本处理、预杂交、杂交、免疫组化染色、镜下进行定量分析、结果报告，其中杂交的具体步骤包括：

1).将待测标本放入反应槽中；

2).仪器自动弃去液体，自动加消化液； 

3).仪器自动弃去液体，自动后固定；

4).仪器自动弃去液体，自动预杂交（42℃）；

5).仪器自动弃去液体，自动清洗；

6).仪器自动弃去液体，自动杂交（42℃）；

7).仪器自动弃去液体，自动清洗；

8).仪器自动弃去液体，自动与DIG抗体培养（室温）；

9).仪器自动弃去液体，自动清洗，显色；

10).取出封片镜检。

本发明的一个优选实施例的方案是：以PTEN和PHLPP1基因为目的基因合成的核酸探针用地高辛标记（地高辛标记的cDNA、RNA和寡核苷酸探针，不但探针的具有生物素标记优点，还克服了生物素标记的探针在原位杂交过程中受组织内源性生物素干忧等缺点），将该杂交探针与人体血液白细胞的待测RNA核酸进行杂交，再用免疫组化的方法显色，在光镜下观察mRNA的存在和定位,根据染色的细胞数，判断目的基因的表达量。

本发明方法是目前常用的核酸原位杂交技术，该方法通过检测底物细胞中的PTEN和PHLPP1基因表达量，用来确定癌变前期的mRNA变化量，预警前列腺癌变是否发生及前列腺癌患者术后是否复发、转移的预测。因为PTEN和PHLPP1基因在正常人中高表达，如果PTEN和PHLPP1基因表达量高，说明正常。如果表达量降低或零表达说明癌变已发生，或癌症病人术后已经复发、转移，从而获得癌症的诊断信息。一个试剂盒可以多人份使用或一人份使用。

如上所述，当检测到PTEN和PHLPP1基因的表达低于正常对照时，则可预测受试者为前列腺癌变病理过程已发生。

本发明具有如下有益效果：

本发明的临床意义是更早期跟踪检测前列腺癌变发生和病理演变过程中PTEN和PHLPP1基因mRNA表达量的变化，预警前列腺癌发生、发展趋势。本发明的诊断试剂盒与临床上其它检测与癌症标志物，以及影像医学检查有显着不同。本发明可以在基因转录的一级功能产物mRNAshuip1检测PTEN和PHLPP1基因异常表达，在影像医学检查未发现占位性癌病灶复发之前，癌症生化指标未产生异常之前，亦未形成肿瘤之前，能及早做到以上基因表达异常的信息采集，给临床癌症病患一个真正的早期诊断以及治疗后转移复发及早预测。这样才有可能实施癌症的早期筛查、早期预防、早期治疗，有可能从源头上彻底根治癌症恶疾。

此外，本发明提供的试剂盒具有灵敏度高、特异性强的特点，同时，本发明的检测方法操作方便、简单，能在区级以上医院普遍使用和推广。

附图说明

图1是本发明PTEN和PHLPP1基因原位杂交技术流程图。

图2是本发明实施例中前列腺癌症病人PTEN表达降低图片。

图3是高位人群和家属史人员图片。

图4是本发明实施例中正常人PTEN和PHLPP1表达图片。

图5是本发明实施例中前列腺癌症病人PHLPP1表达降低图片。

具体实施方式

下面结合实施例，更具体地说明本发明的内容。应该理解，下面的实施例用于说明而非限定本发明内容，任何形式上的改变或变通将落入本发明的保护范围。

实施例1

按照常规方法制备本实施例的原位杂交试剂盒，该试剂盒包括以PTEN和PHLPP1基因为检测目的基因设计的杂交探针、标记物、说明书，其中：

本实施例的探针标记物选用地高辛。

试剂盒杂交液组成：

消化液	100μL/管	1管/盒	无色透明液体
				保护液	100μL/管	1管/盒	无色透明液体
预杂交液	1300μL/管	2管/盒	无色透明液体
				正义杂液	10μL/管	1管/盒	无色透明液体
反义杂液	10μL/管	1管/盒	无色透明液体
				封闭液	1000μL/管	1管/盒	无色透明液体
碱性磷酸酶抗体	1μL/管	1管/盒	无色透明液体
				显色剂A	175μL/管	1管/盒	黄色液体
显色剂B	320μL/管	1管/盒	无色透明液体
				缓冲液Ⅰ	90mL/瓶	1瓶/盒	浅黄色或无色透明液体
缓冲液Ⅱ	80mL/瓶	1瓶/盒	浅黄色或无色透明液体
				缓冲液Ⅲ	20mL/瓶	3瓶/盒	浅黄色或无色透明液体
缓冲液Ⅳ	90mL/瓶	1瓶/盒	浅黄色或无色透明液体
				固定液	90mL/瓶	1瓶/盒	无色透明液体
阳性对照标本	12片/盒

两个基因同时使用，试剂的量将增加一倍。

配制试剂使用浓度：

1).将10×缓冲液Ⅰ用三蒸水按1:10稀释成1×缓冲液Ⅰ；

2).将20×缓冲液Ⅱ用三蒸水按1:10稀释成2×缓冲液Ⅱ；

按1:100稀释成0.2×缓冲液Ⅱ; 按1:200稀释成0.1×缓冲液Ⅱ；

3).将10×缓冲液Ⅲ用三蒸水按1:10稀释成1×缓冲液Ⅲ；

4).10×缓冲液Ⅳ用三蒸水按1:10稀释成×缓冲液 Ⅳ (取1#，2#，3#各10mL, 加水至100mL既可)。

实施例2

应用核酸原位杂交检测方法对各组血液标本PTEN和PHLPP1基因表达量的实施过程：

1).取待测标本四张，每个基因二张；

2).在玻璃缸里加入消化液(消化液100μL加1×缓冲液Ⅰ99.9ml，即为使用浓度)50 ml，37℃水浴预热10min，放进16张玻片，37℃处理12 min, 再用1×缓冲液Ⅰ洗5min；

3).用0.2%的保护液(保护液1ml加1×缓冲液                                               

, 99ml即为使用浓度)洗10min, 三蒸水洗5min（以上过程都在玻璃缸进行），取出玻片，让其自然干燥；

4).将玻片放入保湿盒内, 加预杂交液25μL/片（加在有细胞的地方），盖上盖玻片，盖紧保湿盒，放在42℃恒温水浴箱中3h以上；

5).取出玻片,弃去盖玻片，将玻片放入玻璃缸内,用70%、90%、95%的乙醇各洗2min，取出，自然干燥；

6).将玻片放入保湿盒内，一张加正义杂交液25μL/片，另一张加反义杂交液25μL/片，盖上盖玻片, 盖紧保湿盒，放在42℃恒温水浴箱中16-24h；

7).取出玻片,弃去盖玻片, 将玻片放入玻璃缸内：

  在42℃恒温水浴箱中用2×缓冲液Ⅱ洗两次,每次15min；

  在42℃恒温水浴箱中用0.2×缓冲液Ⅱ洗一次,每次15min； 

  在42℃恒温水浴箱中用0.1×缓冲液Ⅱ洗两次,每次15min；

8).用1×缓冲液Ⅲ洗30s,取出玻片,自然干燥；

9).将玻片放入保湿盒内,加0.5%封闭液（1ml封闭液加5ml 1×缓冲液Ⅲ）100μL/片, 盖紧保湿盒，在室温下作用30min。（此步骤不需加盖玻片）；

10).取出玻片,用1×缓冲液Ⅲ洗30s,自然干燥；

11).将玻片放入保湿盒内, 加X-AP抗体(取一管碱性磷酸酶抗体，向其中加入1.8ml 1×缓冲液Ⅲ)100μL/片,盖紧保湿盒在室温下作用30min，时间不能过长，否则会产生假阳性（此步骤不需加盖玻片）；

12).取出玻片，用1×缓冲液Ⅲ洗3次, 每次15min；

13).用1×缓冲液Ⅳ洗2min，加显色剂(显色剂A73.3μL，显色剂B157.5μL加到30mL 1×缓冲液Ⅳ中,混匀)，室温避光16h到18h以上；

14).用三蒸水洗5min，自然干燥，（用甘油加10%的1×缓冲液Ⅰ混匀）封片镜检。

两个基因以上的试剂量和过程都增加一倍。

本发明的核酸原位杂交检测方法将目的基因用地高辛标记，成为RNA核酸探针，将探针与人体白细胞的待测RNA核酸进行杂交，再用免疫组化的方法显色，因此在光镜下观察mRNA的存在和定位,根据染色的细胞数，判断目的基因的表达量。

前列腺癌病人20名，高危和家属史20名，正常对照组20名。抽所有待检人的外周血3-5毫升（分离白细胞）做原位杂交。结果表示，所有癌症患者PTEN和PHLPP1基因表达降低，细胞染色浅或无染色；高危人群和家属史人员表达降低，小数染色；正常对照组PTEN和PHLPP1基因表达高，细胞多数染色具体结果见图2（癌症病人）、图3、图4，图5（癌症病人）。

 

前列腺癌人数	表达量%	高危人数	表达量%	正常人数	表达量%
						1	8	1	15	1	70
2	0	2	16	2	72
						3	2	3	22	3	62
4	0	4	15	4	58
						5	0	5	10	5	50
6	0	6	18	6	82
						7	2	7	16	7	72
8	6	8	15	8	56
						9	6	9	21	9	64
10	0	10	0	10	48
						12	0	12	6	12	54
13	0	13	0	13	66
						14	0	14	12	14	92
15	0	15	18	15	80
						16	4	16	16	16	70
17	2	17	6	17	72
						18	8	18	10	18	46
19	6	19	13	19	66
						20	2	20	18	20	60

前列腺癌人数	表达量%	高危人数	表达量%	正常人数	表达量%
						1	0	1	15	1	80
2	0	2	17	2	70
						3	0	3	10	3	64
4	0	4	13	4	40
						5	3	5	12	5	48
6	2	6	16	6	58
						7	8	7	14	7	40
8	2	8	11	8	60
						9	6	9	10	9	56
10	3	10	13	10	36
						12	9	12	18	12	62
13	2	13	12	13	57
						14	2	14	14	14	88
15	3	15	17	15	82
						16	0	16	10	16	74
17	0	17	16	17	78
						18	2	18	9	18	50
19	4	19	14	19	52
						20	6	20	16	20	54

 

序列表

 

SEQ ID NO：1（探针序列）

1300 tgaagaccat aacccaccac

     1321 agctagaact tatcaaaccc ttttgtgaag atcttgacca atggctaagt gaagatgaca

     1381 atcatgttgc agcaattcac tgtaaagctg gaaagggacg aactggtgta atgatatgtg

     1441 catatttatt acatcggggc aaatttttaa aggcacaaga ggccctagat ttctatgggg

     1501 aagtaaggac cagagacaaa aagggagtaa ctattcccag tcagaggcgc tatgtgtatt

     1561 attatagcta cctgttaaag aatcatctgg attatagacc agtggcactg ttgtttcaca

     1621 agatgatgtt tgaaactatt ccaatgttca gtggcggaac ttgcaatcct cagtttgtgg

     1681 tctgccagct aaaggtgaag atatattcct ccaattcagg acccacacga cgggaagaca

     1741 agttcatgta ctttgagttc cctcagccgt tacctgtgtg tggtgatatc aaagtagagt

     1801 tcttccacaa acagaacaag atgctaaaaa aggacaaaat gtttcacttt tgggtaaata

     1861 cattcttcat accaggacca gaggaaacct cagaaaaagt agaaaatgga agtctatgtg

     1921 atcaagaaat cgatagcatt tgcagtatag agcgtgcaga taatgacaag gaatatctag

     1981 tacttacttt aacaaaaaat gatcttgaca aagcaaataa agacaaagcc aaccgatact

     2041 tttctccaaa ttttaaggtg aagctgtact tcacaaaaac agtagaggag ccgtcaaatc

SEQ ID NO：2 （探针序列）

2000 ccactaattg gtggaaaagt agaagaagtg aaaaagcacc

     2041 aacactgttt agcatttagc tcctctggac cccaaagcca gacttactac atttgctttg

     2101 atactttcac agaatactta aggtggctgc gacaagtctc caaggttgca tcccagcgca

     2161 ttagctcagt ggacctctcg tgttgtagcc tggaacatct gcctgccaac ctcttctaca

     2221 gccaagacct cactcatctc aatttaaaac aaaacttcct aaggcagaac cctagccttc

     2281 cagctgccag ggggcttaat gaactgcaaa ggttcaccaa gttgaagagt cttaaccttt

     2341 ccaataatca tttaggggac ttcccactgg cagtctgcag tattccaacc ctggcagagc

     2401 tgaacgtgtc ctgcaatgcc ctgcgatcag tcccggcagc cgttggagtg atgcacaact

     2461 tacagacatt tttgttggat ggaaactttc tccaatccct tcctgctgag ttggagaaca

     2521 tgaagcagct tagttatctg ggtctttctt tcaatgaatt tactgacatt cccgaagtat

     2581 tggagaaatt gactgctgtg gataaacttt gtatgtctgg aaactgtgtg gagaccctta

     2641 ggctacaggc tttaagaaaa atgcctcaca ttaaacatgt ggatctaagg ttgaacgtaa

     2701 ttaggaagct gatagcagat gaagtggact ttctacagca tgttactcag cttgacctac

     2761 gagacaataa gcttggtgat ctagatgcta tgattttcaa caacattgaa gttttacact

     2821 gtgaaaggaa tcaactggtc acattagaca tctgtggcta tttcctaaaa gcgctctatg

     2881 cctcttctaa tgaacttgtt caacttgatg

 

SEQ ID NO：3 PTEN基因序列和号：NM-000314

1 cctcccctcg cccggcgcgg tcccgtccgc ctctcgctcg cctcccgcct cccctcggtc

       61 ttccgaggcg cccgggctcc cggcgcggcg gcggaggggg cgggcaggcc ggcgggcggt

      121 gatgtggcgg gactctttat gcgctgcggc aggatacgcg ctcggcgctg ggacgcgact

      181 gcgctcagtt ctctcctctc ggaagctgca gccatgatgg aagtttgaga gttgagccgc

      241 tgtgaggcga ggccgggctc aggcgaggga gatgagagac ggcggcggcc gcggcccgga

      301 gcccctctca gcgcctgtga gcagccgcgg gggcagcgcc ctcggggagc cggccggcct

      361 gcggcggcgg cagcggcggc gtttctcgcc tcctcttcgt cttttctaac cgtgcagcct

      421 cttcctcggc ttctcctgaa agggaaggtg gaagccgtgg gctcgggcgg gagccggctg

      481 aggcgcggcg gcggcggcgg cacctcccgc tcctggagcg ggggggagaa gcggcggcgg

      541 cggcggccgc ggcggctgca gctccaggga gggggtctga gtcgcctgtc accatttcca

      601 gggctgggaa cgccggagag ttggtctctc cccttctact gcctccaaca cggcggcggc

      661 ggcggcggca catccaggga cccgggccgg ttttaaacct cccgtccgcc gccgccgcac

      721 cccccgtggc ccgggctccg gaggccgccg gcggaggcag ccgttcggag gattattcgt

      781 cttctcccca ttccgctgcc gccgctgcca ggcctctggc tgctgaggag aagcaggccc

      841 agtcgctgca accatccagc agccgccgca gcagccatta cccggctgcg gtccagagcc

      901 aagcggcggc agagcgaggg gcatcagcta ccgccaagtc cagagccatt tccatcctgc

      961 agaagaagcc ccgccaccag cagcttctgc catctctctc ctcctttttc ttcagccaca

     1021 ggctcccaga catgacagcc atcatcaaag agatcgttag cagaaacaaa aggagatatc

     1081 aagaggatgg attcgactta gacttgacct atatttatcc aaacattatt gctatgggat

     1141 ttcctgcaga aagacttgaa ggcgtataca ggaacaatat tgatgatgta gtaaggtttt

     1201 tggattcaaa gcataaaaac cattacaaga tatacaatct ttgtgctgaa agacattatg

     1261 acaccgccaa atttaattgc agagttgcac aatatccttt tgaagaccat aacccaccac

     1321 agctagaact tatcaaaccc ttttgtgaag atcttgacca atggctaagt gaagatgaca

     1381 atcatgttgc agcaattcac tgtaaagctg gaaagggacg aactggtgta atgatatgtg

     1441 catatttatt acatcggggc aaatttttaa aggcacaaga ggccctagat ttctatgggg

     1501 aagtaaggac cagagacaaa aagggagtaa ctattcccag tcagaggcgc tatgtgtatt

     1561 attatagcta cctgttaaag aatcatctgg attatagacc agtggcactg ttgtttcaca

     1621 agatgatgtt tgaaactatt ccaatgttca gtggcggaac ttgcaatcct cagtttgtgg

     1681 tctgccagct aaaggtgaag atatattcct ccaattcagg acccacacga cgggaagaca

     1741 agttcatgta ctttgagttc cctcagccgt tacctgtgtg tggtgatatc aaagtagagt

     1801 tcttccacaa acagaacaag atgctaaaaa aggacaaaat gtttcacttt tgggtaaata

     1861 cattcttcat accaggacca gaggaaacct cagaaaaagt agaaaatgga agtctatgtg

     1921 atcaagaaat cgatagcatt tgcagtatag agcgtgcaga taatgacaag gaatatctag

     1981 tacttacttt aacaaaaaat gatcttgaca aagcaaataa agacaaagcc aaccgatact

     2041 tttctccaaa ttttaaggtg aagctgtact tcacaaaaac agtagaggag ccgtcaaatc

     2101 cagaggctag cagttcaact tctgtaacac cagatgttag tgacaatgaa cctgatcatt

     2161 atagatattc tgacaccact gactctgatc cagagaatga accttttgat gaagatcagc

     2221 atacacaaat tacaaaagtc tgaatttttt tttatcaaga gggataaaac accatgaaaa

     2281 taaacttgaa taaactgaaa atggaccttt ttttttttaa tggcaatagg acattgtgtc

     2341 agattaccag ttataggaac aattctcttt tcctgaccaa tcttgtttta ccctatacat

     2401 ccacagggtt ttgacacttg ttgtccagtt gaaaaaaggt tgtgtagctg tgtcatgtat

     2461 ataccttttt gtgtcaaaag gacatttaaa attcaattag gattaataaa gatggcactt

     2521 tcccgtttta ttccagtttt ataaaaagtg gagacagact gatgtgtata cgtaggaatt

     2581 ttttcctttt gtgttctgtc accaactgaa gtggctaaag agctttgtga tatactggtt

     2641 cacatcctac ccctttgcac ttgtggcaac agataagttt gcagttggct aagagaggtt

     2701 tccgaagggt tttgctacat tctaatgcat gtattcgggt taggggaatg gagggaatgc

     2761 tcagaaagga aataatttta tgctggactc tggaccatat accatctcca gctatttaca

     2821 cacacctttc tttagcatgc tacagttatt aatctggaca ttcgaggaat tggccgctgt

     2881 cactgcttgt tgtttgcgca ttttttttta aagcatattg gtgctagaaa aggcagctaa

     2941 aggaagtgaa tctgtattgg ggtacaggaa tgaaccttct gcaacatctt aagatccaca

     3001 aatgaaggga tataaaaata atgtcatagg taagaaacac agcaacaatg acttaaccat

     3061 ataaatgtgg aggctatcaa caaagaatgg gcttgaaaca ttataaaaat tgacaatgat

     3121 ttattaaata tgttttctca attgtaacga cttctccatc tcctgtgtaa tcaaggccag

     3181 tgctaaaatt cagatgctgt tagtacctac atcagtcaac aacttacact tattttacta

     3241 gttttcaatc ataatacctg ctgtggatgc ttcatgtgct gcctgcaagc ttcttttttc

     3301 tcattaaata taaaatattt tgtaatgctg cacagaaatt ttcaatttga gattctacag

     3361 taagcgtttt ttttctttga agatttatga tgcacttatt caatagctgt cagccgttcc

     3421 acccttttga ccttacacat tctattacaa tgaattttgc agttttgcac attttttaaa

     3481 tgtcattaac tgttagggaa ttttacttga atactgaata catataatgt ttatattaaa

     3541 aaggacattt gtgttaaaaa ggaaattaga gttgcagtaa actttcaatg ctgcacacaa

     3601 aaaaaagaca tttgattttt cagtagaaat tgtcctacat gtgctttatt gatttgctat

     3661 tgaaagaata gggttttttt tttttttttt tttttttttt ttaaatgtgc agtgttgaat

     3721 catttcttca tagtgctccc ccgagttggg actagggctt caatttcact tcttaaaaaa

     3781 aatcatcata tatttgatat gcccagactg catacgattt taagcggagt acaactacta

     3841 ttgtaaagct aatgtgaaga tattattaaa aaggtttttt tttccagaaa tttggtgtct

     3901 tcaaattata ccttcacctt gacatttgaa tatccagcca ttttgtttct taatggtata

     3961 aaattccatt ttcaataact tattggtgct gaaattgttc actagctgtg gtctgaccta

     4021 gttaatttac aaatacagat tgaataggac ctactagagc agcatttata gagtttgatg

     4081 gcaaatagat taggcagaac ttcatctaaa atattcttag taaataatgt tgacacgttt

     4141 tccatacctt gtcagtttca ttcaacaatt tttaaatttt taacaaagct cttaggattt

     4201 acacatttat atttaaacat tgatatatag agtattgatt gattgctcat aagttaaatt

     4261 ggtaaagtta gagacaacta ttctaacacc tcaccattga aatttatatg ccaccttgtc

     4321 tttcataaaa gctgaaaatt gttacctaaa atgaaaatca acttcatgtt ttgaagatag

     4381 ttataaatat tgttctttgt tacaatttcg ggcaccgcat attaaaacgt aactttattg

     4441 ttccaatatg taacatggag ggccaggtca taaataatga cattataatg ggcttttgca

     4501 ctgttattat ttttcctttg gaatgtgaag gtctgaatga gggttttgat tttgaatgtt

     4561 tcaatgtttt tgagaagcct tgcttacatt ttatggtgta gtcattggaa atggaaaaat

     4621 ggcattatat atattatata tataaatata tattatacat actctcctta ctttatttca

     4681 gttaccatcc ccatagaatt tgacaagaat tgctatgact gaaaggtttt cgagtcctaa

     4741 ttaaaacttt atttatggca gtattcataa ttagcctgaa atgcattctg taggtaatct

     4801 ctgagtttct ggaatatttt cttagacttt ttggatgtgc agcagcttac atgtctgaag

     4861 ttacttgaag gcatcacttt taagaaagct tacagttggg ccctgtacca tcccaagtcc

     4921 tttgtagctc ctcttgaaca tgtttgccat acttttaaaa gggtagttga ataaatagca

     4981 tcaccattct ttgctgtggc acaggttata aacttaagtg gagtttaccg gcagcatcaa

     5041 atgtttcagc tttaaaaaat aaaagtaggg tacaagttta atgtttagtt ctagaaattt

     5101 tgtgcaatat gttcataacg atggctgtgg ttgccacaaa gtgcctcgtt tacctttaaa

     5161 tactgttaat gtgtcatgca tgcagatgga aggggtggaa ctgtgcacta aagtgggggc

     5221 tttaactgta gtatttggca gagttgcctt ctacctgcca gttcaaaagt tcaacctgtt

     5281 ttcatataga atatatatac taaaaaattt cagtctgtta aacagcctta ctctgattca

     5341 gcctcttcag atactcttgt gctgtgcagc agtggctctg tgtgtaaatg ctatgcactg

     5401 aggatacaca aaaataccaa tatgatgtgt acaggataat gcctcatccc aatcagatgt

     5461 ccatttgtta ttgtgtttgt taacaaccct ttatctctta gtgttataaa ctccacttaa

     5521 aactgattaa agtctcattc ttgtcaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aa

 

 

SEQ ID NO：4 PHLPP1基因序列和号：NM_194449

1 ccgcgacccg ggcggggagg gcgtgtgtcg ggggggcggt ggcggcgagg cgggcgcgcg

       61 ggatggaaca ctgagacacc gacggaatgc tccgaatcgc cacataatcc cctggaacgg

      121 ccgcgcacaa cgccattggc ttctcccttc tccgcgcgcc gccgccgtct cccacctccg

      181 cctcatcgcc tccctctccg cccgctgcct ccggagctgg gggggaaacg cgaagcccca

      241 ctgcaatgga gcccgccgcc gcggccacgg tacagcgact ccccgagctc ggcagggagg

      301 accgagcttc ggctccggcg gccgccgctg cggcagcagc agcagcagcg gcggccgcgg

      361 cggctctggc ggcggcggcc gggggcggcc ggagtccgga gcccgcgctg accccggcgg

      421 ccccgagcgg cgggaacggc agcggcagcg gggcgcggga agaggcccca ggcgaggcgc

      481 cgccggggcc gctgccgggc agagcggggg gtgccgggcg caggaggcgg cgcggggcgc

      541 cccagcccat tgccggcggg gctgcccccg tacccggggc cggcggcggc gccaactccc

      601 tcctgctgag gagagggcgg ctgaagagga atctgtccgc ggccgccgcg gccgcctcct

      661 cgtcgtcgtc gtcctcggcc gctgctgcct cgcactcccc cggcgctgcc ggcctccccg

      721 cctcctgctc ggcctcggcg tcgctgtgca cccggagcct ggacaggaag acgctgcttc

      781 tgaagcaccg gcagacgctg cagctgcagc cgtcggaccg ggactgggtg aggcaccagc

      841 tccagcgcgg ctgcgtgcac gtcttcgacc gccacatggc ctcgacctac ctgcgcccgg

      901 tgctctgcac actggacacc acggccggcg aggtggccgc ccgcctgctg cagctgggcc

      961 acaaaggcgg cggcgtggtg aaggtgctgg gccaggggcc cggagccgcc gccgcccggg

     1021 agcccgctga accgcccccc gaggccggcc cccggctggc gcccccggag ccgcgggact

     1081 cggaggtacc gcccgcgagg agcgcgccgg gtgccttcgg ggggcctccg cgcgcgcccc

     1141 ccgccgacct acccctgccc gtcggcggcc cgggcgggtg gtcgcgccgc gccagcccag

     1201 cgccctcgga ctccagcccc ggcgagccgt tcgttggggg ccctgtctct tcgccccgcg

     1261 ccccacggcc tgtggtctcc gacaccgaga gcttcagtct gagtcccagc gccgagagcg

     1321 tgtctgaccg gttggacccc tacagcagcg gcggcggctc ctcgtcgtcg tcggaagagc

     1381 tcgaggccga cgcagcctcg gccccgacgg gggtcccggg ccagccccgc cgtcccggcc

     1441 accccgcgca gcccctcccg cttccccaga cggcttcctc gcctcagccg cagcagaaag

     1501 ccccgagggc cattgacagc ccgggcgggg ccgtccgcga ggggtcgtgc gaggagaagg

     1561 cagcggcagc cgtggccccg ggaggcctcc agtctacccc cgggaggagc ggggtgaccg

     1621 cggagaaggc gcctccgccg cccccgccgc ccaccctgta cgtgcagctc cacggagaga

     1681 ccacccggcg cttggaggcg gaggagaagc cattgcagat ccaaaatgac tacctcttcc

     1741 aactgggatt tggggagctg tggagggtgc aggaggaagg catggactcg gagattggct

     1801 gcctcatccg cttctatgca ggaaaacctc acagcacggg tagctctgaa cggattcagc

     1861 tctcaggaat gtataatgtc cgtaaaggca agatgcagtt gccagtgaac cgatggacaa

     1921 gacgccaagt catcctatgt gggacctgcc tgatagtatc atctgtgaaa gacagcttga

     1981 ccggaaagat gcatgttctg ccactaattg gtggaaaagt agaagaagtg aaaaagcacc

     2041 aacactgttt agcatttagc tcctctggac cccaaagcca gacttactac atttgctttg

     2101 atactttcac agaatactta aggtggctgc gacaagtctc caaggttgca tcccagcgca

     2161 ttagctcagt ggacctctcg tgttgtagcc tggaacatct gcctgccaac ctcttctaca

     2221 gccaagacct cactcatctc aatttaaaac aaaacttcct aaggcagaac cctagccttc

     2281 cagctgccag ggggcttaat gaactgcaaa ggttcaccaa gttgaagagt cttaaccttt

     2341 ccaataatca tttaggggac ttcccactgg cagtctgcag tattccaacc ctggcagagc

     2401 tgaacgtgtc ctgcaatgcc ctgcgatcag tcccggcagc cgttggagtg atgcacaact

     2461 tacagacatt tttgttggat ggaaactttc tccaatccct tcctgctgag ttggagaaca

     2521 tgaagcagct tagttatctg ggtctttctt tcaatgaatt tactgacatt cccgaagtat

     2581 tggagaaatt gactgctgtg gataaacttt gtatgtctgg aaactgtgtg gagaccctta

     2641 ggctacaggc tttaagaaaa atgcctcaca ttaaacatgt ggatctaagg ttgaacgtaa

     2701 ttaggaagct gatagcagat gaagtggact ttctacagca tgttactcag cttgacctac

     2761 gagacaataa gcttggtgat ctagatgcta tgattttcaa caacattgaa gttttacact

     2821 gtgaaaggaa tcaactggtc acattagaca tctgtggcta tttcctaaaa gcgctctatg

     2881 cctcttctaa tgaacttgtt caacttgatg tttacccagt tccaaattat ctgtcctaca

     2941 tggatgtttc aaggaaccgc ttagaaaatg tgcctgagtg ggtatgtgaa agccgaaagc

     3001 tagaagtttt ggatattggc cataatcaaa tatgtgaact tcctgcccgc ttattttgta

     3061 atagcagtct ccggaaacta ctggcaggac acaaccagtt ggcaaggctg cctgaaaggc

     3121 tagaaagaac ctcggtggag gtcttggatg tgcaacacaa ccagctcctt gagctcccac

     3181 ctaaccttct gatgaaggct gacagcctga gattcctgaa cgcctctgcg aacaaactgg

     3241 aaagccttcc tccagccacg ctttccgaag agacaaacag tatcttacaa gagttgtatt

     3301 tgacaaataa cagcctcaca gacaaatgtg tgcccttgtt aacgggacac ccccatttga

     3361 agatccttca catggcctat aaccgacttc agagttttcc agcaagtaaa atggcgaaac

     3421 tggaggaact tgaagaaatt gatctcagtg ggaataagct gaaagccatc ccaacaacga

     3481 tcatgaattg caggcgcatg cacaccgtga ttgctcactc caactgcatc gaggtctttc

     3541 ccgaagttat gcagctccca gagatcaagt gtgtggacct gagctgtaat gagctaagtg

     3601 aagtcacatt accagaaaac ctgcctccca aactgcagga gctagacctg actggaaacc

     3661 cgcgccttgt ccttgatcac aaaaccctgg aactactgaa taatatccgc tgtttcaaga

     3721 ttgatcagcc ttctacagga gacgcttccg gagccccagc tgtatggagt catggttaca

     3781 ctgaagcttc gggggtaaaa aacaagttgt gtgtcgcagc cctgtcggtg aataacttct

     3841 gtgacaaccg cgaagccctg tatggtgtgt ttgacggaga ccggaatgtg gaggtgccct

     3901 accttctcca gtgcactatg agtgacattt tggctgaaga gctgcaaaaa acaaaaaacg

     3961 aagaagaata catggtcaat acattcattg tcatgcaaag gaaacttgga actgctgggc

     4021 agaagcttgg tggtgccgct gtcctttgtc atatcaagca tgaccctgtg gatccaggag

     4081 gatccttcac cttgacctct gctaatgtgg gcaagtgcca aacagttctc tgtcgaaatg

     4141 gaaagccgct gcctctgtcc agatcttaca tcatgagctg tgaagaagag ctgaagagga

     4201 ttaaacagca caaggccatt atcactgagg atggcaaggt gaacggagtg actgagtcca

     4261 cgcgcatcct gggctacacc ttcctccatc ccagtgtggt gcctcgcccc cacgtgcagt

     4321 ccgtgctcct gactccccag gatgagttct tcatcctagg cagtaagggg ttgtgggaca

     4381 gcctgtccgt cgaggaggcc gtggaagccg tgcgcaacgt gcccgatgcc ctggctgctg

     4441 ccaagaagct gtgtaccctg gcccagagct acggctgcca cgacagcatc agcgctgtgg

     4501 tggtgcagct cagtgtcact gaggacagct tctgctgctg cgagctcagc gccggtgggg

     4561 ctgtgccacc acccagtcct ggcatctttc ctccctcagt gaacatggtg atcaaggatc

     4621 ggccctcaga tgggctgggc gtgccgtcct ccagcagcgg catggcttcc gagattagca

     4681 gtgagctctc cacttctgag atgagcagcg aggtggggtc aacagcctcc gatgagcccc

     4741 cgcccggagc cctaagcgag aacagccctg cctaccccag tgagcagcgc tgcatgctcc

     4801 accccatctg tctgtccaac tccttccagc gccagctatc cagcgccacg ttctctagcg

     4861 ccttctccga caacggcctt gacagtgacg atgaggagcc catcgagggc gtcttcacca

     4921 acggcagccg ggtggaggtg gaggtggaca tccactgcag ccgggccaag gagaaggaga

     4981 aacagcagca cctgcttcag gtgccagcag aggccagtga tgagggcatt gtcatcagcg

     5041 ccaacgagga tgagccaggt ctgcccagga aggcagactt ctctgccgtt gggaccattg

     5101 ggcgccggag ggccaatggc tctgttgcgc cccaggaaag gagccacaat gtgatagagg

     5161 tggctacaga cgcacctctt cgaaagcctg gaggctattt tgctgccccg gctcagccgg

     5221 atcctgatga tcagtttatc atacccccgg agctggaaga ggaggtcaaa gaaatcatga

     5281 agcatcacca ggagcaacag cagcagcagc agccgccacc accccctcag ctccagccgc

     5341 agctgccgcg gcactaccag ctggaccagc tgccagatta ttacgacacg ccactatgac

     5401 ccagccgagc tgtttaacaa ataaactaac cacaaaagac tgagttgcaa gagtctccca

     5461 ggctcacatt aaaccagggg ttttactcca catccttccc ccagacactg ttcccaacct

     5521 gtcatcgcag ctaatctgta ggttctcttt ctttgggtta tttttttaag taatcaccac

     5581 tttcttctag tgatgcttta ccaatatgat ttacatttgt taacttctcc ccctaacata

     5641 tcagatatgt aaagacaaag aacaaaaggt ttaatatatt acagagaaac agttaatgat

     5701 aatgtaatat tttttaaaat ggctttttgt tgtttgtttg gaaggcaggg caggctgccg

     5761 ttgctaaatg atttaataat attgtaattc tgtatttctt tggggggaaa aggcttttgt

     5821 tttgttttgt tttgttttgt tttgtttttg tcttgaaaat aatagacatt tgtagaatat

     5881 ggagactaac tcctaggagt tgctttactc tgtcaggtga cttaagtcac tgggattcac

     5941 taattttctc tgagagaaca gctgattgag aatttccatt gtaaatagct cagtgttgta

     6001 tagtgaggct tacgatgttt tgtagtcttg gcgtaaggac acagcccaag taactgacgt

     6061 ttcccctccc cctcccctct gaggagcctg cctgcctcac aactcaccct cacttcactg

     6121 aatgaggagg ctgagcagct gcagtgtttc tgtccggagg aaatggatct taggccactg

     6181 gacaagaacc tgcacccaag ggccctgaac ccattttcct cccctgtccc agccttccca

     6241 ctttgacaga cacttttaac tgtgttcctt actgctgcca caatcagcat ggttgtatag

     6301 tgccccatta ggccatttac atacccagag ttatactcaa gcagaatgca caaatggaca

     6361 tgtcataatt tttgttacaa taaatatgaa atttacaagt a

 

Claims (10)

1.一种原位杂交检测试剂盒，包括杂交探针和标记物，其特征在于，所述的杂交探针分别为序列表SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2所示的序列。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的标记物选自放射性物质、化学发光或显色物质、生物素、金属鲎、荧光素、酶及纳米材料。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，该试剂盒还包括杂交液。

4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，该试剂盒还包括增效剂。

5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，该试剂盒还包括显色剂。

6.一种PTEN和PHLPP1基因原位杂交检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

（1）在权利要求1所述的杂交探针与靶序列可形成稳定杂交复合体的条件下，将底物中待测RNA与杂交探针接触，形成杂交复合体；和

（2）检测所述杂交复合体。

7.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述的可形成稳定杂交复合体的条件为：核酸杂交的温度为42℃；核酸杂交的时间为16－24小时。

8.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述的底物选用人的血液白细胞标本。

9.如权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述的血液白细胞标本选自癌症、癌症转移、高危人群、遗传家属、正常人标本。

10.PTEN和PHLPP1基因在制备检测前列腺癌病变原位杂交试剂盒中的应用。

Images