发明内容
本申请一方面提供下列式I的化合物或其可药用盐:
其中,R7、R8各自独立地选自氢、烷基、芳基、杂芳基或环烷基,各自是取代或非取代的,取代基选自羟基、环烷基、烷基、卤素;Ar选自取代或未取代的杂芳基,取代基选自烷基、烷氧基、卤代烷基、卤素、硝基、羟基、氨基、芳基、芳基烷基或芳氧基。
R7、R8各自独立地优选氢、烷基、杂芳基或环烷基。
其中R7优选为氢;R8优选为烷基、杂芳基或环烷基。
在一些实施方式中,R7选自氢,R8选自烷基、杂芳基或环烷基,各自是取代或非取代的,取代基选自羟基、环烷基、烷基、卤素;在另一些实施方式中,R7选自氢,R8选自烷基、六元杂芳基、环烷基,各自是取代或非取代的,取代基选自羟基、环丙基、金刚烷基。
Ar优选由5-10个原子组成的单环或双环杂芳基,其中包括1或2个N杂原子,Ar的取代基优选烷基、烷氧基、卤代烷基、卤素、氨基、芳基。
在一些实施方案中,Ar选自取代或未取代的哒嗪基、喹唑啉基、吡咯基、噻吩基、吲唑基、吡唑基;在另一些实施方案中,Ar选自取代或未取代的哒嗪基、喹唑啉基;另一些实施方案中,Ar选自4-甲基-6-苯基哒嗪-3-基、6-苯基哒嗪-3-基、6-甲基哒嗪-3-基、6-甲氧基哒嗪-3-基、6-三氟甲基哒嗪-3-基、6-氨基哒嗪-3-基、6-氯哒嗪-3-基、哒嗪-4-基、2-苯基喹唑啉-4-基、喹唑啉-4-基、2-三氟甲基喹唑啉-4-基、7-甲氧基喹唑啉-4-基、吡咯-2-基、吡咯-3-基、4-甲基吡咯-2-基、1-苯基吡咯-3-基、2,4-二甲基吡咯-3-基、3,5-二甲基吡咯-2-基、噻吩-3-基、噻吩-2-基、5-硝基噻吩-2-基、5-甲基噻吩-2-基、4-甲基噻吩-2-基、4-氯噻吩-2-基、3-溴噻吩-2-基、3-氨基噻吩-2-基、3-氨基-4-甲基噻吩-2-基、4,5-二甲基噻吩-2-基、吲唑-3-基、5-氟吲唑-3-基、5-氯吲唑-3-基、4,7-二氟吲唑-3-基、6-甲氧基吲唑-3-基、4-甲氧基吲唑-3-基、5-甲氧基吲唑-3-基、1-甲基吲唑-3-基、5-甲基吲唑-3-基、7-氯吲唑-3-基、5-硝基吲唑-3-基、5,6-二氯吲唑-3-基、吡唑-3-基、5-异丙基吡唑-3-基、3-氨基吡唑-4-基、1-甲基-4-氯吡唑-3-基、5-硝基吡唑-3-基、1-甲基吡唑-3-基或1-甲基-5-氨基吡唑-4-基;在另一些优选的实施方案中,Ar选自4-甲基-6-苯基哒嗪-3-基、2-苯基喹唑啉-4-基、吡咯-2-基、噻吩-2-基、吲唑-3-基、5-氟吲唑-3-基、4,7-二氟吲唑-3-基、5-氯吲唑-3-基、5-异丙基吡唑-3-基;在另一些更优选的实施方案中,Ar选自4-甲基-6-苯基哒嗪-3-基、2-苯基喹唑啉-4-基。
在一些实施方案中,R7选自氢;R8选自烷基、杂芳基或环烷基,各自是取代或非取代的,取代基选自羟基、环烷基、烷基、卤素;Ar选自取代或未取代的哒嗪基、喹唑啉基、吡咯基、噻吩基、吲唑基、吡唑基,取代基选自烷基、烷氧基、卤代烷基、卤素、硝基、羟基、氨基、芳基、芳基烷基或芳氧基。
在一些实施方案中,R7选自氢,R8选自烷基、六元杂芳基或环烷基,各自是取代或非取代的,取代基选自羟基、环丙基或金刚烷基;Ar选自取代或未取代的哒嗪基、喹唑啉基,取代基选自烷基、烷氧基、卤代烷基、卤素、氨基或芳基。
在另一些实施方式中,R7选自氢,R8选自吡啶基、羟乙基、环丙基甲基、环己基、金刚烷基乙基;Ar选自4-甲基-6-苯基哒嗪-3-基、6-苯基哒嗪-3-基、环己基、金刚烷基乙基;Ar选自4-甲基-6-苯基哒嗪-3-基、6-苯基哒嗪-3-基、6-甲基哒嗪-3-基、6-甲氧基哒嗪-3-基、6-三氟甲基哒嗪-3-基、6-氨基哒嗪-3-基、6-氯哒嗪-3-基、哒嗪-4-基、2-苯基喹唑啉-4-基、喹唑啉-4-基、2-三氟甲基喹唑啉-4-基、7-甲氧基喹唑啉-4-基、吡咯-2-基、吡咯-3-基、4-甲基吡咯-2-基、1-苯基吡咯-3-基、2,4-二甲基吡咯-3-基、3,5-二甲基吡咯-2-基、噻吩-3-基、噻吩-2-基、5-硝基噻吩-2-基、5-甲基噻吩-2-基、4-甲基噻吩-2-基、4-氯噻吩-2-基、3-溴噻吩-2-基、3-氨基噻吩-2-基、3-氨基-4-甲基噻吩-2-基、4,5-二甲基噻吩-2-基、吲唑-3-基、5-氟吲唑-3-基、5-氯吲唑-3-基、4,7-二氟吲唑-3-基、6-甲氧基吲唑-3-基、4-甲氧基吲唑-3-基、5-甲氧基吲唑-3-基、1-甲基吲唑-3-基、5-甲基吲唑-3-基、7-氯吲唑-3-基、5-硝基吲唑-3-基、5,6-二氯吲唑-3-基、吡唑-3-基、5-异丙基吡唑-3-基、3-氨基吡唑-4-基、1-甲基-4-氯吡唑-3-基、5-硝基吡唑-3-基、1-甲基吡唑-3-基或1-甲基-5-氨基吡唑-4-基。
在另一些实施方式中,R7选自氢,R8选自吡啶基、羟乙基、环丙基甲基、环己基、金刚烷基乙基;Ar选自4-甲基-6-苯基哒嗪-3-基、2-苯基喹唑啉-4-基。
在通式I的上述定义和下文所述的实施方案中,本文中所用的术语具有如下定义的含义。
术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
术语“羟基”指-OH基团。
术语“氰基”指-CN基团。
术语“烷基”指由碳原子和氢原子组成的直链或支链的饱和脂肪烃基团,其通过单键与分子的其余部分链接。所述烷基含有1到6个碳原子,烷基的具体例子包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基、戊基、2-甲基丁基、新戊基、正己基等。烷基可以带有取代基术语“卤代烷基”表示被一个或多个“卤素”原子取代的“烷基”,包括一卤代烷基、二卤代烷基、三卤代烷基、全卤代烷基等,具体的例子包括但不限于氯甲基、二氯甲基、二氟甲基、三氟甲基、全氟乙基或2,2,2-三氟乙基等。
术语“烷氧基”是指-O-烷基基团,具体的例子包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、2-甲基丁氧基、新戊氧基、正己氧基等。
术语“氨基”是指-NH2基团、-NH(烷基)基团和-N(烷基)2。氨基的具体例子包括但不限于-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHC1-3烷基、-N(C1-3烷基)2等。
术语“芳基”是指具有完全共轭的π电子体系的具有6-14个碳原子的全碳单环或稠合多环的芳香环基团,芳基的非限制性实例包括但不限于苯基、萘基、蒽基等。术语“芳基烷基”是指被如上文定义的芳基所取代的烷基。芳基烷基的非限制性实例包括但不限于-CH2-苯基、-(CH2)2-苯基、-(CH2)3-苯基、-CH2-CH(CH3)-苯基、-(CH2)4-苯基、-CH2-CH(CH3)-CH2-苯基、-CH2-CH2-CH(CH3)-苯基等。
本发明所述的“杂芳基”是指有5-10个原子的单环或双环芳族基团,其中至少含有1个选自N、O或S的杂原子,其余的原子是C,此外,还有完全共轭的π电子体系。杂芳基的例子包括但不限于哒嗪、喹唑啉、吡咯、噻吩、吲唑、吡唑、喹啉、吡啶、呋喃、咪唑、吡嗪、嘧啶、噻唑、异喹啉、苯并噻唑或二氮杂萘等。杂芳基可以是取代的或未取代的。
术语“环烷基”是指含有3-10个碳原子的饱和环烷烃,包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、金刚烷基,环烷基可以是取代的或未取代的。
本申请提供的化合物或其可药用盐具体举例如下,但不限于下列化合物或其可药用盐:
本申请再一方面提供上述通式I化合物的制备方法,其包括如下反应:
其中R7、R8同通式I中的定义,R6为氢或烷基。
具体反应方法为:将式A和式B的化合物混合,在有机溶剂中加入缩合剂进行反应,反应结束后分离纯化。得到式I化合物。
有机溶剂可以选自二氯甲烷或四氢呋喃,缩合剂选自二环己基碳二亚胺(DCC),二异丙基碳二亚胺(DIC),乙基二甲基氨基丙基碳二亚胺(EDC),乙基二甲基氨基丙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)等。
可以加入碱性溶液,通过有机溶剂进行萃取。
例如可以加入饱和碳酸氢钠溶液,用二氯甲烷萃取,将所得有机相经无水硫酸钠干燥后,浓缩、柱层析分离纯化得到式I所示的化合物。
其中,式A和式B的化合物
可以从市场上买到或者采用本领域中常用的方法合成得到。
当Ar为取代或未取代的哒嗪、喹唑啉,R
6为氢时,
可以采用下列方法合成得到:
其中,Hal代表卤素,如氯、溴、碘等,原料Ar-Hal可以从市场上买到,HCl为6-10M的盐酸。
或者根据国际申请WO2008023357或WO2007127375中公开的方法制备。
例如,将取代或未取代的哒嗪、喹唑啉卤代物(Ar-Hal)和氰化亚铜或者氰化钾混合进行反应。
可以选择加入吡啶或者N,N-二甲基甲酰胺,混合物在60-160℃反应2-48小时后,过滤,加入稀盐酸并用乙酸乙酯萃取。
可以进一步萃取得到目标产物,例如将上述有机相经无水硫酸钠干燥,浓缩后所得到的粗品于6~10M盐酸中加热回流3-8小时,再用饱和碳酸氢钠溶液中和,乙酸乙酯萃取。水相经稀盐酸调pH值至2后,用乙酸乙酯萃取,无水硫酸钠干燥并浓缩得到产物。
其中,取代或未取代的哒嗪、喹唑啉卤代物与氰化亚铜的摩尔比为1∶1.0~2.0,优选1∶1.8,更优选1∶1.5;反应时间为2~48小时,优选24小时,更优选2小时;反应温度为60~160℃,优选130℃,更优选80℃。
本申请提供的上述酰胺类化合物可以以其盐、水合物的形式存在,它们在体内转化为本申请化合物。例如,在本发明的范围内,按照本领域熟知的工艺,将本申请化合物转化为药学上可接受的盐的形式,并且以盐形式使用它们。
本文中所述的“可药用盐”包括上述通式化合物的酸加成盐。通常,这样的盐是通过使游离的碱形式的化合物与化学计量的适合的酸在水或有机溶剂或两者的混合物中反应来制备的。可药用的酸加成盐的实例包括无机或有机酸加成盐,例如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、磷酸盐、硫酸盐、硝酸盐、乙磺酸盐、甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、乙酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、水杨酸盐、丙二酸盐、己二酸盐、己酸盐、精氨酸盐、富马酸盐、烟酸盐、邻苯二甲酸盐或草酸盐等。
当本申请化合物具备游离酸的形式时,使其游离酸形式与药学上可接受的无机或有机碱反应可以制备本申请化合物的碱加成盐,这类盐包括但不限于:锂、钠、钾、钡、钙、镁、铝、铁、亚铁、铜、锌盐,或与吗啉、二乙胺、三乙胺、异丙胺、三甲胺、赖氨酸或组胺酸组成的盐。
本申请再一方面提供,上述式I所述的化合物、其药用盐或其水合物抑制小胶质细胞分泌致病因子IL-1β的用途。
本申请再一方面提供,上述式I所述的化合物、其药用盐或其水合物预防或治疗神经炎症性疾病的用途,所述的神经炎性疾病包括但不限于老年痴呆症(阿尔茨海默氏病)、帕金森氏病、肌肉萎缩性侧索硬化症、自体免疫疾病、朊毒体病、中风、外伤性脑损伤、脊髓性肌萎缩症、多发性硬化、癫痫、神经性疼痛等;优选老年痴呆症。
本申请再一方面提供一种药物组合物,包括治疗有效量的上述式I所述的化合物、其盐或水合物,和合适的药用辅料。本申请所提供的药物组合物可以治疗或预防神经炎症性疾病,所述的神经炎性疾病包括但不限于老年痴呆症(阿尔茨海默氏病)、帕金森氏病、肌肉萎缩性侧索硬化症、自体免疫疾病、朊毒体病、中风、外伤性脑损伤、脊髓性肌萎缩症、多发性硬化、癫痫、神经性疼痛等;优选老年痴呆症。
本申请所述的组合物可以是液体、半液体或固体形式,按照适合于所用的给药途径的方式配制。本申请所述的组合物可以按照下列给药方式给药:口服、肠胃外、腹膜内、静脉内、透皮、舌下、肌内、直肠、口腔、鼻内、脂质体等方式。
口服组合物可以是固体、凝胶或液体。固体制剂的实例包括但不限于片剂、胶囊剂、颗粒剂和散装粉剂。这些制剂可以选择地含有粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、甜味剂和矫味剂等。粘合剂的实例包括但不限于微晶纤维素、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶溶液、蔗糖和淀粉糊;润滑剂的实例包括但不限于滑石、淀粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸;稀释剂的实例包括但不限于乳糖、蔗糖、淀粉、甘露糖醇、磷酸二钙;助流剂的实例包括但不限于二氧化硅;崩解剂的实例包括但不限于交联羧甲基纤维素钠、淀粉羟乙酸钠、藻酸、玉米淀粉、马铃薯淀粉、甲基纤维素、琼脂和羧甲基纤维素。
以肠胃外给予本申请组合物,一般以注射为主,包括皮下、肌内或静脉内注射。注射剂可以被制成任何常规形式,如液体溶液或悬液、适合于在注射之前溶解或悬浮在液体中的固体形式或者乳剂。可用于本申请注射剂的药学上可接收的载体的实例包括但不限于水性载体、非水性载体、抗微生物剂、等渗剂、缓冲剂、抗氧剂、悬浮与分散剂、乳化剂、螯合剂和其它药学上可接受的物质。水性载体的实例包括氯化钠注射液、林格式注射液、等渗葡萄糖注射液、无菌水注射液、葡萄糖与乳酸化林格氏注射液;非水性载体的实例包括植物来源的固定油、棉籽油、玉米油、芝麻油和花生油;抗微生物剂的实例包括间甲酚、苄醇、氯丁醇、苯扎氯铵等;等渗剂的实例包括氯化钠和葡萄糖;缓冲剂包括磷酸盐和柠檬酸盐。
本申请组合物还可以制备成无菌的冻干粉针剂,将化合物溶于磷酸钠缓冲溶液,其中含有葡萄糖或其他适合的赋形剂,随后在本领域技术人员已知的标准条件下将溶液无菌过滤,继之以冷冻干燥,得到所需的制剂。
本申请提供的上述酰胺类化合物制备工艺简单,原料易得,适合工业化大规模生产,并且经体外实验验证,本申请化合物具有高效抑制小胶质细胞分泌IL-1β的作用,IC50均达到nM水平。
具体实施方式
本申请提供的化合物可以通过多种制备方法来合成,实施例中仅提供了合成这些化合物的代表性方法。这里要说明的是,不管以何种方式开发的本申请化合物的游离酸和/或碱形式,还是盐的形式,均属于本申请的范围。具体实施例的目的是进一步说明本申请内容但不意味着对本申请进行限制。
本申请具体实施例中使用的原料3-氯-4-甲基-6-苯基哒嗪根据国际申请WO2007127375中公开的方法制备,4-氯-2-苯基喹唑啉根据国际申请WO2008023357中公开的方法制备,所使用的其他初始原料、反应试剂等若无特殊说明均为市售产品。
实施例1(4-(4-氟苯基)哌嗪基)(4-甲基-6-苯基哒嗪)甲酮(化合物4)的制备
(1)3-氰基-4-甲基-6-苯基哒嗪(化合物2)的制备
于50mL耐压反应管中加入1.25g(6.1mol)3-氯-4-甲基-6-苯基哒嗪,0.99g(11.0mol)氰化亚铜和20mL吡啶,130℃下反应24小时,冷却,过滤,滤饼用50mL乙酸乙酯洗涤3次,有机相用100mL 1N HCl洗两次,再用无水硫酸钠干燥,浓缩得到棕色固体化合物2粗品,该粗品不经纯化,可以直接用于下一步反应,MS:196.0(M+H+)。
(2)3-羧基-4-甲基-6-苯基哒嗪(化合物3)的制备
将实施例1中制备得到的化合物2加入到20mL 8N的HCl溶液中,加热回流4小时,冷却后用饱和碳酸氢钠中和使之变成钠盐,乙酸乙酯萃取2次,水相用稀盐酸调pH至2,再用乙酸乙酯萃取3次,无水硫酸钠干燥,浓缩得到0.59g淡黄色固体化合物3,收率55%,MS:213.0(M-H+)。
(4)目标化合物(化合物4)的制备
于50ml圆底烧瓶中,加入0.40g(1.87mol)化合物3和20ml干燥的二氯甲烷,再依次加入0.30g(2.24mol)HOBt,0.43g(2.24mol)EDC盐酸盐,0.23g三乙胺和0.34g(1.87mol)1-(4-氟苯基)哌嗪。混合物于室温下搅拌18h,然后旋转蒸发除去二氯甲烷,所得油状物用100ml乙酸乙酯和50ml饱和碳酸氢钠饱和溶液进行萃取,有机层相经无水硫酸钠干燥、浓缩,柱层析,得到白色固体状化合物40.49g,69%。
1H-NMR(400MH,CDCl3)δ8.10-8.12(m,2H),7.77(s,2H),7.53-7.57(m,3H),6.97-7.01(m,2H),6.89-6.93(m,2H),4.06(t,J=4.8Hz,2H),3.59(t,J=4.8Hz,2H),3.14(t,J=4.8Hz,2H),2.49(s,3H);MS:377.2(M+H+)。
实施例2(4-(2,4-二氟苯基)哌嗪基)(4-甲基-6-苯基哒嗪)甲酮(化合物4a)的制备
以1-(2,4-二氟苯基)哌嗪和3-羧基-4-甲基-6-苯基哒嗪为原料,参考实施例1中化合物4的合成方法,制备得到化合物4a。
1H-NMR(400MH,CDCl3)δ8.08-8.09(m,2H),7.76(s,1H),7.51-7.55(m,3H),6.91-6.93(m,1H),6.81-6.85(m,2H),4.06(t,J=4.8Hz,2H),3.58(t,J=4.8Hz,2H),3.17(t,J=4.8Hz,2H),3.07(t,J=4.8Hz,2H),2.48(s,3H);MS:395.1(M+H+),417.1(M+Na+)。
实施例3(2-嘧啶哌嗪基)(4-甲基-6-苯基哒嗪)甲酮(化合物5)的制备
以1-(2-嘧啶基)哌嗪和3-羧基-4-甲基-6-苯基哒嗪为原料,参考实施例1中化合物4的合成方法,制备得到化合物5。
1H-NMR(400MH,CDCl3)δ8.32(d,J=4.4Hz,2H),8.08-8.11(m,2H),7.77(s,1H),7.51-7.54(m,3H),6.54(t,J=4.8Hz,1H),4.03(m,2H),3.97(m,2H),3.90(m,2H),3.50(m,2H),2.48(s,3H);MS:m/e 361.1(M+H+),383.1(M+Na+).
实施例4(2-吡啶哌嗪基)(4-甲基-6-苯基哒嗪)甲酮(化合物6)的制备
以1-(2-吡啶基)哌嗪和3-羧基-4-甲基-6-苯基哒嗪为原料,参考实施例1中化合物4的合成方法,制备得到化合物6,淡黄色固体,收率64%。
1H-NMR(400MH,CDCl3)δ8.19(d,J=1.2Hz,2H),8.08-8.11(m,2H),7.76(s,1H),7.49-7.56(m,4H),6.68(m,1H),4.02(m,2H),3.74(m,2H),3.63(m,2H),3.55(m,2H),2.48(s,3H).MS:m/e 360.1(M+H+),382.1(M+Na+).
实施例5(4-(4-氟苯基)哌嗪基)(2-苯基喹唑啉)甲酮(化合物11)的制备
(1)4-氰基-2-苯基喹唑啉(化合物9)的制备
于48mL反应管中加入1.00g(4.15mol)4-氯-2-苯基喹唑啉,0.40g(6.23mol)氰化钾,0.27g(1.38mol)对甲基苯磺酸钠和20mL N,N-二甲基甲酰胺,混合物在80℃反应2小时,冷却,加入50mL水搅拌,用150mL乙醚萃取,有机相经无水硫酸钠干燥,浓缩得到化合物9的棕色固体粗品,MS:232.0(M+H+)。
(2)2-苯基-4-喹唑啉甲酸(化合物10)的制备
于50mL圆底烧瓶中加入化合物9和20mL 8mol/L的HCl溶液,加热回流4小时后,冷却,用饱和碳酸氢钠中和使之变成钠盐,乙酸乙酯萃取2次,所得水相用经稀盐酸调pH值至2,再用乙酸乙酯萃取3次,有机相经无水硫酸钠干燥、浓缩后得到化合物10的淡黄色固体粗品(0.75g,70%),MS:249.0(M-H-)。
(3)目标化合物(化合物11)的制备
以化合物10和1-(4-氟苯基)哌嗪为原料,参考实施例1中化合物4的合成方法,制备得到化合物11的淡黄色固体,收率20%。
1H-NMR(400MH,CDCl3)δ8.62-8.64(m,2H),8.14(d,J=8.4Hz,1H),8.04(d,J=8.0Hz,1H),7.93(t,J=8.0Hz,1H),7.62(t,J=8.0Hz,1H),7.52-7.55(m,3H),6.98(t,J=8.8Hz,1H),6.88-6.91(m,2H),4.14(t,J=4.8Hz,2H),3.52(t,J=4.8Hz,2H),3.32(t,J=4.8Hz,2H),3.08(t,J=4.8Hz,2H);MS:413.1(M+H+),435.1(M+Na+)。
实施例6(4-(5-氟嘧啶-2-基)哌嗪基)(2-苯基喹唑啉)甲酮(化合物12)的制备
以化合物10和4-(5-氟嘧啶-2-基)哌嗪为原料,参考实施例1中化合物4的合成方法,制备得到化合物12的淡黄色固体,收率82%。
1H-NMR(400MH,CDCl3)δ8.61-8.64(m,2H),8.22(s,2H),8.14(d,J=8.4Hz,1H),8.04(d,J=8.4Hz,1H),7.94(t,J=8.0Hz,1H),7.62(t,J=8.0Hz,1H),7.52-7.55(m,3H),4.04-4.14(m,4H),3.82(t,J=5.2Hz,2H),3.44(t,J=5.2Hz,2H);MS:415.1(M+H+),437.1(M+Na+)。
实施例7(4-(嘧啶-2-基)哌嗪基)(2-苯基喹唑啉)甲酮(化合物12a)的制备
以化合物10和4-(嘧啶-2-基)哌嗪为原料,参考实施例1中化合物4的合成方法,制备得到化合物12。
1H-NMR(400MH,CDCl3)δ8.61-8.64(m,2H),8.32(m,2H),8.14(d,J=8.4Hz,1H),8.05(d,J=8.0Hz,1H),7.93(t,J=7.2Hz,1H),7.62(t,J=7.2Hz,1H),7.51-7.54(m,3H),6.55(t,J=4.4Hz,1H),4.05-4.12(m,4H),3.87(t,J=5.2Hz,2H),3.44(t,J=5.2Hz,2H);MS:397.1(M+H+),419.1(M+Na+)。
实施例8(4-(2-吡啶基)哌嗪基)(2-苯基喹唑啉)甲酮(化合物13)的制备
以化合物10和4-(2-吡啶基)哌嗪为原料,参考实施例1中化合物4的合成方法,制备得到化合物13的淡黄色固体,收率82%。
1H-NMR(400MH,CDCl3)δ8.62-8.64(m,2H),8.20(d,J=3.6Hz,2H),8.14(d,J=8.4Hz,1H),8.04(d,J=8.4Hz,1H),7.93(t,J=8.0Hz,1H),7.61(t,J=5.4Hz,1H),7.48-7.53(m,4H),6.65-6.69(m,2H),4.08-4.14(m,2H),3.78-3.80(m,2H),3.51-3.59(m,2H),3.46-3.49(m,2H);MS:369.2(M+H+),418.2(M+Na+)。
实施例9(4-(4-氟苯基)哌嗪基)(吡咯-2-基)甲酮(化合物14)的制备
以4-(4-氟苯基)哌嗪和吡咯-2-甲酸为原料,参考实施例1中化合物4的合成方法,制备得到化合物14的白色固体,收率75%。
1H-NMR(400MH,CDCl3)δ10.15(bs,1H),6.96-7.02(m,2H),6.86-6.95(m,3H),6.56(t,J=2.0Hz,1H),6.26(q,J=2.4Hz,1H),4.01(t,J=3.6Hz,4H),3.14-3.19(m,4H);MS:274.1(M+H+)。
实施例10(4-(4-氟苯基)哌嗪基)(噻吩-2-基)甲酮(化合物15)的制备
以4-(4-氟苯基)哌嗪和噻吩-2-甲酸为原料,参考实施例1中化合物4的合成方法,制备得到化合物15的白色固体,收率15%。
1H-NMR(400MH,CDCl3)δ7.65(d,J=4.8Hz,1H),7.43(d,J=5.4Hz,1H),7.12(t,J=4.0Hz,1H),7.01-7.03(m,4H),3.86(t,J=4.8Hz,4H),3.18(t,J=4.8Hz,4H);MS:291.0(M+H+)。
实施例11(4-(嘧啶-2-基)哌嗪基)(吲唑-3-基)甲酮(化合物17)的制备
以4-(嘧啶-2-基)哌嗪和吲唑-3-甲酸为原料,参考实施例1中化合物4的合成方法,制备得到化合物17,白色固体,收率40%。
1H-NMR(400MH,CDCl3)δ13.56(s,1H),8.40(d,J=4.8Hz,2H),8.01(d,J=8.4Hz,1H),7.62(d,J=8.0Hz,1H),7.42(t,J=7.6Hz,1H),7.22(t,J=7.6Hz,1H),6.66(t,J=4.8Hz,1H),4.11(bs,1H),3.83-3.84(m,6H);MS:308.1(M+H+)。
实施例12(4-(4-氟苯基)哌嗪基)(吲唑-3-基)甲酮(化合物18)的制备
以4-(4-氟苯基)哌嗪和吲唑-3-甲酸为原料,参考实施例1中化合物4的合成方法,制备得到化合物18,白色固体,收率74%。
1H-NMR(400MH,CDCl3)δ8.34(d,J=8.0Hz,1H),7.81-7.87(m,1H),7.63-7.67(m,1H),7.45-7.50(m,1H),7.19-7.28(m,4H),4.60(bs,2H),4.25(bs,2H),3.53(bs,4H);MS:323.1(M+H+)。
实施例13(4-(4-氟苯基)哌嗪基)(5-氟吲唑-3-基)甲酮(化合物19)的制备
以4-(4-氟苯基)哌嗪和5-氟吲唑-3-甲酸为原料,参考实施例1中化合物4的合成方法,制备得到化合物19,淡黄色固体,收率45%。
1H-NMR(400MH,CDCl3)δ10.49(bs,1H),7.84(d,J=4.4Hz,1H),7.44-7.48(m,1H),7.20-7.26(m,1H),6.92-7.01(m,4H),4.30(bs,2H),4.30(bs,2H),3.20(bs,4H);MS:343.1(M+H+)。
实施例14(4-(4-氟苯基)哌嗪基)(4,7-二氟吲唑-3-基)甲酮(化合物20)的制备
以4-(4-氟苯基)哌嗪和4,7-二氟吲唑-3-甲酸为原料,参考实施例1中化合物4的合成方法,制备得到化合物20,淡黄色固体,收率66%。
1H-NMR(400MH,CH3OD)δ7.00-7.12(m,5H),7.78(bs,1H),4.00(bs,2H),3.74(bs,2H),3.23(bs,2H),3.10(bs,2H);MS:343.1(M+H+)。
实施例15(4-(4-氟苯基)哌嗪基)(5-氯吲唑-3-基)甲酮(化合物21)的制备
以4-(4-氟苯基)哌嗪和5-氯吲唑-3-甲酸为原料,参考实施例1中化合物4的合成方法,制备得到化合物21,淡黄色固体,收率51%。
1H-NMR(400MH,D2O)δ7.29-7.33(m,3H),7.11-7.16(m,4H),3.20(m,8H);MS:357.0/359.0(3/1)(M-H-)。
实施例16(4-(2-嘧啶基)哌嗪基)(5-异丙基吡唑-3-基)甲酮(化合物22)的制备
以4-(2-嘧啶基)哌嗪和5-异丙基吡唑-3-甲酸为原料,参考实施例1中化合物4的合成方法,制备得到化合物22,白色固体,收率29%。
1H-NMR(400MH,CDCl3)δ6.95-7.18(m,2H),6.88-6.91(m,2H),6.46(s,1H),4.13(bs,2H),3.15(bs,4H),2.74-2.79(m,1H),1.31(d,J=6.8Hz,6H),MS:317.1(M+H+)。
实施例17(4-(4-氟苯基)哌嗪基)(5-异丙基吡唑-3-基)甲酮(化合物23)的制备
以4-(4-氟苯基)哌嗪和5-异丙基吡唑-3-甲酸为原料,参考实施例1中化合物4的合成方法,制备得到化合物23,淡黄色固体,收率45%。
1H-NMR(400MH,CDCl3)δ11.15(bs,1H),8.32(t,J=4.0Hz,2H),6.52(d,J=4.0Hz,1H),6.45(s,1H),4.07(bs,2H),3.90(bs,6H),3.00(t,J=7.2Hz,1H),1.31(d,J=6.8Hz,6H),1.29(d,J=6.4Hz,6H);MS:317.1(M+H+)。
实施例18(4-吡啶氨基)(4-甲基-6-苯基哒嗪)甲酮(化合物29)的制备
以4-氨基吡啶和3-羧基-4-甲基-6-苯基哒嗪(化合物3)为原料,参考实施例1中化合物4的合成方法,制备化合物29,具体方法如下。
于50ml圆底烧瓶中,加入0.40g(1.87mol)化合物3和20ml干燥的二氯甲烷,再依次加入0.30g(2.24mol)HOBt,0.43g(2.24mol)EDC盐酸盐,0.23g三乙胺和0.18g(1.87mol)4-氨基吡啶。混合物于室温下搅拌18h,然后旋转蒸发除去二氯甲烷,所得油状物用100ml乙酸乙酯和50ml饱和碳酸氢钠饱和溶液进行萃取,有机层相经无水硫酸钠干燥、浓缩,柱层析,得到化合物29,白色固体,收率25%。
1H NMR(CDCl3):δ10.47(bs,1H),8.58(d,J=6.4Hz,2H),8.14(dd,J=4.4Hz,J=2.0Hz,2H),7.83(s,1H),7.69(d,J=6.4Hz,2H),7.56(m,3H),2.90(s,3H).MS(ESI):[M+H]+291.1.
实施例19(乙醇胺基)(4-甲基-6-苯基哒嗪)甲酮(化合物30)的制备
以乙醇胺和3-羧基-4-甲基-6-苯基哒嗪(化合物3)为原料,参考实施例1中化合物4的合成方法,制备得到化合物30,白色固体,收率78%。
1H NMR(CDCl3):δ8.63(bs,1H),8.09(m,2H),7.74(s,1H),7.53(m,3H),3.90(m,2H),3.68(m,2H),2.81(s,3H),2.78(m,1H).MS(ESI):[M+H]+258.1.
实施例20(环丙甲胺基)(4-甲基-6-苯基哒嗪)甲酮(化合物31)的制备
以环丙甲胺和3-羧基-4-甲基-6-苯基哒嗪(化合物3)为原料,参考实施例1中化合物4的合成方法,制备得到化合物31,淡黄色固体,收率75%。
1H NMR(CDCl3):δ8.38(bs,1H),8.12(m,2H),7.75(s,1H),7.53(m,3H),3.36(t,J=6.4Hz,2H),2.83(s,3H),1.08(m,1H),0.56(m,2H),0.32(m,2H).MS(ESI):[M+H]+268.1.
实施例21(环己胺基)(4-甲基-6-苯基哒嗪)甲酮(化合物32)的制备
以环己胺和3-羧基-4-甲基-6-苯基哒嗪(化合物3)为原料,参考实施例1中化合物4的合成方法,制备得到化合物32,白色固体,收率72%。
1H NMR(CDCl3):δ8.21(d,J=7.2Hz,1H),8.12(m,2H),7.75(s,1H),7.53(m,3H),3.99(m,1H),2.83(s,3H),2.05(m,2H),1.80(m,2H),1.66(m,1H),1.32(m,5H).MS(ESI):[M+H]+296.1.
实施例22(金刚乙胺基)(4-甲基-6-苯基哒嗪)甲酮(化合物33)的制备
以金刚乙胺和3-羧基-4-甲基-6-苯基哒嗪(化合物3)为原料,参考实施例1中化合物4的合成方法,制备得到化合物33,淡黄色固体,收率85%。
1H NMR(CDCl3):δ8.25(d,J=10.0Hz,1H),8.12(m,2H),7.75(s,1H),7.53(m,3H),3.94(m,1H),2.83(s,3H),2.00(s,3H),1.66(m,12H),1.17(d,J=6.8Hz,3H).MS(ESI):[M+H]+376.2,[M+Na]+398.1.
实施例23(金刚乙胺基)(2-苯基喹唑啉)甲酮(化合物39)的制备
以2-苯基-4-喹唑啉甲酸(化合物10)和金刚乙胺为原料,参考实施例1中化合物4的合成方法,制备得到化合物39的白色固体,收率85%。
1H NMR(CDCl3):δ9.47(d,J=8.4Hz,1H),8.60(m,2H),8.33(d,J=10.0Hz,1H),8.12(d,J=8.4Hz,1H),7.93(t,J=7.2Hz,1H),7.64(t,J=7.6Hz,1H),7.57(m,3H),3.97(m,1H),2.06(s,3H),1.75(m,1H),1.24(d,J=6.8Hz,1H).MS(ESI):[M+H]+412.2.
实施例24(环丙甲胺基)(2-苯基喹唑啉)甲酮(化合物40)的制备
以2-苯基-4-喹唑啉甲酸(化合物10)和环丙甲胺为原料,参考实施例1中化合物4的合成方法,制备得到化合物40的淡黄色固体,收率52%。
1H NMR(CDCl3):δ9.43(d,J=8.4Hz,1H),8.60(m,2H),8.34(bs,1H),8.12(d,J=8.4Hz,1H),7.93(t,J=7.6Hz,1H),7.64(t,J=7.6Hz,1H),7.57(m,3H),3.46(t,J=6.0Hz,2H),1.18(m,1H),0.64(d,J=4.8Hz,1H),0.39(d,J=4.8Hz,1H).MS(ESI):[M+H]+304.1.
实施例25(乙醇胺基)(2-苯基喹唑啉)甲酮(化合物41)的制备
以2-苯基-4-喹唑啉甲酸(化合物10)和乙醇胺为原料,参考实施例1中化合物4的合成方法,制备得到化合物41的白色固体,收率68%。
1H NMR(CDCl3):δ9.36(d,J=8.4Hz,1H),8.67(bs,1H),8.55(m,2H),8.09(d,J=8.4Hz,1H),7.91(dt,J=1.6Hz,J=7.2Hz,1H),7.64(dt,J=1.6Hz,J=7.2Hz,1H),7.54(m,3H),3.95(q,J=4.8Hz,2H),3.83(q,J=4.8Hz,2H),2.70(t,J=5.6Hz,1H).MS(ESI):[M+H]+294.1.
实施例26体外活性测定
本申请化合物的活性测试采用本领域中已知的方法来测定,所使用的测试化合物采用上述实施例中公开的方法制备,根据候选化合物专一抑制小胶质细胞分泌IL-1β的效率来评估其潜在的应用价值。
研究表明小胶质细胞是中枢神经系统受损伤后最早发生反应的细胞类型,中枢神经系统的多种病理状态均可激活小胶质细胞,例如创伤、脑中风、炎症反应和神经退行性疾病等。激活后的小胶质细胞参与多种神经系统疾病的病理过程,例如,激活后的小胶质细胞通过释放自由基可以引起运动神经元的损伤。在帕金森氏病患者和帕金森氏病动物模型中除了黑质致密部大量多巴胺能神经元坏死外,还有大量的小胶质细胞的增值,这些激活的小胶质细胞可以产生大量的超氧自由基,超氧自由基被认为是造成帕金森氏病患者脑中多巴胺能神经元坏死的氧化应激的主要原因。在阿尔兹海默氏病(AD)患者大脑的老年斑周围有大量激活的小胶质细胞,这些小胶质细胞通过释放细胞因子可以诱导神经元和星形胶质细胞表达淀粉样前体蛋白(APP),淀粉样前体蛋白的大量沉积是造成AD的重要原因。诸多证据表明,神经细胞的凋亡与小胶质细胞的活化密切相关,β淀粉样蛋白激活小胶质细胞介导的免疫炎症反应能引起AD特有的细胞凋亡和认知功能障碍。激活的小胶质细胞释放的TNF-α等炎性因子可以损伤少突胶质细胞和髓鞘,引起多发性硬化(MS)。
此外,小胶质细胞的激活对神经病理性痛的产生和维持具有非常重要的作用。在疼痛刺激下小胶质细胞被激活,傅开元发现,[傅开元,外周炎症性疼痛刺激诱发中枢神经系统小胶质细胞增殖活化。中国神经免疫学和神经病学杂志2001,8:179~183.],外周炎症性致痛剂福尔马林刺激后,中枢小胶质细胞增殖活化,可能是慢性疼痛长期持续的原因之一。用药物(如fluorocitrate)抑制小胶质细胞功能,可产生明显的镇痛作用,提示胶质细胞的激活对神经病理性痛的产生和维持具有非常的相关性。
近年来研究发现癫痫患儿常同时存在免疫功能低下,小胶质细胞是中枢神经系统巨噬细胞,在脑内免疫炎症反应的启动、发展、转归过程中起着很重要的作用。小胶质细胞活化引起的星形胶质细胞变性坏死可能是癫痫重要的生理通路。
目前在一些神经炎症性疾病的治疗中,抑制小胶质细胞激活的药物研究越来越受到重视。中枢神经系统IL-1β的水平对于小胶质细胞由选择状态向完全活化状态的转变起着重要作用,因此我们根据候选化合物专一抑制小胶质细胞分泌IL-1β的效率来评估其潜在的应用价值。
实验方法:
1.鼠源小胶质细胞系BV2培养在含有10%FBS的DMEM培养基中,培养第6代至第15代的细胞用于候选化合物活性筛选。培养细胞按50000个细胞/孔接种于24孔细胞培养板,在培养1天后更换为低血清培养基(添加2%FBS)继续培养16小时。在培养基中加入300ng/ml(用于诱导BV2细胞)LPS(Salmonellatyphimutium)诱导培养细胞分泌IL-1β。按终浓度200pM,20nM,2μM和200μM加入待测样品(DMSO≤0.1%);向空白加入0.1%DMSO作为溶剂对照组。
2.LPS诱导/药物处理24小时后,收集培养液定量检测其中IL-1β水平。培养液样品于4℃离心(8000G)10分钟,除去培养液中的悬浮颗粒杂质。将上清液稀释1倍,取150μl样品用于ELISA(Biosoμrce)检测。
3.培养细胞处理和ELISA检测采用双盲法进行。
4.候选化合物抑制效率根据公式①计算,并计算每种候选化合物的IC50。
公式①:抑制率(%)=([IL-1β]LPS诱导-[IL-1β]药物处理)/[IL-1β]LPS诱导×100%。
实验结果:
表1:本申请化合物抑制BV2分泌IL-1β的IC50
组别 |
IC50 |
化合物29 |
56.55nM |
化合物30 |
0.25μM |
化合物31 |
0.48μM |
化合物32 |
49.91nM |
化合物33 |
58.28nM |
化合物39 |
7.66nM |
化合物40 |
12.4nM |
化合物41 |
29.32nM |
实验结果显示本发明化合物具有高效抑制BV2分泌IL-1β的作用,IC50达到nM水平。
本文将本说明书中提及的全部专利、专利申请出版物、专利申请、及非专利出版物的全部内容引入作为参考。