CN102445534A

CN102445534A - 一种孕妇早产及胎膜早破联检试剂盒

Info

Publication number: CN102445534A
Application number: CN2010105096411A
Authority: CN
Inventors: 雷震; 韦彦余
Original assignee: WUXI BOHUISI BIO-PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY Co Ltd; WUXI CITY KAIAOSHAN BIOPHARMACEUTICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: No.1 Attached Hospital, Nanjing Medical Univ.; Wuxi Bohuisi Bio-Pharmaceutical Technology Co., Ltd.; Wuxi City Kaiaoshan Biopharmaceutical Technology Co., Ltd.
Priority date: 2010-10-15
Filing date: 2010-10-15
Publication date: 2012-05-09

Abstract

本发明涉及一种孕妇早产及胎膜早破联检试剂盒，包括早产及胎膜早破免疫层析检测试纸条，或者包括早产免疫层析检测试纸条和胎膜早破免疫层析检测试纸条，较佳地，早产免疫层析检测试纸条的结合垫和硝酸纤维素膜上分别具有早产检测免疫标记抗体和早产检测抗体，胎膜早破免疫层析检测试纸条的结合垫和硝酸纤维素膜上分别具有胎膜早破检测免疫标记抗体和胎膜早破检测抗体，或者上述免疫标记抗体和抗体都分别包被在早产及胎膜早破免疫层析检测试纸条的结合垫和硝酸纤维素膜上，本发明可以通过一次取样同时诊断早产和胎膜早破，应用简便，并进一步提高早产诊断的准确性，联检结果为下一步准确治疗提供了有力依据，适于大规模推广应用。

Description

一种孕妇早产及胎膜早破联检试剂盒

技术领域

本发明涉及检测试剂盒技术领域，具体涉及联检试剂盒技术领域，特别涉及一种孕妇早产及胎膜早破联检试剂盒。

背景技术

妊娠满28周至不足37周分娩称为早产。早产分为自发性早产和治疗性早产两种，自发性早产包括未足月分娩和未足月胎膜早破，治疗性早产为妊娠并发症或合并症而需要提前终止妊娠者；其中自发性早产占绝大多数比例。

目前临床上对早产的诊断主要有以下几种方法：

1)宫颈评估：测量宫颈的长度与结构变化，一般宫颈长度短至一定程度后，可预测早产的发生；

2)各种生化指标：如胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1；这两种物质都在子宫发生收缩、胎盘和蜕膜发生剥离时释放至孕妇阴道的物质；当孕妇阴道中上述两种物质出现异常升高，可预测早产的发生。

当前临床上对胎膜早破的诊断主要采用以下几种方法：

1)阴道积液(流水)：阴道存在可见积液(羊水池)，或者从宫颈到阴道后穹隆有明显渗流，强烈支持胎膜破裂的诊断。然而，并不是每个患者都有明显积液。此外，胎膜破裂，特别是胎膜早破，可能持续数个小时才能看到有明显渗液。可见渗液出现之前羊膜内感染导致新生儿并发症甚至胎儿窒息的可能性已经大幅增加。

2)羊水结晶方法：羊水在玻片上风干后在显微镜下呈现羊齿状结晶。由于在玻片上容易被指纹、精液、和宫颈粘液污染，可能出现假阳性。干燥拭子或标本被血液污染可能造成假阴性(5-10％)。

3)硝嗪试纸：pH试纸在羊水中变蓝。敏感性和特异性分别为90.7％和77.2％。阴道中出现碱性尿液、血液、精液、阴道细菌炎症、或滴虫炎症等时，会出现假阳性，假阳性率为1％-17％；

4)胰岛素样生长因子结合蛋白-1：这是目前检测胎膜早破准确性最高的方法，准确率可达90％。

如上所述，目前临床上已经存在对早产和胎膜早破诊断较为准备的方法。但是，胎膜早破和早产是密切关联，但又相对独立的产科常见病。因为，胎膜早破是导致早产的部分原因(约占10％)，而胎膜早破的结局并不全是早产，因此临床上对早产和胎膜早破都需进行风险评估。但是，目前上述早产和胎膜早破的临床诊断，绝大多数是分开进行的；这样处理，即增加了操作的繁琐程度，同时因为需要频繁对孕妇进行取样，会刺激孕妇发生宫缩或者感染的机会，进而增加早产和胎膜早破的风险。

为了解决存在的上述问题，需要提供一种试剂盒，其可以通过一次取样同时诊断早产和胎膜早破，使用方便。

发明内容

本发明的目的是克服了上述现有技术中的缺点，提供一种孕妇早产及胎膜早破联检试剂盒，该孕妇早产及胎膜早破联检试剂盒可以通过一次取样同时诊断早产和胎膜早破，应用简便，并进一步提高早产诊断的准确性，联检结果为下一步准确治疗提供了有力依据，适于大规模推广应用。

为了实现上述目的，本发明的孕妇早产及胎膜早破联检试剂盒具有如下构成：

该孕妇早产及胎膜早破联检试剂盒，其特点是，包括早产及胎膜早破免疫层析检测试纸条，或者包括早产免疫层析检测试纸条和胎膜早破免疫层析检测试纸条。

较佳地，所述早产及胎膜早破免疫层析检测试纸条的结合垫上具有早产检测免疫标记抗体和胎膜早破检测免疫标记抗体，所述早产及胎膜早破免疫层析检测试纸条的硝酸纤维素膜上包被有早产检测抗体和胎膜早破检测抗体。

较佳地，所述早产免疫层析检测试纸条的结合垫上具有早产检测免疫标记抗体，所述早产免疫层析检测试纸条的硝酸纤维素膜上包被有早产检测抗体，所述胎膜早破免疫层析检测试纸条的结合垫上具有胎膜早破检测免疫标记抗体，所述胎膜早破免疫层析检测试纸条的硝酸纤维素膜上包被有胎膜早破检测抗体。

更佳地，所述早产检测免疫标记抗体是抗胎儿纤维连接蛋白免疫标记抗体或抗人磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1免疫标记抗体，所述早产检测抗体是抗胎儿纤维连接蛋白抗体或抗人磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体，所述胎膜早破检测免疫标记抗体是抗胰岛素样生长因子结合蛋白-1免疫标记抗体，所述胎膜早破检测抗体是抗胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体。

更佳地，所述早产检测免疫标记抗体是早产检测胶体金标记抗体或早产检测乳胶标记抗体，所述胎膜早破检测免疫标记抗体是胎膜早破检测胶体金标记抗体或胎膜早破检测乳胶标记抗体。

较佳地，所述早产免疫层析检测试纸条和所述胎膜早破免疫层析检测试纸条并列设置。

较佳地，所述孕妇早产及胎膜早破联检试剂盒还包括底板，所述早产免疫层析检测试纸条和所述胎膜早破免疫层析检测试纸条分别贴合在所述底板的上下表面上。

本发明的有益效果在于：

(1)本发明包括早产及胎膜早破免疫层析检测试纸条，或者包括早产免疫层析检测试纸条和胎膜早破免疫层析检测试纸条，从而一次取样，即可对早产和胎膜早破进行检测；避免了反复取样会刺激孕妇产生宫缩反应以及增加感染的风险。

(2)同时检测早产和胎膜早破两个指标非常必要，通过本发明的使用，发生早产的孕妇，若同时发生胎膜早破，则须考虑使用抗生素进行治疗；而胎膜早破的孕妇，如无早产的倾向，则可选择保守治疗，而有早产的倾向，则需积极进行干预，包括促进胎儿成熟等。

因此，本发明可以通过一次取样同时诊断早产和胎膜早破，应用简便，并进一步提高早产诊断的准确性，联检结果为下一步准确治疗提供了有力依据，适于大规模推广应用。

附图说明

图1是本发明的一具体实施例的主视示意图。其中1是结合垫(含抗人磷酸化IGFBP-1胶体金标记抗体和抗人IGFBP-1胶体金标记抗体)；2是箭头；3是部分不透明保护膜；4是第一检测线(包被抗人磷酸化IGFBP-1抗体)；5是第二检测线(包被抗人IGFBP-1抗体)；6是质控线；7是硝酸纤维素膜；8是不透明保护膜。

图2是本发明的另一具体实施例的主视示意图。其中9是结合垫(含抗人磷酸化IGFBP-1胶体金标记抗体)；10是结合垫(含抗人IGFBP-1胶体金标记抗体)；2是箭头；3是部分不透明保护膜；4是第一检测线(包被抗人磷酸化IGFBP-1抗体)；5是第二检测线(包被抗人IGFBP-1抗体)；6是质控线；7是硝酸纤维素膜；8是不透明保护膜。

图3是本发明的又一具体实施例的主视示意图。其中9是结合垫(含抗人磷酸化IGFBP-1胶体金标记抗体)；10是结合垫(含抗人IGFBP-1胶体金标记抗体)；2是箭头；3是部分不透明保护膜；4是第一检测线(包被抗人磷酸化IGFBP-1抗体)；5是第二检测线(包被抗人IGFBP-1抗体)；6是质控线；7是硝酸纤维素膜；8是不透明保护膜，11是底板。

具体实施方式

为了能够更清楚地理解本发明的技术内容，特举以下实施例详细说明。其中图1显示的是本发明的一具体实施例，图2显示的是本发明的另一具体实施例，图3显示的是本发明的又一具体实施例。其中相同的部件采用相同的附图标记。

请参见图1-3所示，本发明的孕妇早产及胎膜早破联检试剂盒包括早产及胎膜早破免疫层析检测试纸条，或者包括早产免疫层析检测试纸条和胎膜早破免疫层析检测试纸条。请参见图1所示，在本发明的一具体实施例中，所述孕妇早产及胎膜早破联检试剂盒包括早产及胎膜早破免疫层析检测试纸条，即只包括一条检测试纸条，可以同时检测早产及胎膜早破。请参见图2和3所示，在本发明的另一具体实施例和又一具体实施例中，所述孕妇早产及胎膜早破联检试剂盒包括早产免疫层析检测试纸条和胎膜早破免疫层析检测试纸条，即包括两条检测试纸条，分别同时检测早产及胎膜早破。

总所周知，免疫层析检测试纸条一般自上而下依次由样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫组成；所述结合垫上包被有免疫标记抗体，硝酸纤维素膜上包被有抗体。检测时，免疫标记抗体和抗体将分别与被检测物质结合从而形成夹心结构。

请参见图1-3所示，在本发明的三个具体实施例中，所述早产检测免疫标记抗体是抗人磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1免疫标记抗体，所述早产检测抗体是抗人磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体。显然，其中的抗人磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1免疫标记抗体和抗人磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体结合人磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1的不同部位。

免疫标记抗体采用常规的免疫标记手段标记。更佳地，所述早产检测免疫标记抗体是早产检测胶体金标记抗体或早产检测乳胶标记抗体，所述胎膜早破检测免疫标记抗体是胎膜早破检测胶体金标记抗体或胎膜早破检测乳胶标记抗体。

请参见图1-3所示，在本发明的三个具体实施例中，所述早产检测免疫标记抗体是早产检测胶体金标记抗体，所述胎膜早破检测免疫标记抗体是胎膜早破检测胶体金标记抗体。

所述早产免疫层析检测试纸条和所述胎膜早破免疫层析检测试纸条可以采用任何合适的形式放置。请参见图2所示，在本发明的另一具体实施例中，所述早产免疫层析检测试纸条和所述胎膜早破免疫层析检测试纸条并列设置。请参见图3所示，在本发明的又一具体实施例中，所述孕妇早产及胎膜早破联检试剂盒还包括底板，所述早产免疫层析检测试纸条和所述胎膜早破免疫层析检测试纸条分别贴合在所述底板的上下表面上。

本发明的孕妇早产及胎膜早破联检试剂盒还可以包括免疫层析检测试剂盒的其它常见试剂，例如样品缓释液等等。

本发明的孕妇早产及胎膜早破联检试剂盒的检测试纸条的制备过程简述如下，应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(NewYork：ColdSpring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1胶体金标记

用于早产诊断的抗体(抗人磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1)胶体金标记方法如下：用碳酸钾溶液调节50ml胶体金溶液pH值至7.7；在搅拌的条件下，逐滴缓慢将0.65ml 1mg/ml待标记抗人磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体加入上述胶体金溶液中，混匀，室温静置30min；将12.5ml封闭液缓慢加入上述胶体金溶液中，混匀，室温静置30min；8000g 4℃离心1h，去上清，留疏松沉淀；各管沉淀用25ml洗涤液溶解，6000g 4℃离心1h，去上清，留疏松沉淀；各管沉淀用1.2ml洗涤液溶解，转入1.5ml离心管中，4500g 4℃离心1h，去上清；所有沉淀用1ml胶体金抗体重悬液重悬，4℃保存。

用于胎膜早破诊断的抗体(抗人胰岛素样生长因子结合蛋白-1)胶体金标记方法同上。

实施例2胶体金垫的喷点

用于早产诊断的抗体(抗人磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1)胶体金垫的喷点方法如下：胶体金抗体溶液稀释：用胶体金抗体重悬液将上述制备的胶体金抗体结合物稀释4倍；设定点膜仪，开启点膜仪的电源，设定喷点程序，喷点量为8ul/cm；1号管道为喷点通道；点膜仪初始化：将1号管道置于胶体金抗体重悬溶液中，选择初始化程序，初始化6个循环；喷点：将金标垫按固定位置平放在点膜仪上，按控制面板上“GO”键开始喷点，点完后取下，检查喷点好的金标垫，喷点的胶体金抗体条带均匀、连续和贯通整个金标垫的直线为合格喷点品，两条直线中出现断点为不合格喷点品；每放一片金标垫，按一次控制面板上的“GO”键为喷点一次(一片)；喷点结束，将喷点的金标垫置于室温中自然干燥1小时，膜上应看不到喷点痕迹。

用于胎膜早破诊断的抗体(抗人胰岛素样生长因子结合蛋白-1)胶体金垫喷点方法同上。

实施例3硝酸纤维素膜的制备

用于早产诊断的抗体(抗人磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1)硝酸纤维素膜制备方法如下：取羊抗人IGFBP-1多克隆抗体500ug，加到5ml刻度离心管中，抗体稀释液至1ml，容器标记T标志。取羊抗鼠IgG抗体25ul，加到5ml刻度离心管中，抗体稀释液至1ml，容器标记C标志。设定点膜仪，开启点膜仪的电源，设定喷点程序，喷点量为1ul/cm；1号管道为检测带喷点通道，2号管道为对照带喷点通道；点膜仪初始化：将1号管道置于检测带溶液中，将2号管道置于对照带溶液中，选择初始化程序，初始化6个循环；喷点：将硝酸纤维素膜按固定位置平放在点膜仪上，按控制面板上“GO”键开始喷点，点完后取下，检查喷点好的硝酸纤维素膜，检测带和对照带为两条均匀、连续和贯通整个硝酸纤维素膜的直线为合格喷点品，两条直线中出现断点为不合格喷点品；每放一片硝酸纤维素膜，按一次控制面板上的“GO”键为喷点一次(一片)；喷点结束，将喷点的硝酸纤维素膜置于室温中自然干燥1小时，膜上应看不到喷点痕迹。

用于胎膜早破诊断的抗体(抗人胰岛素样生长因子结合蛋白-1)硝酸纤维素膜制备方法同上。

实施例4贴膜、切膜

将底板上较宽部分的保护纸除去，沿上面保护纸的下边缘，将划好线的硝酸纤维素膜，以C线在上方的方式贴到底板板上；将胶体金垫贴在T线下方，与NC膜少许接触；将样品垫贴在胶体金垫下方，与胶体金垫少许接触；接着除去上方保护纸，将吸水纸贴在NC膜的上方，与NC膜少许接触；将保护纸及指示带纸逐一贴在组装好的试纸条外面，组装成大卡。

接通切割机电源，设定切膜程序，设定切割宽度为4mm；将大卡合格品平放入切割机平台轨道中，正面朝上，按操作面板上“GO”键，开始切割；每放一片大卡合格品，按操作面板上“GO”键一次，直至切割完所有大卡合格品；切割完成后，分别将用于检测早产和胎膜早破的试纸条并列黏贴于底板上，组成并列式的早产与胎膜早破联检试纸条。

实施例5试剂盒组装

取铝箔袋和干燥剂；打开热封机，预热；将待装袋的试纸条、1袋干燥剂装入铝箔袋中；按照规定的长度切断装有试纸条和干燥剂的铝箔袋；用热封机封好铝箔袋；贴上标签。

实施例6临床样本验证

将上述的试纸条，用临床样本进行验证。

试纸条检测端(图1-3中试纸条的左端)带有吸水纸，反应时插入样品中。

检测时如果C区出现条带即质控线6，则T区出现条带(第一检测线4和第二检测线5)即表示样品为阳性；未出现条带则表示阴性。

检测时如果C区未出现条带，则表示试纸条失效。

检测结果如下：

	早产且破膜	早产未破膜	破膜未早产	正常
					检测阳性	21	67	82	0
检测阴性	1	0	0	121

该试纸条的检测灵敏度为：(21+67+82)/(22+67+82)×100％＝99.41％；

该试纸条的检测特异性为：121/121＝100％。

上述实施例结果表明本胶体金检测的准确率非常高，满足临床应用。

因此，本发明不仅可以通过一次取样即可对早产和胎膜早破进行检测，避免了反复取样会刺激孕妇产生宫缩反应以及增加感染的风险，而且通过同时检测早产和胎膜早破两个指标，提高早产诊断的准确性，并可以根据早产和胎膜早破两个指标的检测结果，进行针对性更强的治疗方案。

综上，本发明的孕妇早产及胎膜早破联检试剂盒可以通过一次取样同时诊断早产和胎膜早破，应用简便，并进一步提高早产诊断的准确性，联检结果为下一步准确治疗提供了有力依据，适于大规模推广应用。

在此说明书中，本发明已参照其特定的实施例作了描述。但是，很显然仍可以作出各种修改和变换而不背离本发明的精神和范围。因此，说明书和附图应被认为是说明性的而非限制性的。

Claims

1.一种孕妇早产及胎膜早破联检试剂盒，其特征在于，包括早产及胎膜早破免疫层析检测试纸条，或者包括早产免疫层析检测试纸条和胎膜早破免疫层析检测试纸条。

2.根据权利要求1所述的孕妇早产及胎膜早破联检试剂盒，其特征在于，所述早产及胎膜早破免疫层析检测试纸条的结合垫上具有早产检测免疫标记抗体和胎膜早破检测免疫标记抗体，所述早产及胎膜早破免疫层析检测试纸条的硝酸纤维素膜上包被有早产检测抗体和胎膜早破检测抗体。

3.根据权利要求1所述的孕妇早产及胎膜早破联检试剂盒，其特征在于，所述早产免疫层析检测试纸条的结合垫上具有早产检测免疫标记抗体，所述早产免疫层析检测试纸条的硝酸纤维素膜上包被有早产检测抗体，所述胎膜早破免疫层析检测试纸条的结合垫上具有胎膜早破检测免疫标记抗体，所述胎膜早破免疫层析检测试纸条的硝酸纤维素膜上包被有胎膜早破检测抗体。

4.根据权利要求2或3所述的孕妇早产及胎膜早破联检试剂盒，其特征在于，所述早产检测免疫标记抗体是抗胎儿纤维连接蛋白免疫标记抗体或抗人磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1免疫标记抗体，所述早产检测抗体是抗胎儿纤维连接蛋白抗体或抗人磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体，所述胎膜早破检测免疫标记抗体是抗胰岛素样生长因子结合蛋白-1免疫标记抗体，所述胎膜早破检测抗体是抗胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体。

5.根据权利要求2或3所述的孕妇早产及胎膜早破联检试剂盒，其特征在于，所述早产检测免疫标记抗体是早产检测胶体金标记抗体或早产检测乳胶标记抗体，所述胎膜早破检测免疫标记抗体是胎膜早破检测胶体金标记抗体或胎膜早破检测乳胶标记抗体。

6.根据权利要求1所述的孕妇早产及胎膜早破联检试剂盒，其特征在于，所述早产免疫层析检测试纸条和所述胎膜早破免疫层析检测试纸条并列设置。

7.根据权利要求1所述的孕妇早产及胎膜早破联检试剂盒，其特征在于，所述孕妇早产及胎膜早破联检试剂盒还包括底板，所述早产免疫层析检测试纸条和所述胎膜早破免疫层析检测试纸条分别贴合在所述底板的上下表面上。