CN102516199A - 一种化合物及其在磺胺类药物检测中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于快速免疫检测技术领域。提供了以式(1)所示的化合物及其在磺胺类药物检测中的应用。由所述化合物得到的磺胺类药物单克隆抗体具有高特异性，因此本发明的检测方法具有特异性高、精确度高、准确度高特点。

Description

一种化合物及其在磺胺类药物检测中的应用

技术领域

本发明属免疫检测领域，具体涉及一种可用作磺胺类药物检测的半抗原的化合物及其在磺胺类药物检测中的应用。 

背景技术

磺胺类药物(Sulfonamides，SAs)是人工合成的抗微生物药，它主要通过干扰细菌酶系统对对氨基苯甲酸(PABA)的利用，影响细胞核蛋白质的合成，从而抑制细菌的繁殖。SAs与抗菌增效剂联用后，抗菌谱扩大、抗菌活性大大增强，因此，磺胺类药物在兽医临床上广泛用于预防和治疗畜禽疾病。但因磺胺类药物残留而产生的副作用仍不可忽视。多种磺胺类药物都易被肠道吸收且在体内代谢较慢，因此短时间大剂量或长时间小剂量的刺激可分别引起急性或慢性中毒，影响机体的免疫、泌尿系统，破坏肝脏、肾脏、眼等器官以及甲状腺等组织，可引起人畜肝硬化、贫血、过敏、甲状腺癌等疾病。另外，人体内长期存在磺胺会导致许多细菌对磺胺类药物产生抗药性。我国采用食品中兽药残留法典委员会(CCRVDF，Codex Committee on Residuesof Veterinary Drugs in Foods，)的限量标准，规定在动物性食品中磺胺类药物的最高残留限量为100μg/kg。 

我国现在检测磺胺类药物的方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱一质谱法(LC-MS)、毛细管区带电泳法(CE)、免疫分析法(IA)等。常规色谱法结果虽准确、灵敏，但检测时间长、耗资大、对人员要求高，不适合大量样品的基层筛选测定。免疫法检测从上个世纪八、九十年代以来国内外学者进行了大量的研究。实践表明，免疫分析法检测具有快速、灵敏、特异性好的优点，适合大批样品的筛选检测，其中酶联免疫检测法作为一种磺胺类药物残留检测的方法已被使用，但特异性不甚理想，均只能检测磺胺类药物中的几种。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有特异性高的检测磺胺类药物的方法。 

为了实现该目的，本发明提供了一种可用作磺胺类药物半抗原的化合物，该化合物如式(1)所示。 

本发明还提供了该化合物的制备方法，该方法包括以下步骤： 

(1)将2-氨基-4噻唑乙酸乙酯与N-乙酰氨基苯磺酰氯在无水吡啶中在110℃搅拌回流1-10小时； 

(2)用乙酸乙酯萃取步骤(1)得到的产物，合并上层溶液并干燥； 

(3)将步骤(2)得到的与2MNaOH溶液在110℃搅拌回流1-10小时； 

(4)将步骤(3)得到的产物的pH值调至4-5，用乙酸乙酯萃取，合并上层溶液并干燥。 

本发明提供了一种磺胺类药物抗原，其特征在于，该抗原是所述化合物与载体蛋白通过碳二亚胺或混合酸酐法偶联得到的。 

所述载体蛋白可以为牛血清白蛋白、鼠血清蛋白、人血清白蛋白、兔血清蛋白、鸡卵清白蛋白、血蓝蛋白或甲状腺蛋白。 

本发明提供了一种表面固定有磺胺类药物抗原的纳米金磁微粒混悬液，其特征在于，所述抗原为本发明提供的抗原。 

本发明提供了一种磺胺类药物抗体，其是由本发明提供的抗原制备，由杂交瘤细胞株2-G12G8B9B8分泌产生的。 

本发明提供了一种磺胺类药物多残留检测的试剂盒，其特征在于该试剂盒包括以下成分： 

(1)本发明提供的表面固定有磺胺类药物抗原的纳米金磁微粒混悬液； 

(2)本发明提供的磺胺类药物单克隆抗体； 

(3)磺胺药物标准品溶液； 

(4)酶标记物； 

(5)洗涤液； 

(6)抗体稀释液； 

(7)底物显色溶液； 

(8)终止液。 

本发明提供了一种检测磺胺类药物的方法，其包括如下步骤： 

(1)样品前处理； 

(2)加样与反应：在试管中加入50μL权利要求5所述的表面固定有抗原的金磁微粒悬浊液，然后依次加入50μL抗体稀释液稀释的含有权利要求6所述的磺胺类药物单克隆抗体的单抗溶液、100μL样本或标准品溶液以及100μL抗体稀释液稀释的酶标记羊抗鼠抗抗体溶液，混合均匀后置于37℃摇床反应40min； 

(3)磁性分离与洗涤：将试管放在磁性分离器上分离2min，倒去上清液，每管加入洗涤液250μL，充分混匀后，再将试管放在磁性分离器上分离2min，弃去上清液。重复洗涤2次； 

(4)加入底物溶液：每管加入200μL底物溶液，室温显色3min； 

(5)终止反应：每管加入50μL终止液，磁性分离2min，取上清用酶标仪450nm处测 吸光值； 

(6)分析检测结果。 

所述磺胺药物为磺胺噻唑、磺胺甲恶唑、磺胺氯哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺恶唑和磺胺眯中的一种或多种。 

本发明具有以下优点： 

(1)本发明的检测方法对样品的前处理要求低，样品前处理过程简单，能同时快速检测大批量样品； 

(2)本发明以纳米金磁微粒代替传统酶标板作为固相载体并采用高特异性的磺胺类药物单克隆抗体，检验方法步骤简单，具有特异性高、灵敏度高、重复性好、对设备要求低、无放射性污染等特点，尤其是可节省检测时间，1h内即可完成整个检测，并且一次即可检测多种磺胺药物，例如可同时检测磺胺噻唑、磺胺甲恶唑、磺胺氯哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺恶唑和磺胺眯，为开发快速检测动物源食品及尿液磺胺类药物残留的产品奠定基础。 

附图说明

图1为磺胺噻唑标准曲线。 

具体实施方式

本发明提供了一种磺胺类药物母核结构，命名为TS(结构式如式(1)所示)，其由N-乙酰氨基苯磺酰氯与2-氨基-4-噻唑乙酸乙酯通过化学合成，可作为半抗原。 

本发明同时还提供了上述半抗原与常规蛋白载体偶联后得到的免疫抗原和检测抗原。将半抗原TS分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)通过羰二亚胺或混合酸酐方法偶联，得到TS-BSA和TS-OVA，以TS-BSA做免疫抗原，以TS-OVA做检测抗原。 

本发明还提供了一株能稳定分泌抗磺胺类药物的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为2-G12G8B9B8。 

本发明目的还在于提供一种鼠源性抗磺胺类药物的单克隆抗体。其优选采用单克隆抗体制备方法，并以人工合成的TS半抗原和BSA偶联物为免疫抗原制备而得。具有灵敏性高、实用性好的特点。 

本发明还提供了检测磺胺类药物的纳米金磁微粒分离酶联免疫快速检测方法，其包括如下试剂： 

(1)表面固定有磺胺类药物检测抗原TS-OVA的纳米金磁微粒混悬液 

(2)磺胺类药物单克隆抗体 

(3)磺胺噻唑标准品溶液 

(4)酶标记物 

(5)洗涤液 

(6)抗体稀释液 

(7)底物显色溶液 

(8)终止液 

其中所述的表面固定TS-OVA的纳米金磁微粒混悬液是通过蛋白质(OVA)分子与纳米金磁微粒的静电、疏水相互作用而偶联在纳米金磁微粒表面形成的复合物。 

其中所述的磺胺类药物单克隆抗体是用人工制得的免疫原TS-BSA对Balb/c小鼠免疫并通过细胞融合、筛克隆化及腹水制备、纯化得到的。 

其中所述磺胺噻唑标准品溶液浓度为0μg/L、0.5μg/L、3.5μg/L、6.5μg/L、12.5μg/L、25.0μg/L、50.0μg/L和100.0μg/L的磺胺药物标准品溶液； 

其中所述酶标记物为酶标记抗抗体或酶标记磺胺类药物抗原，酶标记的抗抗体为羊抗鼠抗抗体，标记酶可为辣根过氧化物酶或细菌提取碱性磷酸酯酶，本发明优选为辣根过氧化物酶。 

其中所述洗涤液为含有0.8％-1.2％吐温20的0.005M-0.015M磷酸盐缓冲液； 

其中所述抗体稀释液为0.05％-0.5％的明胶溶液； 

其中所述底物显色液由A液和B液组成，A液为含有1.5％-2.5％过氧化脲的水溶液，B液为含有0.5％-1.5％四甲基联苯胺的水溶液； 

其中所述终止液为1-2mol/L的硫酸、盐酸或2mol/L的NaOH溶液。 

本发明所述的检测磺胺类药物的纳米金磁微粒分离酶联免疫快速检测方法原理如下： 

将纳米金磁微粒作为固相载体并预包被磺胺类药物半抗原与载体蛋白的偶联物时，加入样本溶液或标准品溶液后，再加入磺胺药物单克隆抗体溶液，样本中残留的磺胺类药物或磺胺药物标准品与纳米金磁微粒上包被的磺胺类药物半抗原与载体蛋白的偶联物竞争磺胺药物单克隆抗体，加入酶标记二抗进行放大作用，用显色液显色，样本吸光值与样本中磺胺类药物的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中磺胺类药物的含量。 

本发明最后一个目的是提供一种检测磺胺类药物纳米金磁微粒分离酶联免疫快速检测方法，其包括如下步骤： 

(1)样品前处理； 

(2)加样与反应； 

(3)磁性分离与洗涤； 

(4)加底物溶液； 

(5)终止反应； 

(6)分析检测结果； 

优选地，样品前处理方法为：牛奶(脱脂)、尿液样本可直接用于检测。(如果样本浓度过高，可用磷酸盐缓冲液稀释2-8倍再进行检测)；动物组织(肌肉、肝脏等)需粉碎均匀，加入一定比例的10％Na2CO3，加入乙酸乙酯，混合离心后取上层液留用，下层沉淀再洗一次，将两次离心的上层液合并，60℃氮气吹干，加入蒸馏水复溶，即可用于检测。 

优选地，加样与反应过程为：在反应管中加入20-200μL固定有抗原的纳米金磁微粒溶液，然后依次加入20-200μL的样本溶液、20-200μL 1∶10000-1∶400000稀释倍数的磺胺类药物单克隆抗体及20-200μL 1∶1000-1∶5000稀释倍数的酶标记物，混匀后置37℃摇床反应20-50min。 

优选地，磁性分离与清洗过程为：使金磁微粒在磁场中沉降，去上清，加入100-500μL洗涤液，除去磁场震荡10s混合均匀后再次使金磁微粒在磁场中磁性分离，吸出上清液。如此重复磁性分离和洗涤2-5次。 

优选地，加底物溶液与终止过程为：每管加入50-300μL底物溶液，混匀后，37℃反应3-10min。每管加入50-200μL终止液终止显色。 

优选地，检测结果分析过程为：用所获得的每个浓度的标准品溶液的吸光度平均值(B)除以第一个标准溶液(0标准)的吸光度值(B0)即为吸光度值，计算公式为：吸光度值＝B/B0。 

以磺胺噻唑标准品溶液的浓度(μg/L)的半对数值为X轴，吸光度值为Y轴，绘制标准曲线图。用同样的办法计算样品溶液的吸光度值，相对应每一个样品的浓度则可从标准曲线上读出样本中磺胺噻唑的含量。也可以采用回归方程法，计算出样品溶液浓度。整个检测过程只需较短时间，1h内即可以完成。 

本发明中所述的磺胺类药物为具有共同分子骨架药理活性的药物，如磺胺噻唑(STZ)、磺胺甲恶唑(SMZ)、磺胺氯哒嗪(SCP)、磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺喹噁啉(SQX)、磺胺恶唑(SMX)和磺胺眯(SG)中的一种或多种。 

下面通过实施例来更详细描述本发明，但是应当理解的是，本发明并不限于此。 

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。 

实施例1、磺胺类药物人工抗原、磺胺类药物单克隆抗体的合成及制备 

1、磺胺类药物半抗原TS的合成 

(1)将2-氨基-4噻唑乙酸酯化反应得到2-氨基-4噻唑乙酸乙酯，2mL无水吡啶加入干燥圆底烧瓶中，搅拌下缓慢加入1g N-乙酰氨基苯磺酰氯，溶解后，加入0.6g 2-氨基-4噻唑乙酸乙酯，110℃搅拌回流2h，自然冷却至室温； 

(2)搅拌下加入18mL温蒸馏水，用乙酸乙酯萃取三次，合并上层溶液，旋蒸干，37℃烘箱烘干过夜； 

(3)将所得产物加入12.5mL 2M NaOH溶液，110℃搅拌回流2h，自然冷却至室温； 

(4)用浓HCl调溶液PH值至4-5，用乙酸乙酯萃取三次，合并上层溶液，旋蒸干，37℃烘箱烘干过夜，得到磺胺半抗原TS。 

2、免疫原与包被原的合成 

(1)取40mg TS用1.6mL N，N’-二甲基甲酰胺(DMF)溶解，加1.6mL MES，再加入60mg乙基二甲氨基碳化二亚胺(EDC)和60mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，常温搅拌2h； 

(2)将所得溶液均分为两份，搅拌下一份加入BSA溶液(25mg BSA溶于1mL 25mg/mLNaHCO₃+1mL H₂O中)，一份加入OVA溶液(20mg OVA溶于1mL 25mg/mLNaHCO₃+1mLH₂O中)，室温搅拌过夜，室温静置透析3d，5000r，5min离心后分装，即得到免疫原TS-BSA和包被原TS-OVA。 

3、磺胺类药物鼠单克隆抗体的制备 

(1)小鼠免疫程序 

采用常规方法，初次免疫用弗氏完全佐剂与免疫抗原以等比例混合乳化，皮下和腹腔混合方式免疫Balb/c小鼠；之后每隔2周，以不完全佐剂与免疫抗原乳化，腹腔注射小鼠，免疫剂量与初次免疫相同，融合前3d，腹腔注射无佐剂抗原。 

(2)细胞融合、筛选及克隆化 

选抗血清效价最高的鼠取脾细胞与骨髓瘤细胞体外融合，采用间接竞争ELISA测定细胞上清液，筛选阳性孔，利用有限稀释法对阳性孔克隆化，经四次亚克隆获得稳定分泌抗磺胺类药物的单克隆抗体细胞株。该杂交瘤细胞株命名为2G12G8B9B8，是一种能够分泌抗抗磺胺类药物单克隆抗体的杂交瘤细胞。 

(3)细胞冻存与复苏 

取处于对数生长期的杂交瘤细胞用冻存液稀释成5*10⁶个/mL的细胞悬液，分装于冻存管，在液氮中长期保存。复苏时取出冻存管，立即放入37℃水浴中速融，离心去除冻存液后，移入培养瓶中培养。 

(4)单克隆抗体的生产与纯化 

采用体内诱生法大量制备单克隆抗体，将克隆化的细胞株体外扩大培养后，打入经产小鼠腹腔，产生大量腹水，采用辛酸-饱和硫酸铵法纯化单克隆抗体，分装后-20℃保存。 

(5)磺胺类药物人工抗原和磺胺类药物单抗的用途和效果 

利用棋盘法进行单抗效价的测定，结果表明，磺胺药物单克隆抗体的效价为3.2*10⁷，最低检测限(LOD值)为0.04μg/L为和半数抑制量(IC50)为2.5μg/L。 

实施例2、酶标记羊抗鼠抗抗体制备 

(1)10mg辣根过氧化物酶溶解于2mL蒸馏水中； 

(2)加入现配的100mmol/LNaIO₄溶液0.5mL，室温搅拌反应20min； 

(3)用1mmol/L醋酸盐缓冲液于4℃透析过夜； 

(4)加入磷酸盐缓冲液(pH8.6、0.5mol/L)50μL和含有IgG 18mg的磷酸盐缓冲液(pH8.6、5mol/L)2.0mL，室温搅拌4h； 

(5)加入现配的NaBH₄水溶液(1mol/L)0.1mL4℃反应4h。 

实施例3、抗原(TS-OVA)在金磁微粒表面的固定化 

取100uL(5mg/mL)磁性微粒，磁性分离弃上清，加入0.2mL醋酸盐缓冲液(pH5.0)，平衡3min，磁性分离弃上清，取250μL醋酸盐缓冲液1∶500稀释的TS-OVA抗原加入磁粒中混匀，置摇床37℃、180r/min反应30min，然后磁性分离弃上清；向磁性微粒中加入5％脱脂奶粉-PBST溶液200μL，置摇床37℃、180r/min反应2h以封闭磁性微粒上剩余位点，然后以醋酸盐缓冲液清洗磁性微粒3次，加入0.5mL PBS溶液，4℃保存备用。 

实施例4、纳米金磁微粒分离酶联免疫法检测样本中的磺胺类药物 

1、材料与设备 

(1)表面固定有抗原的金磁微粒溶液：见实施例3； 

(2)抗磺胺类药物单克隆抗体：见实施例1； 

(3)酶标记羊抗鼠抗抗体：见实施例2； 

(4)洗涤液：含有0.8％-1.2％吐温20的0.005M-0.015M磷酸盐缓冲液； 

(5)抗体稀释液：0.05％-0.5％的明胶溶液； 

(6)磺胺噻唑标准品溶液：将磺胺噻唑标准品用抗体稀释液稀释为0μg/L、0.5μg/L、3.5μg/L、6.5μg/L、12.5μg/L、25.0μg/L、50.0μg/L和100.0μg/L浓度的标准品溶液； 

(7)底物显色液：由A液和B液组成，A液为含有1.5％-2.5％过氧化脲的水溶液，B 液为含有0.5％-1.5％四甲基联苯胺的水溶液； 

(8)终止液：1-2mol/L的硫酸溶液； 

(9)磁分离器：西安金磁纳米生物技术有限公司； 

(10)酶标仪：Model 680，BIO-RAD。 

(11)变温摇床 

2、样品前处理 

(1)肌肉组织：从均匀样本中取5g，加入3mL 10％Na₂CO₃，震荡3min；加入15mL乙酸乙酯，混合5min，4000r/min离心5min；将上层液全部转到一干净容器中，下层沉淀再加入15mL乙酸乙酯，混合5min，4000r/min离心5min；将两次离心的上层液各取3mL合并(相当于1g样本)；60℃氮气吹干，加入1mL纯水复溶；取100μL用于检测； 

(2)牛奶：取牛奶1mL，5000r/min离心5min，轻吸中间层，用磷酸盐缓冲液将其稀释4倍，取100μL用于检测。 

3、加样与反应 

在圆底试管中加入50μL表面固定有抗原的金磁微粒悬浊液，然后依次加入50μL抗体稀释液稀释的单抗溶液、100μL样本或标准品溶液以及100μL抗体稀释液稀释的酶标记羊抗鼠抗抗体溶液，混合均匀后置于37℃摇床反应40min。 

4、磁性分离与洗涤 

将试管放在磁性分离器上分离2min，倒去上清液，每管加入洗涤液250μL，充分混匀后，再将试管放在磁性分离器上分离2min，弃去上清液。重复洗涤2次。 

5、加入底物溶液 

每管加入200μL底物溶液，室温显色3min。 

6、终止反应 

每管加入50μL终止液，磁性分离2min，取上清用酶标仪450nm处测吸光值。 

7、分析检测结果 

(1)用每个浓度的标准品溶液的吸光度平均值(B)除以第一个标准品溶液(0标准)的吸光度值得到吸光度值。以磺胺噻唑标准品浓度(μg/L)的半对数值为X轴，吸光度值为Y轴，绘制标准曲线图。得到的标准曲线如图1所示。用每个检测样本溶液的吸光度平均值(B)除以第一个标准品溶液(0标准)的吸光度值(B₀)得到吸光度值。相对应每一个检测样本溶液的吸光度值，则可从标准曲线上读出检测样本溶液中的磺胺噻唑的残留量。 

(2)样本回收率实验 

取两个浓度的磺胺噻唑标准品溶液分别对样本进行添加回收实验，方法按实施例4进行， 每个浓度做5个平行，分别计算回收率(回收率＝实测值/添加值)。结果见表1。 

表1样本回收率测定 

结果表明，牛奶样品的添加回收率在87.0％-92.7％之间；鸡肉样品的添加回收率在85.0％-88.0％之间。 

(3)交叉反应率试验： 

选择其它抗菌型药物及磺胺类药物测定交叉反应率。通过各种标准曲线分别得到其50％抑制浓度。用下式计算本发明所述方法对其它药物的交叉反应率。 

结果如表2所示。 

表2试剂盒的特异性 

结果表明，本发明方法特异性好，不识别其它种类抗菌型药物，只识别磺胺类药物，尤其对磺胺噻唑(STZ)、磺胺甲恶唑(SMZ)、磺胺氯哒嗪(SCP)、磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺喹噁啉(SQX)、磺胺恶唑(SMX)、磺胺眯(SG)特异性好。 

Claims (10)

1.一种化合物，该化合物如式(1)所示：

式(1)

2.权利要求1所述的化合物的制备方法，该方法包括以下步骤：

(1)将2-氨基-4噻唑乙酸乙酯与N-乙酰氨基苯磺酰氯在无水吡啶中在110℃搅拌回流1-10小时；

(2)用乙酸乙酯萃取步骤(1)得到的产物，合并上层溶液并干燥；

(3)将步骤(2)得到的与2M NaOH溶液在110℃搅拌回流1-10小时；

(4)将步骤(3)得到的产物的pH值调至4-5，用乙酸乙酯萃取，合并上层溶液并干燥。

3.一种磺胺类药物抗原，其特征在于，该抗原是权利要求1所述的化合物与载体蛋白通过碳二亚胺或混合酸酐法偶联得到的。

4.根据权利要求3所述的抗原，其中，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、鼠血清蛋白、人血清白蛋白、兔血清蛋白、鸡卵清白蛋白、血蓝蛋白或甲状腺蛋白。

5.一种表面固定有磺胺类药物抗原的纳米金磁微粒混悬液，其特征在于，所述抗原为权利要求3或4所述的抗原。

6.一种磺胺类药物抗体，其是由权利要求3或4所述的抗原制备。

7.一种磺胺类药物多残留检测的试剂盒，其特征在于该试剂盒包括以下成分：

(1)权利要求5所述的表面固定有磺胺类药物抗原的纳米金磁微粒混悬液；

(2)权利要求6所述的磺胺类药物单克隆抗体；

(3)磺胺类药物标准品溶液；

(4)酶标记物；

(5)洗涤液；

(6)抗体稀释液；

(7)底物显色溶液；和

(8)终止液。

8.一种检测磺胺类药物的方法，其包括如下步骤：

(1)样品前处理

(2)加样与反应：在试管中加入50μL权利要求5所述的表面固定有抗原的金磁微粒悬浊液，然后依次加入50μL抗体稀释液稀释的含有权利要求6所述的磺胺类药物单克隆抗体的单抗溶液、100μL样本或标准品溶液以及100μL抗体稀释液稀释的酶标记羊抗鼠抗抗体溶液，混合均匀后置于37℃摇床反应40min；

(3)磁性分离与洗涤：将试管放在磁性分离器上分离2min，倒去上清液，每管加入洗涤液250μL，充分混匀后，再将试管放在磁性分离器上分离2min，弃去上清液。重复洗涤2次；

(4)加入底物溶液：每管加入200μL底物溶液，室温显色3min；

(5)终止反应：每管加入50μL终止液，磁性分离2min，取上清用酶标仪450nm处测吸光值；

(6)分析检测结果。

9.根据权利要求7所述的试剂盒或权利要求8所述的方法，其中，所述磺胺药物为磺胺噻唑、磺胺甲恶唑、磺胺氯哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺恶唑和磺胺眯中的一种或多种。

10.根据权利要求7所述的试剂盒或权利要求8所述的方法，其中，所述磺胺药物为磺胺噻唑、磺胺甲恶唑、磺胺氯哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺恶唑和磺胺眯。

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