CN102325769A

CN102325769A - 单卡波姆

Info

Publication number: CN102325769A
Application number: CN2009801569587A
Authority: CN
Inventors: S.J.布里克纳; M.E.弗拉纳甘; M.S.拉尔
Original assignee: Pfizer Inc
Current assignee: Pfizer Inc
Priority date: 2008-12-19
Filing date: 2009-12-07
Publication date: 2012-01-18
Also published as: US8252782B2; MX2011006541A; AU2009329169B2; US20100160281A1; TW201026696A; AU2009329169A1; AR074801A1; US8324198B1; CA2744756A1; IL213216A0; KR20110086742A; UY32336A; CA2744756C; SG171781A1; EP2379546A1; PA8855001A1; JP2012512863A; US20120289455A1; WO2010070523A1

Abstract

本发明涉及式(I)的化合物，其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵和R6如说明书所定义。本发明还涉及使用式(I)的化合物治疗细菌感染的药物组合物和方法。

Description

单卡波姆

技术领域

本发明涉及单卡波姆(monocarbam)化合物及其在动物(包括人类)中作为抗菌剂的应用。本发明还涉及制备化合物的方法、用于制备化合物的中间体以及含有化合物的药物组合物。本发明进一步包括通过对需要此治疗的受试者施用化合物或组合物来治疗疾病(如细菌感染)的方法。

背景技术

单卡波姆(monocarbams)是一类合成的单环β-内酰胺抗菌剂，作为其显著特征，其在N-1位具有取代的磺酰氨基羰基活化基团。该领域的早期研究由施贵宝医药研究所(Squibb Institute for Medical Research)的工作人员进行，见Cimarusti，C.M.& R.B.Sykes：Monocyclic β-lactamantibiotics.Med.Res.Rev.4：17～20，1984。先前在1988年9月7日公开的EP 0281289中也已讨论过单卡波姆。本文引用的这些和所有文件以其整体全部并入本文作为参考。

尽管不限于本发明，但据信本发明所述的单卡波姆通过使用铁载体(siderphore)-单酰胺菌素和铁载体-单卡波姆共轭物来使用铁摄取机制。B arbachyn，M.R.，Tuominen，T.C.：Synthesis And Structure-ActivityRelationships of Monocarbams Leading to U-78608，Journal of AntibioticsVol.XLIII No.9：1199-1203，1990。因此，尽管本发明不受任何理论束缚或限制，但是至少概括而言，单卡波姆的活性和作用机理通常是已知的。

对新型抗生素如单卡波姆存在持续的需求，以适应越来越多的耐药性生物出现以及提高安全性，及其它原因。

发明内容

本发明涉及某些式(I)的化合物、其制备以及有用的中间体、其药物组合物以及以其治疗和预防细菌感染的方法。在很多实施方式中，所述化合物对于耐其它抗生素的生物是有活性且有效的。

具体而言，本发明涉及式(I)的化合物：

或其可药用盐；其中

R¹是被1至3个选自卤素、羟基、(C₁-C₆)烷氧基、-NR⁷R⁸、-C(＝O)NR⁷R⁸和3-7元杂环基团的取代基取代的(C₁-C₆)烷基，其中R⁷和R⁸独立地为氢或(C₁-C₆)烷基，其中所述杂环基团含有1至3个独立地选自O、N或S的杂原子；

R²是氢或甲基；

R³是氢或甲基；

R⁴是氢、氘或者被1至3个独立地选自F或Cl的取代基任选取代的甲基；

R⁵是氢、氘或者被1至3个独立地选自F或Cl的取代基任选取代的甲基；

R⁶是H或-C(＝O)OH；且

X是C(H)、C(F)、C(Cl)或N。

在一个实施方式中，所述式(I)的化合物具有式(IA)：

或其可药用盐。在一个实施方式中，R⁴是被1至3个选自F或Cl的取代基任选取代的甲基。在另一实施方式中，R⁴是氢。在另一实施方式中，R⁵是被1至3个选自F或Cl的取代基任选取代的甲基。在另一实施方式中，R⁵是氢。在另一实施方式中，R⁶是-C(＝O)OH。在另一实施方式中，R⁶是氢。在另一实施方式中，X是C(F)。在另一实施方式中，X是C(H)。

在另一实施方式中，X是C(Cl)。在另一实施方式中，X是N。在另一实施方式中，R²是氢。在另一实施方式中，R²是甲基。在另一实施方式中，R³是氢。在另一实施方式中，R³是甲基。

在又一实施方式中，R²是氢；R³是氢；R⁴是甲基；R⁵是甲基；R⁶是-C(＝O)OH；且X是C(H)。在另一实施方式中，另外，R¹是被1至3个选自卤素、羟基、-NH₂、-C(＝O)NH₂和3-7元杂环基团的取代基取代的(C₁-C₆)烷基，其中所述杂环基团含有1至3个独立地选自O、N或S的杂原子。可选地，在另一实施方式中，R¹是被1至3个卤素取代的(C₁-C₆)烷基。可选地，在另一实施方式中，R¹是被1至3个羟基取代的(C₁-C₆)烷基。可选地，在另一实施方式中，R¹是被1至3个NH₂取代的(C₁-C₆)烷基。可选地，在另一实施方式中，R¹是被-C(＝O)NH₂取代的(C₁-C₆)烷基。可选地，在另一实施方式中，R¹是3-7元杂环基团，其中所述杂环基团含有1至3个独立地选自O、N或S的杂原子。

在一个具体实施方式中，本发明是：

或其可药用盐。

在另一具体实施方式中，本发明是：

或其可药用盐。

在另一具体实施方式中，本发明是：

或其可药用盐。

在另一具体实施方式中，本发明是：

或其可药用盐。

在另一具体实施方式中，本发明是：

或其可药用盐。

在另一实施方式中，式I的化合物具有式(IB)：

或其可药用盐，其中R¹选自：

在一个实施方式中，本发明是式(IB)的化合物及其可药用盐，其中R¹选自：

在另一实施方式中，本发明是式(IB)的化合物及其可药用盐，其中R¹选自：

在一个实施方式中，本发明化合物的可药用盐是钾盐或钠盐。

在一个实施方式中，本发明化合物的可药用盐是二钾盐或二钠盐。

在另一实施方式中，本发明是包含上述化合物或其可药用盐以及可药用载体的药物组合物。

在另一实施方式中，本发明是用于治疗哺乳动物的细菌感染的方法，包括向所述哺乳动物施用有效治疗细菌感染的量的式(I)的化合物或其可药用盐。在一个具体实施方式中，细菌感染是耐药性的(resistant)或易感的(susceptible)。在另一具体实施方式中，细菌感染是MDR(多重耐药的)。在一个实施方式中，细菌感染选自呼吸道感染、囊性纤维变性患者的肺感染、复杂性泌尿道感染、烧伤感染、创伤感染、血液感染、复杂性皮肤和软组织感染、指甲感染(nail infections)、耳部感染(ear infections)、医疗器械引起的感染、导管引起的感染、医院性肺炎、呼吸器相关性肺炎(VAP)、社会获得性肺炎(CAP)、菌血症、热浴池皮疹(hot-tub rash)(皮炎)以及人类放射状角膜切开术的术后感染。在另一实施方式中，细菌感染选自医院性肺炎、呼吸器相关性肺炎(VAP)、复杂性UTI(泌尿道感染)、复杂性皮肤及皮肤结构和菌血症。在另一实施方式中，细菌感染是烧伤感染(burn infection)。在另一实施方式中，细菌感染是囊性纤维变性患者的肺感染。

本发明还涉及治疗由铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、大肠杆菌(Escherichia coli)、克雷白杆菌属(Klebsiella species)或不动杆菌属(Acinetobacter species)引起的感染的方法，包括向有此需要的哺乳动物受试者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其可药用盐。在一个具体实施方式中，感染由铜绿假单胞菌引起。

本发明还涉及治疗由对多利培南(doripenem)、美罗培南(meropenem)或呱拉西林(piperacillin)有耐药性的铜绿假单胞菌引起的感染的方法，包括向有此需要的哺乳动物受试者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其可药用盐。

本发明还涉及一种组合物，其包含式(I)的化合物或其可药用盐以及选自β-内酰胺、氨基糖苷、多粘菌素、青霉素和林可酰胺的其它抗菌剂。在一个实施方式中，其它抗菌剂是选自头孢菌素、碳青霉烯和β-内酰胺酶抑制剂的β-内酰胺或β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂组合。在另一实施方式中，其它抗菌剂选自克林霉素(clindamycin)、甲硝唑(metronidazole)、亚胺培南(imipenem)、美罗培南(meropenem)、多利培南(doripenem)、厄他培南(ertapenem)、头孢替坦(cefotetan)、头孢吡肟(cefepime)和头孢匹罗(cefpirome)或第三代头孢霉素。在一个具体实施方式中，其它抗菌剂是头孢吡肟。在另一实施方式中，其它抗菌剂是美罗培南。在所述组合物的另一实施方式中，所述化合物是：

或其可药用盐。在所述组合物的另一实施方式中，所述化合物是：

或其可药用盐。

在另一实施方式中，所述组合物是上面显示的具体化合物之一而所述其它抗菌剂是头孢吡肟。

在另一实施方式中，所述组合物是上面显示的具体化合物之一而所述其它抗菌剂是美罗培南。

本发明还涉及分别包含式(I)的化合物或其可药用盐作为配体和铁(+3)阳离子的络合物或螯合物，其中配体与铁阳离子的比率为约1∶1至约3∶1。在一个实施方式中，该比例为约3∶1。

本发明包括治疗人或非人动物体例如以抗击或治疗(包括预防)细菌感染的方法，包括向受试者施用有益或有效量的本发明化合物，包括其生理上可接受的盐或溶剂合物，以及包括组合物。

本发明的化合物也可根据需要与其它有效成分结合以获得对一种以上病症或生物靶标的联合治疗。例如，本发明的化合物可与与其它抗感染药或者增加该抗感染药的功效或其它性质的药剂例如外流抑制剂相结合。

式(I)的化合物可用于治疗例如患有如细菌感染的病症的患者。

适于用本发明的式(I)化合物、药物组合物和方法治疗的细菌感染包括由下述细菌引起的那些：鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)、不动杆菌属(Acinetobacter spp.)、脆弱类杆菌(Bacteroides fragilis)、(Citrobacter diverus)、弗罗因德枸橼酸杆菌(Citrobacter freundii)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、大肠杆菌(Escherichia coli)、流感杆菌β-内酰胺酶阴性(Haemophilusinfluenzae β-lactamase negative)、流感杆菌β-内酰胺酶阳性(Haemophilus influenzae β-lactamase positive)、奥克西托克雷白杆菌(Klebsiella oxytoca)、克雷白肺炎杆菌(Klebsiella pneurnoniae)(包括编码广谱β-内酰胺酶的那些(下文称为″ESBLs″))、嗜肺性军团病杆菌(Legionella pneumophila)、粘膜炎莫拉菌β-内酰胺酶阴性(Moraxellacatarrhalis β-lactamase negative)、粘膜炎莫拉菌β-阳性(Moraxellacatarrhalis β-lactamase positive)、摩根氏菌(Morganella morganii)、脑膜炎双球菌(Neisseria meningitidis)、普氏杆菌属(Prevotella spp.)(以及表达ESBLs和AmpC-型β-内酰胺酶的肠杆菌科(Enterobacteriaceae)成员，其对目前可用的先锋霉素、头霉素以及β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂组合物产生耐药性)、奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)、铜绿假单胞菌、沙门菌(Salmonella)/志贺杆菌(Shigella)和粘质沙雷杆菌(Serratiamarcescens)。

在一个实施方式中，式(I)的化合物可用于治疗多种医院和社会获得性感染(hospital and community acquired infections)，诸如呼吸道感染(包括囊性纤维变性患者的肺感染)、复杂性泌尿道感染、烧伤感染、创伤感染、血液感染、复杂性皮肤及软组织感染、指甲及耳部感染、医疗器械引起的感染(例如，导管等)、医院性感染(包括呼吸器相关性肺炎(VAP))、社会获得性肺炎(CAP)、菌血症、“热浴池皮疹”(皮炎)和人类放射状角膜切开术中的术后感染(下文称为“感染”)。

在一个实施方式中，感染选自医院性感染、呼吸器相关性肺炎、复杂性泌尿道感染、复杂性皮肤及皮肤结构感染以及菌血症。

在一个实施方式中，本发明的组合物包含治疗有效量的本发明的式(I)的化合物。

本发明还涉及本发明的组合物，其包含一种或更多种式(I)的化合物和至少一种附加成分的任意组合(下文称为“本发明的组合物”)。

所述至少一种附加成分的非限定性实例包括杂质(例如，在未精炼的式(I)化合物中存在的中间体)、如下面讨论的活性或药物物质(例如，另一种抗菌剂)、可药用赋形剂或者一种或更多种溶剂(例如，如在本文中讨论的可药用载体)。

适于施用给有此需要的患者(例如，人类)的本发明的组合物在本文也被称为“本发明的药物组合物”。

本发明化合物(下文称为“活性化合物”)的施用可通过能够使该化合物递送至作用部位的任意方法完成。这些方法包括口服途径、十二指肠内途径、肠胃外注射(包括静脉、皮下、肌内、血管内或输注)、局部和直肠施用。在一个具体实施方式中，施用方法是静脉注射。

所述药物组合物例如可以是适合口服施用的形式，如片剂、胶囊、丸剂、粉剂、持续释放制剂、溶液、混悬液；适合肠胃外注射的形式，如灭菌溶液、混悬液或乳剂；适合局部施用的形式，如软膏或乳膏；或者适合直肠施用的形式，如栓剂。所述药物组合物可以是适合单次施用精确剂量的单位剂型。所述药物组合物包括常规药物载体或赋形剂和作为有效成分的根据本发明的化合物。另外，其可以包括其它药用或制药物质、载体、佐剂等。

示例性的肠胃外施用形式包括活性化合物在无菌水溶液如丙二醇水溶液或葡萄糖溶液中的溶液或混悬液。如果需要，可对这类剂型进行适当缓冲。

合适的药物载体包括惰性稀释剂或填料、水和各种有机溶剂。如果需要，所述药物组合物可含有附加成分，诸如香料、粘合剂、赋形剂等。因此，对于口服施用，含有各种赋形剂诸如柠檬酸的片剂可以与各种崩解剂诸如淀粉、褐藻酸和某些复合硅酸盐以及与粘合剂诸如蔗糖、明胶和阿拉伯胶一起使用。另外，润滑剂诸如硬脂酸镁、月桂基硫酸钠和滑石通常用于压片目的。相似类型的固体成分也可以用在软及硬胶囊中。因此，优选的材料包括乳糖(lactose或milk sugar)和高分子量聚乙烯。当口服施用需要水混悬液或酏剂时，其中的活性化合物可与各种甜味剂或香料、着色剂或染料以及(如果需要)乳化剂或悬浮剂并连同稀释剂诸如水、乙醇、丙二醇、甘油或其组合相结合。

制备各种具有特定数量的活性化合物的药物组合物的方法是已知的，或者对于本领域技术人员而言是显而易见的。例如，参加Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easter，Pa.，15th Edition(1975)。

待施用的式(I)化合物的最小量是治疗有效量。术语“治疗有效量”指预防哺乳动物例如人的细菌感染发作、减轻其症状、终止其进展和/或使其消除的化合物的量。

通常，本发明的式(I)化合物对于成年人的有效施用方案是单次剂量为约50mg至约3000mg的式(I)化合物；在另一实施方式中，有效单次剂量是约100mg至约2000mg。在另一实施方式中，有效单次剂量是约800mg至约1000mg。典型地，所述剂量每天给予1至4次。在一个实施方式中，所述剂量每天给予3次。在一些情况下，使用在这些范围之外的剂量可能是必需的。

本发明的式(I)化合物可与一种或更多种附加的药用或药物物质(“附加活性物质”)结合施用。式(I)化合物与附加活性物质相结合的此类应用可用于同时的、单独的或顺序的应用。

在一个实施方式中，所述附加活性物质是抗菌剂。

在一个实施方式中，所述抗菌剂是β-内酰胺。β-内酰胺的非限定性实例包括先锋霉素类(例如，头孢平、头孢他定、头孢匹罗、头孢妥仑匹酯

头孢呱酮、头孢他定、头孢地尼、头孢噻肟、头孢泊肟、头孢噻酚、头孢克洛或头孢克肟)、头霉素(例如，头孢替坦)、碳青霉烯类(例如，亚胺培南、美罗培南、厄他培南、多利培南)、β-内酰胺酶抑制剂和β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂组合，诸如舒巴克坦、克拉布兰酸、他佐巴坦和氧呱嗪青霉素与他佐巴坦

和sulopenum组合。

在另一实施方式中，所述抗菌剂可以选自氨基糖苷(例如，阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、奈替霉素、巴龙霉素、rhodostreptomycin、链霉素、妥布霉素、阿布拉霉素等)、多粘菌素(例如，多粘菌素B、粘菌素E)、氟喹诺酮(氟呱酸、氟呱酸、左氧氟沙星

莫西沙星

或依诺沙星)、青霉素(例如，阿莫西林、氨苄西林等)以及林可酰胺(例如，克林霉素、林可霉素等)。

在另一实施方式中，所述附加抗菌剂选自甲硝唑、糖肽(例如，万古霉素、达贝万星、特拉万星、奥利万星)、噁唑烷酮(例如，利奈唑胺)、脂肽(例如，达托霉素)和四环素类，包括甘氨酰环素类(gylcylcyclines)(例如，替格环素)。

附加抗菌剂的其它非限定性实例可见于Walsh and Wright，Chemical Reviews 105(2)：391-394(2005)；和Bush等，Current Opinionin Microbiology 7：466-476(2004)。

在一个实施方式中，所述附加抗菌剂与本发明的化合物或可药用盐结合使用以降低耐药性频率。实例包括头孢吡肟、头孢匹罗、亚胺培南、美罗培南、厄他培南、多利培南、硫培南、头孢他定、头孢他定/他佐巴坦、环丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、多粘霉素B和替格环素。

在另一实施方式中，所述附加抗菌剂可以是标准抗厌氧菌药物，其与本发明的化合物或可药用盐结合使用以治疗腹腔内感染。实例包括克林霉素、甲硝唑、亚胺培南、美罗培南、多利培南、厄他培南、头孢替坦、头孢吡肟、头孢匹罗和第三代头孢霉素。

在另一实施方式中，所述附加抗菌剂可以是可接受的抗革兰氏阳性药物，其与本发明的化合物或可药用盐结合使用以治疗铜绿假单胞菌和肠杆菌科(Enterobateriaceae)。实例包括万古霉素、利奈唑胺、达托霉素、达贝万星、特拉万星和奥利万星。

在一个实施方式中，所述一种或更多种附加活性物质当使用时，在式(I)化合物施用之前施用。在另一实施方式中，所述一种或更多种附加活性物质当使用时，在式(I)化合物施用之后施用。在另一实施方式中，所述一种或更多种附加活性物质当使用时，与式(I)化合物的施用大约同时施用。

可通过用于施用附加活性物质的任意途径施用所述附加活性物质。

在一个实施方式中，所述一种或更多种附加活性物质存在于本发明的药物组合物中。因此，在另一实施方式中，本发明涉及使用还包含一种或更多种附加活性物质的本发明的药物组合物治疗患者的方法。

应当理解，本文中任何章节标题和副标题是为了方便读者而非限定性的。例如，发明内容中的主题不具有任何特殊情况，仅仅是因为其位于该章节中。

除非另外说明，在本文件中使用的语言和术语应当被赋予相关领域技术人员所理解的最宽范围的合理解释。另外，在主题(例如，在特定分子位置上的取代)被描述为选自具有可能性的一组的说明书和权利要求书中，该描述尤其意图包括所述组别的任意亚组。在多种可变位置或取代基的情况下，小组或可变亚组的任意组合也考虑在内。

除非另外声明，下述缩写具有下列含义：“L”表示“升”、“mL”表示“毫升”、“mol”表示“摩尔”、“mmol”表示“毫摩尔”、“Ac”表示“乙酰基”、“Ph”表示“苯基”、“Bz”表示“苯甲酰基”、“DCM”或“CH₂Cl₂”表示“二氯甲烷”、“DMSO”表示“二甲亚砜”、“MIC”表示“最小抑制浓度”、“MS”表示“质谱法”(本文所有样品使用LCMS-电雾化(使用乙腈、水、甲酸混合物梯度洗脱)或探针APCI法分析)、“LCMS”表示“液相色谱质谱法”、“NMR”表示“核磁共振波谱法”(除非另外说明，本文所有样品在Varian仪器上在400MHz运行)、“THF”表示“四氢呋喃”、“spp.”表示“属”以及“cfu”表示“集落形成单位”。

如本文所用，术语“(C₁-C₆)烷基”指的是长度为1至6个碳原子的直链或支链烃(例如，甲基、乙基、正丙基、异丙基)。

除非另外说明，术语“杂环烷基”如本文所用，指的是含有一个或更多个杂原子优选1至4个杂原子的非芳环基团，每个杂原子优选选自氧、硫和氮。本发明的杂环烷基也可包括用一个或更多个含氧(oxo)部分取代的环体系。非芳香性杂环烷基的实例是氮杂环丙烯基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、氮杂环庚烯基(azepinyl)、哌嗪基、1，2，3，6-四氢吡啶基、氧杂环丙烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、吗啉基、硫代吗啉基、氧硫杂环己烷基、吡咯啉基、二氢吲哚基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二噁烷基、1，3-二氧戊环基、吡唑啉基、二氢吡喃基、二氢噻吩基、二氢呋喃基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮杂双环[3.1.0]己烷基、3-氮杂双环[4.1.0]庚烷基、喹嗪基、奎宁环基、1，4-二氧杂螺[4.5]癸基、1，4-二氧杂螺[4.4]壬基、1，4-二氧杂螺[4.3]辛基和1，4-二氧杂螺[4.2]庚基。

除非另外说明，术语“杂芳基”如本文所用，指的含有一个或更多个杂原子(优选氧、硫和氮)、优选1至4个杂原子的芳环。5至6元杂芳基的实例是吡啶基、哒嗪基、咪唑基、嘧啶基、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、三嗪基、嘌呤基、噁二唑基、呋咱基(furazanyl)。

术语″杂环″包括杂芳基和杂环烷基环以及含有0或更多个双键的非芳香性杂环。

除非明显的或另外说明，本发明的化合物和权利要求中的术语“化合物”包括任意可药用盐或溶剂合物，以及任意非晶形或晶形，或者互变异构体，无论在上下文中明确叙述与否。类似地，描述适于含有所述化合物的任意物质或组合物(例如，含有化合物的外消旋混合物的盐、互变异构体、差向异构体、立体异构体、不纯混合物等的组合物)。

式(I)的化合物可以以非溶剂化和溶剂化形式存在。因此，应当理解本发明的化合物还包括如下讨论的水合物和溶剂合物形式。

术语“溶剂”在其涉及本发明的组合物时包括有机溶剂(例如，甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷和四氢呋喃)和水。一种或更多种溶剂可以以非化学计算量存在，例如，作为痕量杂质，或者充分过量以便溶解本发明的化合物。可选地，一种或更多种溶剂可以以化学计算量存在，例如，基于本发明化合物的量，0.5∶1、1∶1或2∶1摩尔比。

术语“溶剂合物”在本文用于描述在溶剂与溶质之间或者分散介质与分散相之间的非共价的或易于可逆的结合。应当理解，溶剂合物可以为固体、浆(例如，悬浮液或分散体)或溶液的形式。溶剂的非限定性实例包括乙醇、甲醇、丙醇、乙腈、二甲醚、二乙醚、四氢呋喃、二氯甲烷和水。当所述溶剂是水时，可以采用术语‘水合物’。

目前公认的有机水合物分类系统是定义隔离位点或通道水合物的分类体系——参见K. R. Morris的Polymorphism in PharmaceuticalSolids(Ed.H.G. Brittain，Marcel Dekker，1995)。隔离位点水合物(Isolated site hydrates)是其中通过在通道水合物中插入有机分子而使水分子分离而不会直接接触的水合物。在通道水合物(channel hydrates)中，水分子位于晶格通道中，在那里它们与其它水分子邻接。

当溶剂或水紧密结合时，复合物具有与湿度无关的明确的化学计量。然而，当溶剂或水弱结合时，如在通道溶剂合物和吸湿性化合物中，水/溶剂含量取决于湿度和干燥条件。在这种情况下，非化学计量是标准。

除非另外说明，术语″可药用盐″如本文所用，包括可以存在于化合物中的基于酸或基于碱的盐。本质上为碱性的化合物能够与各种无机和有机酸形成多种盐。可用于制备此类碱性化合物的可药用酸加成盐的酸是形成无毒酸加成盐的那些酸。所述化合物可形成例如硫酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、甲苯磺酸盐、琥珀酸盐、苯磺酸盐、甲磺酸盐、乳酸盐和盐酸盐。碱式盐可以是一元或二元的。在一个优选的实施方式中，盐是延胡索酸盐。

除非另外说明，术语″治疗(treat、treatment和treating)″如本文所用，在本发明化合物的上下文中，是指逆转、减轻、抑制此类疾病或病症的一种或更多种症状的进展。

如本文所用，术语“患者”指的是哺乳动物，诸如人、狗、猫、马、猪、牛等。在一个实施方式中，患者是人。

除非另外说明，术语″药物组合物″指的是适合有效施用给患者的任何形式的活性化合物，例如，化合物与至少一种可药用载体的混合物。

除非另外说明，术语″可药用载体″指的是可以与药物组合物中的化合物一起施用给受试者的物质。所述载体不应当破坏所述化合物的药理活性而且当以足以递送治疗量的化合物的剂量给予时是无毒的。

术语″赋形剂″是指与式(I)化合物相结合以产生药物组合物或口服药物剂型的惰性物质。术语″可药用赋形剂″是指所述赋形剂必须与组合物中的其它成分兼容，而且对其受体无害。基于想要的剂型选择可药用赋形剂。

本发明的化合物具有不对称中心因此可以以不同的对映和非对映形式存在。本发明包括所有旋光异构体和立体异构体及其所有比率的混合物，以及可以使用或保护它们的所有药物组合物和治疗方法。尽管在本说明书中例举的具体化合物可以以特定的立体化学构型描述，但是在任意手性中心具有相反的立体化学或其混合物的化合物也是想象得到的。上述可以作为混合物存在或者在任意程度上富集任意组分。在某一位置的立体化学未指定时，其意图包括任意比率的构型或混合物。

本发明的化合物包括其可药用衍生物或前体药物。″可药用衍生物或前体药物″是指化合物的任意可药用盐、酯、酯盐或其它衍生物，其在给予受体之后能够提供(直接或间接)本发明的化合物或其代谢产物或残留物。本发明的特别有利的衍生物和前体药物是这样的物质：当化合物给予患者时其增加所述化合物的生物使用率(例如，通过使口服施用的化合物更有效地被吸收到血液中)、提高母体化合物向特定生物区室的递送、增加溶解度以允许通过注射施用、改变代谢或改变排泄速度。

式(I)的化合物可展示出多晶现象。通过使本发明的化合物在各种条件下结晶可以制备多晶型式(I)化合物。例如，可以使用各种溶剂(包括水)或不同的溶剂混合物进行重结晶；在不同温度下结晶；在结晶过程中从非常迅速到非常缓慢冷却的各种冷却模式。通过加热或熔化本发明的化合物之后逐渐或快速冷却也可以获得多晶型物。多晶型物的存在可以通过固体探针NMR波谱法、IR波谱法、差示扫描量热法、粉末X射线衍射或其它此类技术来测定。

本发明包括其中一个或更多个氢、碳或其它原子被其不同的同位素取代的化合物。此类化合物可用作药物代谢动力学研究和结合测定中的研究和诊断工具。这些同位素标记的化合物与那些式(I)的化合物是相同的，但是基于下述事实：一个或更多个原子被原子质量或质量数不同于自然界主要发现的原子质量或质量数的原子代替。可引入本发明组合物中的同位素的实例分别包括氢、碳、氮、氧和硫的同位素，诸如但不限于，²H、³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸O、¹⁷O和³⁵S。含有上述同位素和/或这些原子的其它同位素的本发明的式(I)化合物在本发明的范围内。一些同位素标记的式(I)化合物，例如其中引入放射性同位素诸如³H和¹⁴C的那些化合物，用于药物和/或底物组织分布测定中。氚化即³H，以及碳-14即¹⁴C同位素是特别优选的，因为它们容易制备和检测。此外，用同位素诸如氘即²H取代能提供一些由于更大的代谢稳定性引起的治疗优势，例如，体内半衰期增加或者剂量需要量降低，因此其在一些情况下是优选的。通过实施在方案和/或实施例中公开的以及下面描述的步骤、用容易得到的同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂，通常可以制备本发明的同位素标记的化合物。

术语″保护基″指的是能够连接到官能团上并且在稍后去除以显露完整官能团的合适化学基团。各种官能团的合适保护基的实例描述在T. W. Greene and P. G. M. Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，2nd Ed.，John Wiley and Sons(1991和后来的版本)；L.Fieser and M.Fieser，Fieser and Fieser′s Reagents for Organic Synthesis，John Wiley andSons(1994)；和L.Paquette，ed.Encyclopedia of Reagents for OrganicSynthesis，John Wiley and Sons(1995)中。术语″羟基保护基″如本文所用，除非另外说明，包括Ac、Bz和本领域技术人员熟悉的各种羟基保护基，包括Greene提到的基团。

下面提供的实施例和制备进一步阐述和示例本发明的化合物和制备此类化合物的方法。应当理解，本发明的范围不以任何方式受到下面实施例和制备范围的限制。

所有专利、专利申请、公布、测试方法、文献和本文上面和下面引用的其它材料因此以其整体并入本文作为参考。

具体实施方式

如上所述，在一个实施方式中，本发明涉及如上所述的式(I)化合物及其可药用盐。为方便读者，在本文的发明内容以及其它地方结构性地描述了式(I)的化合物。

通用制备方法

本发明的化合物可根据本文的非限定性描述、方案和实施例并结合本领域人员的公知常识制备。

方案A

本发明的化合物可如方案A至方案C所述般制备。可使通式I的化合物(方案A)(如在Yamawaki，K.等，Bioorganic & Medicinal Chem.，(2007)，15，6716和Yamamoto，H.等，Bioorganic and Medicinal Chem.，(2002)，10，1535中所述般制备)与通式II的羟胺(如在公布于2007年6月14日的WO 2007/065288中所述般制备)在诸如甲醇的溶剂中于环境温度反应约2小时，形成式III的羧酸。在偶联剂诸如二环己基碳二亚胺或二异丙基碳二亚胺的存在下，在诸如二氯甲烷的溶剂中，于环境温度，通过使式III化合物与N-羟基琥珀酰胺反应，可制备式IV的活化酯。于环境温度，在碳载钯的存在下，在约2至4个大气压的氢气氛中，在诸如甲醇、乙醇、四氢呋喃、甲苯或乙酸的溶剂中(有时需要其二元组合)，通过使相应的用N-苄氧基羰基(Cbz)保护的化合物氢解脱保护，可制备式V的化合物，如Waulte，S.R.等，J.Org.Chem(1986)，51，3133；Paloma，C.等，J.Org.Chem.(1997)，62，2070；Lall，M.S.等，J.Org.Chem.(2002)，67，1536；和Chhabra，S.R.等，J.Org.Chem.(2002)，67，4017所述般制备。如果氢化在乙酸的存在下进行，则可分离出作为乙酸盐的中间体氨基氮杂环丁酮，随后在溶剂诸如甲醇、乙醇或乙腈中，在碱诸如三乙胺的存在下，使其与式IV的化合物反应，形成通式VI的酰胺。当在氢化中不使用乙酸时，在过滤去除催化剂后，可使所产生的氨基氮杂环丁酮原地与式IV的化合物反应，产生式VI的酰胺。

方案B

式XI的三唑酮可以如方案B所述般制备。从商业可得的曲酸(CAS号：501-30-4)开始，如公布于1988年2月19日的EP 0281289中所述般，可经过五个步骤制备化合物VII。VII与光气或光气等价物如羰二咪唑在溶剂如二氯甲烷或四氢呋喃中于环境温度反应产生化合物VIII。化合物VIII与式IX的伯胺在溶剂如四氢呋喃中于诸如40℃到60℃的较高温度反应产生通式X的化合物。通过在碱如氢氧化钠或氢氧化钾的存在下在水中回流反应，可使式X的化合物环化形成式XI的化合物。可选地，在一些情况下，通过使式X的化合物在N-三甲基甲硅烷基-N-甲基三氟乙酰胺(MSTFA)中在得自微波辐射的约150℃反应，可完成类似的环化反应。

方案C

化合物VI和XI的偶联以及本发明化合物的最终结构可以如方案C所述般完成。通过首先使式XI的化合物与过量MSTFA在四氢呋喃中在约40℃反应1至2小时，之后真空去除四氢呋喃、过量MSTFA和副产物，可完成VI和XI的偶联，产生通式XII的化合物。单独地，可使式VI的化合物与氯磺酰异氰酸酯(CSI)在二氯甲烷中在0℃反应约45分钟。然后可将式XI化合物的加合物再溶解于四氢呋喃中，并向该混合物添加来自式VI化合物与CSI的反应的加合物。在0℃将该两种组分搅拌约2小时之后于环境温度搅拌多达18小时，产生通式XII的化合物。可选地，这种偶联反应可如下完成：使如上所述般制备的CSI加合物与式XI的化合物混合，其通过与过量的六甲基二硅氮烷(hexamethyldisilizide，HMDS)在催化量的氯化三甲基硅烷(TMS-Cl)的存在下在约140℃反应可以被甲硅烷基化。在冷却中环境温度之后，可将该物质溶剂在溶剂如二氯甲烷中并与CSI加合物混合，产生式XII的化合物。通过在2至4个大气压的氢气之间，在由四氢呋喃和乙酸组成的二元溶剂体系中，于环境温度，以及在钯催化剂如钯黑的存在下反应，可以完成从式XII的化合物去除苄基保护基团。去除催化剂和溶剂之后，在溶剂如二氯甲烷中于环境温度用三氟乙酸处理粗制物去除叔丁氧基羰基保护基和叔丁酯(如果含在R⁶内)。然后通过反相色谱法，使用梯度流动相由乙腈和水组成的C18树脂，用甲酸缓冲，可以纯化本发明的粗制物(XIII)。然后，通过用碳酸氢钠水溶液处理之后冻干，可从式XIII的化合物产生通式XIV的钠盐。如果R⁶内存在第二种酸位置如羧酸，则按照同样的步骤可产生式XIV的二钠盐，但是在冻干之前要添加第二当量的碳酸氢钠。

无需进一步详述，相信本领域技术人员使用前述描述能够最大程度地实践本发明。下面的详细实施例描述了如何制备各种化合物化合物和/或实施本发明的各种方法，并且被解释为仅仅是阐述性的，而不是以任何方式对上述公开内容的限制。本领域技术人员即刻认识到来自与反应物以及反应条件和技术有关的操作的适宜变化。

实施例

下面的实施例一般在惰性气氛(氮或氩)下进行，特别是在使用氧或水分敏感性试剂或中间体的情况下。商业溶剂和试剂通常无需进一步纯化即使用。所有产物在随后的化学过程中表征或使用之前进行干燥。提及来自所采用的氘化溶剂的残留峰时，核磁共振(NMR)数据的化学位移以百万分之(几)份(ppm，δ)表示。

实施例1

2-({[(1E)-1-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-2-{[(3S)-1-({[4-乙基-3-(5-羟基-4-氧代-1，4-二氢吡啶-2-基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑-1-基]磺酰基}氨基甲酰基)-2-氧代氮杂环丁-3-基]氨基}-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸(1)的制备

通过在方案1至6描绘以及在下面详述的步骤制备化合物1。

方案1

步骤1.4，5-双(苄氧基)吡啶-2-甲酸苄酯(C4)的制备

A.5-(苄氧基)-2-(羟甲基)-4H-吡喃-4-酮(C1)的制备。将5-羟基-2-(羟甲基)-4H-吡喃-4-酮(300g，2.11mol)溶解在甲醇(9L)中并用碳酸钾(439g，3.18mol)处理，之后缓慢添加苄基氯(433g，3.42mol)。使反应混合物在65℃搅拌8小时。冷却至室温后，使其再搅拌16小时，然后真空下浓缩至粘稠膏状物。将该残留物冷却至10℃并用冰水稀释，产生沉淀，通过过滤收集该沉淀，得到为固体的C1。收率：325g，1.40mol，66％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ4.29(s，2H)，4.94(s，2H)，6.32(s，1H)，7.33-7.42(m，5H)，8.17(s，1H)。

B.5-(苄氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-J甲酸(C2)的制备。将氧化铬(VI)(64.6g，0.646mol)的水溶液(90mL)冷却至-5℃并滴加浓硫酸(56mL)处理。将其用另外的水(40mL)稀释，然后滴加至C1(100g，0.43mol)在丙酮(4.5L)中的冷(-5℃)溶液中。使反应混合物在20℃搅拌3小时，然后经过硅藻土垫过滤。浓缩滤液产生残留物，将其用己烷洗涤，得到C2。收率：80g，0.325mol，76％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ4.97(s，2H)，6.93(s，1H)，7.34-7.42(m，5H)，8.37(s，1H)。

C.5-(苄氧基)-4-氧代-1，4-二氢吡啶-2-甲酸(C3)的制备。将C2(100g，0.406mol)和氢氧化铵水溶液(25％，1L)的混合物在高压釜中搅拌1小时，然后在大气压下在83℃加热7小时。在大约18小时内缓慢冷却之后，用浓盐酸使反应混合物酸化至pH 3。过滤收集得到的沉淀，用水洗涤，并溶解在饱和碳酸氢钠水溶液中。溶液用二氯甲烷洗涤，然后用浓盐酸酸化。过滤收集得到的固体，用水洗涤并在50℃干燥，得到C3。收率：85g，0.347mol，85％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ5.17(s，2H)，7.17(br s，1H)，7.33-7.49(m，7H)。

D.C4的制备。将苄基氯(105.6mL，0.918mol)添加至C3(90g，0.367mol)的二甲基甲酰胺(1.25L)溶液中。添加碳酸钾(124.8g，0.903mol)，将混合物在80℃搅拌16小时。冷却至室温后，用冰水处理反应，过滤收集得到的固体，并通过硅胶层析纯化，得到C4。收率：50g，0.118mol，32％。MSm/z 426(M+1)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ5.32(s，6H)，7.33-7.46(m，15H)，7.76(s，1H)，8.37(s，1H)。

方案2

步骤2.5-(4，5-双(苄氧基)吡啶-2-基)-1，3，4-噁二唑-2(3H)-酮(C6)的制备。

A.4，5-双(苄氧基)吡啶-2-碳酰肼(C5)的制备。在10分钟内将一水合肼(47.5mL，978mmol)滴加至C4(20g，47.0mmol)的甲醇(100mL)悬浮液中。将得到的混合物加热至65℃，持续2小时，然后冷却至室温并真空过滤。用甲醇洗涤所收集的固体，得到为白色固体的C5。收率：15.4g，44.1mmol，94％。LCMSm/z 350.1(M+1)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ4.47(d，J＝4.6Hz，2H)，5.30(s，2H)，5.32(s，2H)，7.31-7.48(m，10H)，7.67(s，1H)，8.23(s，1H)，9.65(t，J＝4.5Hz，1H)。

B.5-[4，5-双(苄氧基)吡啶-2-基]-1，3，4-噁二唑-2(3H)-酮(C6)的制备。将羰基二咪唑(97％，2.87g，17.2mmol)添加至C5(5.00g，14.3mmol)的四氢呋喃(75mL)悬浮液中。将反应混合物于室温搅拌3小时，在此期间白色悬浮液变成均匀溶液，然后变成白色悬浮液。过滤收集固体并用四氢呋喃(3x5mL)洗涤，得到为白色固体的C6。收率：4.92g，13.1mmol，92％。LCMS m/z 376.1(M+1)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ5.31(s，2H)，5.33(s，2H)，7.32-7.48(m，10H)，7.56(s，1H)，8.38(s，1H)，12.64(br s，1H)。

方案3

步骤3.5-(4，5-双(苄氧基)吡啶-2-基)-4-乙基-2H-1，2，4-三唑-3(4H)-酮(C8)的制备。

A.1-(3，4-双(苄氧基)吡啶甲酰基)-4-乙基氨基脲(C7)的制备。在5℃，向C5(0.75g/0.215mol)在5mL N，N-二甲基甲酰胺中的溶液中缓慢加入229mg(3.22mmol)异氰酸乙酯在5mL四氢呋喃中的溶液，并将得到的混合物于室温搅拌2小时，此时，以维持温度低于15℃的速度将该反应混合物转移到在10mL四氢呋喃中含有0.161g(0.0032mol)一水合肼的溶液中。添加后，将得到的混合物于室温搅拌1小时，此时，将混合物倾倒入50mL冰水中，形成沉淀，将其过滤收集并真空干燥，得到为白色固体的C7。LCMS m/z 421(M+1)。¹H NMR(400MHz，CDCL3-d₆)δ1.25(t，J＝6.2Hz，3H)，4.25(br.d，2H)，5.24(br.s，4H)，7.31-7.46(m，10H)，7.55(br.s，1H)，8.18(s，1H)。

B.5-(4，5-双(苄氧基)吡啶-2-基)-4-乙基-2H-1，2，4-三唑-3(4H)-酮(C8)的制备(环化法1)。向0.42g(0.999mmol)C7的搅拌溶液中添加8当量(0.448g/7.99mmol)溶解于2mL水中的氢氧化钾，并将得到的混合物加热至回流24小时，此刻将反应混合物真空浓缩至干。然后通过柱色谱法(硅胶，在乙酸乙酯中的3至5％甲醇，产生0.683g(46％)化合物C8)纯化粗产物。LCMS m/z 403.3(M+1)。¹H NMR(400MHz，CDCL3-d₆)δ1.26(t，J＝7.3Hz，3H)，4.26(q，J＝6.6Hz，2H)，5.24(s，4H)，7.29-7.47(m，10H)，7.57(s，1H)，8.16(s，1H)，9.86(br.s，1H)。

方案4

步骤4.(3S)-3-氨基氮杂环丁-2-酮(C10)的制备。

使[(3S)-2-氧代氮杂环丁-3-基]氨基甲酸苄酯(C9，13.37g，60.7mmol)与脱气乙醇(500mL)和甲苯(125mL)混合。关于C9的合成，参见M.J.Miller等，Tetrahedron，1983，39，2571-2575；和M.S.Lall等 Journalof Organic Chemistry 2002，67，1536-1547。对反应混合物进行声处理直到固体溶解，然后用氮吹扫。添加碳载钯(10％，4.45g)，并在15psi下将反应混合物在帕尔摇动器上氢化1小时。在氮气下经过硅藻土过滤去除钯，并用脱气乙醇冲洗。使含C10的滤液直接进入与C12的偶联反应，步骤4B。收率：假定定量(assumed quantitative)。将来自类似实验的物质浓缩至干以获得NMR资料：¹H NMR(400 MHz，DMSO-d₆)δ2.12(brs，2H)，2.78(dd，J＝5.1，2.3Hz，1H)，3.31(dd，J＝5.3，5.3Hz，1H)，3.97(m，1H)，7.69(br s，1H)。

方案5

步骤5.2-({[(1Z)-1-{2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1，3-噻唑-4-基}-2-氧代-2-{[(3S)-2-氧代氮杂环丁-3-基]氨基}乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸叔丁酯(C13)的制备。

A.2-[({(1Z)-1-{2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1，3-噻唑-4-基}-2-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-2-氧代乙撑}氨基)氧基]-2-甲基丙酸叔丁酯(C12)的制备。将1-羟基吡咯烷-2，5-二酮(N-羟基琥珀酰亚胺，8.84g，76.8mmol)添加至(2Z)-{2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1，3-噻唑-4-基}[(2-叔丁氧基-1，1-二甲基-2-氧代乙氧基)亚氨基]乙酸(C11，30g，70mmol)的二氯甲烷(400mL)悬浮液。关于C11的合成，参见K. Yamawaki等，Bioorganic and Medicinal Chemistry 2007，15，6716-6732。将混合物冷却至0℃，添加N，N′-二环己基碳二亚胺(97％，15.6g，73.3mmol)，将反应在0℃搅拌30分钟，然后于室温搅拌3小时。经硅藻土过滤混合物并真空浓缩，产生为白色固体的C12。收率：36.17g，68.7mmol，98％。LCMS m/z 527.2(M+1)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ1.43(s，9H)，1.54(s，9H)，1.61(s，6H)，2.91(br s，4H)，7.50(s，1H)，8.31(br s，1H)。

B.C13的制备。用化合物C12(26.6g，50.6mmol)处理C10(5.23g，60.7mmol)的乙醇/甲苯溶液(900mL，在步骤4得到的溶液)，并在1小时的期间内减压下缓慢浓缩反应混合物，达到其原始体积的三分之一。将得到的悬浮液在氮气下在35℃搅拌约18小时。真空去除溶剂得到粗产物，使其真空干燥30分钟。将得到的固体在1∶1乙酸乙酯/四氢呋喃(1L)与碳酸钠水溶液(500mL)之间分配。需要额外的水溶解在分离期间观察到的固体。水层用1∶1乙酸乙酯/四氢呋喃(2x 300mL)萃取，将合并的有机层过滤并真空浓缩。粗制固体用3∶2的乙酸乙酯/庚烷(60mL)研磨30分钟，过滤收集固体，用庚烷冲洗，得到为白色固体的C13。收率：22.08g，44.4mmol，88％。LCMS m/z 498.6(M+1)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ1.47(s，9H)，1.52(s，6H)，1.54(s，9H)，3.39(dd，J＝5.7，2.5Hz，1H)，3.65(dd，J＝5.5，5.5Hz，1H)，5.10(dd，J＝5.3，2.5Hz，1H)，7.34(s，1H)。

方案6

步骤6.2-({[(1E)-1-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-2-{[(3S)-1-({[4-乙基-3-(5-羟基-4-氧代-1，4-二氢吡啶-2-基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑-1-基]磺酰基}氨基甲酰基)-2-氧代氮杂环丁-3-基]氨基}-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸(1)的制备。

A.C14的制备(偶联法1)。向C8(180mg/0.45mmol)在3mL四氢呋喃中的搅拌溶液添加6.0当量的N-三甲基甲硅烷基-N-甲基三氟乙酰胺(MSTFA，Aldrich ampoule)，形成浅黄色溶液，将其于室温搅拌45分钟。然后减压浓缩混合物，并将其在真空下加热(高真空)在45℃加热1小时。单独地，向0.223g(0.45mmol)溶解于4mL二氯甲烷中并冷却至0℃的C13添加0.082g(0.58mmol/0.051mL)氯磺酰异氰酸酯，并将得到的溶液在0℃搅拌30分钟。此刻，将四氢呋喃(3mL)添加至C8的加合物，并通过套管将得到的溶液引入CSI反应。将得到的溶液在0℃搅拌1小时，然后恢复至室温，并减压浓缩。通过柱色谱法纯化粗制物(硅胶，庚烷中的45至60％乙酸乙酯)，得到332mg在混合物中的C14，其无需另外纯化而向前进行。LCMS m/z 1003.2(M-1)。

B.化合物1的制备。在帕尔瓶中放置0.190g(0.19mmol)溶解于20mL甲醇中的C14，并用氮气使该溶液脱气。然后添加钯-黑(0.063g)，并将混合物在13psi氢气氛下于室温下搅动40分钟(通过LCMS监控反应完成)。然后使反应混合物经过硅藻土过滤并真空浓缩至干。然后将该物质以粗制物溶解在10mL二氯甲烷中。然后，向该溶液中添加10mL三氟乙酸，并将得到的混合物于室温搅拌2小时，此刻真空浓缩反应混合物。然后通过制备型HPLC纯化粗制物(1)(SymmetryC8，3至23％在水中的乙腈，含0.1％甲酸改性剂)。真空浓缩至干后收集约5mg的1。LCMS m/z 669.4(M+1)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ1.0-1.2(m，6H)，1.3-1.5(br.s，5H)，3.97(d，J＝6.8Hz，2H)，4.88(br.s，1H)，6.81(s，1H)，7.32(s，1H)，7.99(s，1H)，9.05(d，J＝4.2Hz，1H)。

实施例2

2-({[(1Z)-1-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-2-({(3S)-1-[({4-[2-(二甲基氨基) 乙基]-3-(5-羟基-4-氧代-1，4-二氢吡啶-2-基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4- 三唑-1-基}磺酰基)氨基甲酰基]-2-氧代氮杂环丁-3-基}氨基)-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸(2)的制备。

通过在方案7描绘以及在下面详述的步骤制备化合物1。

方案7

步骤1.2-({[(1Z)-1-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-2-({(3S)-1-[({4-[2-(二甲基氨基)乙基]-3-(5-羟基-4-氧代-1，4-二氢吡啶-2-基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑-1-基}磺酰基)氨基甲酰基]-2-氧代氮杂环丁-3-基}氨基)-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸(2)和非对映二醇混合物(实施例10)的制备。

A.C16的制备。化合物C15以与实施例1中的C14类似的方式使用偶联法1制备。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ1.33-1.39(m，9H)，1.41-1.45(br.s，6H)，3.32-3.38(m，1H)，6.67(t，J＝8.2Hz，1H)，4.67(m，1H)，4.85-4.92(m，1H)，4.98(d，J＝5.8Hz，1H)，5.26(d，J＝9.3Hz，2H)，5.73-5.86(m，1H)，7.27-7.49(m，10H)，7.58(s，1H)，8.31(s，1H)，8.99(d，J＝9.34Hz，1H)。向C15(0.30g/0.3mmol)在5mL 9∶1丙酮/水的搅拌溶液添加0.138g(1.18mmol)N-甲基吗啉-N-氧化物(NMO)，然后加入0.746g(0.09mmol)四氧化锇，并将得到的混合物于室温搅拌16小时。然后加入另一份添加量的NMO和四氧化锇，并将混合物再搅拌24小时，此刻，借助LCMS，反应完成。经硅藻土过滤反应，真空浓缩，然后通过柱色谱法纯化(二氧化硅；在庚烷中的30至100％乙酸乙酯，然后转向3至7％在二氯甲烷中的甲醇，收集到0.302g C16)。LCMS m/z 1051.3(M+1)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ1.33-1.38(m，9H)，1.42(s，6H)，3.20-3.26(m，2H)，3.31-3.37(m，1H)，3.58-3.69(m，2H)，3.94-4.11(m，2H)，4.49-4.58(m，1H)，4.89(br.s，1H)，4.94(dd，J＝5.4Hz，J＝10.1Hz，1H)，5.24-5.29(m，4H)，7.27-7.48(m，10H)，7.52(s，1H)，8.31(s，1H)，8.98(d，J＝8.7Hz，1H)。然后，以与实施例1中制备化合物1的C14所述类似的方式，使该物质去保护，以制备实施例10。

B.C17的制备。在火焰干燥烧瓶(flame dry flask)中，置入溶解于8mL 3∶1二噁烷/水中的C15(0.486g，0.48mmol)，然后向该混合物中添加高碘酸钠(0.311g，1.43mmol)和四氧化锇(0.025g，0.003mmol)，并将得到的混合物于室温搅拌16小时(借助LCMS，反应完成)。然后，在饱和碳酸氢钠与乙酸乙酯之间分配反应混合物。有机层用饱和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩至干。粗制物然后通过柱色谱法纯化(硅胶，30至100％在庚烷中的乙酸乙酯，然后转向3至7％在二氯甲烷中的甲醇，收集到0.230g C17，通过¹H NMR其显示以水合物存在。LCMS m/z 1019.9(M+1)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ1.38-1.56(m，24H)，3.72(t，J＝4.7Hz，1H)，3.84(t，J＝4.1Hz，1H)，3.89-3.56(m，1H)，4.16-4.22(m，2H)，4.45(t，J＝5.3Hz，1H)，4.72-4.78(m，1H)，5.00-5.09(m，1H)，5.19-5.29(m，4H)，7.19-7.49(m，10H)，7.77(s，1H)，8.11(s，1H)，8.22(d，J＝9.4Hz，1H)。

C.C18和化合物2的制备。向C17(1.22g，1.20mmol)在10mL四氢呋喃的搅拌溶液中添加二甲胺(0.098g，1.2mmol)和3当量冰醋酸(0.215mL，3.59mmol)，并将得到的溶液于室温搅拌2小时。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.532g，2.51mmol)，并将得到的混合物于室温搅拌18小时。在饱和碳酸氢钠与乙酸乙酯之间分配反应混合物，有机层用饱和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩至干。粗制物通过柱色谱法纯化(硅胶，30至100％在庚烷中的乙酸乙酯，然后转向5至10％在二氯甲烷中的甲醇)，收集到0.340g C18。LCMS m/z 1048.9(M+1)。¹H NMR(400 MHz，CD₃OD)δ1，38-1.54(m，24H)，2.44(s，1H)，2.85(s，6H)，3.40(br.s，1H)，3.71-3.77(m，1H)，3.90(t，J＝6.0Hz，1H)，4.46(br.s，2H)，5.03(s，2H)，5.18-5.26(m，4H)，7.20-7.35(m，9H)，7.40(d，J＝7.0 Hz，2H)，7.65(s，1H)，8.21(s，1H)。然后，以与实施例1的化合物1所述的类似的方式，通过去保护和HPLC纯化，从C18制备化合物2。LCMS m/z 712.5(M+1)。¹H NMR(400 MHz，DMSO-d₆)δ1.39(s，6H)，2.50(s，6H)，3.30-3.45(m，假定3H，被水峰遮住)，3.68(m，1H)，4.37(m，2H)，6.70(s，1H)，7.31(br s，2H)，7.42(s，1H)，8.03(s，1H)，8.98(d，J＝7.0 Hz，1H)，9.99(br s，1H)，10.88(br s，1H)。

实施例3

2-({[(1Z)-1-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-2-({(3S)-1-[({4-[(2R)-2，3-二羟丙基]-3-(5-羟基-4-氧代-1，4-二氢吡啶-2-基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4- 三唑-1-基}磺酰基)氨基甲酰基]-2-氧代氮杂环丁-3-基}氨基)-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸，二钠盐(3)的制备。

通过在方案8描绘以及在下面详述的步骤制备化合物3。

方案8

步骤1.5-[4，5-双(苄氧基)吡啶-2-基]-4-[(2R)-2，3-二羟丙基]-2，4-二氢-3H-1，2，4-三唑-3-酮(C20)的制备。

A.2-{[4，5-双(苄氧基)吡啶-2-基]羰基}-N-[(2R)-2，3-二羟丙基]肼甲酰胺(C19)的制备。将(2R)-3-氨基丙烷-1，2-二醇(0.291g，3.19mmol)添加至C6(1.0g，2.66mmol)的四氢呋喃(50mL)悬浮液，并将混合物加热至60℃，持续20小时。冷却至室温后，过滤该悬浮液，用四氢呋喃(3x 5 mL)洗涤固体，得到为白色固体的C19。收率：1.07g，2.29mmol，86％.LCMS m/z 467.2(M+1)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ2.93(m，1H)，3.19(m，1H)，3.27(m，2H)，3.44(m，1H)，4.53(t，J＝5.8Hz，1H)，4.77(d，J＝4.8 Hz，1H)，5.33(s，4H)，6.31(t，J＝5.5Hz，1H)，7.31-7.48(m，10H)，7.69(s，1H)，8.01(br s，1H)，8.28(s，1H)，10.04(br s，1H)。

B.C20的制备。将C19(3.00g，6.43mmol)在氢氧化钾水溶液(1.6M，40.2mL，64.3 mmol)中的溶液在100℃加热13小时，之后使其冷却至0℃，用水(100mL)稀释，并用浓盐酸酸化至pH 7。过滤得到的固体用水(3x 10 mL)洗涤，得到C20，其被约30％的水解产物4，5-双(苄氧基)吡啶-2-甲酸污染。收率：2.66g，＜5.93mmol，＜92％。LCMS m/z 449.2(M+1)和336.1(M+1，水解产物)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ3.28(m，2H)，3.70(m，1H)，4.05(dd，半个ABX图案，J＝13.7，5.0Hz，1H)，4.12(dd，半个ABX图案，J＝13.7，8.0Hz，1H)，4.61(v br s，1H)，5.01(br s，1H)，5.28(s，2H)，5.31(s，2H)，7.32-7.48(m，10H)，7.58(s，1H)，8.32(s，1H)，12.03(br s，1H)。水解产物的选择峰：5.29(s)，7.70(s)，8.28(s)。

方案9

步骤2.2-({[(1Z)-1-{2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1，3-噻唑-4-基}-2-({(3S)-1-[({4-[(2R)-2，3-二羟丙基]-3-(5-羟基-4-氧代-1，4-二氢吡啶-2-基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑-1-基}磺酰基)氨基甲酰基]-2-氧代氮杂环丁-3-基}氨基)-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸叔丁酯(C22)的制备。

A.2-({[(1Z)-2-({(3S)-1-[({3-[4，5-双(苄氧基)吡啶-2-基]-4-[(2R)-2，3-二羟丙基]-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑-1-基}磺酰基)氨基甲酰基]-2-氧代氮杂环丁-3-基}氨基)-1-{2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1，3-噻唑-4-基}-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸叔丁酯(C21)的制备。将C20(4.00g，8.92mmol)在四氢呋喃(35mL)中的混合物用2，2，2-三氟-N-甲基-N-(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(MSTFA，98％，10.2mL，53.7mmol)处理。搅拌45分钟之后，将浅黄色乳状混合物在60℃真空浓缩1小时，然后在60℃真空下干燥1.5小时。在分液瓶中，将C13(4.88g，9.81mmol)的二氯甲烷(32mL)悬浮液冷却至0℃，用异氰酸酯基磺酰氯(氯磺酰异氰酸酯，95％，0.929mL，10.7mmol)滴加处理，并使其在冰冷却下搅拌30分钟。将得自C20的物质溶解在四氢呋喃(8mL)中，冷却至0℃。然后将冰冷却的含C13的反应混合物经过套管转移到该溶液中。在0℃搅拌1小时，然后于室温搅拌1.5小时之后，用甲醇(5mL)淬灭反应混合物，搅拌10分钟并真空浓缩。残留物通过硅胶层析纯化(梯度：在庚烷中的40-100％乙酸乙酯，然后在乙酸乙酯中的0-12％甲醇)，得到为固体的C21。收率：3.85g，3.66mmol，41％.LCMS m/z 1051.4(M+1)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ1.38(s，9H)，1.39(s，6H)，1.46(s，9H)，3.3(被HOD信号遮住)，3.66(m，1H)，3.70(dd，J＝6.3，6.3Hz，1H)，4.00-4.13(m，2H)，4.56(m，1H)，4.93(m，2H)，5.29(s，2H)，5.30(s，2H)，7.25(s，1H)，7.31-7.50(m，10H)，7.57(s，1H)，8.35(s，1H)，9.02(d，J＝8.5Hz，1H)，11.84(br s，1H)。

B.C22的制备。将C21(0.460g，0.438mmol)在四氢呋喃(10mL)和乙酸(0.1mL)中的溶液用氮(3x)脱气并冲洗，并用Pd黑(134mg)处理。使用帕尔摇动器在36psi的氢气下于室温使混合物氢化4小时(借助LCMS，反应完成)。样品经酸洗纤维素粉末过滤并用THF洗涤，产生淡红色滤液，使其真空浓缩至干，产生0.382g(100％)，为红色固体。LCMS m/z 871.8(M+1)。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ1.39(s，9H)，1.40(s，6H)，1.46(s，9H)，3.29(m，2H)，3.39(dd，J＝6.3，3.3Hz，1H)，3.65(HOD块遮住信号)，3.71(m，1H，估计值)，3.94(m，2H，估计值)，4.92(m，1H)，7.26(s，1H)，7.39(s，1H)，8.02(s，1H)，9.01(d，J＝8.0 Hz，1H)，11.82(br s，1H)。

方案10

步骤3.2-({[(1Z)-1-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-2-({(3S)-1-[({4-[(2R)-2，3-二羟基丙基]-3-(5-羟基-4-氧代-1，4-二氢吡啶-2-基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑-1-基}磺酰基)氨基甲酰基]-2-氧代氮杂环丁-3-基}氨基)-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸，二钠盐(3)的制备。

A.化合物3的制备。将三氟乙酸(13mL)添加至C22(2.54g，2.91mmol)在13mL二氯甲烷中的冷却(0℃)溶液中。将反应混合物于室温搅拌2小时，然后经特氟龙套管缓慢转移到含186mL庚烷/甲基-叔丁基醚(MTBE)的2∶1混合物的圆底烧瓶中，产生微细沉淀。过滤收集固体，用庚烷/MTBE(2∶1)洗涤，真空干燥，产生1.82g(88％)3的三氟乙酸盐，为玫瑰色固体。然后通过反相色谱法纯化该物质的一部分(2.42g)，使用Isco Rf色谱系统，其采用RediSep RfC18柱(130g)，分两批装载为二甲亚砜(1.5mL)溶液的粗制三氟乙酸盐。梯度为5％至30％水(0.1％甲酸)/乙腈(0.1％甲酸)。产物在15-18％乙腈离开柱。收集馏分并在减压下去除溶剂，产生0.847g(35％)为白色固体的物质。在甲醇(4次)中声处理该固体，并去除溶剂(去除甲酸)。¹H NMR证实游离形式的产物，具有最低甲酸含量。LCMS m/z 715.0(M+1)。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ1.42(s，3H)，1.43(s，3H)，3.28(m，2H)，3.38(dd，J＝6.3，3.4 Hz，1H)，3.65(m，1H)，3.70(m，1H)，3.95(br d，J＝6.5 Hz，2H)，4.91(m，1H)，6.79(s，1H)，7.36(s，1H)，8.01(s，1H)，9.03(d，J＝8.3 Hz，1H)。在0℃，向1.20g(1.65mmol)游离形式酸在30mL去离子水中的浆液中缓慢加入0.277g(3.30mmol)溶解于6mL去离子水中的碳酸氢钠(在添加碳酸氢钠溶液之后固体完全溶解)。将得到的溶液冷冻并冻干，产生1.12g为浅粉色亲液物的二钠盐。LCMS m/z 715.6(M+1)。¹HNMR(500 MHz，D₂O)δ1.31(s，3H)，1.32(s，3H)，3.44(dd，1/2 ABX，J＝12.1 Hz，4.8 Hz，1H)，3.48(dd，1/2 ABX，J＝11.8 Hz，4.0 Hz，1H)，3.65(dd，J＝7.3 Hz，3.3 Hz，1H)，3.73-3.92(m，3H)，4.90(dd，J＝3.2 Hz，3.2 Hz，1H)，6.79(s，1H)，6.97(s，1H)，7.72(s，1H)。

实施例4

2-({[(1Z)-2-{[(3S)-1-({[4-(2-氨基-2-氧代乙基)-3-(5-羟基-4-氧代 -1，4-二氢吡啶-2-基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑-1-基]磺酰基}氨基甲酰基)-2-氧代氮杂环丁-3-基]氨基}-1-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸，二钠盐(4)的制备。

通过在方案11至13描绘以及在下面详述的步骤制备化合物4。

方案11

步骤1.{3-[4，5-双(苄氧基)吡啶-2-基]-5-氧代-1，5-二氢-4H-1，2，4-三唑-4-基}乙腈(C24)的制备。

A.2-{[4，5-双(苄氧基)吡啶-2-基]羰基}-N-(氰甲基)肼甲酰胺(C23)的制备。在1分钟内将氨基乙腈(0.11g，1.92mmol)和三乙胺(0.162g，1.60mmol)滴加至C6(0.60g，1.6mmol)的四氢呋喃(5mL)悬浮液中，并将混合物加热至55℃，持续20小时。添加额外的氨基乙腈(0.108g，1.92mmol)和三乙胺(0.162g，1.60mmol)，并在55℃继续加热20小时。用冰浴冷却至0℃之后，过滤悬浮液，固体用四氢呋喃洗涤，真空下干燥，产生为固体的C23。收率：0.550g，1.27mmol，79％。LCMS m/z 430.3(M-1)。¹H NMR(400 MHz，DMSO-d₆).δ4.00(d，J＝5.5Hz，2H)，5.33(s，2H)，5.34(s，2H)，7.30-7.48(m，10H)，7.70(s，1H)，8.27(s，1H)，8.38(br s，1H)，10.18(br s，1H)。

B.C24(环化法2)的制备。使2，2，2-三氟-N-甲基-N-(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(MSTFA，98％，8mL，37 mmol)和C23(0.310g，0.728 mmol)在微波管中结合并加热至150℃，持续15分钟。重复该过程6次，总计组合使用2.20g C23。合并反应并真空浓缩，残留物通过硅胶层析纯化(梯度：在庚烷中的30-50％乙酸乙酯)，产生为固体的C24。收率：1.1g，2.66 mmol，52％。LCMS m/z 414.2(M+1).¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ5.17(s，2H)，5.32(s，2H)，5.34(s，2H)，7.29-7.50(m，10H)，7.64(s，1H)，8.36(s，1H)，12.34(s，1H)。

方案12

步骤2.2-({[(1Z)-1-{2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1，3-噻唑-4-基}-2-{[(3S)-1-({[4-(氰甲基)-3-(5-羟基-4-氧代-1，4-二氢吡啶-2-基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑-1-基]磺酰基}氨基甲酰基)-2-氧代氮杂环丁-3-基]氨基}-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸叔丁酯(C26)的制备。

A.2-({[(1Z)-2-({(3S)-1-[({3-[4，5-双(苄氧基)吡啶-2-基]-4-(氰甲基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑-1-基}磺酰基)氨基甲酰基]-2-氧代氮杂环丁-3-基}氨基)-1-{2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1，3-噻唑-4-基}-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸叔丁酯(C25)的制备。按照合成实施例1中的C21的通用步骤制备化合物C25，不同之处在于用C24代替C20。粗制物通过硅胶层析纯化(梯度：在庚烷中的35-75％乙酸乙酯)，产生C25。收率：1.64g，1.61 mmol，21％。该物质无需进一步纯化而用于接下来的步骤。LCMS m/z 1016.5(M+1)。

B.化合物C26。按照合成实施例3中的C22的通用步骤制备化合物C26，不同之处在于用C25代替C21，并使反应在25psi氢化1.5小时，产生褐色固体C19。收率：0.635g，0.759 mmol，98％。LCMS m/z 836.3(M+1)。

方案13

步骤3.4的制备。

A.2-({[(1Z)-2-{[(3S)-1-({[4-(2-氨基-2-氧代乙基)-3-(5-羟基-4-氧代-1，4-二氢吡啶-2-基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑-1-基]磺酰基}氨基甲酰基)-2-氧代氮杂环丁-3-基]氨基}-1-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸(C27)的制备。按照合成实施例3中的3的通用步骤制备化合物C27，不同之处在于用C26代替C22。同样，与使用实施例3中所采用的沉淀技术相反，通过蒸发三氟乙酸/二氯甲烷溶液产生化合物4的粗制三氟乙酸盐。将粗制物溶解于二甲亚砜中，达到100mg/mL的浓度，过滤，并通过制备型HPLC纯化(柱：Waters SymmetryC8，5μm，30 x 50mm；溶剂A：0.1％甲酸水溶液；溶剂B：在乙腈中的0.1％甲酸。梯度：3％至22％B)。合并属于期望产物的馏分，冷却至-78℃并冻干，得到粉红色固体C27。收率：0.078g，0.11mmol，12％。LCMSm/z 698.9(M+1)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ1.38(br s，6H)，3.33(m，1H)，3.65(m，1H)，4.61(s，2H)，4.88(m，1H)，6.74(br s，1H)，7.03(brs，1H)，7.30(s，1H)，7.89(s，1H)，8.99(d，J＝7.42 Hz，1H)。

B.4的制备。将C27(78mg，0.11mmol)在乙腈(5mL)和水(45mL)混合物中的溶液冷却至0℃，添加碳酸氢钠(18.8mg，0.224mmol)。在0℃剧烈搅拌混合物10分钟。然后将悬浮液冷却至-78℃(使用干冰/丙酮浴)并冻干，产生粉红色固体4。收率：0.079g，0.106mmol，95％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ1.42(s，3H)，1.50(s，3H)，3-3.5ppm，被水峰遮住，3.78(m，1H)，4.57(d，J＝16.4 Hz，1H)，4.72(d，J＝16.4 Hz，1H)，5.15(m，1H)，6.78(s，1H)，6.99(br.s，1H)，7.18(br s，3H)，7.38(br s，1H)，7.41(s，1H)，7.81(s，1H)。

实施例5

2-({[(1Z)-1-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-2-({(3S)-1-[({4-[(2S)-2，3-二羟丙基]-3-(5-羟基-4-氧代-1，4-二氢吡啶-2-基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑-1-基}磺酰基)氨基甲酰基]-2-氧代氮杂环丁-3-基}氨基)-2-氧代乙撑] 氨基}氧基)-2-甲基丙酸，二钠盐(5)的制备。

通过在方案14至16描绘以及在下面详述的步骤制备化合物5。

方案14

步骤1.5-[4，5-双(苄氧基)吡啶-2-基]-4-[(2S)-2，3-二羟丙基]-2，4-二氢-3H-1，2，4-三唑-3-酮(C29)的制备。

A.2-{[4，5-双(苄氧基)吡啶-2-基]羰基}-N-[(2S)-2，3-二羟丙基]肼甲酰胺(C28)的制备。按照合成实施例3中的C19的通用步骤制备化合物C28，不同之处在于用(2S)-3-氨基丙烷-1，2-二醇代替(2R)-3-氨基丙烷-1，2-二醇。得到的化合物C28为黄色固体。通过在真空中从滤液去除溶剂而产生黄色固体(8.58g)，获得另外的产物，使其在四氢呋喃(50mL)中成浆，加热至回流然后过滤，产生第二批C28。C28的组合收率为16.73g，35.88mmol，90％。LCMS m/z 467.2(M+1)。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ2.91(m，1H)，3.20(m，1H)，3.28(m，2H)，3.44(m，1H)，5.31(s，2H)，5.32(s，2H)，6.49(m，1H)，7.31-7.48(m，10H)，7.69(s，1H)，8.25(s，1H)。

B.C29的制备。按照合成实施例1中的C20的通用步骤制备化合物C29，不同之处在于用C28代替C19。粗制物与甲醇(100mL)加热，过滤该热混合物，将滤液浓缩至20mL。过滤收集得到的固体，产生C29。收率：150mg，0.334 mmol，22％。LCMS m/z 449.2(M+1)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ3.28(m，2H)，3.70(m，1H)，4.09(t，J＝5.8Hz，1H)，5.01(d，J＝5.4Hz，1H)，5.27(s，2H)，5.31(s，2H)，7.32-7.49(m，10H)，7.58(s，1H)，8.32(s，1H)，12.03(br s，1H)。

方案15

步骤2.2-({[(1Z)-1-{2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1，3-噻唑-4-基}-2-({(3S)-1-[({4-[(2S)-2，3-二羟丙基]-3-(5-羟基-4-氧代-1，4-二氢吡啶-2-基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑-1-基}磺酰基)氨基甲酰基]-2-氧代氮杂环丁-3-基}氨基)-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸叔丁酯(C31)的制备。

A.2-({[(1Z)-2-({(3S)-1-[({3-[4，5-双(苄氧基)吡啶-2-基]-4-[(2S)-2，3-二羟丙基]-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑-1-基}磺酰基)氨基甲酰基]-2-氧代氮杂环丁-3-基}氨基)-1-{2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1，3-噻唑-4-基}-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸叔丁酯(C30)的制备。按照合成实施例3中的C21的通用步骤制备化合物C30，不同之处在于用C29代替C20。在将反应用甲醇淬灭并在真空中浓缩之后，通过硅胶层析纯化残留物(梯度：在庚烷中的25-100％乙酸乙酯，然后在乙酸乙酯中的0-7％甲醇)，产生固体C30。收率：5.41g，5.14mmol，53％。LCMS m/z1051.7(M+1)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)

1.38(s，9H)，1.40(s，3H)，1.40(s，3H)，1.46(s，9H)，3.28(m，2H)，3.39(dd，J＝6.1，3.2Hz，1H)，3.68(m，2H)，4.03(m，1H)，4.11(m，1H)，4.92(m，1H)，5.28(s，2H)，5.30(s，2H)，7.25(s，1H)，7.31-7.50(m，10H)，7.58(s，1H)，8.35(s，1H)，9.00(d，J＝8.3Hz，1H)。

B.C31的制备。按照合成实施例3中的C22的通用步骤制备化合物C31，不同之处在于用C30代替C21，并使反应在25psi氢化1.5小时，产生红色固体C31。收率：3.49g，4.00mmol，95％。LCMS m/z 871.6(M+1)。

方案16

步骤3.2-({[(1Z)-1-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-2-({(3S)-1-[({4-[(2S)-2，3-二羟丙基]-3-(5-羟基-4-氧代-1，4-二氢吡啶-2-基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑-1-基}磺酰基)氨基甲酰基]-2-氧代氮杂环丁-3-基}氨基)-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸，二钠盐(5)的制备。

A.2-({[(1Z)-1-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-2-({(3S)-1-[({4-[(2S)-2，3-二羟丙基]-3-(5-羟基-4-氧代-1，4-二氢吡啶-2-基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑-1-基}磺酰基)氨基甲酰基]-2-氧代氮杂环丁-3-基}氨基)-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸C32的制备。按照合成实施例3中的3的通用步骤制备化合物C32，不同之处在于用C31代替C22。将粗制物溶解于二甲亚砜中，达到100mg/mL的浓度，过滤，并通过制备型HPLC纯化(柱：Waters Symmetry C8，5μm，30 x 50mm；溶剂A：0.1％甲酸水溶液；溶剂B：在乙腈中的0.1％甲酸。梯度：3％至22％B)。真空浓缩属于期望产物的馏分，保持水浴＜30℃，得到固体。将该固体溶解于乙腈(10mL)和水(100mL)的混合物中，冷却至-78℃并冻干，得到粉红色固体C32。收率：0.155g，0.217mmol，9％。LCMS m/z 715.2(M+1)。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ1.42(s，3H)，1.43(s，3H)，3.27(m，2H)，3.37(dd，J＝6.1，3.1Hz，1H)，3.65(m，1H)，3.70(m，1H)，3.95(m，2H)，4.91(m，1H)，6.81(s，1H)，7.37(s，1H)，8.01(s，1H)，9.04(d，J＝8.3Hz，1H)。HPLC分析：Hewlett Packard 1100；柱：Waters Symmetry C8，5μM，4.6x 50mm；流速：1.2mL/min；溶剂A：0.1％甲酸水溶液；溶剂B：在乙腈中的0.1％甲酸；梯度：6分钟内5％至100％B；注射体积：15uL；检测：254nm；保留时间：3.46min。

B.化合物5的制备。按照合成实施例4中的4的通用步骤制备化合物5，不同之处在于用C32代替C27，产生粉红色固体5。收率：0.155g，0.204mmol，97％。LCMS m/z 715.2(M+1)。¹H NMR(500MHz，D₂O)δ1.40(s，3H)，1.42(s，3H)，3.49(dd，半个ABX图案，J＝12.2，4.9Hz，1H)，3.57(dd，半个ABX图案，J＝12.2，3.7Hz，1H)，3.74(m，1H)，3.88(m，1H)，3.98(m，3H)，5.03(m，1H)，6.90(s，1H)，7.02(s，1H)，7.80(s，1H)。HPLC分析：Hewlett Packard 1100；柱：Waters Symmetry C8，5μM，4.6 x 50mm；流速：1.2mL/min；溶剂A：0.1％甲酸水溶液；溶剂B：在乙腈中的0.1％甲酸；梯度：6分钟内5％至100％B；注射体积：15uL；检测：254nm；保留时间：3.44min。

实施例6

2-({[(1Z)-1-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-2-({(3S)-1-[({3-(5-羟基-4-氧代 -1，4-二氢吡啶-2-基)-4-[(2R)-2-羟丙基]-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑 -1-基}磺酰基)氨基甲酰基]-2-氧代氮杂环丁-3-基}氨基)-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸，二钠盐(6)的制备。

通过在方案17至19描绘以及在下面详述的步骤制备化合物6。

方案17

步骤1.5-[4，5-双(苄氧基)吡啶-2-基]-4-[(2R)-2-羟丙基]-2，4-二氢-3H-1，2，4-三唑-3-酮(C34)的制备。

A.2-{[4，5-双(苄氧基)吡啶-2-基]羰基}-N-[(2R)-2-羟丙基]肼甲酰胺(C33)的制备。按照合成实施例3中的C19的通用步骤制备化合物C33，不同之处在于用(2R)-1-氨基丙-2-醇代替(2R)-3-氨基丙烷-1，2-二醇，并将反应加热60小时，得到白色固体C33。收率：4.54g，10.1mmol，84％。LCMS m/z 451.2(M+1)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ1.00(d，J＝6.2Hz，3H)，2.91(m，1H)，3.01(m，1H)，3.61(m，1H)，4.64(d，J＝4.7Hz，1H)，5.33(br s，4H)，6.28(dd，J＝5.8 Hz，1H)，7.31-7.49(m，10H)，7.69(s，1H)，7.93(br s，1H)，8.28(s，1H)，9.97(br s，1H)。

B.C34的制备。按照合成实施例3中的C20的通用步骤制备化合物C34，不同之处在于用C33代替C19。过滤固体之后，使其从甲醇(250mL)重结晶，获得两批组合的C34。收率：36.5g，84.4 mmol，74％。LCMS m/z 433.6(M+1)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ0.98(d，J＝6.3Hz，3H)，3.81(m，1H)，3.96(dd，半个ABX图案，J＝13.3，5.3Hz，1H)，4.05(dd，半个ABX图案，J＝13.3，7.4Hz，1H)，4.84(d，J＝5.1Hz，1H)，5.28(s，2H)，5.31(s，2H)，7.32-7.49(m，10H)，7.59(s，1H)，8.32(s，1H)，11.96(br s，1H)。

方案18

步骤2.2-({[(1Z)-1-{2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1，3-噻唑-4-基}-2-({(3S)-1-[({3-(5-羟基-4-氧代-1，4-二氢吡啶-2-基)-4-[(2R)-2-羟丙基]-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑-1-基}磺酰基)氨基甲酰基]-2-氧代氮杂环丁-3-基}氨基)-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸叔丁酯(C36)的制备。

A.2-({[(1Z)-2-({(3S)-1-[({3-[4，5-双(苄氧基)吡啶-2-基]-4-[(2R)-2-羟丙基]-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑-1-基}磺酰基)氨基甲酰基]-2-氧代氮杂环丁-3-基}氨基)-1-{2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1，3-噻唑-4-基}-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸叔丁酯(C35)的制备。用氯化三甲基硅烷(0.002mL，0.012mmol)处理C34(1g，2.31 mmol)的1，1，1，3，3，3，-六甲基二硅氮烷(2.54mL，11.6mmol)悬浮液，并使混合物在140℃加热2小时。然后使黄色溶液冷却至室温，并真空浓缩，产生黄色胶。在分液瓶中，在氮气下，在0℃，用羰基氨磺酰氯(0.211mL，2.31mmol)处理C13(1.15g，2.31mmol)的二氯甲烷(2mL)悬浮液，并在0℃搅拌1.5小时。该混合物变成均匀溶液。得自C34的物质用二氯甲烷(2mL)处理，将得到的黄色溶液冷却至-40℃并在氮气下冷却。将该冰冷的含C13的反应混合物经由注射器转移到该溶液中。使混合物在-40℃搅拌30分钟，在1小时内升温至室温，并在升温下搅拌2小时。通过添加甲醇(5mL)淬灭该混合物，真空去除溶剂，粗制物通过硅胶层析纯化(梯度：在乙酸乙酯中的0-3％甲醇)，产生固体C35。收率：1.42g，1.37mmol，59％。LCMS m/z 1035.7(M+1)¹H NMR(400 MHz，DMSO-d₆)δ0.95(d，J＝5.8Hz，3H)，1.33-1.43(m，15H)，1.46(s，9H)，3.40(m，1H)，3.71(m，1H)，3.77(m，1H)，3.95(m，1H)，4.06(m，1H)，4.84(d，J＝5.1 Hz，1H)，5.29(s，2H)，5.31(s，2H)，7.25(s，1H)，7.31-7.51(m，10H)，7.60(s，1H)，8.36(s，1H)，9.02(d，J＝8.3 Hz，1H)，11.85(br s，1H)。

B.C36的制备。按照合成实施例3中的C22的通用步骤制备化合物C36，不同之处在于用C35代替C21，并使反应在25psi氢化1.5小时，产生红色固体C36。收率：3.84g，4.49mmol，88％。LCMS m/z 853.0(M-1)。

方案19

步骤3.2-({[(1Z)-1-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-2-({(3S)-1-[({3-(5-羟基-4-氧代-1，4-二氢吡啶-2-基)-4-[(2R)-2-羟丙基]-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑-1-基}磺酰基)氨基甲酰基]-2-氧代氮杂环丁-3-基}氨基)-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸，二钠盐(6)的制备。

A.2-({[(1Z)-1-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-2-({(3S)-1-[({3-(5-羟基-4-氧代-1，4-二氢吡啶-2-基)-4-[(2R)-2-羟丙基]-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑-1-基}磺酰基)氨基甲酰基]-2-氧代氮杂环丁-3-基}氨基)-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸C37的制备。按照合成实施例3中的3的通用步骤制备化合物C37，不同之处在于用C36代替C22。将粗制物溶解于二甲亚砜中，达到100mg/mL的浓度，过滤，并通过制备型HPLC纯化(柱：Waters Symmetry C8，5μm，30x 50mm；溶剂A：0.1％甲酸水溶液；溶剂B：在乙腈中的0.1％甲酸。梯度：6％至26％B)。真空浓缩属于期望产物的馏分，得到固体，使其溶解于乙腈(10mL)和水(100mL)的混合物中，冷却至-78℃并冻干，得到粉红色固体C37。收率：0.130g，0.186mmol，15％。LCMS m/z 699.0(M+1)。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ0.97(d，J＝6.1 Hz，3H)，1.43(s，3H)，1.43(s，3H)，3.38(dd，J＝6.3，3.2Hz，1H)，3.69(dd，J＝6.1，6.1Hz，1H)，3.78(m，1H)，3.86(m，1H)，4.91(m，1H)，6.83(s，1H)，7.39(s，1H)，8.02(s，1H)，9.08(d，J＝8.3Hz，1H)。

B.6的制备。按照合成实施例4中的4的通用步骤制备化合物6，不同之处在于用C37代替C27，并将原材料C37溶于甲醇(20mL)中，声处理5分钟，并真空浓缩。在反应运行之间，重复该过程3次。收集化合物6，为粉红色固体。收率：0.150g，0.202mmol，96％。LCMSm/z 699.8(M+1)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)0.95(d，J＝5.3Hz，3H)，1.41(s，3H)，1.49(s，3H)，3.30-3.40(m，1H，假定的；被水峰遮住)3.82(m，1H)，3.97(m，3H)，5.11(m，1H)，6.78(s，1H)，7.19(br s，1H)，7.36(s，1H)，7.88(s，1H)。

实施例7

2-({[(1Z)-1-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-2-({(3S)-1-[({3-(5-羟基-4-氧代 -1，4-二氢吡啶-2-基)-4-[(2S)-2-羟丙基]-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑 -1-基}磺酰基)氨基甲酰基]-2-氧代氮杂环丁-3-基}氨基)-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸，二钠盐(7)的制备。

通过在方案20至22描绘以及在下面详述的步骤制备化合物7。

方案20

步骤1.5-[4，5-双(苄氧基)吡啶-2-基]-4-[(2S)-2-羟丙基]-2，4-二氢-3H-1，2，4-三唑-3-酮(C39)的制备。

A.2-{[4，5-双(苄氧基)吡啶-2-基]羰基}-N-[(2S)-2-羟丙基]肼甲酰胺(C38)的制备。按照合成实施例3中的C19的通用步骤制备化合物C38，不同之处在于用(2S)-1-氨基丙-2-醇代替(2R)-3-氨基丙烷-1，2-二醇7，并使反应加热12小时，得到白色固体C38。收率：12.56g，27.88mmol，87％。LCMS m/z 451.6(M+1)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ1.00(d，J＝6.2Hz，3H)，2.91(m，1H)，3.01(m，1H)，3.61(m，1H)，4.65(d，J＝4.7Hz，1H)，5.33(s，4H)，6.28(dd，J＝5.8Hz，1H)，7.31-7.49(m，10H)，7.69(s，1H)，7.93(br s，1H)，8.28(s，1H)，9.99(br s，1H)。

B.C39的制备。按照合成实施例3中的C20的通用步骤制备化合物C39，不同之处在于用C38代替C19，并使反应加热18小时，产生红色固体C39。收率：4.25g，9.82mmol，95％。LCMS m/z 433.3(M+1)。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ0.98(d，J＝6.3Hz，3H)，3.85(m，1H)，3.98(m，1H)，4.07(m，1H)，5.28(s，2H)，5.31(s，2H)，7.31-7.49(m，11H)，7.60(s，1H)，8.32(s，1H)。

方案21

步骤2.2-({[(1Z)-1-{2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1，3-噻唑-4-基}-2-({(3S)-1-[({3-(5-羟基-4-氧代-1，4-二氢吡啶-2-基)-4-[(2S)-2-羟丙基]-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑-1-基}磺酰基)氨基甲酰基]-2-氧代氮杂环丁-3-基}氨基)-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸叔丁酯(C41)的制备。

A.2-({[(1Z)-2-({(3S)-1-[({3-[4，5-双(苄氧基)吡啶-2-基]-4-[(2S)-2-羟丙基]-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑-1-基}磺酰基)氨基甲酰基]-2-氧代氮杂环丁-3-基}氨基)-1-{2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1，3-噻唑-4-基}-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸叔丁酯(C40)的制备。按照合成实施例6中的C35的通用步骤制备化合物C40，不同之处在于用C39代替C34。通过加入甲醇(3mL)淬灭混合物之后，真空去除溶剂，残留物通过硅胶层析纯化(梯度：在乙酸乙酯中的0-3％甲醇)，产生黄色固体C40。收率：0.71g，0.685mmol，44％。LCMS m/z 1035.6(M+1)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆.)δ0.96(d，J＝6.2Hz，3H)，1.38-1.47(m，假定24H)，3.40(dd，J＝6.2，3.1Hz，1H)，3.71(m，1H)，3.78(m，1H)，3.95(m，1H)，4.07(m，1H)，4.83(d，J＝5.5 Hz，1H)，4.91(m，1H)，5.29(s，2H)，5.31(s，2H)，7.25(s，1H)，7.31-7.51(m，10H)，7.60(s，1H)，8.36(s，1H)，9.01(d，J＝8.6Hz，1H)，11.82(br s，1H)。

B.C41的制备。按照合成实施例3中的C22的通用步骤制备化合物C41，不同之处在于用C40代替C21，并使反应在30psi氢化1小时。另外，在这种情况下，经过1cm无铁硅藻土床进行过滤(硅藻土用1N盐酸水溶液，然后用去离子水，之后用丙酮预洗，然后干燥)。得到化合物C41，为红色固体。收率：0.630g，0.7mmol，100％。LCMS m/z 855.1(M-1)。

方案22

步骤3.2-({[(1Z)-1-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-2-({(3S)-1-[({3-(5-羟基-4-氧代-1，4-二氢吡啶-2-基)-4-[(2S)-2-羟丙基]-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑-1-基}磺酰基)氨基甲酰基]-2-氧代氮杂环丁-3-基}氨基)-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸，二钠盐(7)的制备。将C41(0.630g，0.76mmol)的二氯甲烷(0.5mL)溶液冷却至0℃并用三氟乙酸(3.4mL)处理。使该混合物升温至升温并搅拌18小时；然后将该反应混合物缓慢滴加至甲基-叔丁基醚(10mL)和庚烷(20mL)的搅拌溶液中。过滤得到的固体，真空干燥，溶于二甲亚砜(1mL)中，并通过反相色谱法纯化(RediSep RF C₁₈柱，65g；溶剂A：0.1％甲酸水溶液；溶剂B：在乙腈中的0.1％甲酸；梯度：5％至25％B)。真空浓缩属于期望产物的馏分，得到固体。在甲醇中声处理该固体并去除溶剂(这进行4次)，产生为白色固体的游离形式的物质。收率：0.103g，0.147mmol，19％。LCMS m/z 699.0(M+1)。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆.)δ0.95(d，J＝6.1Hz，3H)，1.43(s，3H)，1.44(s，3H)，3.38(dd，J＝6.5，3.3Hz，1H)，3.70(dd，J＝6.1，6.1Hz，1H)，3.77(m，1H)，3.86(m，2H)，4.91(m，1H)，6.82(s，1H)，7.38(s，1H)，8.02(s，1H)，9.06(d，J＝8.8Hz，1H)。将组合的游离形式批量(0.676g，0.92mmol)置于含10mL去离子水的圆底烧瓶中。将悬浮液在冰浴中冷却至0℃，并向该混合物添加(滴加)0.154g碳酸氢钠在1.0mL水中的溶液。搅拌该悬浮液，直到所有固体溶解。然后使溶液冷冻并冻干，产生0.680g化合物7，为浅粉色固体。LCMS m/z 699.6(M+1)。¹H NMR(500MHz，D₂O-d₆.)δ1.01(d，J＝8.5Hz，3H)，1.32(d，J＝6.0Hz，6H)，3.61-3.70(m，2.5H)，3.77(dd，1/2 ABX，J＝18.5Hz，4.0Hz，0.5H)，3.88(t，J＝8.0Hz，1H)，4.90(dd，J＝7.5Hz，4.5Hz，1H)，6.80(s，1H)，6.93(s，1H)，7.71(s，1H)。

实施例8

2-({[(1Z)-1-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-2-({(3S)-1-[({4-[(1，5-二甲基 -1H-吡唑-3-基)甲基]-3-(5-羟基-4-氧代-1，4-二氢吡啶-2-基)-5-氧代-4，5- 二氢-1H-1，2，4-三唑-1-基}磺酰基)氨基甲酰基]-2-氧代氮杂环丁-3-基} 氨基)-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸(8)的制备。

通过在方案23描绘以及在下面详述的步骤制备化合物8。

方案23

A.C43的制备(偶联法2)。以与实施例1中制备C8所述类似的方式制备化合物C42，产生0.67g(0.72mmol)三唑酮C42，为白色固体。LCMS m/z 483.4(M+1)。在氮气下，在23℃，用氯化三甲基硅烷(一滴，0.13uL，0.001mmol)处理C42(0.100g，0.207mmol)的六甲基二硅氮烷(0.227mL，1.04mmol)的悬浮液。使该混合物在140℃加热2小时；加热后，反应变成澄清的褐色液体。将该混合物冷却至室温并在高真空下保持1小时，产生褐色玻璃状物质。单独地，在氮气下，在0℃，用氯磺酰异氰酸酯(0.019mL，0.207mmol)处理C13(0.103g，0.207mmol)的二氯甲烷(0.1mL)悬浮液并搅拌，直到混合物变成均匀的(约5分钟)。在0℃搅拌溶液1.5小时。将该甲硅烷基化的三唑烷酮(0.207mmol)用DCM(0.2mL)处理，将该褐色溶液冷却至-40℃并在氮气下搅拌。然后通过注射器将所制备的氨磺酰氯溶液(0.1mL，0.207mmol)转移至由制备C42的复合物中，并在-40℃使该混合物搅拌30分钟，在1小时内升温至室温，并于室温搅拌2小时。通过添加甲醇(0.5mL)淬灭该混合物，真空去除溶剂，粗制物通过柱色谱法纯化(硅胶，在二氯甲烷中的5％甲醇)，产生0.050g(22％)C43。LCMS m/z 1085.1(M+1)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆.)δ1.34-1.48(m，24H)，2.06-2.10(m，1H)，2.25-2.28(m，1H)，3.40-3.44(m，1H)，3.55(s，1H)，4.92(br.s，1H)，5.20-5.63(m，4H)，5.56-5.63(m，1H)，7.25(d，J＝4.9Hz，1H)，7.28-7.50(m，10H)，7.58(s，1H)，8.33(s，1H)，9.01(br.s，2H)。

B.2-({[(1Z)-1-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-2-({(3S)-1-[({4-[(1，5-二甲基-1H-吡唑-3-基)甲基]-3-(5-羟基-4-氧代-1，4-二氢吡啶-2-基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑-1-基}磺酰基)氨基甲酰基]-2-氧代氮杂环丁-3-基}氨基)-2-氧代乙撑]氨基}氧基)-2-甲基丙酸(8)的制备。以与实施例1中化合物1所述类似的方式对化合物C43脱保护并进行HPLC纯化，产生0.015g(9％)化合物8，为浅粉色固体。LCMS m/z 748.9(M+1)。¹HNMR(500MHz，DMSO-d₆.)δ1.41(s，3H)，1.41(s，3H)，2.39(s，1H)，3.55(s，3H)，3.67(m，1H)，3.91(dd，J＝6.3，6.3Hz，1H)，5.05(m，1H)，5.58(s，2H)，6.73(s，1H)，7.26(s，1H)，7.34(br s，1H)，7.80(s，1H)，9.10(d，J＝8.0Hz，1H)，11.85(s，1H)。

另外的实施例9-30示于下面的表A中，并且类似于上面的实施例制备，使用环化法1(实施例1步骤3B中描述)或环化法2(实施例4步骤1B中描述)，并结合偶联法1(实施例1步骤6A中描述)或偶联法2(实施例4步骤1B中描述)。

生物学性质

在一些实施方式中，本发明的化合物对细菌展示出定向且有效的活性。本发明的化合物因此可用于例如治疗和/或预防人类和动物中由病原菌引起的多种疾病。

下表1显示了铜绿假单胞菌、克雷白肺炎杆菌和鲍曼不动杆菌的特定菌株的体外MIC数据。培养物保藏菌株1045-06对包括碳青霉烯类、氨基糖苷类和氟喹诺酮类在内的几类已知抗微生物剂具有耐药性，而菌株1000-02和3167对先锋霉素类具有耐药性。菌株PA0200是缺乏功能性MexAB-oprM流出泵(efflux pump)的实验室菌株PAO1的衍生物。所列举的化合物对所有这三种筛选菌株具有高度活性，这表明其对革兰氏阴性细菌性病原体的广泛活性。

表1：实施例1-30的MIC

N.T.＝未测试

¹值表示2MIC测定的平均值

下面的表2显示了本发明的几种化合物与头孢吡肟(一种头孢菌素抗生素，标明治疗由铜绿假单胞菌引起的细菌感染)、亚胺培南(一种碳青霉烯抗生素，用于治疗由铜绿假单胞菌引起的感染)和比较实施例A(EP 0281289中的实施例23，公布于1988年9月7日)之间的比较。

表2：抗铜绿假单胞菌的体外和体内比较

¹来自以前试验的数据

²91临床分离物

表2显示本发明化合物的结果，评价了其在小鼠呼吸道感染模型中抗铜绿假单胞菌1091-05的功效。关于该模型，用环磷酰胺对C3H/HeN小鼠进行免疫抑制，相对于攻击，分别在四天前和1天前口服给予150mg/kg和100mg/kg。用异氟烷(在氧气中，5％)麻醉小鼠，经由鼻内滴注，将40μL体积(每只小鼠～2.8x 10³ cfu)的细菌接种物给予每只小鼠。给小鼠服用化合物，经由皮下注射给予，开始于攻击后4小时，并且连续两天每天两次治疗。在10天内跟踪致死率，并测定50％保护剂量(PD₅₀s)，包括解释性评论。已知的单卡波姆原型比较实施例A(EP 0281289中的实施例23b，公布于1988年9月7日)在该模型中通常具有≥100mg/kg的PD₅₀。然而，在该模型中评价本发明的示例性单卡波姆，并且很多相比比较实施例A显示更好的功效，例如实施例4(25.0mg/kg)、实施例6(32.7mg/kg)、实施例5(18.6mg/kg)、实施例3(20.6mg/kg)和实施例7(15.7mg/kg)。

PD₅₀是化合物保护小鼠免受致死性感染的能力的量度。因此，在该研究中较低的值预示功效改善。因为针对实施例3、实施例6、实施例4、实施例7和实施例5的化合物计算的95％置信区间(预测实际值将取决于95％置信度的范围)不与比较实施例A所测定的PD₅₀值重叠，因此可以推断，相对于比较实施例A，这些化合物显著更有效。倘若对抗所使用的病原体(铜绿假单胞菌1091-05)的MIC类似，则这种结果是出乎意料的。重要地，在这些临床前体内模型中的性能预示着对抗这些感染类型的临床效力结果。