CN102286093A - 一种嗜吞噬细胞无形体抗原及含有该抗原的试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了属于人粒细胞无形体病检测技术领域的一种嗜吞噬细胞无形体抗原及含有该抗原的试剂盒。本发明的抗原含有优势B细胞表位，在最大地保留抗原反应性的前提下，尽量减少无关序列造成的交叉反应性。本发明利用ELISA方法和免疫层析法检测抗体，较之免疫荧光法可大大提高检测的灵敏度，具有快速、简便的特点，适合基层医院使用，尤其IgM抗体检测采用IgM捕获法，与间接ELISA技术相比，具有较高的特异性。
Description
技术领域
本发明属于人粒细胞无形体病检测技术领域，具体涉及一种嗜吞噬细胞无形体抗原及含有该抗原的试剂盒。
背景技术
人粒细胞无形体病(Human granulocytic anaplasmosis，HGA)是由嗜吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum)侵染人末梢血中性粒细胞引起，以发热伴白细胞、血小板减少和多脏器功能损害甚至死亡为主要临床表现的新发疾病。人粒细胞无形体病是硬蜱叮咬人体而引起的人兽共患性疾病。1994年美国报告首例人粒细胞无形体病病例(Chen SM，Dumler JS，Bakken JS，et al.Identification of a granulocytotropic Ehrlichia species as theetiologic agent of human disease.J Clin Microbiol，1994，32(3)：589-595.)。2006年我国在安徽省发现首例人粒细胞无形体病病例，此后通过回顾性血清学与分子生物学调查发现我国浙江、山东、河南及湖北等省份均存在HGA病例(Zhang L，Liu Y，Ni D，，et al.Nosocomialtransmission of human granulocytic anaplasmosis in China.JAMA，2008，300(19)：2263-2270.Zhang S，Hai R，Li W，et al.Seroprevalence of human granulocytotropicanaplasmosis in central and southeastern China.Am J Trop Med Hyg，2009，81(2)：293-295.Zhang L，Shan A，Mathew B，et al.Rickettsial Seroepidemiology among farm workers，Tianjin，People′s Republic of China.Emerg Infect Dis，2008，14(6)：938-940.Chahan B，Jian Z，Xuan X，，et al.Serological evidence of infection of Anaplasma and Ehrlichia in domestic animals inXinjiang Uygur Autonomous Region area，China.Vet Parasitol，2005，134(3-4)：273-278.)。由于该病为新发疾病，相关的研究稍显薄弱，一旦疾病爆发可能由于技术储备不足而导致诊断不明，贻误治疗甚至引起恐慌。
目前实验室检测主要有包括血清及病原学检测：(1)急性期血清间接免疫荧光抗体(IFA)检测嗜吞噬细胞无形体IgM抗体阳性。(2)急性期血清IFA检测嗜吞噬细胞无形体IgG抗体阳性。(3)恢复期血清IFA检测嗜吞噬细胞无形体IgG抗体滴度较急性期有4倍及以上升高。(4)全血或血细胞标本PCR检测嗜吞噬细胞无形体特异性核酸阳性，且序列分析证实与嗜吞噬细胞无形体的同源性达99％以上。(5)分离到病原体。
由于人粒细胞无形体病无特异性临床表现，早期诊断较困难。病原学检测包括PCR检测嗜吞噬细胞无形体特异性核酸阳性以及分离病原体。其中PCR检测不适宜基层医院使用，其检测的阳性率也偏低；病原体的分离更需一定的设备和技术储备，不易成功。目前我国血清学检测使用的免疫荧光试剂主要依赖美国进口，价格非常昂贵，而且制备荧光片需大量培养嗜吞噬细胞无形体，荧光片的制备很难标准化和产业化，因此利用免疫荧光方法进行大规模的样品检测受到限制，再者，由于荧光片制备采用感染的全细胞易产生交叉反应性，影响检测的特异性。
由于人粒细胞无形体病是硬蜱叮咬人体而引起的，因此开展蜱传播疾病的鉴别诊断显得尤为重要。嗜吞噬细胞无形体的早期诊断对控制其传播具有重要意义，而特异性抗原则是实验室诊断优劣的关键所在。目前开展嗜吞噬细胞无形体的研究力量严重不足，尚缺乏高灵敏度、高特异性的血清检测试剂。
而酶联免疫检测方法灵敏、简便被广泛用于病原体的抗体检测，具有广阔的应用前景。依据其采用抗原的不同，分为全菌体、基因工程表达重组抗原等。全菌体抗原也需要大量培养病原体，抗原的均一性、可重复性差，且其纯化方法很难标准化，因此可能带来非特异性反应的问题，同样存在产业化的困难，因此利用全菌体抗原进行大规模的样品检测也受到限制。基因工程抗原无需培养病原体，容易标准化和产业化，已成功应用于丙型肝炎病毒、梅毒螺旋体等不能体外培养的病原体的血清学检测。国外已有报道采用基因工程抗原(全蛋白重组抗原)研制酶联免疫试剂用于抗体检测，但全长的重组蛋白存在交叉反应(全长的MSP5重组蛋白与AM(A marginale)存在交叉反应)和表达量低等问题，因此研究开发重组表位抗原有望提高血清学检测的特异性和灵敏度，而且获得的优势诊断表位抗原不需细胞培养，适合大量样品的检测需求。
发明内容
本发明的目的在于提供一种嗜吞噬细胞无形体抗原。
本发明的目的还在于提供编码上述抗原的多核苷酸及其表达载体和工程菌。
本发明的目的还在于提供一种检测嗜吞噬细胞无形体血清IgG抗体的试剂盒。
本发明的目的还在于提供一种检测嗜吞噬细胞无形体血清IgM抗体的试剂盒。
本发明的目的还在于提供一种检测嗜吞噬细胞无形体血清抗体的免疫层析试剂盒。
一种嗜吞噬细胞无形体抗原，所述抗原为含有优势B细胞表位的长肽，其氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6、SEQ ID No.7、SEQ ID No.8或SEQ ID No.9所示。
编码权利要求1任何一项所述的长肽的多核苷酸。
包含权利要求2任何一项所述的多核苷酸的表达载体。
包含权利要求3任何一项所述的表达载体的工程菌。
根据权利要求1任何一项所述的长肽制备的抗体。
一种检测嗜吞噬细胞无形体血清IgG抗体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1所述任一抗原。
一种检测嗜吞噬细胞无形体血清IgM抗体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1所述任一抗原。
一种检测嗜吞噬细胞无形体血清抗体的免疫层析试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1所述任一抗原。
本发明的有益效果：1、本发明是建立高效表达的嗜吞噬细胞无形体重组抗原的基础上，可有效地避免费时费力的病原体培养，降低了检测成本，易于标准化。2、本发明抗原含有优势B细胞表位，在最大地保留抗原反应性的前提下，尽量减少无关序列造成的交叉反应性。表位抗原表达量高，克服全基因抗原表达量低不易制备的缺点。3、本发明利用ELISA方法和免疫层析法检测抗体，较之免疫荧光法可大大提高检测的灵敏度，具有快速、简便的特点，适合基层医院使用。尤其IgM抗体检测采用IgM捕获法，与间接ELISA技术相比，具有较高的特异性。
附图说明
图1为MSP2的B细胞表位分析；1-5代表MSP2优势表位区段。
图2为MSP5的B细胞表位分析；横线为MSP5优势表位区段。
图3为160KD的B细胞表位分析；横线为160KD优势表位区段。
图4为130KD的B细胞表位分析；横线为130KD优势表位区段。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步说明。
以下实施例未说明的实验步骤参照《分子克隆实验指南》第三版，或参照相应试剂盒的说明书。
实施例1抗原基因序列的获得
根据GenBank中的嗜吞噬细胞无形体MSP2、MSP5、160KD和130KD基因序列，设计引物，以感染嗜吞噬细胞无形体的小鼠血清基因组DNA为模板，分别PCR扩增相应的基因，PCR扩增条件如下：95℃预变性2分钟，94℃30秒，50℃30秒，72℃30-90秒(依据基因长度而定)，扩增30个循环，最后72℃延伸7分钟。回收PCR产物，将其连接至pMD19克隆载体中，将重组质粒进行DNA序列测定。
用于MSP2基因扩增的引物序列如下：
MSP2-F(SEQ ID No.10)，MSP2-R(SEQ ID No.11)。
用于MSP5基因扩增的引物序列如下：
MSP5-F(SEQ ID No.12)，MSP5-R(SEQ ID No.13)。
用于160KD基因扩增的引物序列如下：
160KD-409F(SEQ ID No.14)，160KD-1595R(SEQ ID No.15)；160KD-1371F(SEQ ID No.16)，160KD-1914R(SEQ ID No.17)；160KD-1574F(SEQ ID No.18)，160KD-2374R(SEQID No.19)；160KD-1985F(SEQ ID No.20)，160KD-3377R(SEQ ID No.21)；160KD-2997F(SEQ ID No.22)，160KD-3890R(SEQ ID No.23)；160KD-3732F(SEQ ID No.24)，160KD-4559R(SEQ ID No.25)；160KD-4264F(SEQ ID No.26)，160KD-5190R(SEQID No.27)；160KD-4924F(SEQ ID No.28)，160KD-5405R(SEQ ID No.29)。
用于130KD基因扩增的引物序列如下：
130KD-226F(SEQ ID No.30)，130KD-1361R(SEQ ID No.31)；130KD-742F(SEQ ID No.32)，130KD-2247R(SEQ ID No.33)；130KD-1277F(SEQ ID No.34)，130KD-2636(SEQID No.35)；130KD-2410F(SEQ ID No.36)，130KD-3238R(SEQ ID No.37)；130KD-2838F(SEQ ID No.38)，130KD-3700R(SEQ ID No.39)。
将用上述引物扩增出来的片段拼接，得到MSP2、MSP5、160KD和130KD基因序列。
实施例2抗原的B细胞表位预测
将实施例1克隆出来的MSP2、MSP5、160KD和130KD基因序列DNA序列翻译为氨基酸序列，利用BioSun软件分析嗜吞噬细胞无形体MSP2、MSP5、160KD和130KD等抗原的线性B细胞表位，首先输入其氨基酸序列，然后用BioSun生物学软件中蛋白质模块的B细胞表位分析，所得表位分布图见图1-4，结合BLAST分析结果，最终确定各个优势表位抗原区段的序列。
MSP2优势表位抗原区段的氨基酸序列为：
MSP2-1(SEQ ID No.1)；MSP2-3(SEQ ID No.2)；MSP2-4(SEQ ID No.3)；MSP2-5：(SEQID No.4)。
MSP5优势表位抗原区段的氨基酸序列为：(SEQ ID No.5)。
160KD优势表位抗原区段的氨基酸序列为：
160KD-1(SEQ ID No.6)；160KD-2(SEQ ID No.7)。
130KD优势表位抗原区段的氨基酸序列为：
130KD-1(SEQ ID No.8)；130KD-2(SEQ IDNo.9)。
实施例3目的基因的克隆
采用大肠杆菌优势密码子，将实施例2所述优势表位抗原区段的氨基酸序列反推成核苷酸序列，设计引物，采用重叠PCR的方法合成上述表位抗原的基因。将目的基因连接入pMD19克隆载体中测序。
分别合成基因片段，各需要2-3轮退火延伸PCR反应，第一轮PCR反应体系为百泰克公司2×PCR反应液25μl、双蒸水23μl、XF1及XR1引物各1μl，其中X代表待合成基因，PCR反应条件为94℃1分钟，94℃1分钟，55℃1分钟，72℃1分钟，5个循环；第2-3轮PCR反应体系为百泰克公司2×PCR反应液25μl、双蒸水22μl、XF2(或XF3)及XR2(或XF3)引物各1μl，其中X代表待合成基因，第一轮(或第二轮)PCR产物1μl，反应条件为PCR反应条件为94℃3分钟后，94℃1分钟，55℃1分钟，72℃1分钟，30个循环后再72℃延伸5分钟，即获得待合成的基因。
PCR引物设计如下：
MSP2-1F1(SEQ ID No.40)，MSP2-1R1(SEQ ID No.41)；
MSP2-1F2(SEQ ID No.42)，MSP2-1R2(SEQ ID No.43)；
MSP2-3F1(SEQ ID No.44)，MSP2-3R1(SEQ ID No.45)；
MSP2-3R2(SEQ ID No.46)，MSP2-3F2(SEQ ID No.47)；
MSP2-4F1(SEQ ID No.48)，MSP2-4R1(SEQ ID No.49)；
MSP2-4F2(SEQ ID No.50)，MSP2-4R2(SEQ ID No.51)；
MSP2-5F1(SEQ ID No.52)，MSP2-5R1(SEQ ID No.53)；
MSP2-5F2(SEQ ID No.54)，MSP2-5R2(SEQ ID No.55)；
MSP5F1(SEQ ID No.56)，MSP5R1(SEQ ID No.57)；
MSP5F2(SEQ ID No.58)，MSP5R2(SEQ ID No.59)；
160KD-1F1(SEQ IDNo.60)，160KD-1R1(SEQ IDNo.61)；
160KD-1F2(SEQ ID No.62)，160KD-1R2(SEQ ID No.63)；
160KD-1F3(SEQ ID No.64)，160KD-1R3(SEQ ID No.65)；
160KD-2F1(SEQ ID No.66)，160KD-2R1(SEQ ID No.67)；
160KD-2F2(SEQ IDNo.68)，160KD-2R2(SEQ IDNo.69)；
160KD-2F3(SEQ ID No.70)，160KD-2R3(SEQ ID No.71)；
130KD-1F1(SEQ ID No.72)，130KD-1R1(SEQ ID No.73)；
130KD-1F2(SEQ ID No.74)，130KD-1R2(SEQ ID No.75)；
130KD-1F3(SEQ ID No.76)，130KD-1R3(SEQ ID No.77)；
130KD-2F1(SEQ ID No.78)，130KD-2R1(SEQ ID No.79)；
130KD-2F2(SEQ ID No.80)，130KD-2R2(SEQ ID No.81)；
130KD-2F3(SEQ ID No.82)，130KD-2R3(SEQ ID No.83)。
合成的MSP2-1表位抗原区段的DNA序列如序列表SEQ ID No.84所示；
合成的MSP2-3表位抗原区段的DNA序列如序列表SEQ ID No.85所示；
合成的MSP2-4表位抗原区段的DNA序列如序列表SEQ ID No.86所示；
合成的MSP2-5表位抗原区段的DNA序列如序列表SEQ ID No.87所示；
合成的MSP5表位抗原区段的DNA序列如序列表SEQ ID No.88所示；
合成的160KD-1表位抗原区段的DNA序列如序列表SEQ ID No.89所示；
合成的160KD-2表位抗原区段的DNA序列如序列表SEQ ID No.90所示；
合成的130KD-1表位抗原区段的DNA序列如序列表SEQ ID No.91所示；
合成的130KD-2表位抗原区段的DNA序列如序列表SEQ ID No.92所示。
实施例4抗原的表达与纯化
将测序正确的目的基因，克隆入原核表达载体pBVIL-1质粒中，转化HB101挑选阳性克隆并测序。将测序正确的重组原核表达质粒pBVIL-1系列载体转化到HB101受体菌中，经42℃诱导后提取包涵体，采用变性条件镍亲和层析纯化抗原，具体操做简述如下：
取以上合成基因产物及pBVIL-1表达载体各30μl分别放于Eppendorf离心管中，各加入10×buffer(D)4μl、XhoI(10u/μl)和XbaI(12u/μl)各1μl，加灭菌蒸馏水至40μl，置37℃水浴酶切3小时。
酶切产物的琼脂糖凝胶电泳纯化和回收：PCR产物及载体pBVIL1经双酶切后，用1.2％琼脂糖凝胶进行上海华舜生物工程有限公司生产的小量胶回收试剂盒回收纯化，具体操作按试剂盒说明书进行。
于灭菌Eppendorf离心管中加入上述酶切后的载体及目的基因各1μl、10×T4DNALigase buffer 1μl、T4DNA Ligase(12u/ul)1μl，加灭菌蒸馏水至10μl，置16℃过夜。
在超净工作台中，用无菌吸头取100μl感受态细胞悬液于Eppendorf中，加入上述连接物5μl，轻轻旋转混匀，冰浴30分钟。立即转移到42℃水浴中放置2分钟，每管加入0.5mlLB培养基(不加抗生素)，30℃水浴摇床培养60分钟后，各取0.2ml分别涂于LB琼脂培养基平皿上(含抗生素)，室温晾干后，置37℃恒温箱倒置培养过夜。挑选数个菌落，分别接种于LB中(5ml/管)，培养过夜，次日各取0.1ml转移到LB中(2ml/管)，37℃培养3小时，42℃诱导培养5小时，收菌，用SDS-PAGE鉴定，选择高表达的作为下一步大量表达用菌株，并测序鉴定。
表达菌株10μl接种于LB培养基中，37℃培养过夜，次日按2％的比例转种于LB培养基，37℃培养约3小时，当OD600值达到0.7时，转至42℃诱导培养5小时，收集菌液，6000rpm离心20分钟，弃上清，收集沉淀部分。
用10倍体积的20mmol/L pH8.0TE缓冲液将沉淀悬起，加入溶菌酶(1mg/ml悬液)，在室温下磁力搅拌10分钟。在冰浴中超声波破碎菌，每次超30秒钟，间隔30秒钟，共超10次。4℃，1,2000rpm，离心20分钟，弃上清，沉淀用1mol/L NaCl(用TE配制)洗一次，再用TE洗2次，收集沉淀。沉淀用8M脲(用pH8.0TE配制)溶解，加1％β-巯基乙醇。再于20℃，1,2000rpm，离心10分钟，去沉淀取上清。
采用变性条件镍亲和层析纯化抗原。洗脱抗原采用SDS-PAGE进行纯化鉴定。
实施例5：诊断用表位抗原的蛋白芯片和ELISA筛选
采用蛋白芯片结合ELISA方法，用嗜吞噬细胞无形体感染动物(小鼠和绵羊)和疑似患者的血清对上述获得的表位抗原进行抗原性评价，筛选用于诊断的表位抗原。蛋白芯片法：采用点接触法制备芯片，封闭室温2h，洗片，晾干4℃备用，加入稀释的血清室温反应(湿盒)1h，洗液洗，加入cy3标记的二抗(1∶400)室温反应(湿盒)0.5h，洗片，上机扫描。
ELISA方法：包被重组表位抗原，建立间接ELISA方法，检测感染鼠和绵羊的系列血清的IgG抗体：碳酸盐缓冲液溶解抗原约2μg/ml，包被酶联板，4℃过夜，次日1％BSA封闭，干燥备用。将待测血清10倍稀释，37℃孵育30min后洗板，加入辣根过氧化物酶标记的抗IgG(二抗)，37℃孵育20min后洗板，显色剂显色10min，用酶标仪读取450nm吸光值。A值大于Cut off为阳性，A值大于Cut off为阴性。
实施例6
本实施例涉及一种利用实施例2所述抗原用于间接ELISA方法检测嗜吞噬细胞无形体血清IgG抗体的试剂盒和捕获ELISA方法检测嗜吞噬细胞无形体血清IgM抗体的试剂盒及其使用方法。
检测嗜吞噬细胞无形体血清IgG抗体的试剂盒：试剂盒包含实施例2所述任一抗原，碳酸缓冲液，酶联板，牛血清白蛋白，辣根过氧化物酶标记的抗IgG抗体，TMB显色液。
该试剂盒的使用方法：将纯化好的抗原用0.05M pH9.6的碳酸缓冲液浓度稀释为2μg/ml，包被酶联板，每孔100μl，4℃过夜，1％BSA封闭2小时后，拍干备用。每孔加入1∶10倍稀释的待测血清样本，37℃30分钟，弃液，用洗涤液洗板5次后弃液，拍干，加入辣根过氧化物酶标记的抗IgG(二抗)100μl，37℃温浴20分钟，弃液洗板5次拍干。加TMB显色液：A和B液各50μl，37℃避光显色10分钟，每孔加入终止液50μl，用酶标仪读取450nm吸光值。
嗜吞噬细胞无形体血清IgM抗体的试剂盒：试剂盒包含辣根过氧化物酶标记的实施例2所述任一抗原，抗IgM-μ链单抗包被酶联板，牛血清白蛋白，TMB显色液。
该试剂盒的使用方法：抗IgM-μ链单抗包被酶联板(PBS稀释到2μg/ml)，每孔100μl，4℃过夜后弃液，蒸馏水冲洗3次，拍干，每孔加入1％BSA 100μl，室温2小时，弃液。每孔加入1∶10的待测血清样本，37℃30分钟，弃液，用洗涤液洗板5次后弃液，拍干，加入辣根过氧化物酶标记的嗜吞噬细胞无形体抗原100μl，37℃温浴20分钟，弃液洗板5次拍干。加TMB显色液：A和B液各50μl，37℃避光显色10分钟，每孔加入终止液50μl，用酶标仪读取450nm吸光值。
实施例7
本实施例涉及一种利用实施例2所述抗原用于双抗原夹心方法检测嗜吞噬细胞无形体血清抗体的免疫层析试剂盒和捕获方法检测嗜吞噬细胞无形体血清IgM抗体的免疫层析试剂盒及其使用方法。
用于双抗原夹心方法检测嗜吞噬细胞无形体血清抗体的免疫层析试剂盒，包含实施例2所述任一抗原，样品垫，结合垫，吸收垫，硝酸纤维素膜，胶体金探针，兔免疫血清。
双抗原夹心方法检测嗜吞噬细胞无形体血清抗体的免疫层析条的制备：免疫层析检测条由样品垫、结合垫硝酸纤维素膜及吸收垫四部分组成。样品垫和结合垫用玻璃纤维，吸收垫用吸水滤纸。玻璃纤维膜上加胶体金探针，硝酸纤维素膜上包被嗜吞噬细胞无形体抗原(检测带)及兔免疫血清(质控带)。以纯化的嗜吞噬细胞无形体抗原划线作为检测带(浓度4mg/ml)，参数0.1ul/mm划线；检测线与质控线间距离约为7mm。兔免疫血清浓度为5mg/ml，直接划线，参数0.1ul/mm。标记结束的胶体金溶液以含5％蔗糖、5％BSA的0.1mmol/L Tris溶液重悬，调节至OD530为2，浸湿结合垫后37℃干燥2h。将吸收垫、样品垫及处理后的结合垫硝酸纤维素膜叠加，组装成完整的层析条，然后切割层析条，宽度3mm/条，室温干燥避光保存。
检测及结果判读：将制备好层析条的样品垫端插入待测液约1cm，或手工加样80ul，当液体上行到吸收垫时，取出平放，20min后，检测带和质控带均出现红色为阳性，只有质控带出现红色为阴性，检测带和对照带均不显色，则为试剂失效，需换新的层析条重测。
用于捕获方法检测嗜吞噬细胞无形体血清抗体的免疫层析试剂盒，包含辣根过氧化物酶标记的实施例2所述任一抗原，样品垫，结合垫，吸收垫，硝酸纤维素膜，抗IgM-μ链单抗，兔免疫血清，胶体金探针。
捕获方法检测嗜吞噬细胞无形体血清IgM抗体的免疫层析的制备：免疫层析检测条由样品垫、结合垫硝酸纤维素膜及吸收垫四部分组成。样品垫和结合垫用玻璃纤维，吸收垫用吸水滤纸。玻璃纤维膜上加胶体金探针，硝酸纤维素膜上包被抗IgM-μ链单抗(检测带)及兔免疫血清(质控带)。以辣根过氧化物酶标记的嗜吞噬细胞无形体抗原划线作为检测带(浓度1mg/ml)，参数2ul/mm划线；检测线与质控线间距离约为7mm。兔免疫血清浓度为1mg/ml，直接划线，参数2ul/mm。标记结束的胶体金溶液以含5％蔗糖、5％BSA的0.1mmol/LTris溶液重悬，调节至OD530为2，浸湿结合垫后37℃干燥2h。将吸收垫、样品垫及处理后的结合垫硝酸纤维素膜叠加，组装成完整的层析条，然后切割层析条，宽度3mm/条，室温干燥避光保存。
检测及结果判读：将制备好层析条的样品垫端插入待测液约1cm，或手工加样80ul，当液体上行到吸收垫时，取出平放，20min后，检测带和质控带均出现红色为阳性，只有质控带出现红色为阴性，检测带和对照带均不显色，则为试剂失效，需换新的层析条重测。
Claims (8)
1.一种嗜吞噬细胞无形体抗原，其特征在于，所述抗原为含有优势B细胞表位的长肽，其氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQID No.5、SEQ ID No.6、SEQ ID No.7、SEQ ID No.8或SEQ ID No.9所示。
2.编码权利要求1任何一项所述的长肽的多核苷酸。
3.包含权利要求2任何一项所述的多核苷酸的表达载体。
4.包含权利要求3任何一项所述的表达载体的工程菌。
5.根据权利要求1任何一项所述的长肽制备的抗体。
6.一种检测嗜吞噬细胞无形体血清IgG抗体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1所述任一抗原。
7.一种检测嗜吞噬细胞无形体血清IgM抗体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1所述任一抗原。
8.一种检测嗜吞噬细胞无形体血清抗体的免疫层析试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1所述任一抗原。
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| CN2011102128542A CN102286093A (zh) | 2011-07-27 | 2011-07-27 | 一种嗜吞噬细胞无形体抗原及含有该抗原的试剂盒 |
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