CN102369281B - 来源于sox2的hla-a24结合性癌抗原肽 - Google Patents

Abstract

本发明涉及能够诱导以癌细胞为靶标的细胞毒性T细胞的肽，由该肽诱导的CTL、含有该肽和/或该CTL的药物组合物，所述肽由来源于Sox2基因编码的多肽的氨基酸序列或该氨基酸序列中缺失、置换或添加1个或多个氨基酸而成的氨基酸序列构成，且由HLA-A24呈递抗原。进而，本发明涉及前述肽用于CTL诱导的用途。

Description

来源于SOX2的HLA-A24结合性癌抗原肽

技术领域

本发明涉及能够诱导以癌细胞为靶标的细胞毒性T细胞(CTL)的肽。

此外，本发明涉及含有前述肽的癌疫苗和抗癌剂。

进而，本发明涉及前述肽的用于诱导以癌细胞为靶标的CTL的用途、获得的CTL和含有前述CTL的抗癌剂。

背景技术

近年来免疫学和分子生物学的进步给肿瘤免疫的进步带来巨大影响。人发生流感病毒感染时对该感染建立免疫从而摆脱感染症这一现象可以通过以下细胞性免疫而说明。感染了流感病毒的上皮细胞在位于其细胞表面的主要组织适合抗原复合物HLA分子上呈递来源于病毒基因组的9～10的肽。呈递该HLA-病毒肽复合物的感染细胞引发了强烈的异源反应，感染细胞被存在于末梢血中的CD8阳性CTL特异性识别并积极排除。可以理解的是，该细胞性免疫的机理对于自身细胞肿瘤化而产生的癌细胞也同样起作用。这已由比利时的Thierry Boon等由恶性黑色素瘤分离出的肿瘤抗原MAGE基因得到证实(Van der Bruggen et al.、Science，254，1643-1647(1991))。

作为鉴定T细胞所识别的癌抗原的方法，已经开发出使用T细胞筛选来源于人癌的cDNA文库的方法，使用该方法分离出了前述MAGE基因。此后，被以恶性黑色素瘤为首的癌细胞的表面上的I类分子呈递并被T细胞识别的来源于癌的癌抗原肽，已经鉴定出多种，并已经使用这些中的几种开始了临床试验，并已获得一定成果。例如，对于由食道癌鉴定出的被癌患者的血清中存在的抗体识别的分子NY-ESO-1分子而言，已经获知其合成肽具有CTL诱导能力(Chen，YT.et al.，Proc.Natl.Acad.USA，94，1914-1918(1997)和Jager，E.et al.，J.Exp.Med.，187，265-270(1998))。

然而，就临床上占癌的大部分的大肠癌、胃癌、乳腺癌、肺癌、膀胱癌等上皮癌而言，癌抗原还基本未得到鉴定，尚未建立以癌抗原为靶标的免疫疗法。

已知性别决定Y区域转录因子2(Sex determinig Region Y-box2，Sox2)基因在胚胎期的中枢神经中表达，为与神经干细胞的自我复制相关的基因，还获知在恶性神经胶质瘤中大量表达。M.Schmitz等的报道公开了利用Sox2的HLA-A2限制性表位人为地诱导CTL，能够排除神经胶质瘤(非专利文献8)。

此外，近年的研究表明，Sox2基因在含有认为是癌的复发、转移的主要原因的癌干细胞的癌组织中也大量表达(非专利文献1～7)。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：中津川宗秀等，“癌幹細胞抗原分子としてのSOX2”，第12次基础性癌免疫研究会总会抄录，39页

非专利文献2：鸟越俊彦等，“Survivin2Bぺプチドワクチン臨床試験：From Bed to Bench”，日本临床免疫学会会志，Vol.31、No.4、244页

非专利文献3：高橋あかり等，“乳癌と肺癌の癌幹細胞抗原SOX2”，第88回北海道医学大会目录·抄录，17页

非专利文献4：佐藤升志、“ヒト癌幹細胞抗原解析と免疫応答”，第67回日本癌学会学术总会记事，82页

非专利文献5：浅沼广子等，“Basaloid乳癌は、高頻度に幹細胞マ一カ一を発現している”，第67回日本癌学会学术总会记事，177页

非专利文献6：高橋あかり等，“肺癌、乳癌、肉腫における癌幹細胞抗原の探索”，第67回日本癌学会学术总会记事，443页

非专利文献7：广桥良彦等，“肺癌干细胞的免疫学的評価”，第67回日本癌学会学术总会记事，440页

非专利文献：8 M.Schmitz et al.，British Journal of Cancer(2007)96，1293-1301

发明内容

发明要解决的问题

本发明的目的在于提供能够在癌的免疫疗法中使用的癌疫苗和抗癌剂。

解决问题的手段

本发明人等着眼于免疫学上人癌排斥主要由CTL、尤其是CD8(+)CTL承担。CD8(+)CTL识别由癌细胞上的主要组织适合抗原复合物(人类中为HLA)和被呈递到该HLA上的癌抗原肽构成的复合物，从而活化。然后，活化的CTL通过其细胞表面上的T细胞抗原受体介导而识别癌细胞，并攻击该癌细胞。因此，若能鉴定癌抗原肽、用其作为癌疫苗和抗癌剂，则能够高效地诱导CTL，并预防和治疗癌症。

SOX2是一种基因转录调节因子，即使是癌细胞中，表达水平也是在具有干细胞样特征的癌干细胞中特别高。SOX2在肺癌、肾癌等多种癌中表达，在正常组织中的表达仅限于胚性干细胞和神经干细胞等中。

本发明人等反复深入研究了各种来源于SOX2的肽的癌抗原性、即CTL诱导能力，结果发现SOX2基因编码的由317个氨基酸构成的氨基酸序列内具有HLA-A24结合基序，其中的特定的肽能够诱导CTL。基于这些发现完成了本发明。

即，本发明涉及一种能够诱导以癌细胞为靶标的细胞毒性T细胞的肽，该肽由来源于Sox2基因编码的多肽的氨基酸序列或该氨基酸序列中缺失、置换或添加1个或多个氨基酸而成的氨基酸序列构成，且由HLA-A24呈递抗原。

本发明此外涉及上述肽，该肽由序列号1、4～9和12所示的氨基酸序列或该氨基酸序列中缺失、置换或添加1个或多个氨基酸而成的序列构成。

本发明进而涉及由上述肽诱导的细胞毒性T细胞。

本发明进而还涉及编码上述肽的DNA。

此外，本发明涉及含有上述肽和/或上述细胞毒性T细胞和/或上述DNA的药物组合物。

本发明进而还涉及上述药物组合物，该药物组合物为癌疫苗。

本发明此外涉及上述药物组合物，该药物组合物为抗癌剂。

本发明进而涉及上述药物组合物，该药物组合物为DNA疫苗。

本发明进而还涉及上述肽的用于诱导以癌细胞为靶标的细胞毒性T细胞的用途。

发明效果

本发明的肽和改变了1～2氨基酸的改变肽，可以诱导损伤呈递本发明的肽的HLA-A24阳性SOX2阳性的癌细胞的CTL。HLA-A24的表达率，在欧美人中20～30％、在日本人中50％以上为阳性。因此，本发明的癌抗原肽能够作为对全世界各种种类的SOX2阳性的恶性肿瘤有用的癌疫苗和抗癌剂使用。

附图说明

图1是表示来源于SOX2多肽的肽的HLA-A24结合分析结果的图。将显示与用作阳性对照的肽同等程度或与其接近的MFI的肽鉴定为HLA-A24结合性肽。

图2是表示SOX2_109肽的细胞毒性分析结果的图。检测到对作为阴性对照的来源于HIV的肽具有显著大的细胞毒性。

图3是表示SOX2_109肽的酶联免疫斑点检测分析结果的图。在作为阴性对照的来源于HIV的肽中没有检测IFNγ的放出，但在SOX2_109肽中确定了IFNγ的放出。

图4是表示来源于SOX2的肽的酶联免疫斑点检测分析结果的图。图中sur2B表示阴性对照survivin2B添加组，(-)表示未添加肽的组。与SOX2_50和_58反应的CTL在所有患者中均未被诱导，与SOX2_124和_216反应的CTL在4名患者中被诱导。

图5的a)是表示对呈递来源于SOX2的肽抗原的T2-A24细胞的细胞毒性分析结果的图，b)是表示强制表达SOX的LHK2肺癌细胞和通常的LHK2细胞中的细胞毒性分析结果的图。

具体实施方式

以下详细说明本发明。

本发明的肽的鉴定可以通过包含以下步骤的方法进行，

(1)提供来源于SOX2多肽的、具有与人主要组织适合抗原复合物(MHC)I类中的HLA-A24的结合基序对应的序列的肽的步骤、

(2)将前述肽添加到表达HLA-A24的抗原呈递细胞而获得由HLA-A24呈递前述肽的抗原呈递细胞的步骤、

(3)通过前述抗原呈递细胞刺激T细胞从而诱导CTL的步骤、和

(4)测定被诱导的CTL的癌细胞毒性能力的步骤。

本发明的肽由于氨基酸数为10，比较小，因此可以通过通常的氨基酸化学合成法、例如Fmoc法而合成。也可以使用市售的氨基酸合成装置合成。此外，本发明的肽由于是来源于在癌细胞内部表达的SOX2多肽，因此也可以根据文献(Suzuki，K.等，J.Immunol.，163，2783-2791(1999))所述的方法由癌患者的癌细胞分离细胞表面HLA结合肽而获得相应的肽。

本发明的肽中包括任意改变上述肽中的1个或多个氨基酸而得的肽。改变肽也能够诱导损伤由HLA-A24呈递来源于SOX2多肽的肽抗原的细胞的CTL。

根据本发明的肽，能够诱导以癌细胞为靶标的细胞毒性T细胞。为诱导而使用的表达HLA-A24的细胞可以是采自癌患者的细胞，也可以是在非HLA-A24表达细胞中导入了编码HLA-A24的基因而制作的细胞。

本发明的肽为来源于SOX2多肽的肽，只要能够诱导损伤由HLA-A24呈递抗原的细胞的CTL即可，在与HLA-A24具有一定程度的结合亲和性方面，优选序列号1、4～9和11所示的肽。

编码本发明的肽的DNA也包含在本发明中。编码本发明的肽的DNA只要是在被转录、翻译时产生本发明的肽即可，优选具有与Sox2基因序列中的编码本发明的肽部分的序列相同的序列的DNA。

在将本发明的肽或DNA用作药物组合物时，本发明的肽或DNA，可以以其自身或与辅剂一起使用，进而，还可以适当含有药学上可接受的载体。作为辅剂，可以列举出用于强化免疫应答的佐剂，例如弗氏不完全(完全)佐剂、铝佐剂、病毒被膜载体等。

作为药学上可接受的载体，可以列举出例如PBS、蒸馏水等稀释剂，生理盐水等。

以药物组合物形式使用的DNA，除了单独的DNA外，还包括重组了本发明DNA的构建载体。作为载体，只要是能够使本发明的DNA以药物组合物形式发挥作用者即可，可以根据该技术领域公知的技术适当采用适合于药物组合物的形态、目的的载体。作为载体，可以列举出例如质粒载体，来源于仙台病毒、逆转录病毒、牛痘病毒、腺病毒、腺病毒随伴病毒(Adeno-associatedvirus)、疱疹病毒、流感病毒等的病毒载体等，但并非仅限于此。

本发明的药物组合物可以以癌疫苗、抗癌剂或DNA疫苗等形态使用。本发明的癌疫苗、抗癌剂或DNA疫苗可以通过该技术领域公知的方法制成液剂、油剂、乳剂、软胶囊剂、硬胶囊剂、片剂、颗粒剂、固形剂等形态。

本发明的癌疫苗和抗癌剂可以根据其使用形态而经口、非经口或经皮投与。例如，可以列举出静注投与、肌肉注射投与、皮下投与、皮内投与等。投与量通常根据患者的体重、疾患的性质和状态而变化，在用于成人时，每天最多为5～10mg。例如，用于成人癌患者皮下注射时，每周为0.1～10mg，优选为100～1000μg。

此外，使用本发明的肽获得的CTL以癌细胞为靶标，因此可以将其用作抗癌剂。此时，与前述含有本发明肽的抗癌剂同样地，可以适当含有药学上可接受的载体，且可以采取各种形态。含有本发明的CTL的抗癌剂与含有本发明肽的癌疫苗和抗癌剂同样地可以非经口投与。

可以应用本发明的癌疫苗、抗癌剂和DNA疫苗的癌为由通过HLA-A24呈递本发明的肽的癌细胞构成的癌，例如上皮癌。上皮癌可以列举出肺癌、胃癌、大肠癌、膀胱癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌等。

此外，可以将本发明的肽用于诱导以癌细胞为靶标的CTL。诱导可以按照例如文献(Nabeta，Y.等，Jpn.J.Cancer Res，91，616-621(2000))所述的方法进行。

具体而言，可以使用包含以下步骤的方法，

(1)提供表达HLA-A24的细胞的步骤、

(2)在前述细胞中添加本发明的肽，将其呈递到HLA-A24上的步骤、

(3)用由HLA-A24呈递前述肽的细胞刺激T细胞，将前述T细胞诱导为癌细胞靶标CTL的步骤。

表达HLA-A24的细胞既可以是采自癌患者的细胞，也可以是在非HLA-A24表达细胞中导入了编码HLA-A24的基因而制作的细胞。

实施例

以下实施例是进一步具体说明本发明的，对本发明的范围没有任何限定作用。具有常规知识和技术的本领域技术人员可以在不脱离本发明的精神的范围内对下述实施例所示的方式进行多种改变，所述改变后的方式也包含在本发明中。

实施例1

来源于Sox2的肽的HLA-A24肽结合分析

Sox2的氨基酸序列示于序列号16中。已知的是，与HLA-A24结合的肽中，第2位氨基酸为酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸或甲硫氨酸，C末端的氨基酸为亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、苯丙氨酸或甲硫氨酸。从Sox2的氨基酸序列所含的序列中选择具有该HLA-A24结合基序的9～11个氨基酸的序列，合成以下共计13种肽。

SOX2_1：MYNMMETEL(序列号1)

SOX2_50：VWSRGQRRKM(序列号2)

SOX2_58：KMAQENPKM(序列号3)

SOX2_89：PFIDEAKRL(序列号4)

SOX2_109：KYRPRRKTKTL(序列号5)

SOX2_119：LMKKDKYTL(序列号6)

SOX2_124：KYTLPGGLL(序列号7)

SOX2_165：GWSNGSYSM(序列号8)

SOX2_170：SYSMMQDQL(序列号9)

SOX2_196：PMHRYDVSAL(序列号10)

SOX2_209：SMTSSQTYM(序列号11)

SOX2_216：YMNGSPTYSM(序列号12)

SOX2_226：SYSQQGTPGM(序列号13)

T2-A24细胞是在人成淋巴细胞样细胞T2细胞中导入并表达HLA-A2402基因的细胞株。该细胞的细胞表面表达低水平的HLA-A24分子，可以使用HLA-A24特异性单克隆抗体和流式细胞术检测。表达水平可以以平均荧光强度(MFI)进行定量。当在试管内对该细胞添加合成肽、添加的肽与HLA-A24分子结合时，细胞表面HLA-A24表达水平随着结合亲和性相应地增加。使用该实验体系，解析本发明的来源于SOX2的癌抗原肽的HLA-A24结合亲和性。

将T2-A24细胞在26℃下培养一晚。然后用PBS洗涤细胞，加入来源于SOX2的合成肽、作为阳性对照的来源于人获得性免疫缺陷肽即HIV肽(序列号14)、来源于爱泼斯坦-巴尔病毒的肽即EBV肽(序列号15)和作为阴性对照的来源于卵清白蛋白的肽即SL8肽(序列号17)，在26℃下共培养3小时。使温度为37℃，再共培养2.5小时，然后离心分离，除去上清，分离细胞。在分离出的细胞中加入HLA-A24抗体(C7709A2.6)，在4℃下静置1小时，然后用PBS洗涤。加入作为二抗的荧光标记抗小鼠IgG+IgM抗体，在4℃下静置30分钟后，加入1％福尔马林固定细胞。用流式细胞术(BD FACS Calibur)对固定后的细胞测定FITC荧光强度。

结果示于图1。将显示与阳性对照同等以及更强、或与其接近的荧光强度的8个SOX2肽判定为HLA-A24结合性肽。

实施例2

CTL诱导

从已经得到知情同意(informed consent)的HLA-A24阳性肺癌患者或HLA-A24阳性健康人的末梢血50ml中，通过在Ficoll-conray密度梯度中进行离心，从而分离并回收末梢血单核细胞(PBMC)。接着，使用CD8 MACS珠通过PBMC分离成CD8阳性淋巴细胞和CD8阴性淋巴细胞。

在96孔板中将200000个/孔的CD8阴性淋巴细胞和上述HLA-A24结合性SOX2肽分别混合，在室温下静置2小时后以100Gy量进行放射线处理。将处理后的细胞与20U/ml的IL-2(武田药品工业)、100000个/孔的CD8阳性淋巴细胞共培养，对CD8阳性淋巴细胞每周进行1次刺激，共计进行3次刺激，以诱导CTL。通过细胞毒性分析或酶联免疫斑点检测对诱导得到的CTL的肽特异性反应性进行评价。

实施例3

细胞毒性分析

在T2A24中加入Cr⁵¹，在RPMI培养基中于37℃培养1小时以进行放射线标记后，用RPMI培养基洗涤4次。在Cr标记的T2A24中混入SOX2肽或对照肽(HIV肽)，在室温下静置1小时。将用SOX2肽或对照肽施加脉冲的2000个/孔的T2A24、和实施例2中诱导的14000个/孔的CD8阳性淋巴细胞在RPMI培养基中于37℃下共培养4小时。然后回收上清，通过伽玛计数仪测定伽玛射线剂量。

另外将仅RPMI培养基和肽脉冲T2A24进行培养时的剂量作为自然放出(SPR)、将细胞溶解液(2％的NP40)和肽脉冲T2A24进行培养时的剂量作为最大放出(MXR)，以(测定值-SPR)/(MXR-SPR)×100来计算细胞毒性活性。

其结果，在用SOX2_109肽施加脉冲的T2A24中检测到特异性毒性的CTL。结果如图2所示。作为对照肽的来源于HIV的肽中几乎检测不到来源于损伤细胞的放射线，与此相对在SOX2_109肽中检测到大量放射线。

实施例4

酶联免疫斑点检测分析

实验使用Human IFNγ ELISPOT set(BD)来进行。将抗IFNγ抗体在ELISPOT板中于4℃下静置一晚，以进行包被。在T2A24中分别加入SOX2肽或对照肽(HIV肽)，于室温静置1小时。将施加50000个肽脉冲的T2A24、和实施例2中诱导的10000个CTL，在包被了抗IFNγ抗体的板中于37℃下共培养一晚。用1×PBS和0.05％的Tween20洗涤后，加入生物素标记抗IFNγ抗体，于室温静置2小时。用1×PBS和0.05％的Tween20洗涤后，加入HRP标记的链霉亲和素，于室温静置1小时。用1×PBS和0.05％的Tween20洗涤后，加入显色试剂，测定斑点数。

结果如图3所示。在用SOX2_109肽施加脉冲的T2A24中检测到特异性反应的CTL。作为对照肽的来源于HIV的肽中几乎检测不到T细胞放出的IFNγ，在SOX2_109肽中能确认放出了大量IFNγ。

实施例5

各来源于SOX2的肽的细胞毒性T细胞诱导能力比较

使用来源于6名HLA-A2402阳性的肺癌患者的末梢血。已经从所有患者得到知情同意。利用Lymphoprep(注册商标)(Nycomed公司，奥斯陆，挪威)按照常规密度梯度离心分离法分离PBMCs。

(1)CTL诱导

将上述分离得到的PBMCs按照1×10⁷PBMCs/孔的方式接种，用含有10％的混合人AB血清的AIM培养基(Life Technologies Corporation)培养。在pcDNA3.1质粒(Invitrogen)中插入编码全长SOX2的cDNA，将其包埋在包覆了甘露糖的脂质中(OML-SOX2，由BioMedCore Inc.制作)。第一天以0.1μg/mL或1μg/mL的浓度实施OML-SOX2脉冲，添加50U的IL-2培养1周。然后利用酶联免疫斑点检测(以下，称为“ELISPOT”)分析检测来源于SOX2的肽特异性CTLs。

(2)ELISPOT分析

按照已报道的方法(Tsuruma，T等，J.Transl.Med.，6：24(2008))通过IFNγ ELISPOT分析判定CTLs对前述来源于SOX2的肽的特异性。首先，在MULTI SCREEN96孔板(Millipore公司，贝德福德，马萨诸塞州)中以100μL/孔添加PBS中的5μg/mL的抗IFNγ捕捉抗体(Beckton Dickinson Biosciences)，于4℃无菌地静置一晚以进行包被。以200μL/孔洗涤一次板，使用200μL/孔的加入了10％人血清的AIM-V培养基，于室温下封闭2小时。对表达HLA-A24的C1R淋巴瘤的亚细胞株C1R-A24细胞，用10μg/mL的前述各SOX2肽和作为阴性对照的survivin2B肽进行脉冲后，将其作为抗原呈递细胞。然后，将5×10³个CTLs与5×10⁴个抗原呈递细胞C1R-A24细胞共培养。在37℃、5％CO₂下培养24小时后，用PBS将孔洗涤5次，与生物素化抗人IFN-γ抗体和辣根过氧化物酶结合生物素一起孵育。使用KS ELISPOT(Carl Zeiss)对形成的IFNγ斑点计数。

结果示于图4。表中的数字表示测得的斑点数。将测定到作为阴性对照的sur2B和(-)中数值高者的1.3倍以上的斑点数者判定为阳性。表的下部表示对各肽显示阳性的患者数。与SOX2_50和_58反应的CTL在所有患者中均未被诱导，认为其是抗原性最低的肽。与此相对地，与SOX2_124和_216反应的CTL在4名患者中被诱导，认为其是抗原性最高的肽。

实施例6

细胞毒性分析

(1)对呈递来源于SOX2的肽抗原的细胞的毒性

从实施例5的患者A的末梢血淋巴细胞中与实施例2同样地分离CD8阳性T细胞，在其他单核细胞中添加植物凝集素(PHA)使其母细胞化。对进行母细胞化的单核细胞照射放射线，以10μg/mL的浓度添加前述来源于SOX2的13种肽的混合物，添加50单位IL-2，与CD8阳性T细胞一起混合培养。每周进行3次同样的肽刺激，从第3次刺激起的5天后，以添加了T2-A24细胞、13种SOX2肽的混合物的T2-A24细胞(T2-A24-SOX2)和作为阴性对照的人红系白血病细胞(K562)为靶标，进行细胞毒性分析。

利用细胞毒性分析进行的细胞毒性测定通过⁵¹Cr放出分析而进行。将靶标细胞用100μCi的⁵¹Cr于37℃标记1小时，在RPMI1640培养基中洗涤3次。然后，将用⁵¹Cr标记的靶标细胞与效应细胞一起，以各种效应/靶标比率(E/T率)在37℃下于V底的96孔微量滴定板中孵育6小时。然后，采集上清，用计数器测定放射能。％特异性细胞溶解(细胞毒活性)与实施例3同样计算。

结果示于图5的a)。与来源于SOX2的肽和混合培养的CD8阳性T细胞特异性损伤添加了来源于SOX2的肽的T2-A24细胞。

(2)对SOX2表达细胞的毒性

与(1)同样地，以HLA-A24阳性LHK2肺癌细胞和导入了SOX2基因的LHK2细胞(LHK2-SOX2)为靶标，进行细胞毒性分析。

结果示于图5的b)。与来源于SOX2的肽混合培养的CD8阳性T细胞，与强制表达SOX2的LHK2细胞相比，显示出更高的细胞毒活性。

产业上利用的可能性

基于本发明的癌疫苗或抗癌剂，可以成为针对通过现有治疗方法难以治疗、预防的癌症的有效的治疗或预防手段。本发明有助于提高医疗水平、人类的福祉。

Claims (9)

1.一种能够诱导以HLA-A24阳性SOX2阳性的癌细胞为靶标的细胞毒性T细胞的肽，该肽由选自序列号5、7和12中的一种氨基酸序列构成，且由HLA-A24呈递抗原。

2.根据权利要求1所述的肽，所述肽由序列号5所示的氨基酸序列构成。

3.根据权利要求1所述的肽，所述肽由序列号7或12所示的氨基酸序列构成。

4.一种细胞毒性T细胞，由权利要求1～3中任意一项所述的肽诱导而得到。

5.一种DNA，编码权利要求1～3中任意一项所述的肽。

6.一种癌的免疫疗法用药物组合物，含有权利要求1～3中任意一项所述的肽和/或权利要求4所述的细胞毒性T细胞和/或权利要求5所述的DNA。

7.根据权利要求6所述的药物组合物，所述药物组合物为癌疫苗。

8.根据权利要求6所述的药物组合物，所述药物组合物为抗癌剂。

9.根据权利要求6所述的药物组合物，所述药物组合物为DNA疫苗。

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