CN102323404A

CN102323404A - 一种自身免疫抗体检测试剂盒及检测方法

Info

Publication number: CN102323404A
Application number: CN201110130659A
Authority: CN
Inventors: 高翔; 梁培华
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2011-05-18
Filing date: 2011-05-18
Publication date: 2012-01-18

Abstract

本发明涉及一种自身免疫抗体检测试剂盒及检测方法，检测试剂盒包括：包被有抗原的条状固相载体、酶标结合物、酶底物、封闭剂和缓冲液。检测方法是：将待检样品血清或血浆与包被有抗原的条状固相载体在室温下孵育；孵育后用缓冲液洗涤固相载体；将酶标结合物与固相载体在室温下孵育；孵育后用缓冲液洗涤固相载体；将固相载体与酶底物在室温下孵育；孵育后用去离子水清洗固相载体并干燥；把干燥的固相载体放入检测系统中。本发明的检测方法操作简单、快速、灵敏，且特异性好，而且对操作人员的要求不高，其检测结果的解释基本不受试验人员的专业知识和经验等多因素的影响，因此可广泛应用于各级医疗检验场所，尤其是基层医疗机构。

Description

一种自身免疫抗体检测试剂盒及检测方法

技术领域

本发明涉及一种自身免疫抗体检测试剂盒及检测方法，属于医学检验领域。

背景技术

自身免疫性疾病(autoimmune disease，AID)是指由于某些原因(感染、遗传、内分泌等)造成免疫系统对自身成分的免疫耐受减低或破坏，致使自身抗体和/或致敏淋巴细胞以及一些固有免疫成分如补体、炎症因子等损伤自身器官组织而引起的疾病，表现为相应组织器官的功能障碍。

自身免疫性疾病包括11大类30余种疾病，其中系统性红斑狼疮、混合性结缔组织病、进行性系统性硬皮病、多发性肌炎、自身免疫肝病、风湿和类风湿性疾病、I型糖尿病以及恶性肿瘤等是最为常见并严重影响患者健康及生活质量的疾病。

近年来，自身免疫性疾病发病率明显上升，其总体发病率占世界人口的3％-5％，我国AID患者已达3000万人以上。临床上越来越多的疾病与自身免疫相关，由于AID可累及人体的各系统、组织和器官，临床表现复杂，很多AID被认为是疑难病，加之由于国内认识不足及诊断水平的局限，造成大量患者因延误治疗而致残，自身免疫性疾病已成为严重危害人民健康的重大疾病。

自身免疫性疾病患者中，绝大多数病人血清或其它体液中可检测到一种或多种自身抗体(autoantibodies)，能提供对疾病早期诊断和治疗极其有价值的依据。每种AID都伴有特征性的自身抗体谱，许多自身抗体又预示着疾病的活动性和可能损伤的靶器官。自身抗体检测对于诊断和鉴别诊断AID、判断疾病活动度、判断预后、观察治疗效果和指导临床用药具有重要的临床意义。

目前临床上自身抗体检测方法主要有间接免疫荧光法、酶联免疫吸附法、免疫印迹法、免疫斑点法、免疫沉淀法等，其中多数方法仍然以手工操作为主，操作流程较复杂、对操作人员的要求较高，对检测结果的解释受到检测方法、检测试剂的类型、试验人员的专业知识和经验等多因素的影响。

发明内容

本发明的目的是提供一种操作简单、快速、灵敏，特异性好，而且对操作人员的要求不高的自身免疫抗体检测试剂盒及检测方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明的检测试剂盒包括：包被有抗原的条状固相载体、酶标结合物、酶底物、封闭剂和缓冲液。

本发明的检测方法是：(1)将待检样品血清或血浆与包被有抗原的条状固相载体在室温下孵育0.5～1.5小时；(2)孵育后用缓冲液洗涤固相载体；(3)将酶标结合物与固相载体在室温下孵育30～60分钟；(4)孵育后用缓冲液洗涤固相载体；(5)将固相载体与酶底物在室温下孵育3～7分钟；(6)孵育后用去离子水清洗固相载体并干燥；(7)将数据处理芯片上存储的检测试剂盒信息读入数据处理芯片中；(8)把干燥的固相载体放入光学检测系统中，数据处理芯片驱动光学检测系统对固相载体进行检测，并将检测到的光信号经光电及模/数转换后，转换为数字信号，传输给数据处理芯片；(9)数据处理芯片自动识别数字信号，计算得到固相载体上的各抗原灰度值，并与反应质控线和临界值质控线的灰度值比较，进而根据分析软件得到数据分析报告；(10)将分析报告传输给打印装置，打印结果。

本发明的检测试剂盒其内容较齐全，可以应对人体自身免疫抗体的检测。本发明的检测方法操作简单、快速、灵敏，且特异性好，而且对操作人员的要求不高，其检测结果的解释基本不受试验人员的专业知识和经验等多因素的影响，因此可广泛应用于各级医疗检验场所，尤其是基层医疗机构，对疾病的检测、预防及治疗有极为重要的意义。

附图说明

图1是本发明的检测装置示意图，

图2是本发明检测试剂盒2的结构示意图(俯视)，

图3是本发明检测试剂盒2的结构示意图(侧视)，

图4是本发明的移动托盘3的结构示意图。

具体实施方式

本发明较佳的实施例提供了一种自身免疫抗体检测试剂盒及检测方法(见图1～图4)，本实施例的检测试剂盒包括：包被有抗原的条状固相载体、酶标结合物、酶底物、封闭剂和缓冲液。

所述条状固相载体上含有预先设置的反应质控线8和临界值质控线9。

所述条状固相载体包括但不限于硝酸纤维素(NC)膜、醋酸纤维素(CA)膜、聚偏氟乙烯(PVDF)膜或尼龙(Nylon)膜等；所述包被抗原包括但不限于抗核抗原(ANA)、可提取核抗原(ENA)、自身免疫肝病抗原、脉管炎相关抗原、肌炎相关抗原、糖尿病相关抗原、磷脂综合症相关抗原或类风湿关节炎相关抗原。

所述抗核抗原和可提取核抗原(ANA-ENA)包括但不限于RNP68、RNPA、RNPC、SmB、SmD、Ro/SSA60、Ro/SSA52、La/SSB、Rib-P、PCNA、CENPB、Sc170、Jo-1、组蛋白抗原或人源性双链DNA抗原；

所述自身免疫肝病抗原包括但不限于PDH(AMA M2)、Sp100、LKM1、gp210、LC1或SLA；

所述脉管炎相关抗原包括但不限于PR3、MPO或GBM；

所述肌炎相关抗原包括但不限于Jo-1、Mi2、PM-Sc1、U1-snRNP或Ku；

所述糖尿病相关抗原包括但不限于IAA、ICA、GDA、IA-2A或ZnT8；

所述磷脂综合症相关抗原包括但不限于B2GP1或心磷脂抗原；

所述类风湿关节炎相关抗原包括但不限于RF、RA33或CCP。

所述酶标结合物包括但不限于抗人IgG-HRP、抗人IgG-AP，以及根据现有技术可以藕联到抗人IgG分子上的其它酶分子。

所述酶底物包括但不限于TMB、BCIP/NBT、AMPPD、CDP-STAR以及根据现有技术可以与所述酶标结合物上的酶分子反应进行显色和进行化学发光等的化合物分子。

所述封闭剂包括但不限于奶粉、脱脂奶粉、BSA、BSA第5组分、PEG聚合物、酪蛋白及其降解物以及其它根据现有技术可以与所述固相载体和抗原发生非特异结合的物质。

所述缓冲液包括但不限于磷酸盐缓冲液、TRIS缓冲液等；所述缓冲液含有一定浓度的去垢剂和防腐剂等；所述去垢剂包括但不限于吐温(Tween)、曲拉通(Triton)等；所述防腐剂包括但不限于MIT、Oxypyrion、硫柳汞、叠氮钠等。

本实施例的检测方法是：(1)将待检样品血清或血浆与包被有抗原的条状固相载体在室温下孵育0.5～1.5小时；(2)孵育后用缓冲液洗涤固相载体；(3)将酶标结合物与固相载体在室温下孵育30～60分钟；(4)孵育后用缓冲液洗涤固相载体；(5)将固相载体与酶底物在室温下孵育3～7分钟；(6)孵育后用去离子水清洗固相载体并干燥；(7)将数据处理芯片上存储的检测试剂盒信息读入数据处理芯片中；(8)把干燥的固相载体放入光学检测系统中，数据处理芯片驱动光学检测系统对固相载体进行检测，并将检测到的光信号经光电及模/数转换后，转换为数字信号，传输给数据处理芯片；(9)数据处理芯片自动识别数字信号，计算得到固相载体上的各抗原灰度值，并与反应质控线和临界值质控线的灰度值比较，进而根据分析软件得到数据分析报告；(10)将分析报告传输给打印装置，打印结果。

上述实施例检测方法使用的检测装置包括机罩1、数据处理芯片4、传送机构5、光学检测系统6和控制装置7，机罩1的下面装有带凹槽10的移动托盘3，传送机构5设置在移动托盘3的下部，数据处理芯片4与传送机构5电连接，机罩1内装有光学检测系统6和控制装置7。移动托盘3的表面设有二十个凹槽10。移动托盘3是通过传送机构5进行水平移动的一种平板，传送机构5可以采用普通的皮带传动和滚轮传动。移动托盘3的移动受控于数据处理芯片4的控制信号，并根据具体信号指令，检测试剂盒2会循序移动到光学检测系统6所在的位置。因此，移动托盘3会按照顺序将检测试剂盒2逐一移送至光学检测系统6的位置。光学检测系统6是检测所述试剂盒反应颜色的一种检测传感器。本发明的光学检测系统6为CIS接触式图像传感器，其发光体由300-600个紧密排列的红、蓝、绿三色LED灯组成，这些LED灯所发出的光混合在一起，通常把LED灯的波长设定在430-690nm之间的范围。光源直接照射到固相载体上，其发射光通过导光管直接被多晶片传感器所接收，产生高保真的采样信号。光信号经光电及模/数转换后，将数字信号通过接口传输回数据处理芯片，数据处理芯片在CPU的统一管理下，首先对反应质控线8和临界值质控线9的信号进行自动识别并读取数据，接着对多个项目的反应信号进行自动识别，并将光信号存储在存储器中。

上述实施例所述的数据处理芯片可以依据检测结果，自动运行存储的分析软件，对检测结果进行技术分析，并将分析报告传送给输出装置。输出信号的接口可以采用串行、并行或网络接线等多种形式。采用USB接口方式，可以与目前流行的USB接口打印机和计算机连接。

上述实施例的特点是利用移动托盘，可以同时依次放置20个检测用条状固相载体，批量检测自身抗体标本，节约操作人员的实际操作时间。其优点在于可一次性批量分析20个检测结果，使检测试剂的检测时间更为集中，在检测装置进行检测时间段内，操作人员可以自由安排其它工作；由于优化了整个过程的时间安排，因此加快了检测速度。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，这些具体实施方式都是基于本发明整体构思下的不同实现方式，而且本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书的保护范围为准。

Claims

1.一种自身免疫抗体检测试剂盒，其特征在于，检测试剂盒包括：包被有抗原的条状固相载体、酶标结合物、酶底物、封闭剂和缓冲液。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述条状固相载体上含有预先设置的反应质控线和临界值质控线。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述条状固相载体包括硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜、聚偏氟乙烯膜或尼龙膜；所述包被抗原包括抗核抗原、可提取核抗原、自身免疫肝病抗原、脉管炎相关抗原、肌炎相关抗原、糖尿病相关抗原、磷脂综合症相关抗原或类风湿关节炎相关抗原。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述抗核抗原和可提取核抗原包括RNP68、RNPA、RNPC、SmB、SmD、Ro/SSA60、Ro/SSA52、La/SSB、Rib-P、PCNA、CENPB、Sc170、Jo-1、组蛋白抗原或人源性双链DNA抗原。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述酶标结合物包括抗人IgG-HRP或抗人IgG-AP。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述酶底物包括TMB、BCIP/NBT、AMPPD或CDP-STAR。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述封闭剂包括奶粉、脱脂奶粉、BSA、BSA第5组分、PEG聚合物或酪蛋白。

8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述缓冲液包括磷酸盐缓冲液或TRIS缓冲液。

9.一种使用权利要求1所述自身免疫抗体检测试剂盒的检测方法，其特征在于：(1)将待检样品血清或血浆与包被有抗原的条状固相载体在室温下孵育0.5～1.5小时；(2)孵育后用缓冲液洗涤固相载体；(3)将酶标结合物与固相载体在室温下孵育30～60分钟；(4)孵育后用缓冲液洗涤固相载体；(5)将固相载体与酶底物在室温下孵育3～7分钟；(6)孵育后用去离子水清洗固相载体并干燥；(7)将数据处理芯片上存储的检测试剂盒信息读入数据处理芯片中；(8)把干燥的固相载体放入光学检测系统中，数据处理芯片驱动光学检测系统对固相载体进行检测，并将检测到的光信号经光电及模/数转换后，转换为数字信号，传输给数据处理芯片；(9)数据处理芯片自动识别数字信号，计算得到固相载体上的各抗原灰度值，并与反应质控线和临界值质控线的灰度值比较，进而根据分析软件得到数据分析报告；(10)将分析报告传输给打印装置，打印结果。