CN102459302A - 核酸递送组合物及其使用方法 - Google Patents
核酸递送组合物及其使用方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102459302A CN102459302A CN2010800342403A CN201080034240A CN102459302A CN 102459302 A CN102459302 A CN 102459302A CN 2010800342403 A CN2010800342403 A CN 2010800342403A CN 201080034240 A CN201080034240 A CN 201080034240A CN 102459302 A CN102459302 A CN 102459302A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- substituted
- oligonucleotide
- polynucleotide
- group
- sate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 82
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 82
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 81
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 68
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 29
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 claims abstract description 29
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 136
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 97
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 97
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 97
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 59
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 49
- 238000010361 transduction Methods 0.000 claims description 44
- 230000026683 transduction Effects 0.000 claims description 44
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 42
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 39
- -1 nucleotide compound Chemical class 0.000 claims description 37
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 33
- 125000002769 thiazolinyl group Chemical group 0.000 claims description 29
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 claims description 27
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 claims description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 25
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 24
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 claims description 18
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 claims description 17
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 claims description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 15
- 125000003107 substituted aryl group Chemical group 0.000 claims description 14
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 13
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 claims description 13
- 125000005415 substituted alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 13
- 125000004426 substituted alkynyl group Chemical group 0.000 claims description 13
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 7
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 7
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000004103 aminoalkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 abstract description 5
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical group OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 89
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 65
- 230000005591 charge neutralization Effects 0.000 description 58
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 42
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 41
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 37
- 239000002585 base Substances 0.000 description 32
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 26
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 25
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 24
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 24
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 24
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 15
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 15
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 15
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 12
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 11
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 11
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 11
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 11
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 11
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 102100033299 Glia-derived nexin Human genes 0.000 description 10
- 101000997803 Homo sapiens Glia-derived nexin Proteins 0.000 description 10
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 10
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 10
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 10
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 10
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 9
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 9
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 9
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 9
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 8
- 230000008859 change Effects 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 8
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 description 8
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 8
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 8
- 108091007494 Nucleic acid- binding domains Proteins 0.000 description 7
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 150000003580 thiophosphoric acid esters Chemical group 0.000 description 7
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 7
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CWHJIJJSDGEHNS-MYLFLSLOSA-N Senegenin Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@](C)(C(O)=O)[C@@H]2CC[C@@]3(C)C(CC[C@]4(CCC(C[C@H]44)(C)C)C(O)=O)=C4[C@@H](CCl)C[C@@H]3[C@]21C CWHJIJJSDGEHNS-MYLFLSLOSA-N 0.000 description 6
- 102000005488 Thioesterase Human genes 0.000 description 6
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 6
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 6
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 239000009871 tenuigenin Substances 0.000 description 6
- 108020002982 thioesterase Proteins 0.000 description 6
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 6
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 5
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 5
- 125000006165 cyclic alkyl group Chemical group 0.000 description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 5
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 5
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 5
- VXNZUUAINFGPBY-UHFFFAOYSA-N 1-Butene Chemical compound CCC=C VXNZUUAINFGPBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 4
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 description 4
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 description 4
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 4
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 4
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 4
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 4
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 239000002512 suppressor factor Substances 0.000 description 4
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 102000052812 Ornithine decarboxylases Human genes 0.000 description 3
- 108700005126 Ornithine decarboxylases Proteins 0.000 description 3
- 101710192266 Tegument protein VP22 Proteins 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 3
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 3
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 3
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 3
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 3
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical group 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 2
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 2
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- XUYPXLNMDZIRQH-LURJTMIESA-N N-acetyl-L-methionine Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(C)=O XUYPXLNMDZIRQH-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004570 RNA-binding Effects 0.000 description 2
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 2
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- IAQRGUVFOMOMEM-UHFFFAOYSA-N butene Natural products CC=CC IAQRGUVFOMOMEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 2
- 239000007958 cherry flavor Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- VLCYCQAOQCDTCN-UHFFFAOYSA-N eflornithine Chemical compound NCCCC(N)(C(F)F)C(O)=O VLCYCQAOQCDTCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010931 ester hydrolysis Methods 0.000 description 2
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- DRAVOWXCEBXPTN-UHFFFAOYSA-N isoguanine Chemical compound NC1=NC(=O)NC2=C1NC=N2 DRAVOWXCEBXPTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 2
- 229960003511 macrogol Drugs 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000740 n-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 2
- 150000003009 phosphonic acids Chemical class 0.000 description 2
- 229940023488 pill Drugs 0.000 description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 2
- 230000003114 pinocytic effect Effects 0.000 description 2
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 2
- ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N psoralen Chemical compound C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OC=C2 ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 2
- FGDZQCVHDSGLHJ-UHFFFAOYSA-M rubidium chloride Chemical compound [Cl-].[Rb+] FGDZQCVHDSGLHJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- IAQRGUVFOMOMEM-ONEGZZNKSA-N trans-but-2-ene Chemical compound C\C=C\C IAQRGUVFOMOMEM-ONEGZZNKSA-N 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- MEIRRNXMZYDVDW-MQQKCMAXSA-N (2E,4E)-2,4-hexadien-1-ol Chemical compound C\C=C\C=C\CO MEIRRNXMZYDVDW-MQQKCMAXSA-N 0.000 description 1
- JUDOLRSMWHVKGX-UHFFFAOYSA-N 1,1-dioxo-1$l^{6},2-benzodithiol-3-one Chemical compound C1=CC=C2C(=O)SS(=O)(=O)C2=C1 JUDOLRSMWHVKGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VNBFUGOVQMFIRN-UHFFFAOYSA-N 1-chlorobutan-2-ol Chemical compound CCC(O)CCl VNBFUGOVQMFIRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XJGZYFXMKLIKCX-UHFFFAOYSA-N 2-(dimethylamino)butan-2-ol Chemical compound CCC(C)(O)N(C)C XJGZYFXMKLIKCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XQCZBXHVTFVIFE-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4-hydroxypyrimidine Chemical compound NC1=NC=CC(O)=N1 XQCZBXHVTFVIFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004180 3-fluorophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C([H])C(F)=C1[H] 0.000 description 1
- 102100033756 39S ribosomal protein L45, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 101710116868 39S ribosomal protein L45, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 125000001255 4-fluorophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C([H])C([H])=C1F 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-M 4-hydroxybenzoate Chemical compound OC1=CC=C(C([O-])=O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000004172 4-methoxyphenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(OC([H])([H])[H])=C([H])C([H])=C1* 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 235000006491 Acacia senegal Nutrition 0.000 description 1
- 101710159080 Aconitate hydratase A Proteins 0.000 description 1
- 101710159078 Aconitate hydratase B Proteins 0.000 description 1
- 102100029457 Adenine phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108010024223 Adenine phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 102100032578 Adenosine deaminase domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108700031308 Antennapedia Homeodomain Proteins 0.000 description 1
- 101100278510 Arabidopsis thaliana DRB1 gene Proteins 0.000 description 1
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 1
- 241000167854 Bourreria succulenta Species 0.000 description 1
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 description 1
- JWKIYIWSIPAOBN-UHFFFAOYSA-N CC(C)(C(O)SCCO)NC(OCC=C)=O Chemical compound CC(C)(C(O)SCCO)NC(OCC=C)=O JWKIYIWSIPAOBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N CC(C)NC(C)C Chemical compound CC(C)NC(C)C UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100029871 CDKN2A-interacting protein Human genes 0.000 description 1
- VXNUOJDBJQWGPB-UHFFFAOYSA-N COC(C(COC(c1ccccc1)(c(cc1)ccc1OC)c(cc1)ccc1OC)OC1N(C=CC(NC(COc2ccccc2)=O)=N2)C2=O)C1F Chemical compound COC(C(COC(c1ccccc1)(c(cc1)ccc1OC)c(cc1)ccc1OC)OC1N(C=CC(NC(COc2ccccc2)=O)=N2)C2=O)C1F VXNUOJDBJQWGPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFBZJHBURMAGGY-UHFFFAOYSA-N COC(NCCC(SCCOP)=O)=O Chemical compound COC(NCCC(SCCOP)=O)=O QFBZJHBURMAGGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010051152 Carboxylesterase Proteins 0.000 description 1
- 102000013392 Carboxylesterase Human genes 0.000 description 1
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 description 1
- 108020004394 Complementary RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000016736 Cyclin Human genes 0.000 description 1
- 108050006400 Cyclin Proteins 0.000 description 1
- 108090000404 Cyclin G1 Proteins 0.000 description 1
- 102000004012 Cyclin G1 Human genes 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 101710112752 Cytotoxin Proteins 0.000 description 1
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 1
- 102100029791 Double-stranded RNA-specific adenosine deaminase Human genes 0.000 description 1
- 102100024692 Double-stranded RNA-specific editase B2 Human genes 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 1
- 102000009331 Homeodomain Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010048671 Homeodomain Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101000797006 Homo sapiens Adenosine deaminase domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000793819 Homo sapiens CDKN2A-interacting protein Proteins 0.000 description 1
- 101000865408 Homo sapiens Double-stranded RNA-specific adenosine deaminase Proteins 0.000 description 1
- 101000686486 Homo sapiens Double-stranded RNA-specific editase B2 Proteins 0.000 description 1
- 101000869796 Homo sapiens Microprocessor complex subunit DGCR8 Proteins 0.000 description 1
- 101000974349 Homo sapiens Nuclear receptor coactivator 6 Proteins 0.000 description 1
- 101000652433 Homo sapiens Protein SON Proteins 0.000 description 1
- 101000642671 Homo sapiens Spermatid perinuclear RNA-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 101000838340 Homo sapiens tRNA-dihydrouridine(20) synthase [NAD(P)+]-like Proteins 0.000 description 1
- 108700003968 Human immunodeficiency virus 1 tat peptide (49-57) Proteins 0.000 description 1
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026797 Kanadaptin Human genes 0.000 description 1
- 101710155163 Kanadaptin Proteins 0.000 description 1
- ZQISRDCJNBUVMM-UHFFFAOYSA-N L-Histidinol Natural products OCC(N)CC1=CN=CN1 ZQISRDCJNBUVMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZQISRDCJNBUVMM-YFKPBYRVSA-N L-histidinol Chemical compound OC[C@@H](N)CC1=CNC=N1 ZQISRDCJNBUVMM-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical class C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 101100261636 Methanothermobacter marburgensis (strain ATCC BAA-927 / DSM 2133 / JCM 14651 / NBRC 100331 / OCM 82 / Marburg) trpB2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100032459 Microprocessor complex subunit DGCR8 Human genes 0.000 description 1
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000238367 Mya arenaria Species 0.000 description 1
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical class CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFWIBTONFRDIAS-UHFFFAOYSA-N Naphthalene Chemical compound C1=CC=CC2=CC=CC=C21 UFWIBTONFRDIAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100022929 Nuclear receptor coactivator 6 Human genes 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 206010034016 Paronychia Diseases 0.000 description 1
- 101150034459 Parpbp gene Proteins 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- QOSMNYMQXIVWKY-UHFFFAOYSA-N Propyl levulinate Chemical compound CCCOC(=O)CCC(C)=O QOSMNYMQXIVWKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 102100030232 Protein SON Human genes 0.000 description 1
- 102000044126 RNA-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 101710105008 RNA-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108020005091 Replication Origin Proteins 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 229920001800 Shellac Polymers 0.000 description 1
- 102100035935 Spermatid perinuclear RNA-binding protein Human genes 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000723873 Tobacco mosaic virus Species 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 101800004564 Transforming growth factor alpha Proteins 0.000 description 1
- 102400001320 Transforming growth factor alpha Human genes 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000018594 Tumour necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 108050007852 Tumour necrosis factor Proteins 0.000 description 1
- 108010087302 Viral Structural Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229930003756 Vitamin B7 Natural products 0.000 description 1
- DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N [Na].[Cl] Chemical compound [Na].[Cl] DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- PPQRONHOSHZGFQ-LMVFSUKVSA-N aldehydo-D-ribose 5-phosphate Chemical group OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PPQRONHOSHZGFQ-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000002521 alkyl halide group Chemical group 0.000 description 1
- 229940126575 aminoglycoside Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000002785 anti-thrombosis Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940127218 antiplatelet drug Drugs 0.000 description 1
- 229960004676 antithrombotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000305 astragalus gummifer gum Substances 0.000 description 1
- 238000013475 authorization Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108700042656 bcl-1 Genes Proteins 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000003139 biocide Substances 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 125000001246 bromo group Chemical group Br* 0.000 description 1
- 239000006189 buccal tablet Substances 0.000 description 1
- 229940046011 buccal tablet Drugs 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000003822 cell turnover Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000019693 cherries Nutrition 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 125000000392 cycloalkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001995 cyclobutyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001559 cyclopropyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])* 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 239000003398 denaturant Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K dihydroxy(stearato)aluminium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[Al](O)O UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 125000006202 diisopropylaminoethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(N(C([H])([H])C([H])([H])*)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide Substances CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K dioxido-sulfanylidene-sulfido-$l^{5}-phosphane Chemical compound [O-]P([O-])([S-])=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000013265 extended release Methods 0.000 description 1
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001207 fluorophenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 238000012226 gene silencing method Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 150000002431 hydrogen Chemical group 0.000 description 1
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 150000002475 indoles Chemical group 0.000 description 1
- 239000003701 inert diluent Substances 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- XMGQYMWWDOXHJM-UHFFFAOYSA-N limonene Chemical compound CC(=C)C1CCC(C)=CC1 XMGQYMWWDOXHJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000088 lip Anatomy 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960001708 magnesium carbonate Drugs 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000014380 magnesium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 239000001683 mentha spicata herb oil Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- RXMBKOPBFXCPDD-UHFFFAOYSA-N methoxyphosphonamidous acid Chemical compound COP(N)O RXMBKOPBFXCPDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N methyl salicylate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1O OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical compound CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N micophenolic acid Natural products OC1=C(CC=C(C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000011169 microbiological contamination Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 235000021239 milk protein Nutrition 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N mycophenolic acid Chemical compound OC1=C(C\C=C(/C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N 0.000 description 1
- 229960000951 mycophenolic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000001280 n-hexyl group Chemical group C(CCCCC)* 0.000 description 1
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Substances N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000007968 orange flavor Substances 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 125000002255 pentenyl group Chemical group C(=CCCC)* 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L phosphoramidate Chemical compound NP([O-])([O-])=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- SXADIBFZNXBEGI-UHFFFAOYSA-N phosphoramidous acid Chemical group NP(O)O SXADIBFZNXBEGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008884 pinocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000010773 plant oil Substances 0.000 description 1
- 239000000106 platelet aggregation inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000029279 positive regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 description 1
- 125000004076 pyridyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000714 pyrimidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000000452 restraining effect Effects 0.000 description 1
- 239000002342 ribonucleoside Substances 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 101150018558 rnb gene Proteins 0.000 description 1
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000013606 secretion vector Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000003352 sequestering agent Substances 0.000 description 1
- 239000004208 shellac Substances 0.000 description 1
- 229940113147 shellac Drugs 0.000 description 1
- ZLGIYFNHBLSMPS-ATJNOEHPSA-N shellac Chemical compound OCCCCCC(O)C(O)CCCCCCCC(O)=O.C1C23[C@H](C(O)=O)CCC2[C@](C)(CO)[C@@H]1C(C(O)=O)=C[C@@H]3O ZLGIYFNHBLSMPS-ATJNOEHPSA-N 0.000 description 1
- 235000013874 shellac Nutrition 0.000 description 1
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 1
- 235000019721 spearmint oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000004575 stone Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 125000005017 substituted alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 102100028986 tRNA-dihydrouridine(20) synthase [NAD(P)+]-like Human genes 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- ISIJQEHRDSCQIU-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 2,7-diazaspiro[4.5]decane-7-carboxylate Chemical compound C1N(C(=O)OC(C)(C)C)CCCC11CNCC1 ISIJQEHRDSCQIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- OGIDPMRJRNCKJF-UHFFFAOYSA-N titanium oxide Inorganic materials [Ti]=O OGIDPMRJRNCKJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 125000002023 trifluoromethyl group Chemical group FC(F)(F)* 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 101150081616 trpB gene Proteins 0.000 description 1
- 101150111232 trpB-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 239000011735 vitamin B7 Substances 0.000 description 1
- 235000011912 vitamin B7 Nutrition 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000012431 wafers Nutrition 0.000 description 1
- 239000009637 wintergreen oil Substances 0.000 description 1
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/0091—Purification or manufacturing processes for gene therapy compositions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/06—Pyrimidine radicals
- C07H19/073—Pyrimidine radicals with 2-deoxyribosyl as the saccharide radical
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/16—Purine radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/16—Purine radicals
- C07H19/173—Purine radicals with 2-deoxyribosyl as the saccharide radical
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/311—Phosphotriesters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/50—Methods for regulating/modulating their activity
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Manufacturing & Machinery (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明涉及经修饰具有减少的净阴离子电荷的核酸构建物。所述构建物包含磷酸三酯和/硫代磷酸酯保护基团。本发明还提供了制造和使用这种构建物的方法。
Description
相关申请的交叉参考
本申请要求于2009年6月1日提交的美国临时申请号61/182,832的优先权,该申请的公开内容通过引用合并入本文。
技术领域
本公开书涉及用于转导细胞的组合物和方法。
背景技术
已经使用各种各样的重组病毒载体、脂质递送系统和电穿孔在体外和体内进行核酸至细胞的递送。这些技术通过敲除基因表达或提供用于基因治疗的遗传构建物设法治疗各种疾病和病症或研究不同的生物系统。
聚阴离子寡聚物诸如寡核苷酸不容易跨细胞膜扩散。为了克服培养细胞的这个问题,阳离子脂质与阴离子寡核苷酸结合以帮助摄取。不幸的是,该复合物对细胞通常是有毒的,这意味着必须小心地控制阳离子脂的暴露时间和浓度,以保证活细胞的转染。
作为选择性降解mRNA的细胞机理的RNA干扰的发现使得可以靶向操作细胞培养物的表型和发展定向治疗技术(Behlke,Mol.Ther.13,644-670,2006;Xie等人,Drug Discov.Today 11,67-73,2006)。然而,由于它们的大小和负(阴离子)电荷的性质,siRNA是不能进入细胞的大分子。实际上,siRNA超过了Lipinski的用于细胞递送膜可扩散分子的“5s规则”(Rule of 5s)的25倍,在该规则中,通常膜可扩散分子限制为小于500Da的尺寸。因此,在不存在递送载体或转染剂时,裸露的siRNA不进入细胞,即使在毫摩尔的浓度下也不能(Barquinero等人,Gene Ther.11 Suppl 1,S3-9,2004)。重要的关注集中在使用阳离子脂质上,其凝聚siRNA并在细胞膜上打孔来解决siRNA的递送问题。尽管已经广泛使用,但转染剂不能实现有效地递送到许多细胞类型,尤其是原代细胞和造血细胞系中(T细胞和B细胞,巨噬细胞)。而且脂质转染试剂经常导致不同程度的细胞毒性,从肿瘤细胞中的轻度到原代细胞中的高度的细胞毒性。
发明内容
本公开书提供了用于将掩蔽的寡核苷酸或多核苷酸递送到活细胞中的方法和组合物。本发明提供了短暂保护的寡核苷酸或多核苷酸,其包含阴离子电荷中和部分/基团。在一个实施方案中,所述电荷中和部分包含碱性/阳离子电荷。在另一个实施方案中,所述部分包括沿本发明的三酯保护基团的伯胺、仲胺或叔胺。这些化合物可以通过胞吞或大型胞饮机制进入活细胞的细胞胞质。在一个实施方案中,所述磷酸三酯保护/中和基团当暴露于细胞内环境时,被设计成通过酶活性或通过被动的细胞内方法(例如,pH改变)除去,以提供能够诱发RNAi应答的寡核苷酸或多核苷酸。因此,本发明提供了可用作治疗剂、诊断剂和作为研究工具的寡核苷酸前药。
本公开书提供了RNAi诱导的单个可溶性核糖核酸碱(siRNB)分子。在一些实施方案中,siRNB分子与肽转导结构域(PTD)细胞递送肽(PTD-siRNB)缀合,所述肽转导结构域(PTD)细胞递送肽(PTD-siRNB)<2x104Da。RNB亚磷酰胺结构单元被改造从而包含生物学可逆的氨基异丁基S-酰基硫代乙基碱性磷酸三酯,其被细胞质硫酯酶特异性地去除,导致反转为野生型磷酸二酯。自递送的PTD-siRNB在培养的原代和转化细胞的全部群体中诱导快速的RNAi应答,并且在小鼠模型的鼻和上呼吸道中体内诱导RNAi应答。PTD-siRNB代表一种新型的诱导RNAi应答的单个可溶性分子方式。
本公开书提供了伯胺基团形式(pKa>9.0)的碱性(正)电荷,其使RNB可溶于水中,并且不会被PTD递送肽从溶液中驱除。
本公开书提供了在电荷中和的寡核苷酸中使用的修饰核苷酸。核苷酸包含与核苷酸的磷酸基团缀合的氨基烷基S-酰基硫代烷基(“电荷中和部分”或“N-SATE”)。中和基团协助包含所述修饰的核苷酸的寡核苷酸跨细胞膜运输。一旦被细胞摄取,所述中和基团被例如内源性或外源性硫酯酶去除。
在一个实施方案中,用于将N-SATE添加至寡核苷酸(例如,和RNA寡核苷酸)的结构单元包含电荷中和部分,所述电荷中和部分具有下列通式结构:
其中R是氨基或末端为氨基的1-7个原子的烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、环烷基、取代的环烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂环或取代的杂环。前述结构可以在生成siRNB分子的RNA合成反应期间加入。
在一个实施方案中,所述电荷中和部分包含具有下列通式结构的N-SATE:
其中R1可以存在或可以不存在,当R1存在时,R1选自烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、环烷基、取代的环烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂环或取代的杂环;
其中R2可以存在或可以不存在,当R2存在时,R2选自1-7个原子的烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、环烷基、取代的环烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂环或取代的杂环。在一个实施方案中,所述电荷中和部分选自:
所述电荷中和部分可以与核酸碱基(即,A、G、T、U、C)中任一种的磷酸基团缀合。例如,本公开书提供了具有下列通式结构的核苷酸:
其中R1可以存在或可以不存在,当R1存在时,R1选自烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、环烷基、取代的环烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂环或取代的杂环;
其中R2可以存在或可以不存在,当R2存在时,R2选自1-7个原子的烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、环烷基、取代的环烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂环或取代的杂环。在一个实施方案中,所述电荷中和部分选自:
本公开书还提供了包含寡核苷酸或多核苷酸的核酸构建物,所述寡核苷酸或多核苷酸包含减少所述寡核苷酸或多核苷酸主链的净阴离子电荷的电荷中和部分(例如,磷酸二酯和/或硫代磷酸酯保护基团)。在一个实施方案中,所述寡核苷酸或多核苷酸包括siRNA分子。还在另一个实施方案中,所述寡核苷酸包括多个修饰的具有电荷中和部分的核苷酸。还在另一个实施方案中,所述寡核苷酸或多核苷酸包含多个邻近的具有电荷中和部分的核苷酸。还在另一个实施方案中,所述寡核苷酸或多核苷酸包含多个彼此间隔1个或多个核苷酸碱基(例如,2、3、4、5、6、7、8、9或多个核苷酸碱基)的具有电荷中和部分的核苷酸。还在另一个实施方案中,包含电荷中和部分的寡核苷酸或多核苷酸与转导结构域缀合或可操作地连接,所述转导结构域包括膜转运功能,与所述寡核苷酸或多核苷酸结构域可操作连接。
本公开书也提供了药物组合物,其包含本文所述的核酸构建物。
本公开书描述了包括将一个或多个蛋白转导结构域连接到核酸构建物的方法。在一个方面,所述一个或多个蛋白转导结构域包含2-5个蛋白转导结构域。
本公开书也提供了产生核酸构建物的方法,该方法包括:基本上纯化蛋白转导结构域;合成寡核苷酸;用电荷中和基团电荷中和所述寡核苷酸的阴离子电荷;和将所述寡核苷酸连接到一个或多个蛋白转导结构域。
还提供了转染细胞的方法,所述方法包括用本公开书的核酸构建物接触细胞。所述接触可以在体内或体外。
本公开书也提供了治疗疾病或病症的方法,所述方法包括向受试者施用本公开书的核酸构建物,其中所述寡核苷酸或多核苷酸包含治疗性或诊断性分子。
附图说明
图1描绘了细胞摄取电荷中和的寡核苷酸和酶法脱保护。
图2描绘了N-SATE磷酸三酯脱保护。
图3显示了亚磷酰胺结合至RNA寡核苷酸中的实施方案。
图4A-B显示了本公开书的核苷亚磷酰胺合成路线。
图5显示了Fmoc-N1-SATE纯化和表征。
图6显示了Fmoc-N1-SATE U亚磷酰胺纯化和表征。
图7显示了Fmoc-N1-SATE C亚磷酰胺纯化和表征。
图8显示了Fmoc-N1-SATE A亚磷酰胺纯化和表征。
图9显示了Fmoc-N2-SATE纯化和表征。
图10显示了Fmoc-N2-SATE U亚磷酰胺纯化和表征。
图11显示了Fmoc-Ala-SATE亚磷酰胺的合成。
图12显示了Fmoc-Ala-SATE纯化和表征。
图13显示了Fmoc-Ala-SATE U亚磷酰胺纯化和表征。
图14显示了包含具有N1-U-SATE核苷酸的SEQ ID NO:21的测试序列以及纯化和表征。
图15显示了包含具有N1-U-SATE核苷酸的SEQ ID NO:22的测试序列以及纯化和表征。
图16显示了包含具有N1-U-SATE核苷酸的SEQ ID NO:23的针对GFP的RNAi和显示在24小时GFP表达的抑制的剂量响应曲线。
图17显示了包含具有N1-U-SATE核苷酸的SEQ ID NO:23的针对GFP的RNAi和显示在48小时GFP表达的抑制的剂量响应曲线。
图18显示了在细胞中的GFP RNAi抑制作用。
图19显示了HPLC纯化AS-10 N1-SATE(SEQ ID NO:24)。
图20显示了3S-9N1-SATE(SEQ ID NO:25)的HPLC纯化结果。
图21显示了在变性凝胶分析中S和AS N1-SATE寡核苷酸的纯化。
图22显示了纯化的S-9N1-SATE(SEQ ID NO:25)和AS-10-N1-SATE(SEQ ID NO:24)形成dsRNB。
图23显示了在存在各种siRNA抑制剂和浓度(SEQ ID NOs:24和25)的条件下的24小时GFP表达测量。
图24显示了在存在各种siRNA抑制剂和浓度(SEQ ID NOs:24和25)的条件下的48小时GFP表达测量。
图25显示了在存在各种siRNA抑制剂和浓度(SEQ ID NOs:24和25)的条件下的48小时GFP表达测量。
图26显示了使用电荷保护的siRNA制剂的表达抑制。
图27显示了合成测试物N2-SATE磷酸三酯寡核苷酸(SEQ IDNO:21)。
图28显示了包含9个电荷中和部分的SEQ ID NO:25的纯化。
图29显示了包含15个电荷中和部分的SEQ ID NO:25的纯化。
图30显示了SEQ ID NO:25的脱保护反应。
图31显示了使用21聚体电荷保护的寡核苷酸(SEQ ID NO:23)针对GFP的RNAi应答。
图32显示了使用本公开书的电荷保护基团的电荷保护的寡核苷酸(SEQ ID NO:23)可溶于盐溶液中。
具体实施方式
如本文和在所附权利要求所用,单数形式“一”、“和”以及“该”包括复数指代物,除非上下文另外清楚地说明。因此,例如,提及“一个PTD”包括几个这种PTD,提及“所述细胞”包括提及本技术领域人员所知的一个或多个细胞,等等。
除非另外说明,本文所用的所有技术和科学术语具有本公开书所属领域技术人员通常理解的相同意思。但是类似于或等同于本文所述那些的方法和材料可以被用于实施所公开的方法和组合物,本文描述了示例性方法,装置和材料。
此外,“或”的使用是指“和/或”,除非另外说明。同样,“包含”、“包括”、“含有”和“具有”是可互换的并且不意在是限制性的。
还要理解,当各个实施方案的描述使用术语“包括”时,本领域技术人员将理解在具体的情况下,实施方案可以备选地使用“基本由...组成”或“由...组成”的表述。
上述和全文所述的出版物仅仅提供它们在本申请申请日之前的公开内容。此处绝不应理解为承认由于在先公开内容的存在本发明人无权先于这些公开内容而获得授权。
递送一些生物活性剂到细胞内的能力是存在问题的,因为存在细胞膜所带来的生物利用度的限制。细胞胞质膜形成屏障,其将细胞内摄取的分子局限在那些具有足够的非极性和尺寸小于大约500道尔顿的分子。以前的提高蛋白细胞内化的努力集中在与受体配体的融合蛋白(Ng等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,99:10706-11,2002)或通过将它们包装进笼形脂质体载体中(Abu-Amer等人,J.Biol.Chem.276:30499-503,2001)。然而,这些技术常导致不良的细胞摄取和细胞内隔离进入胞吞途径。
其它高度带电的具有治疗能力的核酸分子面临相同的递送屏障。例如,RNA适体具有高的结合、隔离和抑制在>10,000道尔顿和高度带电的蛋白的能力,它们自己不具有或具有有限的能力到进入细胞。本公开书的方法和组合物允许细胞内递送RNA适体、siRNA和DNA载体。
由于它们的阴离子电荷和~14,000道尔顿的大尺寸,在哺乳动物包括人中递送siRNAi面临很大的挑战。然而,带正电荷的肽和蛋白已经在寡核苷酸方面获得了进展。例如,将蛋白转导结构域(PTD)连接至核酸已经在寡核苷酸递送方面提供了一些进展。然而,甚至在这些情况下,siRNA和PTD的阴离子和阳离子电荷经常分别彼此中和,减少了被具有阳离子电荷所促进的摄取。
本公开书提供了通过保护/中和与寡核苷酸或多核苷酸相关的电荷来促进和提高细胞摄取核酸分子的方法和组合物。在一些实施方案中,本公开书的组合物将阳离子电荷提供至核酸以促进摄取。在其他的实施方案中,额外的带正电荷的部分可以连接至核酸分子。
本公开书提供了递送可用于选择性地治疗人类疾病和有利于研究的序列特异的寡核苷酸或多核苷酸的组合物和方法。本公开书的组合物和方法更有效地递送寡核苷酸和多核苷酸,包括siRNA、RNA适体和DNA载体至受试者和细胞。本公开书克服使这种RNAi构建物难以递送或不能递送的大小和电荷的限制。通过可逆的中和在核酸(例如,dsRNA)上的阴离子电荷,包含根据本公开书的磷酸三酯和/或硫代磷酸酯保护基团的构建物可以在体外和体内将核酸递送进入细胞。
本公开书提供了包含电荷中和部分(例如,磷酸三酯和/或硫代磷酸酯保护基团)的核酸构建物。该构建物可以进一步包括用于细胞转导和细胞调节的组合物。这种组合物可以包括包含膜转运功能的转导部分结构域并且可以进一步包含足以可逆地中和核酸上的阴离子电荷的核酸结合结构域。
如本文所证明的,向核酸添加一个或多个可去除的(例如,可逆地结合的)电荷中和部分可以有效地促进细胞转导。任何核酸,无论哪种序列组成,均可以通过本公开书的电荷中和部分被修饰。
本公开书提供了寡核苷酸或多核苷酸,在一些实施方案中,其具有一个或多个生物可逆的电荷中和部分,这些电荷中和部分促成了提高细胞膜的穿透和抵抗外切和内切核酸酶降解的化学和生物物理性质。本公开书进一步提供用于合成生物可逆保护的寡核苷酸或多核苷酸的酰胺试剂。而且,这些保护基团在合成的过程中是稳定的。
具有一个或多个生物可逆的电荷中和部分的本公开书的所述寡核苷酸或多核苷酸有时称为前寡核苷酸或前多核苷酸。在本公开书的实施方案中,前寡核苷酸能够增加细胞脂质双分子层穿透能力以及对体内和体外外切和内切核酸酶降解的抗性。在细胞中,电荷中和部分可以通过硫酯酶的作用通过还原条件、酶活性(例如,内源羧酸酯酶)等除去,以产生生物活性的寡核苷酸化合物,所述化合物能够杂交到具体的内源核酸和/或对其具有亲合力。
所述电荷中和部分可以与合成的DNA或RNA的反义寡核苷酸或与靶序列的互补序列的混合分子一起使用,所述靶序列属于基因或RNA信使,其表达被特定设计为阻断或下调。反义寡核苷酸可以针对靶信使RNA序列或者,可选地针对靶DNA序列,并杂交到它们互补的核酸。因此,这些分子有效地阻断或下调基因表达。
电荷中和的寡核苷酸或多核苷酸也可以针对一些双链DNA区(同型嘌呤/同型嘧啶序列或富含嘌呤/嘧啶的序列),并因此形成三螺旋。特定序列的三螺旋的形成可以阻断调节或否则控制基因表达的蛋白因子的相互作用,和/或可以促进被引入到具体的核酸位点的不可逆损害,条件是得到的寡核苷酸具有反应性官能团。
本文提供了核酸构建物,和产生这种构建物的方法,它们可以用于促进寡核苷酸或多核苷酸递送至细胞中。在一个实施方案中,核酸构建物包括一个或多个电荷中和部分以中和与核酸诸如RNA和/或DNA缔合的磷酸二酯阴离子电荷。一旦进入细胞,电荷中和部分可以从构建物中通过细胞内过程除去,所述细胞内过程包括二硫键还原、酯水解或其它酶介导的过程(例如,硫酯酶活性)。在其它实施方案中,包含一个或多个电荷中和部分的核酸构建物进一步包含一个或多个转导结构域诸如蛋白转导结构域(PTD)。例如,PTD可以通过游离的硫醇基直接缀合到包含该核酸构建物的寡核苷酸(例如,RNA或DNA),诸如5’和/或3’端。例如,通过生物学上敏感和可逆的方式,诸如二硫键,PTD可以连接到该构建物。该方法可以应用到任何寡核苷酸或多核苷酸长度和允许将RNA(例如,siRNA、RNA适体)或DNA递送至细胞中。
在另一个实施方案中,核酸构建物可以包括碱性基团,诸如胍盐基团(类似于头基精氨酸,PTD的活性组分),其连接到可逆的保护基团和由此限制对PTD的需要。
因此,本文提供了核苷酸(例如,RNA或DNA),其被合成以包括用于递送核酸序列通过细胞膜的电荷中和部分。构建物也可以包括,例如,一个或多个转导结构域和/或含有碱性基团的保护基团。一旦进入细胞,所述核酸构建物的寡核苷酸/多核苷酸通过水解或其它酶活性(例如,硫酯酶活性),基于还原环境回复到未保护/野生型的寡核苷酸/多核苷酸。
分离的电荷保护的寡核苷酸或多核苷酸构建物是指包含具有电荷中和部分的核苷酸的寡核苷酸或多核苷酸。
所述电荷中和的寡核苷酸可以使用具有下列通式的亚磷酰胺结构来合成:
包含U、T、C或A核苷酸的上述结构可以用于RNA合成仪中寡核苷酸的合成。
当在本文中使用时,阴离子电荷中和部分或基团是指可以减少与其缔合的寡核苷酸或多核苷酸的总净阴离子电荷的分子或化学基团。如本文所述的氨基-S-酰基-硫代烷基部分是阴离子电荷-中和部分。这些电荷中和部分是可逆的。一个或多个阴离子电荷-中和部分或基团可以与寡核苷酸或多核苷酸缔合,其中每个独立地导致所述寡核苷酸或多核苷酸的阴离子电荷的减少和或阳离子电荷的增加。例如,一个或多个电荷中和部分可以与寡核苷酸缔合,且“受保护的寡核苷酸”可以与一个或多个阳离子转导结构域(例加,PTD)缔合,使得相对于没有所述电荷中和部分和/或PTD的所述寡核苷酸,构建物的总净阴离子电荷减少或构建物的总净电荷为中性或构建物的总净电荷是阳离子。
本公开书提供了电荷中和部分,包含这样的电荷中和部分的核苷酸,以及包含这样的电荷中和部分的寡核苷酸或多核苷酸。在一个实施方案中,所述电荷中和部分具有通式:
(在本文中通常称为N-SATE),其中R1可以存在或可以不存在,当R1存在时,R1选自烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、环烷基、取代的环烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂环或取代的杂环;
其中R2可以存在或可以不存在,当R2存在时,R2选自1-7个原子的烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、环烷基、取代的环烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂环或取代的杂环,其中X是所述电荷中和部分与核酸主链连接的位置,并且其中R3是H、H2或保护基团。在一个实施方案中,所述电荷中和部分(N-SATE)包含:
其中R1可以存在或可以不存在,当R1存在时,R1选自烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、环烷基、取代的环烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂环或取代的杂环;
其中R2可以存在或可以不存在,当R2存在时,R2选自1-7个原子的烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、环烷基、取代的环烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂环或取代的杂环,其中X是核酸主链。在一个实施方案中,所述电荷中和部分选自:
还在另一个实施方案中,包含保护基团的电荷中和部分(N-SATE)选自下列:
Alloc-2-氨基- Alloc-3-氨基 -Alloc-3-氨基-
2,2-二甲基- 2,2-二甲基 -2,2-二甲基-
乙醇S-酰基 丙醇S- 丙醇S-
硫代乙基 酰基硫代乙基 酰基硫代丁基
磷酸三酯 磷酸三酯 磷酸三酯
(Alloc N1-SATE) (Alloc-N2-SATE) (Alloc-N2-SATB)
Alloc-2-氨基- 苯基乙酰基-3- 苯基乙酰基-4-
2,2-二甲基- 氨基-2,2-二甲基 氨基-2,2-二甲基-
丁醇S-酰基 丙醇S-酰基 丁醇S-酰基
硫代乙基 硫代乙基 硫代乙基
磷酸三酯 磷酸三酯 磷酸三酯
(Alloc-N3-SATE) (PhAc-N2-SATE) (PhAc-N3-SATE)
乙酰基-丙氨酸-2- 乙酰基-丙氨酸-3- Fmoc-2-氨基-2-
氨基-2,2-二甲基 二甲基-丙醇 甲基-乙醇
S-酰基硫代乙基 S-酰基硫代乙基 S-酰基硫代乙基
磷酸三酯 磷酸三酯 磷酸三酯
(Ac-Ala-N1-SATE) (Ac-Ala-N2-SATE) (Fmoc-N0-SATE)
Fmoc-2-氨基-2,2- Fmoc-3-氨基-2,2-
二甲基-乙醇 二甲基-丙醇
S-酰基硫代乙基 S-酰基硫代乙基
磷酸三酯 磷酸三酯
(Fmoc-N1-SATE) (Fmoc-N2-SATE)
下面对各种化学基团进行简要的描述。如对本领域技术人员显而易见的那样,基于位阻选择基团。此外,最终的结构应当具有总体阳离子电荷或是中性的。而且,选择此类基团以符合前述标准也将对本领域技术人员是显而易见的。
烷基基团包括直链的、支链的和环状烷基基团。烷基基团包括那些具有1到20个碳原子的基团。烷基基团包括具有1到3个碳原子的小的烷基基团。烷基基团包括具有4-10个碳原子的中等长度的烷基基团。烷基基团包括具有多于10个碳原子的长烷基基团,尤其是具有10-20个碳原子的那些。环状烷基基团包括具有一个或多个环的那些。环状烷基基团包括具有3、4、5、6、7、8、9或10元碳环的那些和特别是具有3、4、5、6、或7元环的基团的那些。环状烷基基团中的碳环也可以携带烷基基团。环状烷基基团可以包括二环和三环烷基基团。烷基基团任选地包括取代的烷基基团。取代的烷基基团尤其地包括被芳基基团取代的那些基团,所述芳基也可以被任选地取代。具体的烷基基团包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基、正丁基、s-丁基、叔丁基、环丁基、正戊基、支链的戊基、环戊基、正己基、支链的己基和环己基,所有这些被任选地取代。
烯基基团包括直链的、支链的和环状烯基基团。烯基基团包括具有1、2或更多个双键的那些和其中两个更多个双键是缀合的双键的那些。烯基基团包括具有2到20个碳原子的烯基基团的那些。烯基基团包括具有2到3个碳原子的小烷基基团。烯基基团包括具有4-10个碳原子的中等长度的烯基基团。烯基基团包括具有多于10个碳原子的长烯基基团,特别是那些具有10-20个碳原子的那些。环状烯基基团包括具有一个或多个环的那些。环状烯基基团包括其中双键在环中或在与环连接的烯基基团中的那些。环状烯基基团包括具有3、4、5、6、7、8、9或10元碳环的那些和特别是具有3、4、5、6或7元环的那些基团。在环状烯基基团中的碳环也可以携带烷基基团。环状烯基基团可以包括二环和三环烷基基团。烯基基团任选地被取代。取代的烯基基团尤其包括被烷基或芳基基团取代的那些,所述烷基或芳基基团也可以任选地被取代。具体的烯基基团包括乙烯基、丙-1-烯基、丙-2-烯基、环丙-1-烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、环丁-1-烯基-、环丁-2-烯基、戊-1-烯基、戊-2-烯基、支链的戊烯基、环戊-1-烯基、己-1-烯基、支链的己烯基、环己烯基-,所有这些任选地被取代。
芳基基团包括基团具有一个或多个5或6元芳族的或杂芳族环。芳基基团可以含有一个或多个稠合的芳族环。杂芳族环可以在环中包括一个或多个N、O、或S原子。杂芳族环可以包括具有一个、两个或三个N的那些环,具有一个或两个O的那些环,和具有一个或两个S的那些环。芳基基团任选地被取代。取代的芳基基团尤其包括被烷基或烯基基团取代的那些基团,所述烷基或烯基也可以任选地被取代。具体的芳基基团包括苯基、联苯基、吡啶基和萘基基团,所有这些任选地被取代。
芳基烷基基团是被一个或多个芳基基团取代的烷基基团,其中烷基基团任选地携带另外的取代基,并且芳基基团任选地被取代。具体的烷基芳基基团是苯基取代的烷基基团,例加,苯基甲基基团。
烷基芳基基团是被一个或多个烷基基团取代的芳基基团,其中烷基基团任选地携带另外的取代基并且芳基基团任选地被取代。具体的烷基芳基基团是烷基取代的苯基基团诸如甲基苯基。
环可以是任选取代的环烷基基团、任选取代的环烯基基团或芳族基团。环可以含有3、4、5、6、7或更多个碳。环可以是杂芳族的,其中芳族环的一个、两个或三个碳被N、O或S取代。环可以是杂烷基或杂烯基,其中环中的一个或多个CH2基团被O、N、NH或S取代。
任何烷基、烯基和芳基基团的任选取代包括被以下取代基中的一个或多个取代:卤素、--CN、--COOR、--OR、--COR、--OCOOR、--CON(R)2、--OCON(R)2、--N(R)2、--NO2、--SR、--SO2R、--SO2N(R)2或--SOR基团。烷基基团的任选取代包括被一个或多个烯基基团、芳基基团或两者的取代,其中烯基基团或芳基基团任选地被取代。烯基基团的任选取代包括被一个或多个烷基基团、芳基基团、或两者取代,其中烷基基团或芳基基团任选地被取代。芳基基团的任选取代包括用一个或多个烷基基团、烯基基团或两者取代芳环,其中烷基基团或烯基基团任选地被取代。
烷基、烯基和芳基基团的任选取代基尤其包括以下:
--COOR,其中R是氢或烷基基团或芳基基团,和更具体地,其中R是甲基、乙基、丙基、丁基、或苯基基团,所有这些任选地被取代;
--COR,其中R是氢、或烷基基团或芳基基团和更具体地,其中R是甲基、乙基、丙基、丁基或苯基基团,所有这些基团任选地被取代;
--CON(R)2,其中每个R,与其它R彼此独立地是氢或烷基基团或芳基基团和更具体地,其中R是甲基、乙基、丙基、丁基或苯基基团,所有这些基团任选地被取代;R和R可以形成环,其可以含有一个或多个双键;
--OCON(R)2,其中每个R,与其它R彼此独立地是氢或烷基基团或芳基基团和更具体地,其中R是甲基、乙基、丙基、丁基或苯基基团,所有这些基团任选地被取代;R和R可以形成环,其可以含有一个或多个双键;
--N(R)2,其中每个R,与其它R彼此独立地是氢、或烷基基团、酰基基团或芳基基团和更具体地,其中R是甲基、乙基、丙基、丁基或苯基或乙酰基,所有这些任选地被取代;或R和R可以形成环,该环可以含有一个或多个双键。
--SR、--SO2R或--SOR其中R是烷基基团或芳基基团和更具体地,其中R是甲基、乙基、丙基、丁基、苯基基团,所有这些任选地被取代;对于SR,R可以是氢;
--OCOOR,其中R是烷基基团或芳基基团;
--SO2N(R)2,其中R是氢、烷基基团或芳基基团,且R和R可以形成环;
--OR,其中R=H、烷基、芳基或酰基;例如,R可以是产生酰基的--OCOR*,其中R*是氢或烷基基团或芳基基团和更具体地,其中R*是甲基、乙基、丙基、丁基或苯基基团,所有这些基团任选地被取代。
具体的取代的烷基基团包括卤烷基基团,尤其是三卤甲基基团和特别是三氟甲基基团。具体的取代的芳基基团包括一、二、三、四、和五卤素-取代的苯基;一、二、三、四、五、六、和七卤素-取代的萘基;3-或4-卤素-取代的苯基,3-或4-烷基-取代的苯基,3-或4-烷氧基-取代的苯基,3-或4-RCO-取代的苯基,5-或6-卤素-取代的萘基。更具体地,取代的芳基包括乙酰基苯基,特别是4-乙酰基苯基;氟苯基,特别是3-氟苯基和4-氟苯基;氯苯基,特别是3-氯苯基和4-氯苯基;甲基苯基,特别是4-甲基苯基,和甲氧基苯基,特别是4-甲氧基苯基。
当寡核苷酸或多核苷酸连接到PTD时,带阴离子电荷的寡核苷酸或多核苷酸的电荷中和释放带正电荷的PTD,以与细胞表面有效地相互作用,并且也阻止了缀合物的聚集。例如,暴露的带阳离子电荷的PTD与细胞表面相互作用和诱导大型胞饮作用。所述寡核苷酸被释放进入细胞质。一旦进入细胞,电荷中和基团(例如,氨基-S-酰基硫代烷基)可以被细胞过程裂解除去,所述细胞过程诸如还原酶、氧化酶、还原剂、氧化剂或酯酶,脱保护所述寡核苷酸或多核苷酸,使核酸到回复到其自然构型。
如本文所用,核酸结构域(与寡核苷酸或多核苷酸结构域互换使用)可以是任何寡核苷酸或多核苷酸(例如,核酶,反义分子,siRNA、dsRNA、多核苷酸、寡核苷酸等)。寡核苷酸或多核苷酸通常含有磷酸二酯键,但是在一些情况,包括核酸类似物,所述核酸类似物可以具有替代主链,包括,例如,氨基磷酸酯、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、或O-甲基亚磷酰胺键(见Eckstein,Oligonucletides and Analogues:A Practical Approach,OxfordUniversity Press);和肽核酸主链和键。其它类似物核酸包括具有正电荷主链;非离子主链,和非核糖主链的那些,包括在美国专利s.5,235,033和5,034,506,以及第6和7章,ASC Symposium Series 580,CarbohydrateModifications in Antisense Research,Sanghui&Cook,eds中描述的那些。含有一个或多个碳环状糖的核酸也包括在核酸的一个定义中。可以为了多种原因修饰核糖-磷酸主链,例如为了增加这种分子在生理环境中的稳定性和半衰期。天然存在的核酸和类似物的混合物也包括在术语寡核苷酸和多核苷酸中;可选地,可以制备不同核酸类似物的混合物,以及天然存在的核酸和类似物的混合物。而且,可以使用RNN、RNB、DNA和RNA的杂合体。dsDNA、ssDNA、dsRNA、siRNA包涵在术语寡核苷酸和多核苷酸中。
多核苷酸指由任意数目的共价结合核苷酸单体构成的聚合化合物,包括核酸分子诸如DNA和RNA分子,包括单、双和三链的这种分子,并且特别意在包含通常称为“寡核苷酸”的多核苷酸的基团,寡核苷酸通常被区分为具有相对小数目的(不多于大约30,例如,大约5-10、10-20或20-30)核苷酸碱基。
当在本文中使用,术语“siRNA”是“短干扰RNA”的缩写,有时也称为“小干扰RNA”或“沉默RNA”,并且指一类大约19-25个核苷酸长的双链核糖核酸分子,在真核生物中,其参与RNA干涉(RNAi)途径,导致转录后的、序列特异的基因沉默。
术语“dsRNA”是“双链RNA″的缩写,和当在本文中使用时是指具有两个互补RNA链的核糖核酸分子,并且其与siRNA的不同之处在于,其为至少大约26个核苷酸长度,和更典型地是至少大约50到大约100个核苷酸长度。
如上所述,核酸可以是DNA(基因组DNA和cDNA)、RNA或杂合体,其中核酸可以含有脱氧核糖和核糖核苷酸的组合,和碱基的组合,所述碱基包括尿嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、鸟嘌呤、肌苷、黄嘌呤、次黄嘌呤、异胞嘧啶、异鸟嘌呤,等。当在本文中使用时,术语“核苷”包括核苷酸和核苷以及核苷酸类似物,和修饰的核苷诸如氨基修饰的核苷。另外,“核苷”包括非天然存在的类似结构。因此,例如肽核酸的每个单元(每个含有碱)在本文中称为核苷。
本文所述的核酸构建物的核酸结构域不限制为任何特定序列。可用于诊断剂、治疗剂和研究的任意数目的寡核苷酸或多核苷酸可以被用于本公开书的方法和组合物。寡核苷酸和多核苷酸的不同来源对本领域技术人员是可得的。例如,基因组片段可以是分离的和根据本公开书修饰的分离的多核苷酸可以使用氨基S-酰基硫代烷基电荷中和部分减少总净阴离子电荷或可以使用例如,本领域已知的核酸合成技术作为所述寡核苷酸或多核苷酸延伸的来源。
从M.Caruthers和S.Beaucage以及他人的出版著作中了解了实施亚磷酰胺化学以制备寡核苷酸。美国专利:4,458,066、4,500,707、5,132,418、4,415,732、4,668,777、4,973,679、5,278,302、5,153,319、5,218,103、5,268,464、5,000,307、5,319,079、4,659,774、4,672,110、4,517,338、4,725,677和Re.34,069,每个通过引用并入,描述了寡核苷酸合成的方法。另外,实施亚磷酰胺化学已被以下文献系统地综述:Beaucage和Iyer于Beaucage,S.L.和Iyer,R.P.,Tetrahedron,1992,48,2223-2311以及Beaucage,S.L.和Iyer,R.P.,Tetrahedron,1993,49,6123-6194,或者其中引用的参考文献,所有这些通过引用并入本文。
核酸合成仪可商业获得,且它们的使用通常被本领域普通技术人员理解为有效地产生几乎任何可能期望的合理长度的寡核苷酸。
在实施亚磷酰胺化学中,有用的5’OH糖保护基团是三苯甲基、单甲氧基三苯甲基、二甲氧基三苯甲基和三甲氧基三苯甲基,尤其是二甲氧基三苯甲基(DMTr)。在实施亚磷酰胺化学中有用的亚磷酸激活基团,即,NR2,是二烷基取代的氮基团和氮杂环。一个方法包括使用二异丙基氨基激活基团。
寡核苷酸可以通过Mermade-6固相自动化寡核苷酸合成仪或任何通常可获得的自动化寡核苷酸合成仪合成。例如在M.Caruthers,Oligonucleotides:Antisense Inhibitors of Gene Expression.,pp.7-24,J.S.Cohen,ed.(CRC Press,Inc.Boca Raton,Fla.,1989)或Oligonucleotidesynthesis,a practical approach,Ed.M.J.Gait,IRL Press,1984;″Oligonucleotides and Analogues,A Practical Approach″,Ed.F.Eckstein,IRLPress,1991中描述的三酯、亚磷酰胺或膦酸氢偶联化学,被这些合成仪用于提供期望的寡核苷酸。Beaucage试剂,如在Journal of American ChemicalSociety,1990,112,1253-1255中所述,或元素硫,如在Beaucage等人,Tetrahedron Letters,1981,22,1859-1862中所述,与亚磷酰胺或膦酸氢化学一起使用以提供取代的硫代磷酸酯寡核苷酸。例如,包括本文所述的保护基团的试剂可以用于许多期望进行保护的应用中。这种应用包括,但不限于,固相和液相的、寡核苷酸合成、多核苷酸合成等。使用核苷和核苷酸类似物也被本公开书考虑用于提供携带本文公开的保护基团的寡核苷酸或寡核苷类似物。因此术语核苷、核苷酸、脱氧核苷和脱氧核苷酸通常包括如本文所述的那些类似物。这些类似物是具有与天然存在的核苷或核苷酸共同的一些结构特征的那些分子,使得当掺入寡核苷酸或寡核苷序列时,它们允许与溶液中的天然存在的寡核苷酸序列杂交。典型的,这些类似物通过置换和/或修饰碱基、核糖或磷酸二酯部分衍生于天然存在的核苷和核苷酸。改变可以被定制以稳定或去稳定杂合体形成或提高与所期望的互补核酸序列的杂交特异性。
例如,结构基团被任选地加到核糖或核苷的碱基上以掺入到寡核苷酸中,诸如在核糖2’-O位置的甲基、丙基或烯丙基基团,或取代2’-O基团的氟基团,或在核糖核苷碱基的溴基团。为了和亚磷酰胺化学一起使用,多种酰胺(amidite)试剂可商购获得,包括2’-脱氧酰胺,2′-O-甲基酰胺和2′-O-羟基酰胺。用于这种合成的任何其它方法也可以使用。所述寡核苷酸的实际合成在本领域技术人员的技能范围内。使用类似技术制备其它寡核苷酸诸如硫代磷酸酯、甲基膦酸酯和烷基化衍生物也是公知的。使用类似的技术和可商业获得的修饰的酰胺和可控孔径玻璃(CPG)产品,诸如生物素、Cy3、荧光素、吖啶或补骨脂素修饰的酰胺和/或CPG(可购自GlenResearch,Sterling Va.)以合成荧光标记的、生物素化的或其它缀合的寡核苷酸也是公知的。
但是本文所述的磷酸三酯中和/保护基团可用于中和核酸结构域的阴离子电荷,连接到受保护的核酸结构域的其他带正电荷的部分可以被用于进一步帮助摄取寡核苷酸和多核苷酸。最近对可以有效地穿过真核细胞质膜的几种蛋白的发现已经导致识别新一类蛋白,由该蛋白已经得到了肽转导结构域。
例如,使用氨基S-酰基硫代烷基部分(SATE)对氨基阴离子核酸(例如,RNA分子)的电荷中和促进了摄取。在其中电荷中和的阴离子核酸与PTD连接的实施方案中,带阴离子电荷的核酸的电荷中和释放阳离子PTD穿过膜并且防止由于净阳离子电荷引起的缀合物聚集。PTD的暴露的自由阳离子电荷然后可以有效地与细胞表面相互作用,诱导大型胞饮作用,并且从大胞饮泡(macropinosome)脱出至细胞质中。一旦在细胞内,磷酸三酯和/或硫代磷酸酯保护基团可以通过细胞内过程(诸如二硫键的还原或酯水解)被去除,从而可以在细胞质中从所述构建物被去除。在一个实施方案中,电荷中和基团的去除通过硫酯酶的活性实现。包括例如dsRNA的核酸构建物然后可以被Dicer(一种RNAse III样核糖核酸酶)水解,从而释放沉默靶基因的siRNA。
一些蛋白转导结构域/肽为本领域已知,并且已经证明促进连接到转导结构域的外源分子(例如,货物分子(cargo molecule))的摄取。这种转导结构域促进通过称为大型胞饮作用的过程摄取。大型胞饮作用是所有细胞进行的非选择形式的胞吞作用。
这些蛋白被最佳表征的是果蝇同源异型蛋白触足转录蛋白(Drosophilahomeoprotein antennapedia transcription protein)(AntHD)(Joliot等人,NewBiol.3:1121-34,1991;Joliot等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88:1864-8,1991;Le Roux等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:9120-4,1993)、单纯性疱疹病毒结构蛋白VP22(Elliott和O’Hare,Cell 88:223-33,1997),HIV-1转录激活剂TAT蛋白(Green和Loewenstein,Cell 55:1179-1188,1988;Frankel和Pabo,Cell 55:1189-1193,1988),和更最近的朊病毒蛋白的阳离子N端结构域。这些蛋白不但可以穿过胞质膜,而且其它蛋白的结合,诸如酶β-半乳糖苷酶,足以刺激细胞摄取这些复合物。这种嵌合蛋白以生物活性形式存在于细胞质和核中。该过程的特征显示摄取这些融合多肽是快速的,以受体独立的方式,常发生在几分钟内。而且,这些蛋白的转导看上去不受细胞类型的影响,并且可以有效地转导培养物中的100%细胞,而没有明显的毒性(Nagahara等人,Nat.Med.4:1449-52,1998)。除了全长蛋白,蛋白转导结构域也已经成功地用于诱导细胞内摄取DNA(Abu-Amer,见上)、反义寡核苷酸(Astriab-Fisher等人,Pharm.Res,19:744-54,2002)、小分子(Polyakov等人,Bioconjug.Chem.11:762-71,2000)和甚至是无机的40纳米的铁粒子(Dodd等人,J.Immunol.Methods 256:89-105,2001;Wunderbaldinger等人,Bioconjug.Chem.13:264-8,2002;Lewin等人,Nat.Biotechnol.18:410-4,2000;Josephson等人,Biocobjug.,Chem.10:186-91,1999),表明对该过程没有明显的大小限制。使用转导结构域的有效转导,部分受到在PTD-货物构建物上的总分子电荷的限制。
蛋白转导结构域(PTD)与外源分子(例如,多核苷酸、小分子或蛋白)的融合足以导致它们以浓度依赖的方式转导进入多种不同的细胞。而且,用于蛋白递送的该技术似乎避免了与DNA和基于药物的技术有关的许多问题。
PTD本性是典型的阳离子。这些阳离子蛋白转导结构域进入携带有其所连接的货物的脂筏内体,并且通过破坏内体小泡释放它们的货物进入到细胞质。通常,本公开书的核酸构建物的转导结构域可以是几乎任何合成的或天然存在的氨基酸序列,该氨基酸序列可以转导或帮助转导融合分子。典型地,转导结构域是带正电荷的。例如,转导可以根据本公开书通过使用核酸构建物实现,所述核酸构建物包括磷酸三酯和/或硫代磷酸酯保护基团和蛋白序列诸如HIV TAT蛋白或其片段,所述蛋白序列或其片段在N端或C端连接到包括磷酸三酯和/或硫代磷酸酯保护基团的寡核苷酸或多核苷酸。在一些实施方案中,核酸可以包含磷酸三酯和/或硫代磷酸酯保护基团并且也可以包含双链结合结构域(例如,DRBD)。转导蛋白结构域,例如,可以是触足同源异型结构域或HSV VP22序列,朊病毒蛋白的N端片段或其合适的转导片段,诸如本领域已知的那些片段。
可以连接至电荷中和的核酸分子的PTD的类型和大小将通过包括期望转导程度的几个参数来指导。PTD能够转导至少大约20%、25%、50%、75%、80%、90%、95%、98%、99%或100%的细胞。转导效率,典型地表达为转导细胞的百分比,可以通过几种常规的方法确定。
PTD会显示细胞进出率(有时分别称为K1和K2),其支持细胞内至少皮摩尔量的融合分子。通过标准动力学分析使用可检测标记的融合分子,PTD和任何货物的进出率可以容易地确定,或至少被近似地确定。典型地,进入率与排出率的比率在大约5到大约100直至大约1000的范围。
在一个实施方案中,可用于本公开书的方法和组合物的PTD包含特征为大量α螺旋的肽。已经发现,当PTD显示显著的α螺旋时转导被优化。在另一个实施方案中,PTD包括含有碱性氨基酸残基的序列,所述碱性氨基酸残基基本沿着所述肽的至少一个面排列。本公开书的PTD结构域可以是天然存在的肽或合成的肽。
在本公开书的一个实施方案中,PTD包括包含强α螺旋结构的氨基酸序列,精氨酸(Arg)残基在螺旋柱的下方。还在另一个实施方案中,PTD结构域包括以下通式表示的肽:B1-X1-X2-X3-B2-X4-X5-B3(SEQ ID NO:1)其中B1、B2和B3各自独立地是碱性氨基酸,相同或不同;并且X1、X2、X3、X4和X5各自独立地是α螺旋增强氨基酸,相同或不同。在另一个实施方案中,PTD结构域由以下通式表示:B1-X1-X2-B2-B3-X3-X4-B4(SEQ ID NO:2)其中B1、B2、B3和B4各自独立地是碱性氨基酸,相同或不同;并且X1、X2、X3和X4各自独立地是α螺旋增强氨基酸,相同或不同。
另外PTD结构域包含碱性残基,例加,赖氨酸(Lys)或精氨酸(Arg),并进一步包括至少一个脯氨酸(Pro)残基从而足以将“扭结”引入到结构域。这种结构域的实例包括朊病毒的转导结构域。例如,这种肽包括KKRPKPG(SEQ ID NO:3)。
在一个实施方案中,结构域是以下序列表示的肽:X-X-R-X-(P/X)-(B/X)-B-(P/X)-X-B-(B/X)(SEQ ID NO:4),其中X是任何α螺旋促进残基,诸如丙氨酸;P/X是脯氨酸或如前面所定义的X;B是碱性氨基酸残基,例如,精氨酸(Arg)或赖氨酸(Lys);R是精氨酸(Arg)和B/X是上面所定义的B或X。
在另一个实施方式中,PTD是阳离子的且由7和10个之间的氨基酸构成,具有式K-X1-R-X2-X1(SEQ ID NO:5)其中X1是R或K且X2是任何氨基酸。这种肽的实例包括RKKRRQRRR(SEQ ID NO:6)。
另外的转导结构域包括TAT片段,其包括TAT的至少氨基酸49到56直至大约全长的TAT序列(见,例如,SEQ ID NO:7)。TAT片段可以包括一个或多个氨基酸改变,所述改变足以增加片段的α螺旋。在一些情况,引入的氨基酸改变将包括加入识别的α螺旋增强氨基酸。可选地,氨基酸改变将包括从TAT片段除去阻碍α螺旋形成或稳定性的一个或多个氨基酸。在更具体的实施方案中,TAT片段将包括被α螺旋增强氨基酸的至少一个氨基酸置换。典型的TAT片段或其它PTD将通过标准的肽合成技术制备,尽管在一些情况下可以使用重组DNA方法。
可以用于本公开书的核酸构建物的另外的转导蛋白(PTD)包括TAT片段,其中TAT49-56序列已被修饰,使得序列中的至少两个碱性氨基酸沿着TAT片段的至少一个面基本对齐。示例性的TAT片段包括在TAT的至少氨基酸49-56中的一个特定氨基酸置换,该置换与49-56序列的碱性氨基酸残基沿着该片段和典型的TAT 49-56序列的至少一个面对齐。
另外的转导蛋白包括TAT片段,其中TAT 49-56序列包括被α螺旋增强氨基酸的至少一个置换。在一个实施方案中,选择所述置换使得在TAT片段中的至少两个碱性氨基酸残基沿着TAT片段的至少一个面基本对齐。在更具体的实施方案中,选择所述置换使得在TAT 49-56序列中的至少两个碱性氨基酸残基沿着该序列的至少一个面基本对齐。
PTD的其他实例包括AntHD、TAT、VP22、阳离子朊病毒蛋白结构域、poly-Arg、AGRKKRRQRRR(SEQ ID NO:14)、YARKARRQARR(SEQID NO:15)、YARAAARQARA(SEQ ID NO:16)、YARAARRAARR(SEQ IDNO:17)、YARAARRAARA(SEQ ID NO:18)、YARRRRRRRRR(SEQ IDNO:19)、YAAARRRRRRR(SEQ ID NO:20)及其功能片段和变体。本公开书在一个实施方案中提供了将电荷中和的核酸与PTD诸如TAT和poly-Arg的使用结合的方法和组合物。电荷中和是指核酸(例如,寡核苷酸或多核苷酸)的总阴离子电荷在构建物中被减少、中和或比不存在磷酸三酯和/或硫代磷酸酯保护基团,或磷酸三酯和/或硫代磷酸酯保护基团和能够中和核酸(即,“货物”)结构域上的阴离子电荷的结合结构域和/或蛋白转导结构域的相同核酸具有更多的阳离子。
还包括嵌合的PTD结构域。这种嵌合的转导蛋白包括至少两个不同的转导蛋白的部分。例如,嵌合的转导蛋白可以通过融合两个不同的TAT片段形成,例加,一个来自HIV-1和另一个来自HIV-2或一个来自朊病毒蛋白,另一个来自HIV。
PTD可以与任意数目的包含寡核苷酸或多核苷酸的其它分子连接或融合。可选地,核酸构建物或PTD可以结合到包含核酸结合结构域、靶向作用部分等的其它分子实体。例如,两个以上的PTD(例如,1-5,2-4,典型的3个)可以被连续连接或被一个或多个其它结构域(例如,核酸结构域或肽接头)分开。通过减少阴离子电荷使得PTD结构域的阳离子电荷足以转导/跨越细胞膜,核酸结合结构域可以促进摄取包含核酸(包括包含保护基团的寡核苷酸或多核苷酸)的融合构建物。可以理解的是,PTD可以融合到包含阴离子电荷中和基团的寡核苷酸或多核苷酸,并可以进一步连接到核酸结合结构域。示例性的RNA结合蛋白(例如,DRBD)包括组蛋白、RDE-4蛋白或鱼精蛋白。另外的dsRNA结合蛋白(和它们括号内的登录号)包括:PKR(AAA36409、AAA61926、Q03963)、TRBP(P97473、AAA36765)、PACT(AAC25672、AAA49947、NP609646)、Staufen(AAD17531、AAF98119、AAD17529、P25159)、NFAR1(AF167569)、NFAR2(AF167570、AAF31446、AAC71052、AAA19960、AAA19961、AAG22859)、SPNR(AAK20832、AAF59924、A57284)、RHA(CAA71668、AAC05725、AAF57297)、NREBP(AAK07692、AAF23120、AAF54409、T33856)、kanadaptin(AAK29177、AAB88191、AAF55582、NP499172、NP198700、BAB19354)、HYL1(NP563850)、偏下性叶(hyponastic leaves)(CAC05659、BAB00641)、ADAR1(AAB97118、P55266、AAK16102、AAB51687、AF051275)、ADAR2P78563、P51400、AAK17102、AAF63702)、ADAR3(AAF78094、AAB41862、AAF76894)、TENR(XP059592、CAA59168)、RNaseIII(AAF80558、AAF59169、Z81070Q02555/S55784、PO5797)、和Dicer(BAA78691、AF408401、AAF56056、S44849、AAF03534、Q9884)、RDE-4(AY071926)、FLJ20399(NP060273、BAB26260)、CG1434(AAF48360、EAA12065、CAA21662)、CG13139(XP059208、XP143416、XP110450、AAF52926、EEA14824)、DGCRK6(BAB83032、XP110167)CG1800(AAF57175、EAA08039)、FLJ20036(AH22270、XP134159)、MRP-L45(BAB14234、XP129893)、CG2109(AAF52025)、CG12493(NP647927)、CG10630(AAF50777)、CG17686(AAD50502)、T22A3.5(CAB03384)和登录号EAA14308。
可以用于本公开书的融合多肽和方法中的肽接头典型地包含达大约20或30个氨基酸,通常达到大约10或15个氨基酸,和更常见的大约1到5个氨基酸。接头序列是通常柔性的,使得不将融合分子保持为单一刚性构象。接头序列可以被用来,例如,将PTD结构域与核酸结合结构域和/或核酸结构域隔开。例如,肽接头序列可以被定位以提供分子柔性。选择接头部分的长度以优化包含PTD结构域融合构建物的多肽的生物学活性并可以经验性地确定而无需过多的实验。接头部分应该足够长和足够柔性,以允许PTD与核酸自由地相互作用,或反之亦然。接头部分的实例是--Gly--Gly--GGGGS(SEQ ID NO:8)、(GGGGS)N(SEQ ID NO:8,重复的)、GKSSGSGSESKS(SEQ ID NO:9)、GSTSGSGKSSEGKG(SEQ ID NO:10)、GSTSGSGKSSEGSGSTKG(SEQ ID NO:11)、GSTSGSGKPGSGEGSTKG(SEQ ID NO:12)或EGKSSGSGSESKEF(SEQ ID NO:13)。连接部分例如在Huston等人,Proc.Nat’l Acad.Sci 85:5879,1988;Whitlow等人,ProteinEngineering 6:989,1993;和Newton等人,Biochemistry 35:545,1996中被叙述。其它合适的肽接头是描述在美国专利号4,751,180和4,935,233中的那些,这些通过引用并入。
本公开书的方法、组合物和融合多肽提供了细胞在体外和在体内对核酸分子的增强摄取和释放。
术语“治疗”以通用意义使用,包括治疗剂、预防剂和替代剂。治疗性分子的实例包括,但不限于,细胞周期调控剂;抑制周期蛋白的药剂,诸如周期蛋白G1和周期蛋白D1基因的反义多核苷酸;可以被裂解以提供针对具体的生长因子的siRNA分子的dsRNA,所述生长因子诸如,例如,表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、促红细胞生成素、G-CSF、GM-CSF、TGF-α、TGF-β和成纤维细胞生长因子;细胞因子,包括,但不限于,白细胞介素1-13和肿瘤坏死因子;抗凝剂,抗血小板剂;TNF受体结构域等。
使用这种方法和组合物,可以治疗不同疾病和病症。例如,在递送抗肿瘤siRNA后,肿瘤细胞的生长可以被抑制、阻止或破坏。
因此,可以理解的是本公开书不局限于任何特定的转导结构域或寡核苷酸/多核苷酸。任何带阴离子电荷的核酸(例如,dsRNA、siRNA等)可以使用本公开书的方法和组合物递送。
在本公开书使用的多肽(例如,关于融合多肽或全长融合多肽的特定结构域)可以包含氨基酸的L-光学异构体或D-光学异构体或两者的组合。可以在本公开书使用的多肽包括修饰的序列诸如糖蛋白、逆-反(retro-inverso)多肽、D-氨基酸修饰的多肽,等。多肽包括天然存在的蛋白,以及通过重组或合成方法合成的那些多肽。“片段”是多肽的一部分。术语“片段”指多肽的部分,其显示至少一个有用的表位或功能结构域。术语“功能片段”指保留多肽活性的多肽片段。例如,PTD的功能片段包括保留了转导活性的片段。
在一些实施方式中,使用逆-反肽。“逆-反”指氨基-羧基倒位以及在一个或多个氨基酸中的对映异构体变化(即,左旋(L)到右旋(D))。本公开书的多肽包括,例如,氨基酸序列的氨基-羧基倒位,含有一个或多个D-氨基酸的氨基-羧基倒位,和含有一个或多个D-氨基酸的非倒位序列。稳定的和保留生物学活性的逆-反模拟肽可以根据Brugidou等人(Biochem.Biophys.Res.Comm.214(2):685-693,1995)和Chorev等人(TrendsBiotechnol.13(10):438-445,1995)所述设计。
本公开书还提供了编码本公开书的融合蛋白构建物的多核苷酸。这种多核苷酸包含编码一个或多个PTD结构域,和/或核酸结合结构域(例如,DRBD)的序列。多核苷酸也可以编码接头结构域,其将一个或多个PTD和/或核酸结合结构域分开。在一个方面产生包含两个以上的PTD结构域的融合多肽,并且接着连接到电荷减少的/受保护的包含N-SATE的寡核苷酸或多核苷酸。
多核苷酸构建物可以结合(即,克隆)进入合适的载体。为了表达,编码本公开书的融合多肽的多核苷酸可以插入至重组表达载体中。术语“重组表达载体”指质粒、病毒,或本领域已知的其它载体,所述载体已通过插入或结合编码本公开书的融合多肽的多核苷酸而进行操作。表达载体典型地含有复制起始点、启动子,以及允许表型选择转化细胞的特定基因。适合于这种用途的载体包括,但不限于,用于在细菌中表达的T7基表达载体(Rosenberg等人,Gene,56:125,1987),用于在哺乳动物细胞中表达的pMSXND表达载体(Lee和Nathans,J.Biol.Chem.,263:3521,1988),用于在昆虫细胞中表达的杆状病毒衍生载体,用于在植物中表达的花椰菜花叶病病毒、CaMV和烟草花叶病病毒TMV。
根据使用的载体,任意数目的合适的转录和翻译元件(调节序列),包括组成性和诱导性启动子、转录增强子元件、转录终止子等可以用于表达载体中(见,例如,Bitter等人,Methods in Enzymology,153:516-544,1987)。这些元件为本领域普通技术人员所公知。
术语“可操作地连接”和“可操作地结合”互换使用,在本文中广义指两个在其它方面不同的结构域的化学或物理偶联,每个结构域具有独立的生物学功能。例如,可操作地连接指在调控序列和受调控序列调节的多核苷酸之间的功能连接。在另一方面,可操作地连接指核酸结构域和转导结构域的结合,使得每个结构域在合适的条件下保留其独立的生物学活性。可操作地连接进一步指融合多肽的编码结构域之间的连接,使得每个结构域在框内连接,以产生期望的多肽序列。
在酵母中,可以使用含有组成性或诱导性启动子的一些载体(见,例如,Current Protocols in Molecular Biology,Vol.2,Ed.Ausubel等人,GreenePublish.Assoc.& Wiley Interscience,Ch.13,1988;Grant等人,“Expressionand Secretion Vectors for Yeast,”in Methods in Enzymology,Eds.Wu &Grossman,Acad.Press,N.Y.,Vol.153,pp.516-544,1987;Glover,DNACloning,Vol.II,IRL Press,Wash.,D.C.,Ch.3,1986;“Bitter,HeterologousGene Expression in Yeast,”Methods in Enzymology,Eds.Berger & Kimmel,Acad.Press,N.Y.,Vol.152,pp.673-684,1987;和The Molecular Biology ofthe Yeast Saccharomyces,Eds.Strathern等人,Cold Spring Harbor Press,Vols.I and II,1982)。可以使用组成性酵母启动子,如ADH或LEU2,或诱导性启动子,如GAL(“Cloning in Yeast,”Ch.3,R.Rothstein In:DNA CloningVol.11,A Practical Approach,Ed.DM Glover,IRL Press,Wash.,D.C.,1986)。可选地,可以使用促进外源DNA序列整合进入酵母染色体中的载体。
表达载体可以用于转化宿主细胞。“转化”是指将细胞外源的多核苷酸整合进入细胞后在细胞中诱导的永久性遗传变化。当细胞是哺乳动物细胞时,永久性遗传变化通常是通过引入多核苷酸进入细胞的基因组实现的。“转化细胞”或”重组宿主细胞”意思是通过分子生物学技术已引入编码本公开书的融合多肽的多核苷酸的细胞(或者其祖先)。转化宿主细胞可以通过本技术领域人员所知的常规技术进行。当宿主是原核生物,诸如大肠杆菌时,这些能够摄取多核苷酸的感受态细胞可以如下制备:指数生长期后收获细胞,然后通过本领域已知的程序通过CaCl2方法处理。可选地,可以使用MgCl2或RbCl。转化也可以在形成宿主细胞的原生质体后或通过电穿孔进行。
本公开书的融合多肽可以通过在原核生物中表达编码融合多肽的多核苷酸来产生。这些包括,但不限于,微生物,诸如用编码本公开书的融合多肽的重组噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA表达载体转化的细菌。构建物可以在大肠杆菌中大规模表达。当序列包括用于通过镍-螯合层析一步纯化的标签时,简化了从细菌的纯化。因此,编码融合多肽的多核苷酸也可以包含标签以简化融合多肽的分离。例如,例如,六个组氨酸残基聚组氨酸标签可以结合在融合多肽的氨基端。聚组氨酸标签允许通过镍-螯合层析方便地一步分离蛋白。本公开书的融合多肽也可以被改造为含有裂解位点以帮助蛋白回收。裂解位点可以是上述的接头部分的一部分。编码期望肽接头的DNA序列可以插入其中,并且在与其后接着核酸结构域的编码PTD的多核苷酸或其片段相同的读框中,PTD也可以使用任何合适的常规技术连接到期望核酸(例如,dsRNA、DNA、siRNA,等)。例如,编码接头的化学合成的寡核苷酸可以连接在两个编码的多核苷酸之间。在具体的实施方案中,本公开书的多核苷酸编码包含通过接头隔开的两个至四个单独的结构域(例如,一个或多个PTD结构域和一个或多个核酸结构域)的融合多肽。在一些实施方案中,一旦纯化,包含多个PTD的融合多肽就与包含阴离子电荷中和基团或其它阴离子电荷减少基团的寡核苷酸结合或连接。
当宿主细胞是真核细胞时,可以使用转染DNA的方法如磷酸钙共沉淀,常规的机械程序诸如显微注射、电穿孔,插入包埋在脂质体中的质粒,或病毒载体。真核细胞也可以用编码本公开书的PTD-融合多肽的多核苷酸,和编码可筛选表型的第二多核苷酸分子诸如单纯性疱疹胸苷激酶基因共转染。另一个方法是使用真核病毒载体,诸如猿猴病毒40(SV40)或牛乳头瘤病毒,短暂地感染或转化真核细胞和表达融合多肽(见,例如,Eukaryotic Viral Vectors,Cold Spring Harbor Laboratory,Gluzman ed.,1982)。
真核系统和典型的哺乳动物表达系统,允许对表达的哺乳动物蛋白发生适宜的翻译后修饰。具有用于初级转录物的适宜加工、糖基化、磷酸化,和有利地分泌融合产物的细胞机器的真核细胞可以用作宿主细胞以表达本公开书的PTD-融合多肽。这种宿主细胞系可以包括,但不限于,CHO、VERO、BHK、HeLa、COS、MDCK、Jurkat、HEK-293和WI38。
长期大量生产重组蛋白,需要稳定表达。不使用含有病毒复制起始点的表达载体,宿主细胞可以用编码本公开书的融合多肽的cDNA转化,所述融合多肽通过合适的表达调控元件(例如,启动子、增强子、序列、转录终止子、多聚腺苷酸化位点等)和可筛选标志物调控。在重组质粒中的可筛选标志物赋予选择性(例如,通过细胞毒素抗性)和使细胞稳定地整合质粒进入它们的染色体中和生长形成灶,后者依次地可被克隆和扩充进入细胞系。例如,引入外源DNA后,被改造的细胞可以被允许在富集培养基中生长1-2天,接着转到选择培养基。可以使用许多选择系统,包括,但不限于,单纯性疱疹病毒胸苷激酶(Wigler等人,Cell,11:223,1977),次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(Szybalska & Szybalski,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,48:2026,1962),和腺嘌呤磷酸核糖基转移酶(Lowy等人,Cell,22:817,1980)基因可以被分别用于tk-、hgprt-或aprt-细胞。此外,抗代谢物抗性可以用作以下的选择基础:dhfr,其赋予氨甲喋呤抗性(Wigler等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77:3567,1980;O′Hare等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,8:1527,1981);gpt,其赋予霉酚酸抗性(Mulligan & Berg,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,78:2072,1981);neo,其赋予氨基糖苷G-418抗性(Colberre-Garapin等人,J.Mol.Biol.,150:1,1981);和hygro,其赋予潮霉素基因抗性(Santerre等人,Gene,30:147,1984)。已经叙述了另外的可筛选基因,即trpB,其允许细胞使用吲哚取代色氨酸;hisD,其允许细胞使用组氨醇(histinol)取代组氨酸(Hartman & Mulligan,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,85:8047,1988);和ODC(乌氨酸脱羧酶),其赋予对鸟氨酸脱羧酶抑制剂,2-(二氟甲基)--DL-鸟氨酸,DFMO的抗性(McConlogue L.,In:CurrentCommunications in Molecular Biology,Cold Spring Harbor Laboratory,ed.,1987)。
用于分离和纯化微生物或真核表达的本公开书的PTD-融合多肽的技术可以通过任何常规手段,诸如,例如,制备性色谱分离和免疫分离,诸如涉及使用单克隆或多克隆抗体或抗原的那些。
本公开书的融合多肽可用于递送带阴离子电荷的核酸分子(例如,dsRNA、siRNA、DNA、反义、核酶等),以用于治疗和/或诊断一些疾病和病症。例如,融合多肽可以用于治疗细胞增生性病症,其中受保护的寡-或多核苷酸被可逆地修饰,使得其单独或结合PTD跨细胞膜到诱导细胞增殖的靶基因。PTD结构域增加核酸构建物的总净阳离子电荷或减少核酸构建物的总净阴离子电荷,促进细胞的摄取。因此,构建物可用于治疗具有细胞增生性病症的细胞。同样,本公开书的构建物可以用于治疗炎性疾病和病症、感染、血管疾病和病症等。
在一个实施方案中,本公开书的构建物可以可选地包含,或除了以上还可以包含,PTD、靶向结构域。靶向结构域可以是受体、受体配体或抗体,其用于将构建物导入表达关联结合结构域的特定细胞类型。
因此,本公开书提供了包含减少阴离子电荷的N-SATE部分的寡核苷酸(电荷中和的寡核苷酸)。本公开书还提供了与PTD连接的电荷中和的寡核苷酸,所述PTD包括包含融合蛋白的PTD。本公开书还提供了包含RNA结合结构域蛋白的电荷中和的寡核苷酸。在一些实施方案中,PTD和RNA结合结构域蛋白的组合与电荷中和的寡核苷酸连接或构建。通常这样的电荷中和的寡核苷酸和构建物具有(i)减少的阴离子电荷,(ii)中性电荷,或(iii)阳离子电荷。
本公开书的多核苷酸的递送可以通过使用本领域技术人员已知的多种方法使细胞与多核苷酸接触来实现。因为包含单独N-SATE或N-SATE和PTD的多核苷酸或寡核苷酸具有总体中性或阳离子电荷,所述多核苷酸能够跨越细胞膜。在一些实施方案中,所述寡核苷酸与各种载体、分散剂等一起配制,如本文其他地方更详细描述的那样。
本公开书的构建物典型地可以与药学上可接受的载体一起制备,尽管融合多肽可以作为药物组合物单独施用。
根据本公开书的药物组合物可以包括本公开书的电荷保护的寡核苷酸或构建物,用载体、赋形剂、和添加剂或辅剂制备成适于施用于受试者的形式。经常使用的载体或辅剂包括碳酸镁、二氧化钛、乳糖、甘露醇和其它糖类、滑石、乳蛋白、明胶、淀粉、维生素、纤维素及其衍生物、动物和植物油、聚乙二醇和溶剂诸如无菌水、醇、甘油和多元醇。静脉内载体包括流体和营养补充剂。防腐剂包括抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、和惰性气体。其它药学上可接受的载体包括水溶液、无毒的赋形剂包括盐、防腐剂、缓冲液等,如在以下中所述,例如,Remington′s PharmaceuticalSciences,15th ed.,Easton:Mack Publishing Co.,1405-1412,1461-1487(1975),和The National Formulary XIV.,14th ed.,Washington:AmericanPharmaceutical Association(1975),其内容通过引用结合入本文。药物组合物的pH和不同组分的准确浓度根据本领域常规技术调整。见Goodman和Gilman′s,The Pharmacological Basis for Therapeutics(第7版)。
根据本公开书的药物组合物可以局部或全身施用。“治疗有效剂量”是指预防、治愈或至少部分抑制疾病或病症的症状(例如,到抑制细胞增殖的程度)所需要的根据本公开书的融合多肽的量。该使用的有效量,当然,取决于疾病的严重性和受试者的体重和一般状况。典型地,在体外使用的剂量可以对用于原位施用药物组合物的量提供有用的指导,动物模型可以使用以确定治疗特定病症的有效的剂量。在以下文献中叙述了不同考虑因素,例如,Langer,Science,249:1527,(1990);Gilman等人(编辑)(1990),它们通过引用并入。
当在本文中使用时,“施用治疗有效量”意在包括对受试者给予或施用本公开书的药物组合物的方法,其允许钙组合物发挥其意欲的治疗功能。治疗有效量将根据许多因素而变化,所述因素诸如受试者中的感染程度,个体的年龄、性别和体重。剂量方案可以被调节以提供最优的治疗反应。例如,几个分次剂量可以每日施用或剂量可以按照治疗情况的迫切性按比例地减少。
药物组合物可以以方便的方式施用,诸如通过注射(例如,皮下、静脉内等)、口服、吸入、透皮给药或直肠给药。根据给药途径,药物组合物可以用材料包衣以保护药物组合物免受酶、酸和可以使药物组合物失活的其他自然条件的作用。药物组合物也可以经胃肠外或腹膜内施用。分散液也可以在甘油、液体聚乙二醇,和它们的混合物中,以及在油中制备。在通常的贮存和使用条件下,这些制剂可以含有防腐剂以阻止微生物的生长。
适于注射使用的药物组合物包括无菌水溶液(在为水溶性的时候)或分散液和用于临时制备无菌注射溶液或分散液的无菌粉末。组合物典型地是无菌的和是达到容易注射程度的流体。典型地,组合物在制造和贮存条件下是稳定的,并且可以被保存以防止微生物的污染作用,诸如细菌和真菌。载体能够是溶剂或分散介质,其含有例如,水、乙醇、多元醇(例如,甘油、丙二醇和液体聚乙二醇,等),它们的合适混合物,和植物油。适宜的流动性可以通过下述方法来保持,例如,通过使用包衣,诸如卵磷脂,在分散液的情况下通过保持所需的颗粒大小,和通过使用表面活性剂。阻止微生物的作用可以通过不同的抗细菌剂和抗真菌剂,例如,对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、酚、抗坏血酸、硫柳汞等实现。在许多情况制备,等渗剂例如,糖、多元醇诸如甘露醇、山梨醇,或氯化钠用于组合物中。注射组合物的延长吸收可以通过在组合物中包括延迟吸收剂,例如,单硬脂酸铝和明胶来获得。
无菌注射溶液可以根据需要,通过在合适的溶剂中加入所需要量的药物组合物和以上列举的成分之一或组合,然后通过过滤灭菌来制备。通常,分散液通过将药物组合物加入到含有碱性分散介质和以上列举的那些中所需要的其它成分的无菌载体中来制备。
药物组合物可以例如,和惰性稀释剂或可吸收的食用载体一起口服施用。药物组合物和其它成分也可以封装在硬或软壳明胶胶囊中,压缩成片剂,或直接加入至受试者的膳食中。对于口服治疗施用,药物组合物可以和赋形剂结合并以可摄取的片剂、口含片剂、锭剂、胶囊、酏剂、混悬剂、糖浆剂、糯米纸囊剂等形式施用。这种组合物和制剂应该含有至少1%重量的活性化合物。当然,组合物和制剂的百分比可以变化并且可以适宜地在大约5%到大约80%的单位重量之间。
片剂、锭剂、丸剂、胶囊等也可以含有以下:粘合剂,诸如黄蓍胶、阿拉伯树胶、玉米淀粉或明胶;赋形剂诸如磷酸二钙;崩解剂,诸如玉米淀粉、马铃薯淀粉、藻酸等;润滑剂,诸如硬脂酸镁;和增甜剂,诸如蔗糖、乳糖或糖精,或矫味剂诸如薄荷油、冬青油或樱桃香精。当剂量单位形式是胶囊时,除了以上类型的材料外,其可以含有,液体载体。多种其它材料可以作为包衣存在或否则改变剂量单位的物理形式。例如,片剂、丸剂或胶囊可以用虫胶、糖或两者包衣。糖浆剂或酏剂可以含有药剂,作为增甜剂的蔗糖,作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和丙酯,染料,和矫味剂诸如樱桃或橙子香料。当然,用于制备任何剂量单位形式的任何材料应该是药学纯的和在使用的量下基本无毒的。另外,药物组合物可以结合至持续释放制剂和剂型中。
因此,“药学上可接受的载体”意在包括溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。用于药学活性物质的这种介质和药剂的使用是本领域公知的。除非任何常规的介质或药剂与药物组合物是不相容的,否则会考虑它们在治疗性组合物和方法中的使用。补充性活性化合物也可以加入至所述组合物中。
尤其有益的是,以剂量单位形式配制胃肠外组合物,以易于施用和剂量均一。“剂量单位形式”当在本文中使用时,指适合作为用于待治疗的受试者的单位剂量的物理离散单位;每个单位含有预定量的药物组合物,其被计算为与所需要的药物载体一起产生期望的治疗效果。本公开书的剂量单位形式的规格与药物组合物的特性和所要获得的特定治疗效果有关。
主要的药物组合物与合适的药学上可接受的载体以可接受的剂量单位复合,用于以有效量方便和有效地施用。在含有补充性活性成分的组合物的情况下,通过参照所述成分的常规剂量和施用方式来确定剂量。
实施例
在附图中给出了合成和用途的多个实施例。另外,本公开书提供了下列用于中和与阴离子寡核苷酸结合的电荷的亚磷酰胺和结构。
Alloc N1SATE
Alloc N1SATE-U
Alloc N1SATE-CPac
Alloc N1SATE-APac
Alloc N2SATE
Alloc N2SATE-U
Alloc N2SATE-CPac
Alloc N2SATE-APac
Alloc N3SATE
Alloc N3SATE-U
Alloc N3SATE-CPac
Alloc N3SATE-APac
Alloc N2SATB
Alloc N2SATB-U
Alloc N2SATB-CPac
Alloc N2SATB-APac
苯基乙酰基N2SATE
苯基乙酰基N2SATE-U
苯基乙酰基N2SATE-CPac
苯基乙酰基N2SATE-APac
苯基乙酰基N2SATB
苯基乙酰基N2SATB-U
Fmoc N0SATE
Fmoc N0SATE-U
Fmoc N1SATE
Fmoc N1SATE-U
Fmoc N1SATE-CAc
Fmoc N1SATE-APac
Fmoc N2SATE
Fmoc N2SATE-U
Fmoc N2SATE-CAc
Fmoc N2SATE-APac
已经描述了本公开书的许多实施方案。然而,要理解的是,在不脱离本公开书的精神和范围的前提下,可以作出各种改动。因此其他实施方案包括在下列权利要求的范围内。
Claims (19)
1.一种核苷酸化合物,其包含与所述核苷酸的磷酸基缀合的氨基烷基S-酰基硫代烷基(N-SATE)部分。
4.权利要求1或2所述的核苷酸化合物,其中所述N-SATE部分与核酸碱基A、G、C、T或U任一个的磷酸基缀合。
6.权利要求5所述的核苷酸,其中所述N-SATE部分选自:
7.一种寡核苷酸或多核苷酸,其包含具有权利要求1所述的N-SATE部分的核苷酸。
8.权利要求7所述的寡核苷酸或多核苷酸,其中与缺少N-SATE部分的相同所述寡核苷酸或多核苷酸相比所述寡核苷酸或多核苷酸包含中性或更多的阳离子电荷。
9.包含氨基烷基S-酰基硫代烷基(N-SATE)部分的寡核苷酸或多核苷酸,所述氨基烷基S-酰基硫代烷基(N-SATE)部分减少所述寡核苷酸或多核苷酸主链的净阴离子电荷。
10.权利要求9所述的寡核苷酸或多核苷酸,其中所述寡核苷酸或多核苷酸包含siRNA分子。
11.权利要求9或10所述的寡核苷酸或多核苷酸,其中所述寡核苷酸包含多个修饰的具有N-SATE部分的核苷酸。
12.权利要求9或10所述的寡核苷酸或多核苷酸,其中所述寡核苷酸或多核苷酸包含多个邻近的具有N-SATE部分的核苷酸。
13.权利要求9或10所述的寡核苷酸或多核苷酸,其中所述寡核苷酸或多核苷酸包含多个彼此间隔1个或多个核苷酸碱基的具有N-SATE部分的核苷酸。
14.权利要求9所述的寡核苷酸或多核苷酸,其还包含至少一个与所述寡核苷酸或多核苷酸结构域缀合的或可操作连接的蛋白质转导结构域(PTD),所述蛋白质转导结构域包含膜转运功能。
15.权利要求14所述的寡核苷酸,其包含多个蛋白质转导结构域。
16.一种药物组合物,其包含权利要求9所述的寡核苷酸或多核苷酸。
17.一种在体外或体内将寡核苷酸或多核苷酸递送至细胞的方法,所述方法包括使所述细胞与权利要求16所述的药物组合物或权利要求9所述的寡核苷酸或多核苷酸接触。
19.权利要求18所述的方法,其中所述合成仪是RNA合成仪。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US18283209P | 2009-06-01 | 2009-06-01 | |
US61/182,832 | 2009-06-01 | ||
PCT/US2010/036905 WO2010141471A2 (en) | 2009-06-01 | 2010-06-01 | Nucleic acid delivery compositions and methods of use thereof |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN102459302A true CN102459302A (zh) | 2012-05-16 |
Family
ID=43298444
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2010800342403A Pending CN102459302A (zh) | 2009-06-01 | 2010-06-01 | 核酸递送组合物及其使用方法 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20120142763A1 (zh) |
EP (1) | EP2438079A4 (zh) |
KR (1) | KR20120052909A (zh) |
CN (1) | CN102459302A (zh) |
AU (1) | AU2010256836A1 (zh) |
CA (1) | CA2801178A1 (zh) |
WO (1) | WO2010141471A2 (zh) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104781271A (zh) * | 2012-08-20 | 2015-07-15 | 加利福尼亚大学董事会 | 具有生物可逆的基团的多核苷酸 |
CN106061981A (zh) * | 2013-11-06 | 2016-10-26 | 索尔斯蒂斯生物有限公司 | 具有二硫化物基团的多核苷酸构建体 |
US11597744B2 (en) | 2017-06-30 | 2023-03-07 | Sirius Therapeutics, Inc. | Chiral phosphoramidite auxiliaries and methods of their use |
US11981703B2 (en) | 2016-08-17 | 2024-05-14 | Sirius Therapeutics, Inc. | Polynucleotide constructs |
Families Citing this family (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009532017A (ja) | 2006-02-10 | 2009-09-10 | ザ レジェンツ オブ ザ ユニヴァースティ オブ カリフォルニア | PTD/CPPSへのdsRNA結合ドメイン融合体によるsiRNAの導入可能な送達 |
US20090093425A1 (en) * | 2006-07-12 | 2009-04-09 | The Regents Of The University Of California | Transducible delivery of nucleic acids by reversible phosphotriester charge neutralization protecting groups |
KR101881596B1 (ko) | 2008-12-02 | 2018-07-24 | 웨이브 라이프 사이언시스 재팬 인코포레이티드 | 인 원자 변형된 핵산의 합성 방법 |
MX342945B (es) | 2009-07-06 | 2016-10-18 | Ontorii Inc * | Profármacos de ácido nucleico novedosos y métodos de uso de los mismos. |
WO2012039448A1 (ja) | 2010-09-24 | 2012-03-29 | 株式会社キラルジェン | 不斉補助基 |
DK2734208T3 (en) | 2011-07-19 | 2017-06-19 | Wave Life Sciences Ltd | PROCEDURES FOR SYNTHESIS OF FUNCTIONALIZED NUCLEIC ACIDS |
DK2872485T3 (da) | 2012-07-13 | 2021-03-08 | Wave Life Sciences Ltd | Asymmetrisk hjælpegruppe |
CA2879066C (en) | 2012-07-13 | 2019-08-13 | Shin Nippon Biomedical Laboratories, Ltd. | Chiral nucleic acid adjuvant |
US9982257B2 (en) | 2012-07-13 | 2018-05-29 | Wave Life Sciences Ltd. | Chiral control |
WO2015108046A1 (ja) | 2014-01-15 | 2015-07-23 | 株式会社新日本科学 | 抗アレルギー作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗アレルギー剤 |
US10144933B2 (en) | 2014-01-15 | 2018-12-04 | Shin Nippon Biomedical Laboratories, Ltd. | Chiral nucleic acid adjuvant having immunity induction activity, and immunity induction activator |
US10149905B2 (en) | 2014-01-15 | 2018-12-11 | Shin Nippon Biomedical Laboratories, Ltd. | Chiral nucleic acid adjuvant having antitumor effect and antitumor agent |
WO2015107425A2 (en) | 2014-01-16 | 2015-07-23 | Wave Life Sciences Pte. Ltd. | Chiral design |
CA2968304C (en) * | 2014-11-18 | 2024-04-16 | Zata Pharmaceuticals, Inc. | Phosphoramidite synthones for the synthesis of self-neutralizing oligonucleotide compounds |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5955591A (en) * | 1993-05-12 | 1999-09-21 | Imbach; Jean-Louis | Phosphotriester oligonucleotides, amidites and method of preparation |
WO2008008476A2 (en) * | 2006-07-12 | 2008-01-17 | The Regents Of The University Of California | Transducible delivery of nucleic acids by reversible phosphotriester charge neutralization protecting groups |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6407077B1 (en) * | 1998-11-05 | 2002-06-18 | Emory University | β-L nucleosides for the treatment of HIV infection |
US8691971B2 (en) * | 2008-09-23 | 2014-04-08 | Scott G. Petersen | Self delivering bio-labile phosphate protected pro-oligos for oligonucleotide based therapeutics and mediating RNA interference |
-
2010
- 2010-06-01 EP EP10783926.8A patent/EP2438079A4/en not_active Withdrawn
- 2010-06-01 KR KR1020117031625A patent/KR20120052909A/ko not_active Application Discontinuation
- 2010-06-01 US US13/375,451 patent/US20120142763A1/en not_active Abandoned
- 2010-06-01 WO PCT/US2010/036905 patent/WO2010141471A2/en active Application Filing
- 2010-06-01 AU AU2010256836A patent/AU2010256836A1/en not_active Abandoned
- 2010-06-01 CA CA2801178A patent/CA2801178A1/en not_active Abandoned
- 2010-06-01 CN CN2010800342403A patent/CN102459302A/zh active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5955591A (en) * | 1993-05-12 | 1999-09-21 | Imbach; Jean-Louis | Phosphotriester oligonucleotides, amidites and method of preparation |
WO2008008476A2 (en) * | 2006-07-12 | 2008-01-17 | The Regents Of The University Of California | Transducible delivery of nucleic acids by reversible phosphotriester charge neutralization protecting groups |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
CARSTON R. WAGNER,等: "Pronucleotides:Toward the InVivo Delivery of Antiviral and Anticancer Nucleotides", 《MEDICIANL RESEARCH REVIEWS》, vol. 20, 30 November 2000 (2000-11-30), pages 417 - 451, XP055240714 * |
NATHALIE SCHLIENGER,等: "S-Acyl-2-thioethyl Aryl Phosphotriester Derivatives as Mononucleotide Prodrugs", 《J. MED. CHEM.》, vol. 43, 24 October 2000 (2000-10-24), pages 4570 - 4574, XP008148501, DOI: doi:10.1021/jm000996o * |
SCOTT J. HECKER,等: "Prodrugs of Phosphates and Phosphonates", 《J. MED. CHEM.》, vol. 51, 1 February 2008 (2008-02-01), pages 2328 - 2345, XP008148502, DOI: doi:10.1021/jm701260b * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104781271A (zh) * | 2012-08-20 | 2015-07-15 | 加利福尼亚大学董事会 | 具有生物可逆的基团的多核苷酸 |
CN106061981A (zh) * | 2013-11-06 | 2016-10-26 | 索尔斯蒂斯生物有限公司 | 具有二硫化物基团的多核苷酸构建体 |
US11981703B2 (en) | 2016-08-17 | 2024-05-14 | Sirius Therapeutics, Inc. | Polynucleotide constructs |
US11597744B2 (en) | 2017-06-30 | 2023-03-07 | Sirius Therapeutics, Inc. | Chiral phosphoramidite auxiliaries and methods of their use |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2438079A2 (en) | 2012-04-11 |
US20120142763A1 (en) | 2012-06-07 |
EP2438079A4 (en) | 2013-05-22 |
WO2010141471A3 (en) | 2011-04-21 |
KR20120052909A (ko) | 2012-05-24 |
WO2010141471A2 (en) | 2010-12-09 |
AU2010256836A1 (en) | 2012-01-19 |
CA2801178A1 (en) | 2010-12-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102459302A (zh) | 核酸递送组合物及其使用方法 | |
CN101506368B (zh) | 通过可逆的磷酸三酯电荷中和保护基转导运输核酸 | |
US20200392498A1 (en) | Polynucleotide constructs having bioreversible and non-bioreversible groups | |
JP7395483B2 (ja) | mRNAの細胞内送達のためのペプチドおよびナノ粒子 | |
US8153605B2 (en) | Modulation of toll-like receptor 3 expression by antisense oligonucleotides | |
DE102006035618A1 (de) | Nukleinsäure der Formel (I): GlXmGn, insbesondere als immunstimulierendes Adjuvanz | |
CA2880869A1 (en) | Polynucleotides having bioreversible groups | |
KR20180104075A (ko) | IL4Rα, TRPA1, 또는 F2RL1을 표적화하는 RNA 복합체를 사용한 아토피 피부염 및 천식의 치료 | |
KR20110039382A (ko) | 안티센스 올리고누클레오티드에 의한 톨-유사 수용체 8 발현의 조절 | |
Das et al. | A peptide nucleic acid–aminosugar conjugate targeting transactivation response element of HIV-1 RNA genome shows a high bioavailability in human cells and strongly inhibits Tat-mediated transactivation of HIV-1 transcription | |
US10066230B2 (en) | Immune regulatory oligonucleotide (IRO) compounds to modulate toll-like receptor based immune response | |
JP2021063128A (ja) | ペプチド担体上の多重オリゴヌクレオチド部分 | |
WO2020043750A9 (en) | Neoantigen engineering using splice modulating compounds | |
Altrichter et al. | Simultaneous targeting of two master regulators of apoptosis with dual-action PNA–and DNA–peptide conjugates | |
KR20240040112A (ko) | 방법 | |
JP2011529967A (ja) | アンチセンスオリゴヌクレオチドによるToll様受容体7発現の調節 | |
Uhlmann | Oligonucleotide technologies: synthesis, production, regulations and applications | |
WO2020044349A1 (en) | Compounds, cojugates and compositions for use in the methods for trans-membrane delivery of molecules | |
US20200248177A1 (en) | Small guide antisense nucleic acid and use thereof | |
US11898145B2 (en) | Enhanced oligonucleotides for inhibiting RTEL1 expression | |
CN115916976A (zh) | 诱导血管紧张素转换酶2基因外显子跳跃的反义核酸 | |
AU2016377398A1 (en) | Nucleic acid oligomers and uses therefor | |
NZ751385A (en) | Complement component c5 irna compositions and methods of use thereof | |
NZ751385B2 (en) | Complement component c5 irna compositions and methods of use thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20120516 |