CN102478554A - 不同产地栝楼子农药残留快速测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及农药残留快速测定方法,具体涉及不同产地栝楼子农药残留快速测定方法。不同产地栝楼子农药残留快速测定方法，包括使用气相色谱电子捕获测定法（GC-ECD）快速测定栝楼子有机氯农药残留，依次包括步骤：A.制备并混合对照品贮备液；B.对栝楼子样品前处理；C.确定标准曲线和最低检测限；D.色谱分析；E.外标法定量测定，计算栝楼子中的有机氯农药残留量。本发明根据不同产地栝楼子药材的种植情况、病虫草害的发生情况和农药使用情况，建立GC－ECD快速测定栝楼子中6种有机氯类农药残留的检测方法，提高了中药材样品前处理的准确性和便捷性，为规范栝楼子药材农药残留量检测方法、提高栝楼子药材的质量安全、控制农药残留提供了可靠依据。
Description
技术领域
本发明涉及农药残留快速测定方法,具体涉及不同产地栝楼子农药残留快速测定方法。
背景技术
近年来，中药的农药残留量问题越来越受到世界各国政府的关注，中药由于重金属和农药残留超标而在国外遭禁的事件屡屡发生。根据我国“九五”攻关课题《中药材质量标准规范化研究》中对72种中药材的850份样品的检测结果，中药中六六六(BHC)和滴滴涕(DDT)检出率近100%，部分栽培的根类药材更是污染严重,一些鲜用药材中也查出禁用农药。但目前除《中国药典》2005版对极少数中药材的农药残留量有标准外,目前中国尚未制订中药中农药残留检测限量的国家标准。因此为保障中药用药安全有效，监测中草药中农药残留量，了解残留水平和制定限量标准是十分必要的。
中国人民共和国国家标准GB2763 - 81 ,对食品中有机氯农药的允许量标准是:粮食(成品量) 和蔬菜、水果中六六六的含量分别低于0.13 和0.12 mg·kg-1 ,滴滴涕的含量分别低于0.12 和0.11 mg·kg- 1 。
栝楼子为葫芦科植物栝楼T richosan thes k irilow ii M ax im的种子，为常用中药材。经动物试验证明，栝楼子具有抗菌、消炎、祛痰、泻下、抗肿瘤等作用，其临床应用较广泛，具有极高的药用和经济价值 [1]。浙江省湖州地区是栝楼子的主产区之一，但目前栝楼子作为药材还无法定农残标准。因此为了提高栝楼子的质量，加强对栝楼子中农药残留量的监测，有必要建立一种准确、快速、简便的测定栝楼子中农药多残留的分析方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种不同产地栝楼子农药残留快速测定方法。
本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
不同产地栝楼子农药残留快速测定方法，包括使用气相色谱电子捕获测定法（GC-ECD）快速测定栝楼子有机氯农药残留，依次包括步骤：
A．制备并混合对照品贮备液；
B．对栝楼子样品前处理；
C．确定标准曲线和最低检测限；
D．色谱分析；
E．外标法定量测定，计算栝楼子中的有机氯农药残留量。
作为本发明技术方案的一种优选，所述的气相色谱条件为：石英毛细管柱进样口温度250-300℃，检测器温度为280-330℃；高纯氮载气流速为2-5ml/min，不分流进样；采用程序升温的初始温度为120-180℃，保持1-5min；然后2-5℃/min升至160-190℃，保持8-12min；然后再8-12℃/min升至220-280℃，保持3-8min；进样量为1.0μl。
作为本发明技术方案的进一步优选，所述的气相色谱条件为：使用Agilent 7890A气相色谱仪，配有63Ni-ECD检测器，石英毛细管柱；进样口温度：280℃；检测器温度：300℃；载气：高纯氮；流速3ml/min，不分流进样。采用程序升温：初始温度150℃，保持2min；4℃/min升至180℃，保持10min；10℃/min升至250℃，保持5min；进样量：1.0μl。
作为本发明技术方案的一种优选，所述步骤A的配制并混合对照品贮备液：
a. 配制对照品贮备液：各种农药标准品在气相色谱仪上的响应值不同，精密移取α- BHC、β- BHC、δ- BHC、p,p’-DDT、p,p’-DDD、p,p’-DDE农药对照品适量，用石油醚（60～90℃）分别配制成1.0-1.5ml约含有机氯对照品40-48μg的对照品贮备液，放于冰箱中-15 - -19℃保存备用；
b. 混合对照品贮备液：精密量取上述各对照品贮备液0.4-0.6ml，置于10ml容量瓶中，用石油醚（60～90℃）稀释至刻度，摇匀。
作为本发明技术方案的一种优选，所述步骤B的对栝楼子样品前处理的方法为：
取栝楼子供试品于50-70℃干燥3-5小时，粉碎成细粉，取约1-3g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加水10-50ml浸泡过夜，精密加丙酮30-50ml，称定重量，超声处理20-40分钟，放冷，再称定重量，用丙酮补足减失的重量，再加氯化钠约6-8g及二氯甲烷25-35ml，称定重量，超声处理10-18分钟,再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，静置分层，将有机相迅速移入装有适量无水硫酸钠的100ml具塞锥形瓶中，放置3.5-4.5小时；精密量取30-40ml，于 30-50℃水浴上减压浓缩至近干，加少量石油醚(60～90℃)如前反复操作至二氯甲烷及丙酮除净，用石油醚(60～90℃)溶解并转移至10ml具塞刻度离心管中,加石油醚(60～90℃)至5-8ml;小心加入硫酸 0.5-1.5ml，振摇1-3分钟，离心(3000转／分)10-15分钟；精密量取上清液2-5ml置具刻度的浓缩瓶中，连接旋转蒸发器，用氮气将溶液浓缩至适量、精密稀释至 1-3ml，作为供试品液待用。
作为本发明技术方案的一种优选，所述步骤C的确定标准曲线和最低检测限的方法为：
精密量取混合对照品储备液，用石油醚（60～90℃）制成每1L分别含5μg、10μg、50μg、100μg、250μg、500μg的溶液，按色谱条件进样，重复3次，取平均值绘制标准曲线，以试样浓度(y，μg/ml )为纵坐标，以峰面积为横坐标，进行回归计算；配制低浓度混合标准品液，按色谱条件进样，重复3次，以3倍噪声计算方法确定最低检测限为0.0003μg/ml。
综上所述，本发明具有以下有益效果：
根据不同产地栝楼子药材的种植情况、病虫草害的发生情况和农药使用情况，建立GC－ECD快速测定栝楼子中6种有机氯类农药残留的检测方法，提高了中药材样品前处理的准确性和便捷性，为规范栝楼子药材农药残留量检测方法，提高栝楼子药材的质量安全，控制农药残留提供了可靠依据。
附图说明
图1是6种有机氯农药标准溶液色谱图。
图2是加样回收率试验色谱图。
图3是栝楼子样品色谱图。
其中，1.α- BHC; 2.β- BHC; 3.δ- BHC; 4.p,p’-DDE; 5.p,p’-DDD; 6.p,p’-DDT。
具体实施方式
以下结合附图对本发明作进一步详细说明。
仪器与试剂
Agilent 7890A气相色谱仪，配63Ni-ECD检测器，HP-5石英毛细管柱(30m×0.32mm×0.25um)，旋转蒸发仪（亚荣RE-2000）,电子天平（赛多利斯BP211D）,医用冷冻箱(ROWSEN YD-308),微量进样器（10～100ul,Brank）。
甲体－六六六（α- BHC）、乙体－六六六（β- BHC）、丁体－六六六（δ- BHC）、对，对－滴滴涕（p,p’-DDT）、对，对－滴滴滴（p,p’-DDD）、对，对－滴滴依（p,p’-DDE），所有标准品均购于德国DR.Ehrenstorfer公司，纯度≥99.9%。其余试剂均为分析纯。
实施例一
色谱条件 ：Agilent 7890A气相色谱仪，配有63Ni-ECD检测器，石英毛细管柱；进样口温度：280℃；检测器温度：300℃；载气：高纯氮；流速3ml/min，不分流进样。采用程序升温：初始温度150℃，保持2min；4℃/min升至180℃，保持10min；10℃/min升至250℃，保持5min；进样量：1.0μl。
湖州产栝楼子农药残留快速测定方法：
(1) 对照品贮备液的配制 : 根据各种农药标准品在气相色谱仪上的响应值不同，精密移取α- BHC、β- BHC、δ- BHC、p,p’-DDT、p,p’-DDD、p,p’-DDE农药对照品适量，用石油醚（60～90℃）分别配制成1.0ml约含有机氯对照品45μg的对照品贮备液，放于冰箱中-18℃保存备用;
(2) 混合对照品贮备液的配制: 精密量取上述各对照品贮备液0.5ml，置于10ml容量瓶中，用石油醚（60～90℃）稀释至刻度，摇匀，即得;
(3) 样品前处理: 取栝楼子供试品于60℃干燥4小时，粉碎成细粉，取约2g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加水20ml浸泡过夜，精密加丙酮40ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用丙酮补足减失的重量，再加氯化钠约6g及二氯甲烷30ml，称定重量，超声处理15分钟,再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，静置分层，将有机相迅速移入装有适量无水硫酸钠的100ml具塞锥形瓶中，放置4小时。精密量取35ml，于 40℃水浴上减压浓缩至近干，加少量石油醚(60～90℃)如前反复操作至二氯甲烷及丙酮除净，用石油醚(60～90℃)溶解并转移至10ml具塞刻度离心管中,加石油醚(60～90℃)至5ml。小心加入硫酸 1ml，振摇1分钟，离心(3000转／分)10分钟。精密量取上清液2ml置具刻度的浓缩瓶中，连接旋转蒸发器，用氮气将溶液浓缩至适量、精密稀释至 1ml，作为供试品液待用;
(4) 标准曲线与最低检测限: 精密量取混合对照品储备液，用石油醚（60～90℃）制成每1L分别含5μg、10μg、50μg、100μg、250μg、500μg的溶液，按色谱条件进样，重复3次，取平均值绘制标准曲线，以试样浓度(y，μg/ml )为纵坐标，以峰面积为横坐标，进行回归计算。配制低浓度混合标准品液，按色谱条件进样，重复3次，以3倍噪声计算方法确定最低检测限为0.0003μg/ml；
(5) 仪器精密度: 取同一浓度的混合标准品贮备液，按色谱条件进样，重复6次，计算各农药峰面积的RSD；
(6) 重复性: 取同一样品5份，按“2.5”项下方法制备供试品贮备液，按色谱条件进样，计算各农药峰面积的RSD；
(7) 加样回收率: 取同一样品9份，分别添加一定量标准品贮备液，3个添加水平每水平3份样品，按“2.5”项下方法制备供试品贮备液，按色谱条件进样，计算各农药的平均加样回收率及RSD；
(8) 样品的测定: 准确称取不同采集点的栝楼子样品共10份，按按“2.4”项下方法制备供试品贮备液，按色谱条件进样，重复3次，外标法定量测定，计算样品中的农药残留量。
结果分析:
1．色谱条件:选用HP-5石英毛细管柱对6种有机氯农药标样进行分离，结果见图1，6种有机氯农药得到很好分离；
2．标准曲线
用所配好的6个浓度的混合标样做线性回归分析，以峰面积定量，得到有机氯农药的线性回归方程、相关系数和最低检测限。说明各有机氯农药在浓度0.005~0.500μg/ml范围内线性良好。结果见表1：
表1 线性回归方程、相关系数和最低检测限
3．精密度实验
精密移取0.05μg/ml标准溶液，按“2.1”色谱条件进样测定，重复6次，得到α- BHC，β- BHC，δ- BHC，p,p’-DDT，p,p’-DDD，p,p’-DDE峰面积，计算各农药峰面积的RSD为1.5%，0.7%，1.3%，2.1%，1.9%，1.6%。
4．重复性实验
取同一样品5份，按“2.5”项下方法制备供试品贮备液，按“2.1”色谱条件进样测定，得到α- BHC，β- BHC，δ- BHC，p,p’-DDT， p,p’-DDD，p,p’-DDE计算各农药峰面积的RSD分别为2.6%，5.9%，5.4%，1.7%，2.0%，3.1%。
5．回收率实验
准确称取取同一样品9份，分别添加0.01μg/g、0.05μg/g和0.1μg/g的标准品贮备液，每水平3份样品，按“2.5”项下方法制备供试品贮备液，按色谱条件进样，计算各农药的平均加样回收率及RSD，结果见表2。
表2 各农药的平均加样回收率及RSD
6．样品的测定
准确称取不同采集点的栝楼子样品共10份，按“2.5”项下方法制备供试品贮备液，按色谱条件进样，重复2次，外标法定量测定，计算样品中的农药残留量。
由结果可知不同采集地的10份栝楼子样品中有20％样品可检出BHC，残留量1.78×10－3~4.13×10－3μg/g，30％样品可检出DDT，残留量0.89×10－3~2.47×10－3μg/g；其余样品在最小检测范围内均未检出，目前对菊花中农药残留量尚无限量标准，参考《中国药典》2005年版II部黄芪和甘草项下对BHCs和DDTs的限量标准，检测的10个栝楼子样品均符合要求。
详细结果见表3。
表3 10份栝楼子样品的测定结果（10－3μg/g）
表3结果显示湖州产的栝楼子中6种有机氯的农药残留量均明显低于上述国家标准或建议值，说明该湖州产栝楼子在食用安全性方面符合要求。
本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内。
Claims (6)
1. 不同产地栝楼子农药残留快速测定方法，包括使用气相色谱电子捕获测定法（GC-ECD）快速测定栝楼子有机氯农药残留，依次包括步骤：
制备并混合对照品贮备液；
对栝楼子样品前处理；
确定标准曲线和最低检测限；
色谱分析；
外标法定量测定，计算栝楼子中的有机氯农药残留量。
2. 根据权利要求1所述的不同产地栝楼子农药残留快速测定方法，其特征在于：所述的气相色谱条件为：石英毛细管柱进样口温度250-300℃，检测器温度为280-330℃；高纯氮载气流速为2-5ml/min，不分流进样；采用程序升温的初始温度为120-180℃，保持1-5min；然后2-5℃/min升至160-190℃，保持8-12min；然后再8-12℃/min升至220-280℃，保持3-8min；进样量为1.0μl。
3. 根据权利要求2所述的不同产地栝楼子农药残留快速测定方法，其特征在于：所述的气相色谱条件为：使用Agilent 7890A气相色谱仪，配有63Ni-ECD检测器，石英毛细管柱；进样口温度：280℃；检测器温度：300℃；载气：高纯氮；流速3ml/min，不分流进样；采用程序升温：初始温度150℃，保持2min；4℃/min升至180℃，保持10min；10℃/min升至250℃，保持5min；进样量：1.0μl。
4. 根据权利要求1所述的不同产地栝楼子农药残留快速测定方法，其特征在于：所述步骤A的配制并混合对照品贮备液：
a.配制对照品贮备液：各种农药标准品在气相色谱仪上的响应值不同，精密移取α- BHC、β- BHC、δ- BHC、p,p’-DDT、p,p’-DDD、p,p’-DDE农药对照品适量，用石油醚（60～90℃）分别配制成1.0-1.5ml约含有机氯对照品40-48μg的对照品贮备液，放于冰箱中-15 - -19℃保存备用；
b. 混合对照品贮备液：精密量取上述各对照品贮备液0.4-0.6ml，置于10ml容量瓶中，用石油醚（60～90℃）稀释至刻度，摇匀。
5. 根据权利要求1所述的不同产地栝楼子农药残留快速测定方法，其特征在于：所述步骤B的对栝楼子样品前处理的方法为：
取栝楼子供试品于50-70℃干燥3-5小时，粉碎成细粉，取约1-3g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加水10-50ml浸泡过夜，精密加丙酮30-50ml，称定重量，超声处理20-40分钟，放冷，再称定重量，用丙酮补足减失的重量，再加氯化钠约6-8g及二氯甲烷25-35ml，称定重量，超声处理10-18分钟,再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，静置分层，将有机相迅速移入装有适量无水硫酸钠的100ml具塞锥形瓶中，放置3.5-4.5小时;
精密量取30-40ml，于 30-50℃水浴上减压浓缩至近干，加少量石油醚(60～90℃)如前反复操作至二氯甲烷及丙酮除净，用石油醚(60～90℃)溶解并转移至10ml具塞刻度离心管中,加石油醚(60～90℃)至5-8ml；
小心加入硫酸 0.5-1.5ml，振摇1-3分钟，离心(3000转／分)10-15分钟；
精密量取上清液2-5ml置具刻度的浓缩瓶中，连接旋转蒸发器，用氮气将溶液浓缩至适量、精密稀释至 1-3ml，作为供试品液待用。
6.根据权利要求1所述的不同产地栝楼子农药残留快速测定方法，其特征在于：所述步骤C的确定标准曲线和最低检测限的方法为：
精密量取混合对照品储备液，用石油醚（60～90℃）制成每1L分别含5μg、10μg、50μg、100μg、250μg、500μg的溶液，按色谱条件进样，重复3次，取平均值绘制标准曲线，以试样浓度(y，μg/ml )为纵坐标，以峰面积为横坐标，进行回归计算；
配制低浓度混合标准品液，按色谱条件进样，重复3次，以3倍噪声计算方法确定最低检测限为0.0003μg/ml。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20120530 |