CN102539424B - 一种pH值乙醇法舌苔快速尿素酶的检测方法及试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种pH值乙醇法舌苔快速尿素酶的检测方法及试剂盒，该检测方法：A、用pH试纸测量口腔唾液的酸碱度；B、在快速尿素酶试剂杯中滴入95％乙醇液3～4滴，用牙签将杯底部附着的试剂颗粒与乙醇液搅匀；C、取舌背后部舌苔置入试剂杯中，搅匀，静置5分钟后在试剂杯中再滴入3～4滴溶解液，搅匀，静置5～10分钟，观察颜色变化；D、若变成红色，用pH试纸测量，将结果与口腔pH值比较，从而判断结果。试剂盒，包括有盒体，在所述的盒体内设有快速尿素酶试剂杯，盛装有1～10ml的溶解液和95％乙醇液的软塑瓶，检测范围5.5～9.0的pH精密试纸，棉签一包和牙签一包。本发明检测方法简单、无创、快速、价廉。
Description
技术领域
本发明涉及一种pH值乙醇法舌苔快速尿素酶的检测方法，本发明还涉及一种用于该pH值乙醇法舌苔快速尿素酶的检测方法的试剂盒。
背景技术
幽门螺杆菌与胃内、胃外多种疾病关系密切，由于其易致病性和与肿瘤相关性特点而受到广范的重视和不断深入的研究。现有技术方法普遍存在着测试手续复杂，使用操作不便，检测准确度低，检测结果不直观，安全系数低等缺点。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术中的不足之处，提供一种简单、无创、快速、价廉的pH值乙醇法舌苔快速尿素酶的检测方法，通过检测舌苔中是否存在尿素酶从而可判断是否存在幽门螺杆菌；
本发明的另一个目的是提供一种用于该pH值乙醇法舌苔快速尿素酶的检测方法的试剂盒。
为了达到上述目的，本发明采用以下方案：
一种pH值乙醇法舌苔快速尿素酶的检测方法，其特征在于包括以下步骤：
A、用pH试纸测量口腔唾液的酸碱度；
B、在快速尿素酶试剂杯中滴入95％乙醇液3～4滴，用牙签将杯底部附着的试剂颗粒与乙醇液搅匀；
C、用棉签拭去舌苔表面唾液，于舌背后部刮取米粒大小舌苔置入试剂杯中，搅匀，静置5分钟后在试剂杯中再滴入3～4滴溶解液，搅匀，静置5～10分钟，观察颜色变化；
D、若步骤C中的颜色变成红色，用pH试纸测量呈红色的试剂杯中液体的酸碱度，将结果与口腔pH值比较，如果试剂杯中液体的pH值低于口腔pH值，其反应结果视为阴性，即不含有尿素酶；如果pH值高于或等于口腔PH值者则视为阳性，即含有尿素酶。
如上所述的一种pH值乙醇法舌苔快速尿素酶的检测方法，其特征在于所述的pH试纸为pH精密试纸，检测范围：5.5～9.0。
如上所述的一种pH值乙醇法舌苔快速尿素酶的检测方法，其特征在于所述的快速尿素酶试剂杯为幽门螺杆菌快速诊断试剂杯。
本发明一种用于pH值乙醇法舌苔快速尿素酶的检测方法的试剂盒，其特征在于包括有盒体，在所述的盒体内设有快速尿素酶试剂杯，盛装有1～10ml的溶解液和95％乙醇液的软塑瓶，检测范围5.5～9.0的pH精密试纸，棉签一包和牙签一包。
综上所述，本发明的有益效果：
本发明检测方法简单、无创、快速、价廉通过检测舌苔中是否存在尿素酶从而可判断是否存在幽门螺杆菌。
具体实施方式
为了更好地理解本发明，下面结合具体实施例来对本发明作进一步说明，但本发明所要求保护的范围并不局限于实施例所记载的范围。
本发明pH值乙醇法舌苔快速尿素酶的检测方法，包括以下步骤：
A、用pH试纸测量口腔唾液的酸碱度；其中所述的pH试纸为pH精密试纸，检测范围：5.5～9.0；由上海三爱思试剂有限公司生产；
B、在快速尿素酶试剂杯中滴入95％乙醇液3～4滴，用牙签将杯底部附着的试剂颗粒与乙醇液搅匀；其中所述的快速尿素酶试剂杯幽门螺杆菌快速诊断试剂杯，由宁波美康生物科技有限公司生产；
C、用棉签拭去舌苔表面唾液，于舌背后部刮取米粒大小舌苔置入试剂杯中，搅匀，静置5分钟后在试剂杯中再滴入3～4滴溶解液，搅匀，静置5～10分钟，观察颜色变化；
D、若步骤C中的颜色变成红色，用pH试纸测量呈红色的试剂杯中液体的酸碱度，将结果与口腔pH值比较，如果试剂杯中液体的pH值低于口腔pH值，其反应结果视为阴性，即不含有尿素酶；如果pH值高于或等于口腔PH值者则视为阳性，即含有尿素酶。
本发明用于pH值乙醇法舌苔快速尿素酶的检测方法试剂盒，包括有盒体，在所述的盒体内设有快速尿素酶试剂杯盛装有1～10ml的溶解液和95％乙醇液的软塑瓶，检测范围5.5～9.0的pH精密试纸，棉签一包和牙签一包。
以下是采用本发明方法与其他方法作了一些对比试验：
对同一病例取舌苔、胃黏膜进行快速尿素酶试验(GRUT)。舌苔快速尿素酶试验(TURT)组分为乙醇法舌苔快速尿素酶试验组(A组)和乙醇稀释法舌苔快速尿素酶试验(B)对照组。
一、试验对象与方法
1.1试验对象：男197例，女203例；年龄14～75岁，平均37±2.83岁。
1.2诊断：慢性胃炎346例，胃溃疡2例，幽门管溃疡1例，复合溃疡1例，十二指肠溃疡27例，胆汁反流性胃炎13例，其它10例。
1.3材料：本发明试剂盒，其中包括快速尿素酶试剂杯，盛装有1～10ml的溶解液和95％乙醇液的软塑瓶，检测范围5.5～9.0的pH精密试纸，棉签一包和牙签一包。
1.4方法
1.4.1镜检前用pH试纸测量口腔(唾液)酸碱度。
1.4.2乙醇法实验组在快速尿素酶试剂杯中滴入95％乙醇3～4滴，用牙签将杯底部附着的试剂颗粒与乙醇液搅匀，再用棉签拭去舌苔表面唾液，于舌背后部刮取米粒大小舌苔置入试剂杯中，5分钟后滴入3～4滴溶解液，搅匀，静置5～10分钟，观察颜色变化。红色为阳性，不变色为阴性。对阳性标本用PH试纸检测杯液的酸碱度，如果PH值低于口腔PH值，以阴性处之。PH值高于或等于口腔PH值者则以阳性统计。
1.4.3乙醇稀释法对照组在另一快速尿素酶试剂杯中滴入3～4滴溶解液，将舌苔(同上)置入试剂杯中，5分钟后再滴入95％乙醇3～4滴，静置5～10分钟，观察颜色变化。阳性者再用PH试纸检测杯液的酸碱度，判断方法同上。
1.4.4胃黏膜快速尿素酶试验组在快速尿素酶试剂杯中滴入3～4滴溶解液将胃黏膜标本置入杯中，静置5～10分钟，观察颜色变化。如不变色视为阴性，红色视为阳性。
1.5统计方法采用SPSS13.0统计软件，计数资料进行卡方检验。
2结果
2.1性别与乙醇法TRUT的关系
本组男女比例0.97∶1，乙醇法TRUT阳性比92/95＝0.97∶1，X2＝0.004，P＞0.05。PH值介入后X2＝0.16，P＞0.05。GRUT阳性比32/26＝1.23∶1，X2＝0.952，P＞0.05。性别对TURT检测结果无影响。见表1。
表1性别RUT结果比较(例)
2.2年龄与TRUT的关系
本实验分6个年龄段，21～60岁占总病例数82.75％，阳性病例占TRUT阳性率92.75％，占GRUT阳性率86.21％。61岁以上病例数占总病例数的3％，20岁以下占总病例数的4.25％，两者合计7.25％，阳性病例占TURT7.05％，占GRUT阳性率13.79％。X2＝3.552，P＞0.05，年龄对TURT检测结果无影响。见表2。
表2年龄RUT结果比较(例)
2.3乙醇法TRUT阳性标本PH值变化与GRUT结果比较乙醇法TRUT试剂PH值与口腔PH值比较，增高60例，持平18例，降低109例。三者对应GRUT阳性率分别为75.00％、55.56％、2.75％。PH值降低标本占阳性标本58.29％，与GRUT符合率低。见表3。
表3乙醇法TRUT阳性pH值变化与GRUT比较(口腔pH作参照值)
2.4实验组与对照组结果比较
A组与B组比较X2＝9.70，P＜0.05，差异有统计学意义。见表4。
表4A、B组检测结果和pH值变化与GRUT比较(口腔pH作参照值)
2.5实验组和对照组与GRUT(G组)结果比较
将A、B组PH值降低标本纳入阴性范畴，对A、B、G三组进行统计。B组与A组X2＝10.81，P＜0.05，差异有显著性。B组与G组X2＝26.22，P＜0.05，差异有显著性。敏感度100％，特异度82.46％。A组与G组X2＝3.54，P＞0.05，差异无显著性，两组标本相符数为322+58＝380，符合率95％(380/400)。A组敏感度100％，特异度94.15％，阳性预测值74.36％，阴性预测值100％。见表5。
表5三组舌苔RUT与胃黏膜(G)RUT结果比较(例)
通过表1、表2的数据反映，在A组试验中性别和年龄无差异性，P＞0.05。在年龄段中小于20岁和大于60岁的病例只占总病例数的7.25％，两者占TRUT阳性率7.05％，占GRUT阳性率13.79％。虽然HP感染有年轻化的趋势，但接受检查的人群来源受客观因素影响，可控性较低。而21～60岁阳性病例占TRUT阳性率92.75％，占GRUT阳性率86.21％。充分说明TURT在年龄和性别两方面具有可靠的适应性。
本发明中pH法源于尿素酶变色原理，而乙醇法源于乙醇下述作用：95％乙醇与尿素酶试剂溶解液PH值均在5.5以下，不会改变试液的酸碱度；乙醇在细菌表面形成固化膜，对具有分泌尿素酶的细菌起到阻止尿素酶的释放和降低尿素酶的浓度，同时也对舌苔中其他成份进行清理。由于幽门螺植菌(HP)不惧强酸环境，且尿素酶的分泌量是其它分泌尿素酶细菌2～7倍，在滴入溶解液后继续分解尿素，提高试液的pH值产生阳性反应。
本发明中乙醇法TURT的特点：
pH值介入的乙醇法TRUT有两重作用：其一、95％的乙醇降低了假阳性率。其二、PH值测量排除了大部分假阳性标本。其中一个特点是当TRUT阴性时，GRUT呈阴性，无阳性标本；当GRUT阳性时，TRUT呈阳性，无阴性标本。另一个特点是TRUT阳性例数超过GRUT阳性数。这种情况恰恰印证了口腔是胃HP感染的菌源观点。那么，当TRUT呈阳性反应时应考虑HP感染的可能性。当TRUT呈阴性时不应忽略HP感染。多次TURT检测有益于HP感染的识别。该方法既可用于人群普查，又可用于HP感染治疗后的复查。
本发明检测方法中的注意事项
pH值的作用是鉴别假阳性和排除假阴性。在测量时应注意下面几个问题：
1、测量前不含服酸碱性食物或药物。
2、选择读数板跨度较小的PH试纸。
3、反复多次测量试液PH值以资对比。
刮取舌苔应注意：
1、以取舌后部舌苔为宜。
2、咽反射强烈者应取得受检者的合作，或暂时放弃该项检查。
3、无苔者不宜进行该项试验。
在试验过程中应注意：
1、舌苔置入试剂杯后应充分搅匀。
2、据观察GRUT反应时间从30秒至20分钟不等，建议TRUT观察不超过20分钟，搁置太久因其它化学反应使PH值逐渐升高；对试剂PH值高于口腔PH值而试液未变色或淡红色时则延长观察时间，以免漏诊阳性病例。
3、可多次取舌苔进行检测，提高诊断的准确率。
pH值的检测是根据尿素酶试验的反应原理介入的，正常RUT试液PH值在5.5以下，当试液PH值升高至6.8以上时，试液开始变色，由淡黄色转为红色，这是尿素酶分解尿素致使试液的pH值升高后酚红作用的结果。但是，本发明中对GRUT阳性试液进行PH测量时，pH值＜6.8红色标本13例，同样乙醇法TRUT与乙醇稀释法阳性试液低于口腔pH值分别为109例和113例，所有阴性标本的PH值测量均≤6.5，而阳性标本的PH值在6.0～8.5范围，＞8.5的病例极少。表明RUT试剂的变色的前题是PH值超过5.5，但不完全取决于酸碱度的影响。虽然尿素酶在化学反应中作用至关重要，但是其它的因素也对试液的酸碱度产生影响，即试液颜色的变化并非由单一因素引起。既然尿素酶试验并非完全因酸碱程度改变而使标本变成红色，表明测量试液的PH值就尤其重要，其重要性在于TURT标本无论是阳性或阴性应以试液pH值来判断。口腔pH值受诸多因素的影响，PH值的波动范围较大，可以是酸性，也可以呈碱性，5.5～8.0的跨度对TRUT的结果判断造成某些影响。在实验中可以发现部分试验标本PH值在≤6.5时反应可呈阳性也可呈阴性，TRUT对应GRUT阳性标本为101∶7，差额数94例。当PH值＞6.5时TRUT与GRUT阳性标本为86∶51，差额数35例。如果无PH值介入，假阳性率达68.98％(|94+35|÷187)。PH值分为升高、持平、降低三种结果。乙醇法PH值升高者与GRUT阳性符合率75.00％。，持平者阳性率55.56％，降低者阳性率2.75％(见表3)。后者占阳性标本58.29％，pH值介入后，这部分阳性标本97.25％是假阳性，从而提高了TRUT与GRUT的符合率。
Claims (4)
1.一种pH值乙醇法舌苔快速尿素酶的检测方法，其特征在于包括以下步骤：
A、用pH试纸测量口腔唾液的酸碱度；
B、在快速尿素酶试剂杯中滴入95%乙醇液3～4滴，用牙签将杯底部附着的试剂颗粒与乙醇液搅匀；
C、用棉签拭去舌苔表面唾液，于舌背后部刮取米粒大小舌苔置入试剂杯中，搅匀，静置5分钟后在试剂杯中再滴入3～4滴溶解液，搅匀，静置5～10分钟，观察颜色变化；
D、若步骤C中的颜色变成红色，用pH试纸测量呈红色的试剂杯中液体的酸碱度，将结果与口腔pH值比较，如果试剂杯中液体的pH值低于口腔pH值，其反应结果视为阴性，即不含有尿素酶；如果pH值高于或等于口腔PH值者则视为阳性，即含有尿素酶。
2.根据权利要求1所述的一种pH值乙醇法舌苔快速尿素酶的检测方法，其特征在于所述的pH试纸为pH精密试纸，检测范围：5.5～9.0。
3.根据权利要求1所述的一种pH值乙醇法舌苔快速尿素酶的检测方法，其特征在于所述的快速尿素酶试剂杯为幽门螺杆菌快速诊断试剂杯。
4.一种用于权利要求1所述pH值乙醇法舌苔快速尿素酶检测的试剂盒，其特征在于包括有盒体，在所述的盒体内设有快速尿素酶试剂杯，盛装有1～10ml尿素酶溶解液的软塑瓶和盛装有1～10ml95%乙醇液的软塑瓶，检测范围5.5～9.0的pH精密试纸，棉签一包和牙签一包。
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