CN102470140A - 含有人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及含有源自人参的人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物。本发明的组合物通过活化一氧化氮合成酶来增加一氧化氮的生成，通过血管的舒张作用，而具有优异的降血压效果，因此，本发明的组合物可有效地应用于预防及治疗高血压及由高血压并发症所引起的各种心血管疾病的保健食品组合物。

Description

含有人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物
技术领域
本发明涉及含有人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物，尤其涉及一种人参皂苷浓缩流分的有效量为0.1～95重量％的用于降血压的组合物。本发明通过活化一氧化氮合成酶来增加一氧化氮的生成，通过血管的扩张作用，而具有优异的降血压特点。
背景技术
根据2005年的国民健康营养调查，我国20岁以上的韩国人中约有27％的男性和21％的女性患有高血压，在60岁以上的成人中有一半以上患有高血压。高血压虽然没有主观症状，但其同关节炎及龋齿一样具有很高的知晓率。按照年份比较，30岁以上的成人的高血压知晓率在1998年时为27％，而到了2001年为36％，2005年增加到60％，增长速度很快。
高血压由遗传或环境因素等多种原因而引发。高血压是因为(1)体内的盐分积累过多，使得血液量增加，或(2)动脉的弹性减弱，使得周围血管的阻力增加而发生。高血压不仅其本身是个问题，而且给心脏带来需要过度收缩的负担。并且血管分布于全身，从而使得高血压引起全身和脏器的多种疾病。例如，已知在我国，高血压导致心脏疾病发生率为21％，导致脑血管疾病发生率为35％。血压高的人有血压持续上升的倾向，因此，被诊断为高血压的人应在改善生活习惯的同时通过服用药物来控制血压。但是考虑到服用药物引起的副作用，以及经济上的负担，使得高血压前期(prehypertension)的预防变得尤为重要。
人参是一种含有人参皂苷、生物碱、聚乙炔(polyacetylene)、多聚糖、低聚糖、低聚肽、类黄酮、脂质、维生素、无机物等200余种成分的食品。分类为萜烯类、皂苷类的人参皂苷为人参的主要功能成分，至今公开了约30种结构。
大部分的研究都是采用纯度为98％以上的单一人参皂苷作为试验物质，因此将这些作为支持人参、人参提取物或人参流分功能性的直接依据有些勉强。虽然也有对人参提取物的研究，但数量很少，而且没有提供以人参皂苷为中心的标准化信息，因此这些研究在作为人参、人参提取物或人参流分的功能性资料方面具有局限性。
本发明的发明人将降血压剂产品化，而为了克服上述现有技术中存在的问题，经过反复研究的结果，制备得到一种具有降血压效果的含有人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物，从而完成了本发明。所述含有人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物是通过活化一氧化氮合成酶来增加一氧化氮的生成，通过血管的舒张作用，而具有降血压效果。
发明内容
本发明要解决的技术问题
本发明的目的在于提供一种源自人参的人参皂苷浓缩流分。此外，本发明的另一目的是提供一种含有人参皂苷浓缩流分作为有效成分的用于降血压的组合物。
解决技术问题的技术手段
本发明的目的是通过含有人参皂苷浓缩流分作为有效成分的用于降血压的组合物而实现。所述人参皂苷浓缩流分含有人参皂苷Rg1及Rb1。
上述人参皂苷浓缩流分的特征为人参皂苷Rg1含量为10～15重量％，优选为12重量％；人参皂苷Rb1的含量为5～10重量％，优选为6重量％。
本发明的用于降血压的组合物，其特征在于，所述用于降血压的组合物中的人参皂苷浓缩流分的有效量优选为0.1～95重量％。
此外，上述人参皂苷浓缩流分的特征在于，其是通过下述步骤制得：在干燥的尾参中加入乙醇，进行溶剂提取的步骤；将上述人参乙醇提取物加热浓缩的步骤；将上述浓缩物加入蒸馏水稀释后，通过吸附树脂的步骤；使蒸馏水通过后，使20v/v％的乙醇通过的步骤；以及洗脱至乙醇浓度为30-40v/v％的步骤。
即，在干燥的1kg的尾参中加入C1-C4的低级醇，优选加入70％的乙醇，加入量为试样重量的5～20倍，优选为15倍，在50～100℃下，优选70℃下提取12～48小时，优选提取24小时，从而制得人参的乙醇提取物。将上述制得的人参乙醇提取物进行加热浓缩，白利度为50-100brix，优选为80brix。加入所得浓缩物的2～10倍重量的蒸馏水，优选加入5倍重量的蒸馏水，充分稀释后，通过甲醛系HP-20(diaion HP-20)吸附树脂，从而吸附皂苷成分，继续使上述树脂容量的2～10倍，优选为5倍的蒸馏水通过，从而去除没有被吸附的成分。然后为了去除非皂苷成分，先使树脂体积的2～10倍，优选为5倍左右的20v/v％的乙醇通过，然后洗脱至乙醇浓度为30～40v/v％，从而获得人参皂苷浓缩流分。
已知血管内皮层使收缩及舒张血管的各种物质游离，用于调节血管平滑肌的紧张，其中作为内皮依赖性舒张因子最具代表性的物质为一氧化氮(NO)，其除了在血管内皮层中生成，在体内的其他部位也有生成，例如平滑肌细胞、循环血细胞及神经细胞或中枢神经系统等。一氧化氮的变化是理解高血压病理生理的一个指标，已有报道称实际上一氧化氮导致的血管舒张变异与高血压的引发有关。一氧化氮是由作为体内氨基酸的L-精氨酸通过一氧化氮合成酶(NOS)而合成得到。
并且，本发明也想通过在人的血管内皮细胞中测量一氧化氮的生成量和一氧化氮合成酶的活性，从而了解含有人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物对血管的舒张效果。结果在作为人血管内皮细胞的HUVEC细胞实验中确认了含有人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物能够促进引起血管舒张的血管内皮细胞中的一氧化氮(NO)的生成，确认了作为一氧化氮合成酶eNOS(内皮型NO合成酶，endothelial NO synthase)的蛋白质表达量的增加。动物实验使用了具有代表性的高血压动物模型——自发性高血压大鼠(spontaneouslyhypertensive rats；SHR)。该动物模型从5～6周开始出现高血压，之后的收缩压达到180～200mmHg。以SHR作为对象，给予含有人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物，结果确认为通过活化一氧化氮合成酶，从而增加一氧化氮的生成，通过血管的舒张作用降低了血压。
由上述结果可知，本发明的含有源自人参的人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物的特征在于，其为可用于预防或治疗高血压的药物组合物或食品组合物。
本发明的用于降血压的组合物可以制成含有人参皂苷浓缩流分作为有效成分的多种剂型，例如粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、糖浆剂、饮料剂等口服剂型。将本发明的用于降血压的组合物制成制剂时，在对有效成分的效果没有坏影响的情况下，根据需要可加入用于保健食品的各种辅料，例如赋形剂或其他添加剂，例如稳定剂、软化剂、乳化剂等。
发明的效果
如上所述，本发明的含有源自人参的人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物在血管中通过增加一氧化氮合成酶的活性和表达，从而增加一氧化氮的生成，通过舒张血管，具有降血压的效果，能够预防高血压，具有提供用于降血压的保健食品的优异效果。
附图说明
图1示出了人参乙醇提取物的人参皂苷Rg1及Rb1的含量。
图2示出了本发明人参皂苷浓缩流分的人参皂苷Rg1及Rb1的含量。
图3示出了本发明的含有人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物在人体血管内皮细胞中的一氧化氮(NO)生成量的实验测量结果。
图4示出了本发明的含有人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物在人体血管内皮细胞中的一氧化氮合成酶(eNOS)表达量的实验测量结果。
图5示出了本发明的含有人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物在自发性高血压大鼠(SHR)中的降血压效果的实验测量结果。
图6示出了本发明的含有人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物在自发性高血压大鼠(SHR)中的一氧化氮合成酶(NOS)活度实验测量结果。
具体实施方式
下面通过本发明的优选实施例详细说明本发明。但这些实施例并不限制本发明的范围。
实施例1：本发明的人参皂苷浓缩流分的制备
1-1：人参乙醇提取物的制备
在1kg干燥的尾参中加入70％的乙醇，加入量为试样重量的15倍，在70℃下提取24小时，从而制得人参乙醇提取物。
采用高效液相色谱法(HPLC)测量获得的人参乙醇提取物中的人参皂苷Rg1及Rb1的含量，其结果示于表1及图1。
1-2：人参皂苷浓缩流分的制备
将上述实施例1-1制得的人参乙醇提取物进行加热浓缩，使白利度为80brix。加入该浓缩物的5倍重量的蒸馏水，充分稀释后，通过甲醛系HP-20吸附树脂，从而吸附皂苷成分，继续使上述树脂体积的约5倍量的蒸馏水通过，从而去除没有被吸附的成分。
然后为了去除非皂苷成分，先使树脂体积的5倍左右的20v/v％的乙醇通过，然后洗脱至乙醇浓度为30～40v/v％，从而获得人参皂苷浓缩流分。
采用高效液相色谱(HPLC)测量上述流分的人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1的含量，其结果示于表1及图2。
表1
 人参皂苷Rg1含量  人参皂苷Rb1含量
  人参乙醇提取物   0.7重量％   2.0重量％
  人参皂苷浓缩流分   12.0重量％   6.0重量％
本发明的含有人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物可制备成下列剂型，下述实施例仅是为了说明本发明，并不限制本发明的内容。
实施例2：本发明的含有人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物片剂的制备
将25mg实施例1中获得的人参皂苷浓缩流分与270mg结晶纤维素和200mg葡聚糖混合。然后在上述混合物中加入2.5mg镁及2.5mg羟丙基甲基纤维素，从而制备得到。
实施例3：本发明的含有人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物胶囊剂的制备
将500mg实施例1中获得的人参皂苷浓缩流分填充到软质明胶胶囊壳中，从而制得胶囊剂。
实施例4：本发明的含有人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物饮料剂的制备
将5g实施例1中获得的人参皂苷浓缩流分溶解于50mL的水中，作为辅料加入15mL维生素及低聚糖，加入1.5mL的防腐剂后，加水至100mL，从而制得饮料剂。
实验例1：本发明的含有人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物在人体血管内皮细胞中的一氧化氮(NO)生成量的实验测量结果
含有按照本发明实施例1的方法制备的人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物在人体血管内皮细胞中的一氧化氮(NO)生成量的实验测量结果如图3所示。
实验方法为在24-孔板中培养人体血管内皮细胞(HUVEC)后，制备了各种浓度的含有人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物溶液。分别加入0.5mL人参皂苷浓缩流分，以使得最终浓度为0～50μM，在37℃，5％CO2条件下培养30分钟，培养结束后将培养基0.4mL移到试管内进行离心分离，然后使用格里斯试剂(Griess reagent)盒测量上清液中一氧化氮的生成量。将一氧化氮生成量换算成μg蛋白质的量并进行定量。
结果如图3所示，在HUVEC细胞中使用0μM的人参皂苷浓缩流分进行处理时，一氧化氮生成量为18.8nmol/μg的蛋白质的生成量随着容量的增加而增加，当以50μM处理时蛋白质增加至50.34nmol/μg。分别用5、10、25、50μM的人参皂苷浓缩流分处理，一氧化氮生成量与浓度成比例增加，已确认：与0μM相比，25μM和50μM的效果分别为显著增加和极显著增加(p＜0.01，p＜0.001)。多次反复实验中也示出了类似的结果。
实验例2：本发明的含有人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物在人体血管内皮细胞中的一氧化氮合成酶(eNOS)表达量的实验测量结果
含有按照本发明实施例1的方法制备的人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物在人体血管内皮细胞中的一氧化氮合成酶(eNOS)表达量的实验测量结果如图4所示。
实验方法采用蛋白印迹法(Western blotting)测量了血管内皮细胞的一氧化氮合成酶的表达量。在培养皿中培养一定量的血管内皮细胞，分别照射不同量的激光进行24小时培养。照射的激光量分别为0、0.09、0.26、0.52、0.77J/cm2。用蛋白分解酶分解附着的细胞，总蛋白质用缓冲液提取。将细胞刮下来后取14,000g，在4℃下进行15分钟离心分离。SDS-PAGE膜采用抗-人单克隆eNOS抗体和抗-小鼠-肌动蛋白多克隆抗体进行培养。进行3次试验，为了定量结果，使用光学浓度计分析法，表达了肌动蛋白(actin)的百分率。
结果如图4所示，随着人参皂苷浓缩流分的处理浓度的增加，一氧化氮合成酶的蛋白质表达量也随之增加。与对照组相比，特别是人参皂苷浓缩流分的处理浓度为5、10、25、50μM时，表达量显著增加(p＜0.01)。
实验例3：本发明的含有人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物在自发性高血压大鼠中的降血压效果的实验测量结果
含有按照本发明实施例1的方法制备的人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物在自发性高血压大鼠中的降血压效果的实验测量结果如图5所示。
实验方法为：作为自发性高血压动物购入16周龄的自发性高血压大鼠(SHR)，在正常的实验室条件(22±1℃，相对湿度65±5％，昼夜周期12小时)下，自由摄取水和实验饲料进行饲养。经过1周时间的适应期后分为两组，对照组饲喂AIN-93基本饲料，对实验组饲喂的饲料为：在基本饲料中添加了含有人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物的饲料，饲喂5周。采用从实验动物尾巴测量血压的尾套法(tail-cuffmethod)测量了收缩压和舒张压。为测量稳定的血压，将实验动物固定在固定框，在恒温的水槽内稳定10到15分钟，在进行实验2周前就开始使其适应血压测量环境，每周在一定的时间(14:00-16:00)测量。
结果如图5所示，加入了含有人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物的结果为，在实验开始前2组的收缩压均在189～190mmHg，收缩压相似；5周后，对照组及含有人参皂苷浓缩物流分的用于降血压的组合物的实验组的收缩压分别显示为200mmHg和170mmHg。可知，从实验第3周开始显示为两组之间的收缩压具有明显差异(p＜0.05)，直到实验结束，两组血压具有越来越大的差异。
实验例4：本发明的含有人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物在自发性高血压大鼠中的一氧化氮合成酶(NOS)活度实验测量结果
含有按照本发明实施例1的方法制备的人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物在自发性高血压大鼠中的一氧化氮合成酶(NOS)活度实验测量结果如图6所示。
实验方法为：分离大动脉后，利用组织捣碎匀浆机在Tris(三羟甲基氨基甲烷)缓冲溶液(50mM的Tris，0.1％的巯基乙醇，0.1mM的EDTA，0.1mM的EGTA，2mM的亮抑蛋白酶肽，1mM的PMSF，1mM的胃酶抑素，pH7.4)中对组织进行均质处理。NOS活度的测量是测量[3H]-L-精氨酸转换为[3H]-L-瓜氨酸的量。将组织均质液(60μg蛋白质)在反应液(1mM的MgCl2，1mM的CaCl2，1mM的DTT，2mM的NADPH，3μM的TBH4，3μM的FAD，3μM的FMN，10μg/mL的钙调蛋白质，[3H]-L-精氨酸2μCi/ml)中，于37℃反应约20分钟。加入500μL的反应停止液(20mM的HEPES，2mM的EGTA，2mM的EDTA，pH5.5)使反应停止。将反应液加入到Dowex 50W-X8(钠离子形式)色谱柱中进行洗脱，将洗脱出的[3H]-L-瓜氨酸的量用液体闪烁计数器定量。非特异反应时在含有0.1mM的L-NAME的反应液中决定了洗脱出的[3H]-L-瓜氨酸。
结果如图6可知：由于加入了含有人参皂苷浓缩流分的用于降血压的组合物，使得大动脉中一氧化氮合成酶的活性(72fmol/min/mg蛋白质)比对照组(49fmol/min/mg蛋白质)，有明显增加(p＜0.05)。
工业实用性
本发明的含有人参皂苷浓缩流分的组合物可应用于降血压，具有显著的效果，因此是在保健食品领域非常有用的发明。

Claims (7)

1.一种用于降血压的组合物，其含有人参皂苷浓缩流分作为有效成分，所述人参皂苷浓缩流分含有人参皂苷Rg1及Rb1。
2.根据权利要求1所述的用于降血压的组合物，其特征在于，所述人参皂苷浓缩流分中的人参皂苷Rg1含量为10～15重量％。
3.根据权利要求1所述的用于降血压的组合物，其特征在于，所述人参皂苷浓缩流分中的人参皂苷Rb1含量为5～10重量％。
4.根据权利要求1所述的用于降血压的组合物，其特征在于，所述人参皂苷浓缩流分的有效量为0.1～95重量％。
5.根据权利要求1所述的用于降血压的组合物，其特征在于，所述人参皂苷浓缩流分通过下述步骤制得：在干燥的尾参中加入乙醇，进行溶剂提取的步骤；将上述人参乙醇提取物加热浓缩的步骤；将上述浓缩物加入蒸馏水稀释后，通过吸附树脂的步骤；使蒸馏水通过后使20v/v％的乙醇通过的步骤；以及洗脱至乙醇浓度为30-40v/v％的步骤。
6.根据权利要求1所述的用于降血压的组合物，其特征在于，所述组合物为药物组合物或食品组合物。
7.根据权利要求1所述的用于降血压的组合物，其特征在于，所述组合物为粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、糖浆剂或饮料剂中的任意一种形态。
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