CN102271530A - 用于治疗和预防伴侣动物的与体重相关疾病的组合物和方法 - Google Patents

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CN102271530A
CN102271530A CN2009801538324A CN200980153832A CN102271530A CN 102271530 A CN102271530 A CN 102271530A CN 2009801538324 A CN2009801538324 A CN 2009801538324A CN 200980153832 A CN200980153832 A CN 200980153832A CN 102271530 A CN102271530 A CN 102271530A
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Hills Pet Nutrition Inc
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents

Abstract

本发明包括治疗或预防伴侣动物的与体重相关疾病的组合物和方法，其中所述组合物和方法包括给伴侣动物饲喂包含硫辛酸或其盐的组合物。

Description

用于治疗和预防伴侣动物的与体重相关疾病的组合物和方法
发明领域
本发明包括治疗和/或预防伴侣动物的与体重相关疾病的组合物和方法，其中所述组合物和方法包括给伴侣动物饲喂包含硫辛酸或其盐的组合物。
发明背景
动物健康的一个重要指征是动物的身体构成。不健康的饮食和/或不健康的生活方式可导致动物具有不健康比例的身体脂肪，尤其与体内的瘦肉相关。现认为脂肪量超过30％(重量)的肌体表明该动物不健康，尤其是如果体内脂肪量超过35％(重量)时。
本发明包含伴侣动物的宠物食品组合物，其比目前市场上的伴侣动物食品，对于维持或促进健康身体构成，具有提高的治疗和预防效力。
发明概述
本发明人开发出用于治疗或预防动物疾病的食品组合物和使用所述组合物的方法。
本发明包括保持或促进伴侣动物的健康身体构成的方法，例如减轻体重或体内脂肪，增加瘦肉量的百分比，所述方法包括给动物饲喂有效保持或促进健康身体构成的量的组合物，所述组合物包含硫辛酸或其盐。
发明详述
总述
本发明包括在有需要的伴侣动物中预防或治疗疾病的食物组合物，其包含有效量的硫辛酸或其盐。
一个实施方案包含一种在伴侣动物中保持或促进健康身体构成的方法，其包含给该动物饲喂有效保持或促进健康身体构成的量的包含硫辛酸或其盐的组合物。
在某些实施方案中，所述有效量为至少约25ppm。
在某些实施方案中，所述有效量为至少约50ppm。
在某些实施方案中，所述有效量为至少约100ppm。
在某些实施方案中，所述有效量为约100ppm至约600ppm。
在某些实施方案中，所述有效量为约100ppm至约200ppm。
在某些实施方案中，所述伴侣动物为狗。
在某些实施方案中，所述伴侣动物为猫。
在某些实施方案中，所述组合物还包含蛋白质、脂肪、碳水化合物、纤维及其组合。
在某些实施方案中，所述组合物为犬类食品。
在某些实施方案中，所述组合物为猫类食品。
在某些实施方案中，所述组合物是食物、营养食物、补充剂、动物训练用食物(treat)或玩具。
在某些实施方案中，所述组合物为潮湿食物形式。
在某些实施方案中，所述组合物为干燥食物形式。
另一个实施方案包含一种在伴侣动物中引发体重减轻的方法，其包含给该动物饲喂有效引发体重减轻的量的包含硫辛酸或其盐的组合物。
在某些实施方案中，所述有效量为至少约25ppm。
在某些实施方案中，所述有效量为至少约50ppm。
在某些实施方案中，所述有效量为至少约100ppm。
在某些实施方案中，所述有效量为约100ppm至约600ppm。
在某些实施方案中，所述有效量为约100ppm至约200ppm。
在某些实施方案中，所述组合物还包含蛋白质、脂肪、碳水化合物、纤维及其组合。
在某些实施方案中，所述组合物为犬类食品。
在某些实施方案中，所述组合物为猫类食品。
在某些实施方案中，所述组合物是食物、营养食物、补充剂、动物训练用食物或玩具。
在某些实施方案中，所述组合物为潮湿食物形式。
在某些实施方案中，所述组合物为干燥食物形式。
在某些实施方案中，所述伴侣动物为狗。
在某些实施方案中，所述伴侣动物为猫。
本发明另一个实施方案包含在伴侣动物中引发体内脂肪消耗的方法，其包含给该动物饲喂有效引发体内脂肪消耗的量的包含硫辛酸或其盐的本发明的组合物。
在某些实施方案中，硫辛酸的有效量为至少约25ppm。
在某些实施方案中，所述有效量为至少约50ppm。
在某些实施方案中，所述有效量为至少约100ppm。
在某些实施方案中，所述有效量为约100ppm至约600ppm。
在某些实施方案中，所述有效量为约100ppm至约200ppm。
在某些实施方案中，所述组合物还包含蛋白质、脂肪、碳水化合物、纤维及其组合。
在某些实施方案中，所述组合物为犬类食品。
在某些实施方案中，所述组合物为猫类食品。
在某些实施方案中，所述组合物是食物、营养食物、补充剂、动物训练用食物或玩具。
在某些实施方案中，所述组合物为潮湿食物形式。
在某些实施方案中，所述组合物为干燥食物形式。
在某些实施方案中，所述伴侣动物为狗。
在某些实施方案中，所述伴侣动物为猫。
本发明另一个实施方案包含在伴侣动物中增加瘦肉量百分比的方法，其包含给该动物饲喂有效增加瘦肉量百分比的量的包含硫辛酸或其盐的本发明的组合物。
在某些实施方案中，硫辛酸的有效量为至少约25ppm。
在某些实施方案中，所述有效量为至少约50ppm。
在某些实施方案中，所述有效量为至少约100ppm。
在某些实施方案中，所述有效量为约100ppm至约600ppm。
在某些实施方案中，所述有效量为约100ppm至约200ppm。
在某些实施方案中，所述组合物还包含蛋白质、脂肪、碳水化合物、纤维及其组合。
在某些实施方案中，所述组合物为犬类食品。
在某些实施方案中，所述组合物为猫类食品。
在某些实施方案中，所述组合物是食物、营养食物、补充剂、动物训练用食物或玩具。
在某些实施方案中，所述组合物为潮湿食物形式。
在某些实施方案中，所述组合物为干燥食物形式。
在某些实施方案中，所述伴侣动物为狗。
在某些实施方案中，所述伴侣动物为猫。
本发明中使用的术语“伴侣动物”包括任何适合作为人的宠物饲养的非人类动物，包括狗、猫和啮齿类动物。本发明所有方面都优选用于治疗猫和/或狗。
术语“狗”包括那些作为伴侣动物的狗，如家犬、工作犬等。术语狗与术语犬同义。
术语“猫”包括那些作为伴侣动物的猫，这些伴侣动物称为家猫或饲养猫。
术语“啮齿类动物”包括但不限于仓鼠、小鼠、大鼠、豚鼠、沙鼠、野兔、刺猬、雪貂、丝毛兔等。
除另有特别说明外，本文表示的所有百分数都是以干品计的组合物的重量比。
本发明组合物
本发明一个实施方案包括用于伴侣动物的组合物，其包含有效量的硫辛酸或其盐。
本文所用术语“硫辛酸或其盐”包括但不限于例如α-硫辛酸、硫辛酸的外消旋混合物、硫辛酸盐、酯、酰胺或其衍生物，例如U.S.专利号5,621,117中所述。在各种实施方案中，可将硫辛酸以包含潮湿或干燥食物成分的组合物形式给予，其可以是潮湿食物、干燥食物、补充剂或训练用食物的形式。可将硫辛酸掺入到其中或掺入到任何食物组合物的表面上，如通过喷洒或凝结其上，或者可通过零食、补充剂、训练用食物或以在饮食的液体部分(如水或其它流体)中的方式加入到饮食中。可将硫辛酸以粉末、固体或以液体(包括凝胶)形式给予。一个重要的方面是可给动物供应有效量的硫辛酸以提供积极的作用。一般地，硫辛酸源以最大量可保持对动物无毒性的量存在于所述组合物中。
α-硫辛酸的量可以变化，从至少约25ppm、约50ppm、约100ppm、约200ppm、约300ppm、约500ppm、约700ppm、约900ppm、约1100ppm、约1200ppm、约1400ppm、约1600ppm、约1800ppm、约2000ppm、约2200ppm、约2400ppm、约2600ppm、约2800ppm、约3000ppm或约3500ppm。在各种实施方案中，可给予狗的硫辛酸的范围为约150ppm至约4500ppm。在各种实施方案中，可给予猫的硫辛酸的范围为约65ppm至约2600ppm。在某些示例性实施方案中，给予的量可在约100ppm至保持对宠物无毒性的量之间变化。在其它实施方案中，范围为约100ppm至约200ppm。
在各种实施方案中，包含硫辛酸的食物组合物对计划中的受试动物提供一种基本全营养性饮食。“全营养性饮食”是以下饮食：其包括在食物上维持健康动物正常健康状态的充足营养。
硫辛酸或其盐以对计划的动物的健康无害的浓度存在。因此，例如，硫辛酸或其盐以不引起不良或毒性作用的浓度存在。
所述组合物可以是液体或固体食物。当组合物为液体时，可将硫辛酸或其盐与其它组分混合。当组合物为固体时，可将硫辛酸涂覆在组合物上、掺入组合物中或两者。
在各种实施方案中，可将硫辛酸或其盐加入到动物食物中。在各种实施方案中，可将硫辛酸或其盐通过配制者或制造者在一定的场所加入到动物食物中，或者在喂食动物前由动物饲养者加入到动物食物中。在各种实施方案中，可将硫辛酸或其盐在加工动物食物过程中加入，如在与组合物的其它组分混合期间和/或之后加入，然后包装并使消费者可以得到。这种加工可包括挤出、制罐头、烘焙等或本领域任何已知的其它制备宠物食品的方法或过程。在各种实施方案中，硫辛酸或其盐可来源于诸如动物或植物组分的天然来源，或者硫辛酸或其盐可由源于合成的来源获得，或者硫辛酸或其盐可源于天然和合成来源的混合物。
除硫辛酸或其盐外，所述组合物还包括至少一种适用于伴侣动物消费的组分，包括但不限于脂肪、碳水化合物、蛋白质、纤维、营养平衡剂，如维生素、矿物质和微量元素及其混合物。本领域普通技术人员均可根据动物的饮食要求，例如动物的种类、年龄、体积、体重、健康状况和功能，来选择一般食物的数量和食物成分类型。
食物组合物的食物成分部分可包括最高至约100％的任何特定的食物成分或者可包括不同比例的食物成分的混合物。在某些实施方案中，食物组合物包括以下各量的食物成分的组合，约0wt.％-约50wt.％的脂肪、约0wt.％-约75wt.％的碳水化合物、约0wt.％-约95wt.％的蛋白质、约0wt.％-约40wt.％的膳食纤维和约0wt.％-约15wt.％的一种或多种营养平衡剂。
在某些实施方案中，脂肪和碳水化合物食物成分从多种来源获得，如动物脂肪、鱼油、植物油、肉、肉制品、谷物、其它动物或植物来源及其混合物。谷物包括小麦、玉米、大麦和粳米。
在某些实施方案中，蛋白质食物成分从各种来源获得，如植物、动物或两者。动物蛋白包括肉、肉副产品、乳酪和蛋类。肉类包括禽肉、鱼肉和诸如牛、猪、绵羊、山羊等的动物肉、肉副产品包括肺、肾、脑、肝、胃和肠。蛋白质食物成分也可不含氨基酸和/或肽。蛋白质食物成分优选包括肉类、肉副产品、乳制品或蛋类。
在某些实施方案中，纤维食物成分从各种来源获得，如植物纤维来源，例如纤维素、甜茶渣、花生壳和大豆纤维。
在某些实施方案中，营养平衡剂从技术熟练人员所知的多种来源获得，例如维生素和矿物质补充剂和食物成分。可包括避免缺乏和维持健康所需要量的维生素和矿物质。这些量本领域中易于查到。国家研究委员会(NRC)提供推荐量的家畜的这类营养素。参见，例如猪的营养需求(10th Rev.Ed.，Nat’l Academy Press，Wash.D.C.，1998)、家禽的营养需求(9th Rev.Ed.，Nat’l Academy Press，Wash.D.C.，1994)、马的营养需求(5th Rev.Ed.，Nat’l Academy Press，Wash.D.C.，1989)。美国饲料监督官协会(AAFCO)提供狗和猫的这类营养素的推荐量。参见American Feed Control Officials，Inc.，Official publication，pp.129-137(2004)。通常可用作食物添加剂的维生素包括维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素D、生物素、维生素K、叶酸、肌醇、烟酸和泛酸。可用作食物添加剂的矿物质和微量元素包括钙、磷、钠、钾、镁、铜、锌、氯化物、铁、硒、碘和铁。
在某些实施方案中，所述食物组合物可包含其它成分，例如维生素、矿物质、填充剂、适口性增强剂、粘合剂、香料、稳定剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、缓冲剂、盐、涂料以及技术人员了解的类似成分。稳定剂包括趋于增加组合物储存期限的物质，如防腐剂、协同剂和螯合剂、包装气体、稳定剂、乳化剂、增稠剂、胶凝剂和保湿剂。乳化剂和/或增稠剂的实例包括明胶、纤维素醚、淀粉、淀粉酯、淀粉醚和变性淀粉。各组合物组分、食物成分和其它成分的特定量将取决于多种因素，如组合物中包括的特定组分和成分；动物种类；动物的年龄、体重、健康状况、性别和饮食；动物的消耗率；所治疗的疾病或病症类型等。因此，所述组分和成分的量可在很宽范围内变化，并可脱离本文所述的优选的比例。
在一个示例性实施方案中，除硫辛酸或其盐外，组合物还可包含例如至少下列一种成分：
(a)约0％-约75％的碳水化合物，
(b)约2％-约50％的脂肪，
(c)约0％-约40％的膳食纤维，和
(d)约0％-约15％的一种或多种营养平衡剂。
饲喂成年伴侣宠物(如犬科动物和猫科动物)的饮食是给该年龄动物喂食的标准正常食物。以下为年龄1-6岁犬的典型饮食。
表1：示例性伴侣动物宠物食物组合物
  成分   目标
  蛋白质(％干品)   23
  脂肪(％干品)   15
  磷(％干品)   0.6
  钠(％干品)   0.3
所述组合物可包含用于保持或提高动物健康的其它成分，如补充剂、药物、草药、全身治疗的药物和组合物等。
本发明的组合物可包括一种或多种用于预防或治疗一种或多种疾病或病症的其它成分。
实现这一点的食物中的组分为抗氧化剂或其混合物。抗氧化剂是猝灭自由基的物质。这类物质的实例包括食物，如银杏、柑桔果肉、葡萄渣、番茄渣、胡萝卜和菠菜，所有都优选为干燥品，以及各种其它物质，如β-胡萝卜素、硒、辅酶Q10(泛醌)、叶黄素、生育三烯酚类、大豆异黄酮、S-腺苷甲硫氨酸、谷胱甘肽、牛磺酸、N-乙酰半胱氨酸、维生素E、维生素C、α-硫辛酸、L-肉碱等。可将维生素E以生育酚或生育酚混合物和其各种衍生物的形式给予，如酯例如维生素E乙酸酯、琥珀酸酯、棕榈酸酯等。优选α型，但可包括β、γ和δ型。优选d型，但外消旋混合物也可接受。所述各型和衍生物经宠物摄取后以维生素E样活性发挥作用。在这种饮食中的维生素C可以抗坏血酸及其各种衍生物，如钙磷酸盐、胆固醇盐、2-单磷酸盐等的形式给予，其经宠物摄取后以维生素C样活性发挥作用。它们可以是诸如液体、半固体、固体和热稳定形式的任何形式。可将α-硫辛酸以α-硫辛酸或如美国专利号5,621,117中的硫辛酸酯(盐)衍生物、其外消旋混合物、盐、酯或酰胺形式加入到食物中。可将L-肉碱加入到饮食中，并可使用肉碱的各种衍生物，如盐类，如盐酸盐、富马酸盐和琥珀酸盐，和乙酰化肉碱等。
计算饮食中所加入的活性物质的量，所有量均以食物的wt％(干品计)，活性物质本身作为游离物质测定。所使用的最大量不应产生毒性。可使用至少约100ppm或至少约150ppm的维生素E。可使用的优选的范围为约500至约1,000ppm。虽然不必要，但一般不超过约2,000ppm或约1,500ppm的最大值。对于维生素C，使用至少约50ppm，理想是至少约75ppm，更理想是至少约100ppm。可使用非毒性的最大量。α-硫辛酸的量可从至少约25ppm变化，理想是至少约50ppm，更理想是约100ppm。最大量可从约100ppm至保持对宠物无毒性的量之间变化。优选的范围是约100ppm-约200ppm。对于L-肉碱，约50ppm，理想是约200ppm，更理想是约300ppm是犬科动物所用的最小量。对猫科动物来讲，可使用稍高最小量的L-肉碱，如约100ppm、200ppm和500ppm。可使用非毒性最大量，例如小于约5,000ppm。对于犬科动物，可使用稍低的量，例如小于约5,000ppm。对于犬科动物，优选的范围是约200ppm至约400ppm。对于猫科动物，优选的范围是约400ppm至约600ppm。可使用约1-15ppm的β-胡萝卜素。可使用约0.1至约5ppm的硒。可使用至少约5ppm的叶黄素。可使用至少约25ppm生育三烯酚。可使用至少约25ppm辅酶Q10。可使用至少约50ppm的S-腺苷甲硫氨酸。可使用至少约1000ppm的牛磺酸。可使用至少约25ppm的大豆异黄酮。可使用至少约50ppm N-乙酰半胱氨酸。可使用至少约50ppm的谷胱甘肽。可使用至少50ppm的银杏提取物。
以下是具有较高ORAC(氧自由基吸收能力)含量的原料成分：菠菜渣、番茄渣、柑橘肉、葡萄渣、胡萝卜粒、绿花椰菜、绿茶、银杏和谷类麸质餐。
当以1％包含物(为降低ORAC成分，总量为5％代替物，如玉米)加入到食物中时，它们增加了总体食物的ORAC含量，并且增加了食用含有这些组分食物的动物的血浆的ORAC含量。如果以和四种其它1％成分组合的1％(共计加入5％)向食物中加入，优选可使用每克干品具有ORAC含量＞25μmol的抗氧化当量(Trolox equivalents)的任何成分。在某些实施方案中，所述组合物还包括有效量的至少一种选自下列的物质：葡糖胺、软骨素、硫酸软骨素、二甲基砜(“MSM”)、肌酸、抗氧化剂、Perna canaliculata、ω-3脂肪酸、ω-6脂肪酸及其混合物。
在各种实施方案中，包含有效量硫辛酸或其盐的补充剂还包括有效量的至少一种物质，包括阿司匹林、抗炎剂如布洛芬、COX-2抑制剂和其它医用和药用组合物及其组合。补充剂包括但不限于与另一种饲料使用的饲料，用以改善营养平衡或整体的性能。补充剂包括组合物，这类组合物作为补充剂不稀释到其它饲料中，其可单独、自由选择地与动物定量食物中的其它部分一起给予，或者用动物常规食物稀释和混合制成完整的食物。例如AAFCO在American Feed ControlOfficials，Inc.Official Publication，p.220(2003)中提供有关补充剂的讨论。补充剂可以是各种形式，包括例如粉末、液体、糖浆剂、丸剂和包封的组合物。
在某些实施方案中，所述组合物可以是训练用食物。训练用食物包括在非进餐时间给予动物以引诱动物吃的组合物，例如犬用狗骨头。训练用食物可具有营养性，其中所述组合物包括一种或多种营养素并可具有食物样组合物。非营养性的训练用食物包含任何其它无毒性训练用食物。可将组合物或组分涂覆在训练用食物之上、掺入训练用食物之中或两者。本发明的训练用食物可通过类似于干燥食物所用的挤出或烘焙方法制备。也可使用其它方法将组合物涂覆在现存的训练用食物形式的外部或者将组合物注射到现存的训练用食物形式之中。
在某些实施方案中，所述组合物可以是玩具。玩具包括可咀嚼玩具，如人工骨头。硫辛酸或其盐可在玩具表面或在玩具零件的表面上形成涂层，或将其部分或全部掺入到玩具中或者两者。在一个实施方案中，硫辛酸或其盐是预期使用者易于口服的。目前存在着很多适合的当前上市的玩具，例如，美国专利号5,339,771、美国专利号5,419,283及其其中公开的参考文献。本发明提供部分可消耗性玩具，例如包括塑料零件的玩具，以及完全可消耗性玩具，如生牛皮和各种人工骨头。本发明优选提供狗或猫使用的玩具。
本发明组合物的制备
采用技术人员已知的常规制备食品的方法，可将本发明组合物制备成罐头或湿物的形式。一般将地上动物蛋白质组织与其它成分，如鱼油、谷粒、平衡成分、特殊目的的添加剂(如维生素和矿物质混合物、无机盐、纤维素和甜茶渣、增量剂等)和足用以加工量的水混合。将这些成分在适于加热的容器中混合，同时掺混这些组分。使用任何适合的方式加热该混合物，如直接注入蒸汽或用安装热交换器的容器。然后加入最后的成分，将混合物加热至约50℉-约212℉温度。该范围外的温度是可接收的，但不使用其它加工助剂下可能在商业上是不实际的。当加热至适当温度时，物质一般将为稠液体形式。将该稠液体填充于罐头中。盖上盖子，并将该容器密封。然后将密封的罐头置于设计用于给内容物灭菌的常规设备中。灭菌通常通过将温度加热至约230℉以上适当时间完成，加热时间取决于所用的温度、组合物和类似因素。本发明组合物可在食物组合物的制备之前、期间或之后加入。
采用技术人员已知的常规方法，可将食物组合物制备成干品形式。一般将诸如动物蛋白、植物蛋白、谷物等干燥成分研磨并混合在一起。然后加入潮湿或液体成分，包括脂肪、油类、动物蛋白、水等并与干燥混合物混合。然后将该混合物加工成粗磨物(kibbles)或类似的干燥小片。粗磨物通常采用挤出方法形成，其中将干燥和潮湿成分的混合物在高压和高温下进行机械加工，并迫使通过小的开口，然后通过旋转刀具切成粗磨物。然后将湿的粗磨物干燥并任选涂覆一个或多个顶部涂层，如香料、脂肪、油类、粉末等。还可采用烘焙方法而不是挤出方法，由生面团(dough)制成粗磨物，其中在干燥加热加工之前，将生面团置于模子中。采用类似于上述干燥食品或玩具的那些挤出或烘焙方法，如美国专利号5,339,771和5,419,283公开的那些，所述食物组合物可以为训练用食物形式。可在制备之前、期间或之后，将本发明的组合物加入到食物组合物中。
用本发明组合物治疗或预防疾病的方法
本发明还包含通过给予有需要的伴侣动物包含有效量的硫辛酸或其盐的组合物，治疗或预防某些疾病的方法。
向伴侣动物宠物食物中加入一定量的抗氧化剂或其混合物可保持或促进宠物，如成年宠物中的健康身体构成，例如减轻体重或身体脂肪，和增加瘦肉量的百分比。术语“成年”一般是指至少1-6岁的犬科动物和至少1-6岁的猫科动物。老龄的狗或猫是7岁和以上。
本发明人已成功实现保持或促进健康身体构成，例如减轻体重或身体脂肪，或者增加瘦肉量的百分比。
本发明不限于本文所述的特定的方法学、方案和试剂，原因是它们均可以变化。另外，本文所用的术语目的在于仅描述特定的实施方案，并不意欲限制本发明的范围。本文及附加权利要求书中所用的单数形式“一”和“该”，除上下文中明确指明外，否则都包括复数指示物。类似地，词语“包括”和“包括地”应解释为包含在内而非排他性的。除另有定义外，本文所用的所有技术和科学术语和任何首字母缩写都具有与本发明领域内一般技术人员通常了解的相同的含义。虽然在实施本发明中可使用与本文所述类似或等同的任何组合物、方法、制造物品或其它手段或材料，但优选的组合物、方法、制造物品或其它手段或材料为本文描述的那些。
实施例
本发明可通过其下列优选实施方案的实施例进一步举例说明，虽然应理解的是所包括的这些实施例仅用于举例说明，并且除另有特别说明，它们并不限定本发明的范围。
实施例1
本研究使用30只随机来源的成年狗进行。狗在试验前至少为10月龄、未怀孕、未泌乳并有适当的体重。将动物随机分为5个饮食治疗组，每组3只雄性和3只雌性。
在2周的摄食前期(表2)，给所有的狗喂食满足或超过美国官方饲料管制协会(AAFCO 2000)建议的所有营养推荐量的对照食物(加入0ppm DL-α-硫辛酸)。经过该摄食前期后，将狗随机分为5个治疗组，分别包含下列之一的DL-α-硫辛酸目标(以干品计)：0ppm、150ppm、1,500ppm、3,000ppm、4,500ppm。在所有的饮食中，对照和α-硫辛酸，都加入维生素E，其量为600-1000国际单位水平，并加入水平为100-200ppm的维生素C。
除水外，试验食物是唯一的营养来源。淡水随意供给。选择狗并称取最初的体重后，根据预期的食物ME，计算各狗的食物剂量。初始食物剂量的计算以狗的维持能量需求(MER)为依据，MER通过说明正常活性的因子来校正，按下式计算：
MER(kcal/日)＝1.6×RER(静态能量需求)
其中：RER(kcal/日)＝70×体重(kg)0.75.
每周给狗称重，按需要调节食物剂量，以使喂食足量食物以保持它们的最适体重。测量的最适体重为5级分制的3分。如果调整食物剂量后，狗的体重未维持在初始体重的-10％之内，则将狗从研究中排除。记录所有体重和食物摄取的测定值。
将样品研磨，将0.100+/-0.001g样品提取2次至5.0ml磷酸盐缓冲液(10mM Na2HPO4、2mM乙二胺四乙酸(EDTA)、0.9％NaCl，pH7.4)中。将250μL提取物置于5ml带有特氟龙线性管帽的玻璃离心管中。加入15μL EDTA溶液(100mM EDTA，用约1M NaOH调节至pH 7.8)和50μL新制的5mM二硫赤藓糖醇(DTE)。将该溶液涡旋并在室温下孵育5分钟。然后加入10μL 1M H3PO4和2.0ml乙醚。将各管盖帽、涡旋并在室温下以1500×g离心3分钟。将乙醚层转移至单独的5ml玻璃离心管中，同时将水层用1.5ml乙醚再提取2次。合并同一样品的所有提取液。然后在室温下，在水浴中在氮气蒸发器内干燥提取物。在该点，将样品封盖并冷冻过夜。
然后将干燥的提取物解冻，用70μL SDS/EDTA溶液(0.11％十二烷基硫酸钠(SDS)、15mM EDTA、0.9％NaCl)和5μL新制的1mMDTE制成溶液。随后将50μL新制的NaBH4加入到各管中。将各管涡旋并在室温下孵育10分钟。10分钟后，将样品在-70℃下冷冻。加入20μL2M HCl，然后将溶液解冻。溶液解冻后，加入800μL 100mM NH4HCO3。将溶液涡旋，并加入5μL 100mM一溴二胺(monobromodiamane)的乙腈溶液(mBBr)。然后在室温下，将该溶液在暗处孵育90分钟。
通过用1.5ml二氯甲烷提取，从孵育后的样品中除去过量的mBBr和DTE衍生物。将水层置于HPLC上。分离硫辛酸，使用流动相，该流动相由30％乙腈、1％乙酸组成，用约2M NH4OH调节至pH3.95，以流速1.0mL/min泵送，每次进样等度洗脱15分钟。该制备推定挤出食物的密度等于1g/ml。
在开始进行研究前2周以及在研究的第0、28、56、84、112、140和168日，无菌收集全血进行完全血细胞计数和血液生化分析。另外，在进行饮食干预的第0、28和84日，收集15ml全血进行淋巴细胞分离。
将肝素化全血分层置于50ml Accuspin尖底离心管(SigmaChemical)内，然后加入等体积的磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在不振摇下，将样品以700g离心30分钟。收集单核细胞层，转移至15ml尖底离心管内，再悬浮于1-3ml的PB中，如以前一样离心(首次清洗)。按首次清洗步骤进行第二次清洗。最后，收集细胞，悬浮于高氯酸(10％w/v)中，在-70℃下冷冻待分析用。
将样品从-70℃冰箱中转移至里面带有干冰的冷却器内。在冷冻离心机内，将各管以12,000rpm速度离心5分钟。将一等份进行谷胱甘肽(GSH)分析的样品转移至圆锥形试管中。
根据Jones(Jones等)改进的Reed和其同事(Fariss等)的方法，进行所述酸溶解提取物的衍生化。
简略地讲，将150μL外标提取物加入到1.5ml微量离心管中，接着加入20μγ-Clu-Glu内标物和50μL IAA，然后混合。用KOH-KHCO3工作液，将该溶液调节至pH约为10(紫色)。在室温下，将溶液于暗处孵育1小时。加入与总体积相同体积的桑格试剂，然后在室温下，将该溶液于暗处孵育过夜(20小时)。
孵育后，将溶液以12,000rpm速度离心5分钟，将上清液转移至另一个1.5ml微量离心管中。将200μL上清液加入到具有300μL入口的琥珀色非针头式过滤器(Autovial)内，用压折器固定顶端以进行HPLC分析。
采用(Fariss，Jones)所述的溶剂和分离条件。定量确定相对于真正标准物的GSH和GSSG的水平。使用γ-谷酰胺基-谷氨酸盐作为内标物评估衍生化效率。
临床化学、血液学和体重相对于基线值的比较通过配对t检验进行分析，SAS窗显著性意义设为P＜0.05。通过单向方差分析ANOVA分离各测定时间点的平均值，显著性意义设为P＜0.05。各组之间84日和基线之间的GSH∶GSSG的差异通过单向ANOVA分析，SAS窗显著性意义设为P＜0.05。
结果
连续7个测定(0，28，56，84，112，140，168日)测得的食物中硫辛酸的浓度(ppm)处于所期望的测定敏感度和一般在我们设备中遇到的生产参数范围之内(表2)。
食物摄入数据不显著。所有组中的大多数动物6个月时摄取的食物平均都比研究开始时更多。除在4,500ppm包含物组中最初出现一些体重减轻，但该变化经6个月时间呈现逆转之外，体重数据并不显著。身体条件的评分似乎并不受这种体重较少损失的影响。
常规的身体检查并未暴露出任何与营养相关的异常情况或DL-α-硫辛酸毒性的证据。研究群体中的所有动物在整个研究期间都保持正常。研究期间在几只动物中发现偶尔的呕吐；但是，未观察到导致人们得出呕吐可能是由于硫辛酸所引起的这个结论的趋势。最高包含物组中的一只动物在21日时因体重减轻和白细胞增多而从研究中去除。研究结束时该动物白细胞增多并未消除，因此推断归咎于某些其它的疾病过程。
当将28、56、84、112、140和168日血清生化值与相同组狗的最初值比较时，注意到几个统计学上的差异，但是，不认为这些具有生物学上的意义，因为这些值处于或非常接近实验室参考值范围，并注意到在数月内保持一致。各时间期限内对照组和其它治疗组之间的比较也显示出一些统计学差异，但是，不认为这些具有生物学上的意义，因为这些值处于或非常接近临床实验室参考值范围，并且未出现趋势。
当将第28、56、84、112、140和168日的血液值与相同组狗的最初值比较时，注意到一些统计学上的差异，但是，不认为这些具有生物学上的意义，因为这些值处于或非常接近实验室参考值范围，并且未出现趋势。各时间期限内对照组和其它治疗组之间的比较也显示出一些统计学差异，但是，不认为这些具有生物学上的意义，因为这些值处于或非常接近临床实验室参考值范围，并且未出现趋势。
GSH∶GSSG比率
饲喂84日中GSH∶GSSG比率的变化显示食物的明显整体影响(P＝0.024)，并且所有补充物组该比率增加(表3)。ANOVA显示出最低和最高包含物食物与基础食物相比的显著性差异，但是，增加的最大值在最低包含物水平中。即，最高和最低包含物的GSH∶GSSG比率的变化与基础食物相同时间期限观察到的变化具有明显差异。第84日未能检测到4个点的比率，因为在任何这些样品(1个对照组，3个治疗组)中都未检测到GSSG。因此，如果该测试法灵敏度足以测定第84日低水平的GSSG，则可显示补充物组甚至更高的GSH∶GSSG比率数值。
表2
Figure BPA00001392978100171
表3
*第84日对照组和4,500ppm组中的1只狗未检测到GSSG，同时第84日3,000ppm组中的2只狗未检测到GSSG。
可应用对α-硫辛酸的进一步观察。在食物中慢性补给α-硫辛酸是安全且有效的。其改善还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)的比率。在食物中慢性给予α-硫辛酸的时期可以为最少1、2、3、4、5或6个月至最高1、2、3、4、5年或甚至更长时间，包括动物的终生。α-硫辛酸在食物中发挥作用，其不需任何特别保护，如包封，并且不需要以药物中所用的诸如片剂、丸剂、胶囊等单位剂型形式出现在食物中。提供在食物中硫辛酸的量至少为食物的约25、50、75或100ppm。最高范围低于其毒性水平，从始至终低至食物的约400、300或200ppm。一般地，日剂量不能超过动物每kg体重约6或7mg，更通常不超过约5mg/kg。α-硫辛酸改善抗氧化剂的防御能力并改善动物抵抗氧化损伤的能力。所有这些作用均是在适量的其它抗氧化剂(如维生素E和维生素C)存在下进行。这表明α-硫辛酸的作用优于维生素C和/或维生素E。
实施例2
材料和方法：
用30只狗测定硫辛酸的作用，与AAFCO对照食物或含鱼油测试食物进行对比。
在AAFCO对照食物、含鱼油食物和含硫辛酸的食物之间研究差异基因表达谱。在30日，在最小1.3倍变化处，与AAFCO对照组相比，产生一列1212基因，而与含鱼油食物相比，产生一列1896基因。
RNA提取：使用PAXgene RNA分离试剂盒，从全血样品中分离总的RNA。所有测量采用犬2Affymetrix基因芯片进行。对于统计分析，将所有测量用RMA标准化。用Partek进行所有的分析。对对照和试验食物之间差异性表达的基因进行ANOVA t-检验，并根据p-值截止值0.1，倍数变化＞+/-1.3选择测试食物。
基因表达：当与饲喂AAFCO对照食物的狗相比时，发现在喂食含150ppm硫辛酸的试验食物的狗中，1212个基因表达改变。另外，当与含鱼油的试验食物相比时，发现在喂食含硫辛酸的试验食物的狗中，1896个基因表达改变。表7显示的基因按照喂食对照食物或者含鱼油食物的那些相关的表达功能和方向进行分组。
代谢产物学(Metabolomics)：分析血浆代谢物，并比较相对于喂食对照食物的狗的倍数变化。
生物标记物测定：采用基于ELISA的试剂盒测定血清软骨标记物以确定软骨标记物的浓度。将0日值作为分析中的协变量以调节基线值。
结果：与无硫辛酸的类似食物相比，向食物中加入硫辛酸可使II型胶原C-前肽和II型胶原的羧基端交联的端肽片段更大地降低。已知这两个标记物在骨关节炎狗中增加。另外，喂食含硫辛酸食物的狗脂肪减少，表明利用产生能量的脂肪(脂肪氧化)增加以及降低产生葡萄糖以保持更健康的体重。换言之，喂食硫辛酸的狗更有效地利用现有的葡萄糖并将其能量代谢转换为脂肪代谢以供能量利用。另外，血浆中代谢物羟脯氨酸降低，其表明软骨破坏降低，原因是这种代谢物几乎完全由软骨产生。此外，按血清白血细胞中测定的基因表达中的变化支持这种证据，即认为增强了由软骨成分合成增加引起的软骨的保护作用并降低了降解软骨的酶的表达。最后，基因表达变化表明通过增加PDK4能提高脂肪的利用，PDK4抑制葡萄糖形成丙酮酸盐并使代谢向关闭乙酰基-CoA移动以便产生能量，以及上调葡萄糖转运蛋白。与喂食对照食物的狗相比，喂食硫辛酸的狗还呈现出基因性纤瘦。
该表显示相对于硫辛酸治疗的脂肪和体重以及软骨标记物的差异。
表4说明与喂食对照加鱼油以及对照加硫辛酸的狗相比，喂食对照食物的狗的身体构成的变化。如表4中所示，在90日的治疗期间，喂食对照加硫辛酸的狗呈现出最大的体重变化。
Figure BPA00001392978100201
表5说明与喂食对照加鱼油以及对照加硫辛酸的狗相比，喂食对照食物的狗的丙酮酸盐血液水平的变化。如表5中所示，在30日的治疗期间，喂食对照加硫辛酸的狗在丙酮酸盐血液水平上呈现出最大的变化。
Figure BPA00001392978100202
a将0日值作为分析中的协变量
表6说明与喂食30日对照加鱼油以及对照加硫辛酸的狗相比，喂食对照食物后的狗被归类为基因性肥胖的百分比。如表6中所示，在30日的治疗期后，喂食对照加硫辛酸的狗基因上与物理性肥胖的狗不相似。
Figure BPA00001392978100203
Figure BPA00001392978100211
表7.与对照或改进食物(改进含鱼油)相比，与硫辛酸改变的软骨和能量代谢相关的基因
Figure BPA00001392978100212
Figure BPA00001392978100221
表8说明本发明一个示例性宠物食品组合物中的成分。
表8.制备组合物所用成分
  成分
 1   小麦
 2   高粱(milo)
 3   玉米
  4   鸡肉粉
  5   玉米谷蛋白粗粉
  6   家禽粗粉
  7   大豆油
  8   亚麻籽
  9   大米啤酒
  10   大豆粉，49％
  11   Pal增强子1
  12   甜菜渣
  13   柠檬酸钾
  14   鱼油
  15   DL-甲硫氨酸
  16   盐酸L-赖氨酸
  17   盐
  18   碳酸钙
  19   硫辛酸
  20   氯化胆碱
  21   维生素预混物
  22   L-苏氨酸
  23   维生素E
  24   L-色氨酸
  25   硫辛酸
  26   矿物质预混物
  27   防腐剂
表9显示双能X-射线吸收仪(DEXA)测定喂食90日对照食物后的狗，并与喂食含硫辛酸的宠物食品的狗相比。使用DEXA测定体内脂肪比用于评估健康状况的体重更加准确。一只狗可以有很多肌肉，但经很多身高/体重图表被判断为“超重”。相反亦可能是真实的-一只狗可能具有很多脂肪和很少肌肉，其为“脂肪超量”而非超重。
Figure BPA00001392978100231
Figure BPA00001392978100241
表10说明在第180日的身体构成，以确定喂食5种不同宠物食品180日后，相对最初协变量的狗治疗效果。
Figure BPA00001392978100242
表11说明对比喂食30日包含硫辛酸宠物食物的狗，喂食对照食物的狗的血液样品中测定的代谢物的变化。如表11中所示，喂食对照加硫辛酸的狗在30日后呈现出肾标记物减少。
Figure BPA00001392978100243
Figure BPA00001392978100251
本发明并不限于由实施例中公开的具体实施方案的范围，所述实施例仅视为本发明一些方面的示例性说明，且任何功能上等同的实施方案都包括在本发明的范围内。的确，除本文显示和描述的那些实施方案外，本发明的各种修改对本领域技术人员而言都是显而易见的，它们均将落入所附的权利要求的范围内。
本文引用或参考的所有专利、专利申请、出版物以及其他参考文献在法律允许的程度通过引用结合到本文中。那些参考文献的讨论仅用于概述其中的主张。并不是承认任何这些专利、专利申请、出版物或参考文献或其任何部分与本发明的现有技术相关，并且明确保留对这些专利、专利申请、出版物以及其他参考文献的精确性和相关性提出质疑的权利。

Claims (44)

1.一种在有需要的伴侣动物中保持或促进健康身体构成的方法，所述方法包括给伴侣动物饲喂组合物，所述组合物包含有效保持或促进健康身体构成的量的硫辛酸或其盐。
2.权利要求1的方法，其中所述有效量为至少约50ppm。
3.权利要求1的方法，其中所述有效量为至少约100ppm。
4.权利要求1的方法，其中所述有效量为约100ppm至约600ppm。
5.权利要求1的方法，其中所述有效量为约100ppm至约200ppm。
6.权利要求1的方法，其中所述伴侣动物为狗。
7.权利要求1的方法，其中所述伴侣动物为猫。
8.权利要求1的方法，其中包含硫辛酸的所述宠物食物组合物给予至少15日。
9.权利要求1的方法，其中包含硫辛酸的所述宠物食物组合物给予至少30日。
10.权利要求1的方法，其中包含硫辛酸的所述宠物食物组合物给予至少45日。
11.权利要求1的方法，其中包含硫辛酸的所述宠物食物组合物每日给予。
12.一种在有需要的伴侣动物中引起体重减轻的方法，所述方法包括给伴侣动物饲喂组合物，所述组合物包含有效引起体重减轻的量的硫辛酸或其盐。
13.权利要求12的方法，其中所述有效量为至少约50ppm。
14.权利要求12的方法，其中所述有效量为至少约100ppm。
15.权利要求12的方法，其中所述有效量为约100ppm至约600ppm。
16.权利要求12的方法，其中所述有效量为约100ppm至约200ppm。
17.权利要求12的方法，其中所述伴侣动物为狗。
18.权利要求12的方法，其中所述伴侣动物为猫。
19.权利要求12的方法，其中包含硫辛酸的所述宠物食物组合物给予至少15日。
20.权利要求12的方法，其中包含硫辛酸的所述宠物食物组合物给予至少30日。
21.权利要求12的方法，其中包含硫辛酸的所述宠物食物组合物给予至少45日。
22.权利要求12的方法，其中包含硫辛酸的所述宠物食物组合物每日给予。
23.一种在有需要的伴侣动物中引起肌体脂肪损耗的方法，所述方法包括给伴侣动物饲喂组合物，所述组合物包含有效引起肌体脂肪损耗的量的硫辛酸或其盐。
24.权利要求23的方法，其中所述有效量为至少约50ppm。
25.权利要求23的方法，其中所述有效量为至少约100ppm。
26.权利要求23的方法，其中所述有效量为约100ppm至约600ppm。
27.权利要求23的方法，其中所述有效量为约100ppm至约200ppm。
28.权利要求23的方法，其中所述伴侣动物为狗。
29.权利要求23的方法，其中所述伴侣动物为猫。
30.权利要求23的方法，其中包含硫辛酸的所述宠物食物组合物给予至少15日。
31.权利要求23的方法，其中包含硫辛酸的所述宠物食物组合物给予至少30日。
32.权利要求23的方法，其中包含硫辛酸的所述宠物食物组合物给予至少45日。
33.权利要求23的方法，其中包含硫辛酸的所述宠物食物组合物每日给予。
34.一种在有需要的伴侣动物中增加瘦肉量百分比的方法，所述方法包括给伴侣动物饲喂组合物，所述组合物包含有效增加瘦肉量百分比的量的硫辛酸或其盐。
35.权利要求34的方法，其中所述有效量为至少约50ppm。
36.权利要求34的方法，其中所述有效量为至少约100ppm。
37.权利要求34的方法，其中所述有效量为约100ppm至约600ppm。
38.权利要求34的方法，其中所述有效量为约100ppm至约200ppm。
39.权利要求34的方法，其中所述伴侣动物为狗。
40.权利要求34的方法，其中所述伴侣动物为猫。
41.权利要求34的方法，其中包含硫辛酸的所述宠物食物组合物给予至少15日。
42.权利要求34的方法，其中包含硫辛酸的所述宠物食物组合物给予至少30日。
43.权利要求34的方法，其中包含硫辛酸的所述宠物食物组合物给予至少45日。
44.权利要求34的方法，其中包含硫辛酸的所述宠物食物组合物每日给予。
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