CN102293768A

CN102293768A - 钩吻素子在制备治疗类风湿性关节炎药物中的应用

Info

Publication number: CN102293768A
Application number: CN201110174657A
Authority: CN
Inventors: 俞昌喜; 许盈; 杨渐; 苏燕评; 蔡宏达
Original assignee: Fujian Medical University
Current assignee: Fujian Medical University
Priority date: 2011-06-25
Filing date: 2011-06-25
Publication date: 2011-12-28
Anticipated expiration: 2031-06-25
Also published as: US9078890B2; CN102293768B; US20150011767A1; WO2013000209A1; CN103619333A

Abstract

本发明公开一种钩吻素子在制备治疗类风湿性关节炎药物中的应用，尤其是作为活性成分的钩吻生物碱单体钩吻素子或其药学上可接受的盐在制备治疗类风湿性关节炎药物中的应用。药理学实验结果显示，钩吻素子能剂量依赖性降低类风湿性关节炎机体抗体的产生，改善肿胀、痛敏、关节炎指数等症状，逆转关节病理性改变，无临床常用药的严重缺点，表明钩吻素子具有强效低毒抗类风湿性关节炎的作用。钩吻素子可开发为治疗类风湿性关节炎的新药，产业化前景明确。

Description

钩吻素子在制备治疗类风湿性关节炎药物中的应用

技术领域

本发明涉及钩吻生物碱单体钩吻素子（Koumine）的新用途，尤其是涉及钩吻素子在制备治疗类风湿性关节炎药物中的应用。

背景技术

类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis)是一种累及周围关节为主的多系统性炎症性自身免疫性疾病，病因未明。类风湿性关节炎是临床上最常见的炎症性关节疾病，严重影响患者的功能状况、生活质量与预期寿命，因其慢性特点、相关并发症和长期功能障碍，对社会和经济造成巨大的影响。目前对类风湿性关节炎的治疗以药物治疗为主（常用药为非甾体抗炎药，新上市生物制剂如TNF-α抑制剂），但是没有一个药物能真正完全控制病情的发展，且有严重的副作用，因此亟待研发新型抗类风湿性关节炎药。在中草药中寻找活性药用物质是研发的热点与方向之一。

钩吻（Gelsemium elegans Benth.）为马钱科植物胡蔓藤的全草，是历史悠久的药用植物，我国盛产于福建、浙江、广东等地，具有多种生理药理活性，如抗肿瘤、松弛平滑肌、抑制血小板聚集等作用；但毒性较大，不宜直接入药。钩吻主要活性成分为生物碱，包括钩吻素子、甲、己等40多种单体。钩吻总生物碱毒性较高，但各种单体毒性大小不一。其中钩吻素子为国产钩吻生物碱单体中含量最高且毒性较小的一种有效成分，具有研发应用前景。

钩吻素子，分子式为C₂₀H₂₂N₂O，结构式为：

钩吻素子的来源目前主要从钩吻植物中提取分离，如使用柱层析法，或使用本发明人发明的“高速逆流色谱法从钩吻中分离制备钩吻生物碱单体的方法”（已授权，授权公告号: CN101323618B），该发明提供了高效、速效获得钩吻素子的途径，为钩吻素子的产业化应用奠定基础。

近年对钩吻素子的研究渐热，发现其具有多种生理药理活性，如抗肿瘤作用[吴达荣，秦瑞，蔡晶，迟德彪. 钩吻素子抗肿瘤作用研究，中药药理与临床，2006，22（5）：6-8]、抗焦虑作用（本课题组已申请国家发明专利，钩吻素甲、钩吻素子、1-甲氧基钩吻碱在制备治疗焦虑症药物中的应用，申请号：201110130826.6）、抗慢性疼痛作用（本课题组已申请国家发明专利，钩吻素子在制备治疗慢性疼痛药物中的应用，申请号：200810071467.X）等。但是，钩吻素子抗类风湿性关节炎作用及其可能的用途未见文献和专利报道。本发明公开了钩吻素子抗类风湿性关节炎作用及其在制备治疗类风湿性关节炎药物中的应用。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的是提供一种钩吻生物碱单体钩吻素子强效低毒抗类风湿性关节炎的新用途，即作为活性成分的钩吻素子或其药学上可接受的盐在制备治疗类风湿性关节炎药物中的应用。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：钩吻素子作为活性成分在制备治疗类风湿性关节炎药物中的应用。

所述的钩吻素子，为钩吻生物碱单体，分子式为C₂₀H₂₂N₂O，结构式为：

钩吻素子或其药学上可接受的盐具有制备治疗类风湿性关节炎药物的应用。

药理学实验结果显示，钩吻素子能剂量依赖性降低类风湿性关节炎机体抗体的产生，改善肿胀、痛敏、关节炎指数等症状，逆转关节病理性改变；表明钩吻素子具有的强效低毒抗类风湿性关节炎的作用。

本发明优选技术方案为：作为活性成分的其结构式如下的钩吻生物碱单体钩吻素子或其药学上可接受的盐在制备治疗类风湿性关节炎药物中的应用

本发明的有益效果是：

1.钩吻素子具有高效抗类风湿性关节炎作用，既显著减轻症状，如肿胀、痛敏状态和关节炎指数，且逆转关节病理损伤、降低类风湿性关节炎机体抗体水平，“标本兼治”。克服现有技术如非甾体抗炎药“治标不治本”的缺陷。

2.钩吻素子毒性较低（小鼠，皮下注射，LD₅₀=99.0 mg/kg），远低于钩吻总生物碱毒性（小鼠，皮下注射，LD₅₀=1.68mg/kg），且克服现有技术临床常用药的不足，如无非甾体抗炎药严重的胃肠道不良反应，无生物制剂易降解、引发结核病、肿瘤等的风险。

3.潜在的重大经济效应。目前全球类风湿性关节炎治疗药市场巨大：有数据显示，类风湿性关节炎患者一生中多支出的费用大约为61000～122000美元。钩吻素子或其药学可接受的盐具有制备治疗类风湿性关节炎药物的应用，按照国家创新药物审批办法开发研制，有望成为具有我国独立自主知识产权的国家1类高效低毒治疗类风湿性关节炎新药，产业化前景明确。

4.本发明的钩吻素子来源于天然植物钩吻的提纯，钩吻植物在我国盛产，因而可以推动相关药材产业的发展。

附图说明

图1为钩吻素子对佐剂性关节炎小鼠体重的改善作用图。图中横坐标表示时间（天），纵坐标表示体质量（克）；1为假建模组，2为生理盐水阴性对照组，3为吲哚美辛阳性对照组，4为钩吻素子0.8 mg/kg组，5为钩吻素子4 mg/kg组，6为钩吻素子20 mg/kg组；^##P<0.01，与假建模组比较；^* P<0.05，^** P<0.01，与阴性对照组比较。

图2为钩吻素子对佐剂性关节炎小鼠致炎足肿胀的抑制作用图。图中横坐标表示时间（天），纵坐标表示足厚度（毫米）；1为假建模组，2为生理盐水阴性对照组，3为吲哚美辛阳性对照组，4为钩吻素子0.8 mg/kg组，5为钩吻素子4 mg/kg组，6为钩吻素子20 mg/kg组；^## P<0.01，与假建模组比较；^* P<0.05，^** P<0.01，与阴性对照组比较。

图3-1为钩吻素子对佐剂性关节炎小鼠关节病理损伤逆转作用实验的假建模组结果图。

图3-2为钩吻素子对佐剂性关节炎小鼠关节病理损伤逆转作用实验的阴性对照组结果图。

图3-3为钩吻素子对佐剂性关节炎小鼠关节病理损伤逆转作用实验的吲哚美辛阳性对照组结果图。

图3-4为钩吻素子对佐剂性关节炎小鼠关节病理损伤逆转作用实验的钩吻素子0.8 mg/kg组结果图。

图3-5为钩吻素子对佐剂性关节炎小鼠关节病理损伤逆转作用实验的钩吻素子4 mg/kg组结果图。

图3-6为钩吻素子对佐剂性关节炎小鼠关节病理损伤逆转作用实验的钩吻素子20 mg/kg组结果图。

图4为自制足容积计示意图。

图5为钩吻素子对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠血清Ⅱ型胶原抗体的抑制作用图。图中横坐标表示组别，纵坐标表示血清Ⅱ型胶原抗体水平（ng/ml）；1为阴性对照组，2为甲氨蝶呤阳性对照组，3为钩吻素子0.6 mg/kg组，4为钩吻素子3 mg/kg组，5为钩吻素子15 mg/kg组，6为假建模组；^## P<0.01，与假建模组比较；^* P<0.05，^** P<0.01，与阴性对照组比较。

图6为钩吻素子对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠足肿胀的抑制作用图。图中横坐标表示干预时间（天），纵坐标表示足容积（ml）；1为阴性对照组，2为甲氨蝶呤阳性对照组，3为钩吻素子0.6 mg/kg组，4为钩吻素子3 mg/kg组，5为钩吻素子15 mg/kg组，6为假建模组；^## P<0.01，与假建模组比较；^** P<0.01，与阴性对照组比较；^★ P<0.05，^★★ P<0.01，与干预前比较。

图7为钩吻素子对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠关节炎指数的抑制作用图。图中横坐标表示干预时间（天），纵坐标表示关节炎指数；1为阴性对照组，2为甲氨蝶呤阳性对照组，3为钩吻素子0.6 mg/kg组，4为钩吻素子3 mg/kg组，5为钩吻素子15 mg/kg组；^** P<0.01，与阴性对照组比较；^★ P<0.05，^★★ P<0.01，与干预前比较。

图8-1-1为钩吻素子抗Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠关节病理损伤作用的X线假建模组侧位影像图。

图8-1-2为钩吻素子抗Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠关节病理损伤作用的X线假建模组正位影像图。

图8-2-1为钩吻素子抗Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠关节病理损伤作用的X线阴性对照组侧位影像图。

图8-2-2为钩吻素子抗Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠关节病理损伤作用的X线阴性对照组正位影像图。

图8-3-1为钩吻素子抗Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠关节病理损伤作用的X线阳性对照组侧位影像图。

图8-3-2为钩吻素子抗Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠关节病理损伤作用的X线阳性对照组正位影像图。

图8-4-1为钩吻素子抗Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠关节病理损伤作用的X线钩吻素子0.6 mg/kg组侧位影像图。

图8-4-2为钩吻素子抗Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠关节病理损伤作用的X线钩吻素子0.6 mg/kg组正位影像图。

图8-5-1为钩吻素子抗Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠关节病理损伤作用的X线钩吻素子3 mg/kg 组侧位影像图。

图8-5-2为钩吻素子抗Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠关节病理损伤作用的X线钩吻素子3 mg/kg组正位影像图。

图8-6-1为钩吻素子抗Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠关节病理损伤作用的X线钩吻素子15 mg/kg组侧位影像图。

图8-6-2为钩吻素子抗Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠关节病理损伤作用的X线钩吻素子15 mg/kg组正位影像图。

图9-1为钩吻素子抗Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠关节病理损伤作用的HE染色组化假建模组结果图。

图9-2为钩吻素子抗Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠关节病理损伤作用的HE染色组化阴性对照组结果图。

图9-3为钩吻素子抗Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠关节病理损伤作用的HE染色组化阳性对照组结果图。

图9-4为钩吻素子抗Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠关节病理损伤作用的HE染色组化钩吻素子0.6 mg/kg组结果图。

图9-5为钩吻素子抗Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠关节病理损伤作用的HE染色组化钩吻素子3 mg/kg组结果图。

图9-6为钩吻素子抗Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠关节病理损伤作用的HE染色组化钩吻素子15 mg/kg组结果图。

图10为钩吻素子对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠病理评分的抑制作用图。图中横坐标表示干预时间（天），纵坐标表示病理评分；1为阴性对照组，2为甲氨蝶呤阳性对照组，3为钩吻素子0.6 mg/kg组，4为钩吻素子3 mg/kg组，5为钩吻素子15 mg/kg组；^** P<0.01，与阴性对照组比较。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明进行进一步的说明。

实施例1 钩吻素子对小鼠佐剂性关节炎的治疗作用

完全弗氏佐剂诱导产生佐剂性关节炎，与人类的类风湿性关节炎相似，因而被认为是研究人类类风湿性关节炎的理想模型。实施例1在小鼠佐剂性关节炎模型上，以关节炎症状（小鼠状态、体重、致炎足肿胀度、痛敏）以及关节病理学改变为指标，说明钩吻素子对类风湿性关节炎的治疗作用。

材料

1.1 动物

昆明种小鼠，18~23 g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司,许可证号：SCXK（沪）2009-0005。光暗周期12/12 h、恒温（23±2℃）、恒湿度（50±5%）环境饲养，自由饮食，适应实验室3天后用于正式实验，实验操作遵守国际和本地实验动物使用和保护委员会颁布的条例（下同）。

1.2 药品和试剂

钩吻素子由本发明申请人从天然植物钩吻提取分离纯化获得，纯度>99%（精密称取钩吻素子，以0.2mol/L HCl溶解，以5mol/L 氢氧化钠调pH=7，用生理盐水稀释至各剂量组所需溶液）。吲哚美辛，上海九福药业。完全弗氏佐剂，sigma公司。卡介苗冻干粉剂，上海生物制品公司。

1.3 实验仪器

微量注射器，美国 Hamilton。PL-200型热测痛仪，成都泰盟科技有限公司。精密电子天平，日本AND会社。精密酸度计，上海大普仪器有限公司。游标卡尺，上海三丰机械。全自动恒冷切片机，德国Leica。BX51显微镜，日本OLYMPUS。（下同）

2 方法

卡介苗80℃水浴灭活，与完全弗氏佐剂充分乳化为含卡介苗5mg/ml弗氏完全佐剂乳剂，4℃保存，使用前摇匀。昆明种小鼠分为建模组和假建模组。参照文献[Rasool M, Sabina EP, Lavanya B. Anti-inflammatory effect of Spirulina fusiformis on adjuvant-induced arthritis in mice. Biol Pharm Bull. 2006，29(12):2483-7]方法，建模组小鼠麻醉后，右侧足底皮内注射20μl乳剂以制备模型；假建模组以生理盐水替代乳剂。建模组小鼠于注射8天时筛选动物：注射足厚度增加>0.5mm并出现热痛敏（热刺激缩爪潜伏期<8秒）的小鼠作为实验对象。入选小鼠随机分为5组：钩吻素子低、中、高剂量处理组（0.8, 4, 20mg/kg）；吲哚美辛阳性对照组（10mg/kg）；阴性对照组（生理盐水），每组12只。致炎后第8天开始各组小鼠灌胃给予相应干预，每天1次，连续10天。

观测指标：

（1）观察钩吻素子对佐剂性关节炎小鼠症状的影响

①观察钩吻素子对佐剂性关节炎小鼠状态和体重的影响

观察各组小鼠致炎后的状态，于致炎前、致炎第4、8、12、16、18天称重，观察小鼠体重的变化情况。

②观察钩吻素子对佐剂性关节炎小鼠致炎足肿胀度的影响

参照《药理学实验方法学》（徐叔云，卞如濂. 药理学实验方法学[M]. 第三版，人民卫生出版社：912-913），使用游标卡尺测量小鼠足跖厚度，作为足肿胀指标，测量时间点同上，每次测量重复3次，取平均值（下同）。

③观察钩吻素子对佐剂性关节炎小鼠痛敏的影响

灌胃给药30 min后，以光热测痛仪测定各组小鼠致炎足热缩足反射潜伏期，以反映动物痛敏状态。

（2）观察钩吻素子对佐剂性关节炎小鼠关节病理损伤的影响

干预结束后（第19天）处死小鼠，取踝关节，行HE染色病理检查。

结果

3.1钩吻素子对小鼠佐剂性关节炎症状的作用

①钩吻素子对佐剂性关节炎小鼠状态和体重的影响

致炎后，阴性对照组小鼠食量与活动明显减少，而钩吻素子处理组未见明显改变；致炎后第4、8、12、16、18天各组小鼠体重如附图1所示，结果显示钩吻素子对佐剂性关节炎小鼠的体重减轻有剂量依赖性对抗作用，高剂量组甚至有促壮作用。

②钩吻素子对佐剂性关节炎小鼠致炎足肿胀度的影响

致炎后第4、8、12、16、18天各组小鼠致炎足肿胀度如附图2所示，结果显示钩吻素子剂量、时间依赖性减少佐剂性关节炎小鼠的致炎足厚度，表明钩吻素子具有改善佐剂性关节炎的肿胀症状作用。

③钩吻素子对佐剂性关节炎小鼠痛敏的影响

致炎足热刺激缩爪潜伏期见表1，结果显示钩吻素子可显著延长佐剂性关节炎小鼠的热刺激缩爪潜伏期，作用呈量效、时效关系，表明钩吻素子具有抗佐剂性关节炎的痛敏作用。

3.2钩吻素子对佐剂性关节炎小鼠关节病理损伤的影响

各组小鼠关节病理损伤如附图3所示。结果显示钩吻素子可剂量依赖性改善佐剂性关节炎小鼠关节的炎性细胞浸润、滑膜增生、骨质破坏等，表明钩吻素子具有逆转佐剂性关节炎病理改变的作用。

综上，钩吻素子剂量依赖性改善佐剂性关节炎症状（体重减轻、肿胀、痛敏等）、逆转关节病理性改变，表明钩吻素子具有治疗类风湿性关节炎的作用。

实施例2 钩吻素子对大鼠Ⅱ型胶原诱导关节炎的治疗作用

Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠模型是美国食品药品监督管理局用于治疗类风湿性关节炎药物筛选的动物模型，是公认的研究人类类风湿关节炎的经典模型。实施例2在Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠模型上，以Ⅱ型胶原抗体（评价药物治疗类风湿性关节炎有效的金指标）、关节炎症状（大鼠状态、体重、足肿胀度、关节炎症指数、痛敏）、关节病理改变（X线摄片和HE染色观察）为指标，说明钩吻素子对类风湿性关节炎的治疗作用。

材料

1.1 动物

清洁级雄性 Wistar大鼠，130~150 g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号：SCXK（沪）2010-0005。

1.2 药品和试剂

钩吻素子（同实施例1）。完全弗氏佐剂、不完全弗氏佐剂、鸡Ⅱ型胶原，Sigma公司。冰醋酸，北京化学试剂公司。甲氨蝶呤，上海医药有限公司。七氟烷，江苏恒瑞制药有限公司。戊巴比妥钠，上海试剂二厂。大鼠血清Ⅱ型胶原抗体酶联免疫吸附测定试剂盒，美国Chondrex公司。

1.3 实验仪器

Von-frey电子机械痛阈测定仪，IITC Life Science。RT-6000酶标仪，美国Biotek。数字化X线摄影机，PHLIPS ELEVA VS。

方法

取鸡Ⅱ型胶原蛋白l0mg，在无菌条件下与10mM冰醋酸溶液5ml混匀，置4℃冰箱中搅拌过夜使之充分溶解。冰浴下与弗氏完全佐剂等体积混合，使之充分乳化成胶原浓度为lmg/m1的乳剂。

Wistar大鼠分为建模组和假建模组。建模组大鼠戊巴比妥腹腔注射麻醉后，在背部、尾根部等3~4处皮内注射上述乳剂，0.3ml/只，行初次免疫。7天后继发免疫，用不完全弗氏佐剂代替初次免疫乳化剂中的完全弗氏佐剂，在七氟烷吸入麻醉下注射乳剂0.1ml，避免与前次注射部位相同。假建模组用溶剂冰醋酸溶液替代乳剂。

建模组中成功建模的大鼠随机分为5组：钩吻素子低、中、高剂量处理组，阳性对照组，阴性对照组，每组10只。建模后第21天开始，各组大鼠按下述实施相应干预，连续10天：钩吻素子低、中、高剂量处理组分别灌胃给予钩吻素子0.6, 3, 15mg/kg，每天1次；阳性对照组给予甲氨蝶呤1mg/kg，每3天1次，其余天数给予等容积生理盐水；阴性对照组给予等容积生理盐水。

观测指标：

（1）观察钩吻素子对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠Ⅱ型胶原抗体的影响

各组大鼠于干预结束后处死，腔静脉抽血，采用血清酶联免疫吸附法，观测大鼠血清Ⅱ型胶原抗体水平。

（2）观察钩吻素子对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠症状的影响

①观察钩吻素子对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠状态和体重的影响

观察各组大鼠致炎后状态的变化情况，于致炎前、致炎第7、14、21、31天称重，观察大鼠体重的变化情况。

②观察钩吻素子对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠足肿胀度和关节炎指数的影响

于实施干预前、干预第5、10天，参照文献[杨鹤松, 韩生玉, 高巍，等. 大鼠足跖肿胀容积测量装置及其检测精确度控制. 承德医学院学报, 2002,19(2):132-133]自制足容积测定计（见附图4），测定各组大鼠最肿胀后足爪，作为足肿胀度指标；按下述标准对各组大鼠关节炎病变情况进行评分： 0分：无红肿；1分：小趾关节红斑或轻度肿胀；2分：趾关节和趾跖关节中度肿胀；3分：踝关节以下的足爪肿胀；4分：包括踝关节在内全部足爪肿胀。四肢关节的累计得分即为关节炎指数。

③观察钩吻素子对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠痛敏的影响

灌胃给药1 h后，光热测痛仪测定各组大鼠热缩足反射潜伏期；Von-frey电子机械痛阈测定仪测定各组大鼠机械痛阈，从而观测各组大鼠的热痛敏和机械痛敏情况。

（3）观察钩吻素子对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠关节病理改变的影响

①X线放射学观察钩吻素子对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠关节病理改变的影响

各组大鼠于干预9天后，麻醉，X光摄片机拍摄大鼠后肢侧、正位X线片，观察各组大鼠关节病理改变情况。

②HE染色组化法观察钩吻素子对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠关节病理改变的影响

各组大鼠于干预10天后，处死，取左后肢踝关节，行HE染色，观察病理改变并评分。评分标准如下：0分：关节具有正常的结构，如关节间隙、软骨、骨和滑膜组织等；1分：关节组织中有纤毛形成和轻度的关节炎症，并有滑膜增生，血管数量增加，以及小的炎性细胞灶，无软骨和骨的侵蚀破坏；2分：关节有软骨的侵蚀破坏，有中度的关节炎症，有大量炎细胞浸润，滑膜增生和血管翳形成较严重，无骨破坏，关节结构无破坏；3分：有严重的血管翳形成，广泛的软骨侵蚀破坏，可见骨破坏，关节结构破坏。

结果

3.1钩吻素子对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠Ⅱ型胶原抗体的影响

各组大鼠干预结束后血清Ⅱ型胶原抗体水平如附图5所示，结果显示钩吻素子对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠Ⅱ型胶原抗体水平升高有显著的拮抗作用，呈剂量依赖性，表明钩吻素子具有抑制类风湿性关节炎机体自身抗体生成的作用。

3.2 钩吻素子对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠症状的影响

①钩吻素子对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠状态和体重的影响

建模后，阴性对照组大鼠食量与活动明显减少、毛色无光泽、消瘦，而钩吻素子处理组可剂量依赖性改善Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠状态的改变；初次免疫后第7、14、21、31天各组大鼠体重见表2，结果显示钩吻素子对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠的体重减轻对抗作用，高剂量组甚至有促壮作用。

②钩吻素子对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠足肿胀和关节炎指数的影响

干预前、干预第5、10天各组大鼠足肿胀和关节炎指数如附图6、7所示，结果显示钩吻素子剂量依赖性减轻Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠足肿胀、降低关节炎指数。

③钩吻素子对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠痛敏状态的影响

干预前、干预第2、4、6、8、10天各组大鼠热刺激缩爪潜伏期、机械痛阈如表3-4所示，结果显示钩吻素子可显著延长Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠的热刺激缩爪潜伏期、提高机械痛阈，作用呈量效关系，表明钩吻素子具有抗Ⅱ型胶原诱导关节炎的热痛敏和机械痛敏作用。

3.3 钩吻素子对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠关节病理改变的影响

各组大鼠关节病理改变的侧、正位X线片影像如附图8所示。结果显示阴性对照组大鼠可见踝关节软组织肿胀、骨关节边缘模糊，表面软骨破坏，骨质侵蚀，足跖趾关节及趾间小关节间隙变窄模糊不清；高剂量及中剂量钩吻素子均可减轻踝关节的骨质破坏；提示钩吻素子有逆转Ⅱ型胶原诱导关节炎的病理损伤作用。

各组大鼠踝关节病理改变的HE染色结果及关节评分情况如附图9、10所示。结果显示阴性对照组大鼠增生的滑膜组织形成绒毛状，毛细血管增生，血管翳形成纤维素增生，炎性细胞浸澜等现象；钩吻素子可改善踝关节的组织损伤，显著降低CIA大鼠踝关节病变程度评分。表明钩吻素子具有逆转Ⅱ型胶原诱导关节炎的病理损伤作用。

综上，钩吻素子能剂量依赖性降低机体抗体的产生、改善症状（肿胀、痛敏、关节炎指数等）、逆转关节病理损伤，表明钩吻素子具有治疗类风湿性关节炎的作用。

实施例1、2仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，任何未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims

1.一种结构式如下的钩吻生物碱单体钩吻素子或其药学上可接受的盐在制备治疗类风湿性关节炎药物中的应用

。