CN102432660A - 一种青钱柳苷ⅰ的提取分离方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种青钱柳苷Ⅰ的提取分离方法，方法是将青钱柳干燥叶粉碎，加生物酶酶解1-3天，酶解原料加8-12倍量60-90%乙醇溶液，在50-90℃的温度下浸泡提取1-3次，提取液浓缩至浸膏，加适量水分散后，加入水饱和正丁醇萃取2-4次，合并萃取液加丙酮沉淀，过滤，滤液浓缩干燥得到粗提物，加入适量有机溶剂回流提取，提取液浓缩，冷却，结晶，重结晶，得到青钱柳苷Ⅰ。本方法制备量大，产品含量高，适合工业化生产。
Description
技术领域
本发明属于天然产物分离领域，尤其涉及一种青钱柳苷Ⅰ的提取分离方法。
背景技术
青钱柳苷Ⅰ（Cyclocarioside I）属三萜皂苷类，分子式为C41H70O12，分子量755.01，分子结构为：
青钱柳苷Ⅰ可以作为甜味剂，其甜度约为蔗糖的250倍。青钱柳苷Ⅰ主要来源于胡桃科青钱柳Cyclocarya paliurus (Batal.) Iljinskaja的叶。目前，大规模开发无毒、使用安全、低热量、天威素质优良又具有保健作用的天然甜味剂代替蔗糖和人工合成甜味剂，是国内外科技工作者迫切需要解决的大课题。舒任庚等从青钱柳叶提取物中分离出20个单体化合物，签订并推断出15个化合物的结构。其中青钱柳苷Ⅰ具有甜味，是世界上发现的具有甜味的天然化合物之一。
目前，国内尚未见青钱柳苷Ⅰ的工业提取纯化方法的相关文献和专利的报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种青钱柳苷Ⅰ的提取分离方法，该方法操作简单，产品含量高。
本发明是采用以下技术方案来实现的：
（1）取青钱柳干燥叶粉碎，加生物酶酶解1-3天，得酶解原料；
（2）酶解原料加8-12倍量60-90%乙醇溶液，在50-90℃的温度下浸泡提取1-3次，过滤得到提取液；
（3）提取液在50-70℃的温度下浓缩至浸膏，加适量水分散后，加入1-3倍量的水饱和正丁醇萃取1-4次，合并萃取液加0.5-1倍量丙酮沉淀，过滤，滤液浓缩干燥得到粗提取；
（4）粗提物加入适量有机溶剂回流提取，提取液浓缩，冷却，加入微量的纯度大于98%青钱柳苷Ⅰ结晶作为晶种，静置结晶，过滤，干燥得到类白色青钱柳苷Ⅰ粗品；
（5）将类白色青钱柳苷Ⅰ粗品用无水甲醇加热回流溶解，过滤，滤液冷却，加入微量的纯度大于99%青钱柳苷Ⅰ结晶作为晶种，静置结晶，过滤，干燥得到白色青钱柳苷Ⅰ。
所述步骤（1）中生物酶可选果胶酶、纤维素酶和淀粉酶中的任一种，用量为原料重量的0.5-0.8%。
所述步骤（4）中有机溶剂为乙酸乙酯-甲醇，其体积比为1:7。
下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施例。
具体实施方式
实施例1：
青钱柳干燥叶粉碎，过40目筛，称取3kg，加20g的果胶酶混合均匀，酶解1天，酶解原料加8倍量90%乙醇溶液，在50℃的温度下浸泡提取3次，过滤得到提取液，提取液在70℃的温度下浓缩至浸膏，加500ml水分散，再加500ml水饱和正丁醇萃取2次，合并萃取液，加750ml丙酮沉淀，过滤，滤液浓缩干燥得到粗提物，粗提物加入体积比为1:7乙酸乙酯-甲醇回流提取，提取液浓缩，冷却，加入微量的纯度大于98%青钱柳苷Ⅰ结晶作为晶种，静置结晶，过滤，干燥得到类白色青钱柳苷Ⅰ粗品，将类白色青钱柳苷Ⅰ粗品用无水甲醇加热回流溶解，过滤，滤液冷却，加入微量的纯度大于99%青钱柳苷Ⅰ结晶作为晶种，静置结晶，分出结晶，干燥得到白色青钱柳苷Ⅰ0.7g，含量99.3%。
实施例2：
青钱柳干燥叶粉碎，过60目筛，称取3kg，加15g的淀粉酶混合均匀，酶解2天，酶解原料加12倍量60%乙醇溶液，在90℃的温度下浸泡提取1次，过滤得到提取液，提取液在70℃的温度下浓缩至浸膏，加500ml水分散，再加600ml水饱和正丁醇萃取3次，合并萃取液，加2300ml丙酮沉淀，过滤，滤液浓缩干燥得到粗提物，粗提物加入体积比为1:7乙酸乙酯-甲醇回流提取，提取液浓缩，冷却，加入微量的纯度大于98%青钱柳苷Ⅰ结晶作为晶种，静置结晶，过滤，干燥得到类白色青钱柳苷Ⅰ粗品，将类白色青钱柳苷Ⅰ粗品用无水甲醇加热回流溶解，过滤，滤液冷却，加入微量的纯度大于99%青钱柳苷Ⅰ结晶作为晶种，静置结晶，分出结晶，干燥得到白色青钱柳苷Ⅰ产品1.0g，含量98.6%。
实施例3：
青钱柳干燥叶粉碎，过20目筛，称取3kg，加24g的纤维素酶混合均匀，酶解2天，酶解原料加10倍量70%乙醇溶液，在60℃的温度下浸泡提取2次，过滤得到提取液，提取液在60℃的温度下浓缩至浸膏，加800ml水分散，再加1500ml水饱和正丁醇萃取2次，合并萃取液，加1800ml丙酮沉淀，过滤，滤液浓缩干燥得到粗提物，粗提物加入体积比为1:7乙酸乙酯-甲醇回流提取，提取液浓缩，冷却，加入微量的纯度大于98%青钱柳苷Ⅰ结晶作为晶种，静置结晶，过滤，干燥得到类白色青钱柳苷Ⅰ粗品，将类白色青钱柳苷Ⅰ粗品用无水甲醇加热回流溶解，过滤，滤液冷却，加入微量的纯度大于99%青钱柳苷Ⅰ结晶作为晶种，静置结晶，分出结晶，干燥得到白色青钱柳苷Ⅰ产品1.3g，含量98.1%。
实施例4：
青钱柳干燥叶粉碎，过40目筛，称取10kg，加40g的淀粉酶混合均匀，酶解2天酶解原料加10倍量70%乙醇溶液，在60℃的温度下浸泡提取1次，过滤得到提取液，提取液在60℃的温度下浓缩至浸膏，加1500ml水分散，再加1500ml水饱和正丁醇萃取4次，合并萃取液，加4000ml丙酮沉淀，过滤，滤液浓缩干燥得到粗提物，粗提物加入体积比为1:7乙酸乙酯-甲醇回流提取，提取液浓缩，冷却，加入微量的纯度大于98%青钱柳苷Ⅰ结晶作为晶种，静置结晶，过滤，干燥得到类白色青钱柳苷Ⅰ粗品，将类白色青钱柳苷Ⅰ粗品用无水甲醇加热回流溶解，过滤，滤液冷却，加入微量的纯度大于99%青钱柳苷Ⅰ结晶作为晶种，静置结晶，分出结晶，干燥得到白色青钱柳苷Ⅰ产品3.6g，含量99.5%。
实施例5：
青钱柳干燥叶粉碎，过40目筛，称取20kg，加100g的果胶酶混合均匀，酶解3天，酶解原料加12倍量60%乙醇溶液，在90℃的温度下浸泡提取3次，过滤得到提取液，提取液在50℃的温度下浓缩至浸膏，加4L水分散，再加12L水饱和正丁醇萃取1次，合并萃取液，加8L丙酮沉淀，过滤，滤液浓缩干燥得到粗提物，粗提物加入体积比为1:7乙酸乙酯-甲醇回流提取，提取液浓缩，冷却，加入微量的纯度大于98%青钱柳苷Ⅰ结晶作为晶种，静置结晶，过滤，干燥得到类白色青钱柳苷Ⅰ粗品，将类白色青钱柳苷Ⅰ粗品用无水甲醇加热回流溶解，过滤，滤液冷却，加入微量的纯度大于99%青钱柳苷Ⅰ结晶作为晶种，静置结晶，分出结晶，干燥得到白色青钱柳苷Ⅰ产品7.9g，含量98.9%。
Claims (3)
1.一种青钱柳苷Ⅰ的提取分离方法，其特征在于包含以下步骤：
（1）取青钱柳干燥叶粉碎，加生物酶酶解1-3天，得酶解原料；
（2）酶解原料加8-12倍量60-90%乙醇溶液，在50-90℃的温度下浸泡提取1-3次，过滤得到提取液；
（3）提取液在50-70℃的温度下浓缩至浸膏，加适量水分散后，加入1-3倍量的水饱和正丁醇萃取1-4次，合并萃取液加0.5-1倍量丙酮沉淀，过滤，滤液浓缩干燥得到粗提取；
（4）粗提物加入适量有机溶剂回流提取，提取液浓缩，冷却，加入微量的纯度大于98%青钱柳苷Ⅰ结晶作为晶种，静置结晶，过滤，干燥得到类白色青钱柳苷Ⅰ粗品；
（5）将类白色青钱柳苷Ⅰ粗品用无水甲醇加热回流溶解，过滤，滤液冷却，加入微量的纯度大于99%青钱柳苷Ⅰ结晶作为晶种，静置结晶，过滤，干燥得到白色青钱柳苷Ⅰ。
2.如权利要求1所述的青钱柳苷Ⅰ的提取分离方法，其特征在于所述步骤（1）中生物酶可选果胶酶、纤维素酶和淀粉酶中的任一种，用量为原料重量的0.5-0.8%。
3.如权利要求1所述的青钱柳苷Ⅰ的提取分离方法，其特征在于所述步骤（4）中有机溶剂为乙酸乙酯-甲醇，其体积比为1:7。
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