CN102319274B

CN102319274B - 珍珠菜提取物及其提取方法和应用

Info

Publication number: CN102319274B
Application number: CN 201110281698
Authority: CN
Inventors: 康文艺; 魏金凤; 尹震花; 李园园; 巩芳
Original assignee: Henan University
Current assignee: Central service project of Jinhu County
Priority date: 2011-09-21
Filing date: 2011-09-21
Publication date: 2013-06-26
Anticipated expiration: 2031-09-21
Also published as: CN102319274A

Abstract

本发明涉及一种珍珠菜提取物，其选自珍珠菜醇提物的石油醚部位、乙酸乙酯部位或正丁醇部位中的一种或任意组合；具体的提取方法为：取干燥的珍珠菜粉末用体积浓度不小于70%的乙醇水溶液进行浸提，浸提液浓缩得浸膏；将浸膏分散于蒸馏水中，然后依次用溶剂石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，各萃取三次；挥干溶剂后即分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。实验证明，珍珠菜三种不同部位提取物均能显著降低急性肝损伤小鼠血清中的GPT、GOT的含量以及小鼠肝组织中的MDA含量，并能显著升高SOD活力，可用来制备保肝护肝药物，尤其是制备具有保护急性肝损伤的药物。

Description

珍珠菜提取物及其提取方法和应用

技术领域

本发明属于制药领域，涉及一种珍珠菜提取物及其提取方法，该珍珠菜提取物具有保肝护肝作用。

背景技术

肝损伤是多种因素如毒物（CCL₄、AP、IC）的中间产物与大分子物质共价结合、缺氧、脂质过氧化、细胞内钙稳态失调和内毒素相互作用的结果，而非单一的作用。肝损伤引发的肝脏疾病已成为常见病、多发病，更为严重的是其引发的肝功能衰竭和肝性脑病等，发病率和死亡率高，极大地威胁着人类健康。很多因素都可引起肝损伤。体内模型特别是化学性肝损伤模型在形态学、病理生理学的某些方面与人慢性肝病较为相似。腹腔注射CCl₄植物油溶液是目前常用的肝炎模型。CCl₄引起肝损伤的机制是CCl₄在肝微粒体细胞色素P450激活下生成自由基CCI₃·及Cl·，这些自由基可与肝细胞内大分子发生共价结合，也可攻击膜下不饱和脂质，引起脂质过氧化，从而使肝细胞损伤，细胞质内GPT、GOT渗入血液，表现为血清中GPT、GOT活性升高。SOD活性及MDA含量常可反映体内脂质过氧化反应程度，间接反映机体组织、细胞损伤的程度。通过检测小鼠肝匀浆中的SOD活性及MDA含量可反映出药物对肝细胞的保护作用。因此，以血清GPT、GOT、肝组织SOD活性及MDA含量作为指标来探讨药物对肝脏的保护作用是非常有意义的。

目前，肝损伤的治疗方法有很多，虽然均有一定的疗效，但也存在着明显的不足。首先，西药具有较大的毒副作用，且疗效并不确切。其次，实验和临床研究证实，中药在抗菌抗病毒、改善肝功能、抗氧化、改善微循环、调节免疫功能以及抗肝纤维化等方面显示出良好的疗效，安全、可靠、有效，进一步显示出中医辨证论治的合理性，突显了中药在治疗肝损伤，尤其是内毒素性急性肝损伤方面的良好前景。

珍珠菜为报春花科植物珍珠菜(Lysimachia clethroides Duby)的根或全草，在我国东北、华北、华东、中南、西南及河北、陕西等地均有分布，其味苦、辛，性平，具清热利湿，活血散瘀、解毒消痈之功效。国内外学者从20世纪60年代开始相继从珍珠菜中分离得到黄酮及苷类和有机酸等化合物。药理研究表明其具有良好的抗肿瘤作用，对大鼠W256、L1-皮下型、小鼠肉瘤S180、小鼠宫颈癌U14、小鼠肝癌H22实体瘤、肝癌腹水型 HAC转实体HSC、艾氏腹水型EAC转实体ESC以及小鼠L615白血病均有明显的抑制作用；此外，其还有抗菌作用。但是，国内外尚未见到有关于珍珠菜对急性肝损伤小鼠保护作用的报道。

发明内容

本发明目的在于提供一种珍珠菜提取物，该提取物具有保肝护肝作用，可用来制备保护急性肝损伤的药物。本发明还提供了该提取物的提取方法。

为实现上述目的，本发明采取如下技术方案：

一种珍珠菜提取物，其选自珍珠菜醇提物的石油醚部位、乙酸乙酯部位或正丁醇部位中的一种或任意组合。

所述珍珠菜提取物的提取方法，包括如下步骤：取干燥的珍珠菜粉末用浓度不小于70V%的乙醇水溶液进行浸提，浸提液浓缩得浸膏；将浸膏分散于蒸馏水中，然后依次用溶剂石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，各萃取三次；挥干溶剂后即分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。

具体的，所述干燥的珍珠菜粉末用95V%的乙醇水溶液在室温下浸泡2－4次，每次3天，合并所得浸提液并浓缩成浸膏。

上述珍珠菜提取物在制备保肝护肝药物方面的应用，尤其是在制备具有保护急性肝损伤药物方面的应用。

本发明提供的珍珠菜提取物选自报春花科植物珍珠菜(Lysimachia clethroides Duby)的根或全草。为证实上述提取物的保肝护肝作用，本发明以联苯双酯为阳性对照，分别考察了珍珠菜三种不同部位的提取物对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠的治疗作用。实验结果表明，珍珠菜三种不同部位的提取物均能够显著降低急性肝损伤小鼠血清中的GOT、GPT及小鼠肝组织中的MDA含量，除珍珠菜正丁醇部位低剂量组外，其他剂量组均能显著升高SOD活力。由此说明，本发明珍珠菜三种不同部位的提取物对急性肝损伤具有很好的保护作用。

具体实施方式

实施例1

一种珍珠菜有效部位，其选自珍珠菜醇提物的石油醚部位、乙酸乙酯部位或正丁醇部位中的一种或任意组合；具体的提取方法为：珍珠菜全草阴干、粉碎，取1000 g干燥的珍珠菜粉末，用体积分数95%的乙醇水溶液（乙醇水溶液的添加量为珍珠菜粉末重量的3－5倍），室温下浸泡3次，每次3天，合并3次所得浸提液并浓缩成浸膏；将浸膏分散于1000ml蒸馏水中，然后依次用溶剂石油醚（3000ml）、乙酸乙酯（3000ml）和正丁醇（3000ml）进行萃取，各萃取三次；挥干溶剂后即分别得到固态的石油醚部位（LCPE）12 g、乙酸乙酯部位(LCEA) 38 g和正丁醇部位(LCBU56 g)，对应提取率分别为1.2%、3.8%和5.6%。

具体的萃取过程为：先用石油醚萃取三次，萃取液分层，取上层石油醚部分（挥干后即为石油醚部位），下层为水层；水层再用乙酸乙酯萃取三次，萃取液分层，取上层乙酸乙酯部分（挥干后即为乙酸乙酯部位），下层为水层；水层最后用正丁醇萃取三次，萃取液分层，取上层正丁醇部分（挥干后即为正丁醇部位）。这样操作的目的在于将浸膏中的有效成分按极性从小到大的顺序依次萃取出来，因溶剂石油醚、乙酸乙酯和正丁醇的极性是递增的。

实施例2

用体积分数85%的乙醇水溶液替换体积分数95%的乙醇水溶液，其它同实施例1，分别得到固态的石油醚部位（LCPE）14g、乙酸乙酯部位(LCEA) 39g和正丁醇部位(LCBU) 61g，对应提取率分别为1.4%、3.9%和6.1%。

效果试验

（一）主要试剂与仪器：

四氯化碳（分析纯）购自开封化学试剂总厂；橄榄油购自上海卫辉化学试剂厂；联苯双酯滴丸购自浙江万邦药业有限公司，批号：090205；考马斯亮蓝G250购自上海化学试剂公司分装厂，批号：20050115；牛清蛋白购自北京奥博星生物技术有限责任公司，批号：20100526；其它试剂均为分析纯。

谷草转氨酶（GOT）试剂盒（20110613）、谷丙转氨酶（GPT）试剂盒（20110808）、丙二醛（MDA）试剂盒（20110803）、超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒（20110802）均购于南京建成生物工程研究所。

0.4V%CCl₄油溶液：取四氯化碳分散到橄榄油中，用磁力搅拌器强力搅拌2 h；现用现配。

UV 2000型紫外可见分光光度计 (尤尼可上海仪器有限公司)；Multiskan MK3酶标仪 (Thermo Electron)；LRH-150恒温培养箱 (上海一恒科技有限公司)。

（二）实验方法：

取健康的成年雄性昆明小鼠（4～6 周龄，体重20±2 g）120只，随机分为12组，每组10只。分别为空白组、模型组、联苯双酯阳性对照组（70mg/kg）、石油醚部位（LCPE）高、中、低剂量组（500、250、125mg/kg）、乙酸乙酯部位（LCEA）高、中、低剂量组（600、300、150mg/kg）和正丁醇（LCBU）高、中、低剂量组（600、300、150mg/kg）。除模型组外，空白组用0.5%的羟甲基纤维素钠水溶液（CMC-Na）灌胃，其它试验组用0.5%CMC-Na分别配制成相应浓度灌胃给药，1次/天，连续给药8天。于末次给药2 h后对小鼠进行造模（空白组除外）。禁食不禁水12 h后，摘除小鼠眼球取血，血浆室温静置30min，待血清分离后离心，得到血清，放置于冰箱0-3℃保存。快速分离肝脏，制备10%和1%的肝脏组织匀浆液。并用考马斯亮蓝法测定10%和1%组织匀浆液的蛋白含量。

（三）实验结果：

从表1中可以看出，模型组与空白组比较，GOT和GPT均显著升高（P<0.001），说明造模成功；给药8天后，阳性对照组与模型组比较，GOT和GPT均显著降低（P<0.01，P<0.001）；LCPE、LCEA和LCBU高、中、低剂量组与模型组比较，GOT和GPT均有极显著降低（P<0.001）。三种不同部位的提取物不同剂量组在降低GOT的活力上，效果均好于联苯双酯。因此，珍珠菜三种提取部位均能明显降低四氯化碳致肝损伤小鼠血清中GOT和GPT的活力，具有很好的肝保护作用。

由表2可以看出，模型组与空白组比较，MDA含量和SOD水平均有显著升高（P<0.001，P<0.01）；给药8天后，阳性对照组与模型组比较，能显著性降低MDA含量（P<0.001），并且能显著性升高SOD水平（P<0.01）；LCPE、LCEA和LCBU高、中、低剂量组和模型组比较，均能显著性降低MDA含量（P<0.001）；LCPE高、中、低剂量组和模型组比较，能显著升高小鼠肝组织中SOD活力（P<0.01）；LCEA高、中、低剂量组和模型组比较，SOD有显著升高（P<0.05）；LCBU高、中、低剂量组和模型组比较，SOD高、中剂量组有极显著升高（P<0.001），低剂量组无显著性差异。结果表明，除LCBU低剂量组外，珍珠菜三种提取部位各剂量组能够明显升高四氯化碳致肝损伤小鼠肝匀浆SOD 的活力，降低MDA 的含量，其中LCBU高、中剂量组的效果最好。

综上说明，珍珠菜的三种石油醚部位（LCPE）、乙酸乙酯部位(LCEA)和正丁醇部位(LCBU)提取物具有较好的保肝护肝作用，可以用来制备保肝护肝药物，尤其是制备具有保护急性肝损伤的药物。

Claims

1.珍珠菜提取物在制备具有保护急性肝损伤药物方面的应用，所述珍珠菜提取物选自珍珠菜醇提物的石油醚部位、乙酸乙酯部位或正丁醇部位中的一种或任意组合；所述珍珠菜提取物经下述方法获得：取干燥的珍珠菜粉末用浓度95V%的乙醇水溶液进行浸提，浸提液浓缩得浸膏；将浸膏分散于蒸馏水中，然后依次用溶剂石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，各萃取三次；挥干溶剂后即分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。