CN102260270A - N-(2-甲基呋喃[2，3-d]嘧啶-4-基)丙烯酰胺、其制备方法及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种小分子化合物——N-(2-甲基呋喃[2，3-d]嘧啶-4-基)丙烯酰胺(HK-156)及其制备方法，还涉及该化合物的用途，即其作为小分子核转录因子NF-κB信号通路抑制剂抑制炎症因子的表达从而达到抗炎作用的用途。本发明提供的小分子化合物HK-156，其通过作用于TAK1上游的靶点，抑制LPS诱导的TAK1的磷酸化，进而引起IKKβ磷酸化的降低，从而导致IκBα的磷酸化和降解，并导致随后的NF-κB转位入核及其与κB增强子序列的结合受到抑制。本发明提供的小分子化合物HK-156有望开发为一种新的抗炎药物。

Description

N-(2-甲基呋喃[2,3-d]嘧啶-4-基)丙烯酰胺、其制备方法及其用途

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种小分子化合物——N-(2-甲基呋喃[2，3-d]嘧啶-4-基)丙烯酰胺及其制备方法，还涉及该化合物的用途，即其作为小分子核转录因子NF-κB信号通路抑制剂抑制炎症因子的表达从而达到抗炎作用的用途。

背景技术

核转录因子NF-κB是1986年由David Baltimore实验室的Ranjan在研究B细胞的发育及抗体表达基因重排过程中发现的。NF-κB被认为是一个组成型的B细胞核内特有的蛋白，其结合于κ轻链增强子序列(GGGACTTTCC)上，并调控抗体κ轻链的转录和表达。由于发现时其作为核转录因子选择性地结合于κ增强子上，并且当时只在B细胞提取物中被发现，因此将其命名为NF-κB。从NF-κB发现至今的24年间，已发现NF-κB在免疫系统中起到特别重要的作用，是一个重要的先天和获得性免疫以及炎症反应的调节因子。

在经典的NF-κB信号通路中，核转录因子NF-κB的异源二聚体p50：p65/RelA在静息细胞中以结合抑制蛋白IκBα的无活性形式存在于细胞质中。细胞在受到包括细胞因子、生长因子、细菌以及病毒产物等刺激的条件下，信号通过受体和细胞内连接蛋白的转导，最后汇集于主要由IKKα、IKKβ和NEMO组成的IKK复合物中，通过IKK复合物中主要是IKKβ的磷酸化激活，并进一步磷酸化为IκBα的Ser32和Ser36。随后磷酸化的IκBα快速被泛素化并被26S蛋白酶体所降解，最终导致NF-κB复合物p50：p65被释放而转位入细胞核，同靶向基因的DNA作用元件κB增强子序列结合从而调控基因的表达。受NF-κB调控诱导表达的基因多达四百种以上，包括：促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6等；趋化因子IL-8等；细胞粘附分子ICAM-1等；以及酶MMP-9、iNOS、COX-2等。LPS和TNF-α是先天性免疫和炎症过程中常见的激活经典NF-κB信号通路的刺激物，而抗原通过TCR或者BCR受体激活经典NF-κB信号通路而在活化T细胞和B细胞的获得性免疫过程中发挥作用。

在一些类风湿性关节炎、多发性硬化症和炎性肠病等炎性疾病的病理生理发展过程中，由巨噬细胞、单核细胞、Th细胞等分泌的促炎因子、趋化因子等细胞因子对于细胞的浸润和组织损伤起着关键性的作用，而这些细胞因子几乎都是NF-κB调控的靶向基因，其中一些细胞因子如TNF-α、IL-1β等同时又反过来再次激活经典的NF-κB信号通路并导致级联反应的扩大。由此可见，NF-κB信号通路在炎性疾病中起着关键的作用。同时，糖皮质激素和阿司匹林等抗炎药物都陆续发现其抗炎作用机理与抑制NF-κB信号通路有关。

革兰氏阴性细菌的细胞壁成分脂多糖(LPS)是在微生物感染导致炎症的过程中常见的病原微生物分子，而且也是一种典型的激活经典NF-κB信号通路的刺激物。LPS通过血浆中的LBP蛋白和细胞膜上的CD14的帮助结合到由TLR4和MD-2组成的受体复合物后，导致MyD88和TRIF依赖的两条途径能够激活NF-κB，其中MyD88依赖的途径占主导地位。结合LPS后的TLR4受体胞质部分构象的改变导致TIRAP/MAL被招募到受体胞浆区域，并作为桥梁因子招募MyD88。MyD88进一步招募TRAF6和IRAK家族成员，导致TRAF6的寡聚化和自身泛素化后，通过招募TAB2和TAB3进一步激活TAK1。激活的TAK1然后磷酸化IKKβ，并引起下游IκBα磷酸化和降解，最终导致NF-κB的激活。

败血症(Sepsis)是一种高死亡率的急性炎症，是由于革兰氏阴性菌的感染导致细菌的脂多糖(LPS)进入血液循环系统，过度激活免疫系统并释放出大量的细胞因子，而引发一连串的全身性炎症，如低血压、凝血和抗纤溶反应，最终导致多种器官衰竭和死亡。LPS诱导的NF-κB的激活是其主要的病理学机制，其中炎症因子TNF-α的产生在病理生理中起关键性作用，TNF-α的抗体Afelimomb在临床试验中体现了一定疗效。

在炎性疾病的病理组织中均发现NF-κB的组成型激活，因此靶向NF-κB信号通路抑制剂的开发已经成为抗炎药物开发的重要策略。目前，国外至少已有三种靶向NF-κB信号通路的IKK抑制剂处于II期临床研究中，如SPC-839、PS1145、BMS-345541等。

发明内容

发明目的

本发明的一个目的是提供一种小分子化合物——N-(2-甲基呋喃[2，3-d]嘧啶-4-基)丙烯酰胺。

本发明的另一个目的是提供N-(2-甲基呋喃[2，3-d]嘧啶-4-基)丙烯酰胺的制备方法。

本发明的又一个目的是提供N-(2-甲基呋喃[2，3-d]嘧啶-4-基)丙烯酰胺作为小分子核转录因子NF-κB信号通路抑制剂抑制炎症因子的表达从而达到抗炎作用的用途。

本发明的再一个目的是提供一种抗炎症的药物组合物。

技术方案

为了实现上述目的，本发明的一个方面提供了如下式所示的小分子化合物——N-(2-甲基呋喃[2，3-d]嘧啶-4-基)丙烯酰胺：

该化合物的分子式为：C₁₀H₉N₃O₂，分子量为：203.197。

本发明的另一个方面提供了制备N-(2-甲基呋喃[2，3-d]嘧啶-4-基)丙烯酰胺的方法，该方法的反应路线如下：

氰基乙酸乙酯在甲醇钠NaOMe的存在下，于甲醇MeOH中与乙脒回流反应生成化合物1；

化合物1在氢氧化钠NaOH的存在下与碘I₂反应生成化合物2；

化合物2在催化剂四三苯基膦钯Pd(PPh₃)₄、碘化亚铜CuI、二异丙基乙基胺DIPEA、乙腈MeCN的存在下，与三甲基硅乙炔回流反应，生成化合物3；

化合物3在溶剂N，N二甲基甲酰胺DMF的存在下，与碳酸银AgCO₃反应，生成化合物4；

化合物4在氢化钠NaH、四氢呋喃THF的存在下与二碳酸二叔丁酯Boc₂O反应生成化合物5；

化合物5在氢氧化钠NaOH水溶液与乙醇EtOH的存在下室温搅拌生成化合物6；

化合物6在二氯甲烷CH₂Cl₂和三乙胺Et₃N的存在下与烯丙酰氯反应生成化合物7；

化合物7在二氯甲烷CH₂Cl₂和三氟醋酸CF₃COOH的存在下生成最终产物8，即生成N-(2-甲基呋喃[2，3-d]嘧啶-4-基)丙烯酰胺。

本发明的又一个方面提供了N-(2-甲基呋喃[2，3-d]嘧啶-4-基)丙烯酰胺在制备小分子核转录因子NF-κB信号通路抑制剂中的用途。

本发明的再一个方面提供了N-(2-甲基呋喃[2，3-d]嘧啶-4-基)丙烯酰胺作为小分子核转录因子NF-κB信号通路抑制剂在制备抗炎症的药物中的用途。

此外，本发明还提供了一种抗炎症的药物组合物，其含有治疗有效量的N-(2-甲基呋喃[2，3-d]嘧啶-4-基)丙烯酰胺以及药学上可接受的辅料。

下文，将本发明提供的N-(2-甲基呋喃[2，3-d]嘧啶-4-基)丙烯酰胺简称为HK-156。

有益效果

本发明提供的小分子化合物HK-156，其通过作用于TAK1上游的靶点，抑制LPS诱导的TAK1的磷酸化，进而引起IKKβ磷酸化的降低，从而导致IκBα的磷酸化和降解，并导致随后的NF-κB转位入核及其与κB增强子序列的结合受到抑制。最终的试验结果表明，本发明的HK-156作为小分子核转录因子NF-κB信号通路抑制剂抑制LPS诱导的炎症因子TNF-α和IL-1β等的转录和表达，进而在体内能抑制LPS诱导的血清中TNF-α的产生，并能在败血症模型上降低高剂量LPS诱导小鼠的死亡率及延长其存活时间，并有望开发为一种新的抗炎药物。

可以将上述技术方案中的小分子核转录因子NF-κB信号通路抑制剂或者抗炎药物制备成注射剂、口服片剂等多种剂型而用于治疗多种急性和慢性炎性疾病，包括类风湿性关节炎、炎性肠病、慢性阻塞性肺病、哮喘、多发性硬化症、败血症等。

附图说明

图1为本发明的HK-156的核磁谱图数据(氢谱)和质谱数据；

图2为本发明的HK-156对LPS诱导的NF-κB转录活性的抑制率曲线；

图3为本发明的HK-156对LO2、HEK293以及HEK293/NF-κB-luc细胞生长的抑制率曲线；

图4A和图4B分别为本发明的HK-156抑制LPS诱导单核细胞THP-1炎症因子的释放量的框图；

图5为本发明的HK-156对THP-1细胞的生长抑制率曲线图；

图6A和图6B分别为本发明的HK-156抑制LPS诱导的炎症因子mRNA的表达量的框图；

图7为本发明的HK-156抑制LPS诱导NF-κB复合物的入核和转录的免疫印迹图；

图8为本发明的HK-156靶向作用于TAK1上游的配体信号分子的免疫印迹图；

图9为本发明的HK-156抑制体内LPS诱导的细胞因子释放量的框图；以及

图10为本发明的HK-156降低高剂量的LPS诱导小鼠的死亡率及延长存活时间的Keplan-Meier生存时间图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步阐述，但这些实施例绝不是对本发明的任何限制。

制备实施例：HK-156的制备

1)中间体化合物1的制备

将10g金属钠分批加入到40mL无水甲醇中去，搅拌使其完全溶解。将9.5g盐酸乙脒和10.7mL的氰基乙酸乙酯溶于20mL甲醇中，再滴加到刚刚制备好的甲醇钠的甲醇溶液中去，在70℃下回流2h。然后，减压蒸干溶剂，加入60mL温水，待其冷却，过滤掉不溶物，再加一倍量的水，调pH值到5，静置过夜。第二天过滤得到白色固体产物，水洗后干燥，从而得到10.1g化合物1，收率：80％。

2)中间体化合物2的制备

将8g中间体化合物1溶于含有6g氢氧化钠的60mL水中，加入16.3g碘。在110℃下回流，2h后停止加热。冷却，调pH值到6，有大量白色固体析出，过滤，水洗，干燥，从而得到13.6g化合物2，收率：85％。

3)中间体化合物3的制备

向双颈瓶中加入5g化合物2，380mg碘化亚铜，1.12g四三苯基膦钯，充换氮气，之后加入20mL二异丙基乙基胺DIPEA、300mL乙腈MeCN、10mL三甲基硅乙炔，室温下搅拌1h，在80℃下回流过夜。第二日点板检测，原料反应完。然后，蒸干溶剂，过硅胶柱提纯(二氯甲烷∶甲醇＝40∶1)，从而得到棕色固体的化合物33.4g，收率：75％。

4)中间体化合物4、5、6的制备

将1g化合物3加入到N，N-二甲基甲酰胺DMF中，加入0.1当量的碳酸银，140℃下搅拌3h，点板检测反应完毕，蒸干溶剂得到化合物4；

将化合物4加入到四氢呋喃THF的溶液中去，加入2.5当量的NaH和二碳酸二叔丁酯(Boc₂O)，在80℃下回流，5h后停止加热，点板检测，反应完毕，蒸干溶剂得到化合物5；

将化合物5加入到等当量的1N的氢氧化钠水溶液和乙醇溶液中(体积比1∶1)，室温下搅拌5h，点板检测反应完毕。用乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，蒸干得到1.11g化合物6，三步总收率99％。

5)中间体化合物7和最终产物8的制备

向干燥的二氯甲烷中加入1.11g化合物6，加入1.1当量的三乙胺和1.2当量的烯丙酰氯，室温下搅拌过夜，第二日点半检测，反应完毕。加食盐水破坏，用乙酸乙酯提取，无水硫酸钠干燥。蒸干后得到化合物7；

将化合物7溶于二氯甲烷溶液中，加入0.5当量的三氟醋酸，室温下搅拌2h，点板检测，已经完全转化成最终产物8，用乙酸乙酯萃取，用碳酸氢钠溶液洗掉剩余的三氟醋酸。干燥，过硅胶柱提纯(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3)，得到白色固体的最终产物8(HK-156)906mg，收率99％。

上述制备的HK-156的核磁谱图数据(氢谱)和质谱数据如图1所示，其核磁共振数据如下：

¹H NMR(300MHz，氯仿-d).ppm 2.67(s，3H)，5.90(d，J＝10.18Hz，1H)，6.34(dd，J＝10.18Hz，J＝16.88Hz，1H)，6.54(d，J＝16.88Hz，1H)，7.34(d，J＝2.48Hz，1H)，7.55(d，J＝2.48Hz，1H)，8.70(s.，1H).m/z：203.1.

试验实施例

1)NF-κB信号通路抑制剂筛选平台用稳定细胞株的建立

a)将HEK293(中科院上海生命科学院细胞库)以3×10⁵细胞/mL接种于12孔板，1mL/孔。过夜培养后，密度达到70％-90％之间，按照lipofectamine 2000(美国Invitrogen公司)的说明书进行转染。即将NF-κB荧光素酶报告质粒pNFκB-TA-Luc(美国Clontech公司)与含有新霉素抗性的空白质粒pcDNA3.1以质量比10∶1的比例混合，取混合液1.6μg(不超过20μL)与100μL Opti-MEM(美国Gibco公司)混合，lipofectamine 20004μL与100μLOpti-MEM混合，室温放置5min后，再将二者混合孵育20min，然后加入细胞孔中。

b)过夜培养后，以1∶60的比例将细胞传代，换到100mm细胞培养皿中，24h后加入G418(美国默克公司)800μg/mL，继续培养。每周换液一次，补加新的G418。大约5-6周后，有单克隆形成，用枪头挑出，换到96孔板中继续培养，维持G418浓度不变。待长满后换到48孔板，而后转到24孔板中。等到24孔板长满以后，胰酶消化细胞接种到96孔板中，进行检测。

c)检测时同一克隆一般种4个孔，2个为阳性，加LPS(美国Sigma公司)1μg/mL刺激，另2个为阴性，不加刺激。

d)刺激过夜后，吸去上清，每孔加细胞裂解液CCLR 100μL，放-20℃冻融一次，将裂解液转移至荧光素酶专用检测板上，加荧光素酶检测试剂(美国Promeg公司)20μL，检测各孔的荧光强度。

e)如果同一克隆的阳性孔与阴性孔的荧光值差距达到4倍以上，暂认定为阳性克隆，继续扩增培养，传代超过10代以上(大约2个月)重新进行检测，如果仍为阳性，可认为克隆稳定，并冻存。

f)经以上步骤，最后筛选到几株不同NF-κB报告基因活性的克隆，选择其中一株(阳性与阴性荧光比值在50附近)作为后续实验的稳定株。

2)HK-156抑制LPS及TNF-α诱导的NF-κB转录活性

HEK293/NF-κB-luc细胞经不同浓度的HK-156(0.78，1.56，3.125，6.25，12.5，25，50，100μM)同LPS(1μg/mL)或者TNF-α(10ng/mL)(美国R&D公司)共孵育6h后，将细胞裂解，测荧光素酶活性，计算抑制率并作量效关系曲线。结果如图2所示，HK-156能够剂量依赖地抑制LPS诱导的NF-κB的转录活性(IC₅₀为3.61μM)，同时还能剂量依赖地抑制炎症因子TNF-α激活的NF-κB转录活性(IC₅₀为10.09μM)。

3)HK-156对LO2、HEK293以及HEK293/NF-κB-luc细胞的毒性

不同浓度的HK-156(0.78，1.56，3.125，6.25，12.5，25，50，100μM)孵育LO2、HEK293以及HEK293/NF-κB-luc细胞(中科院上海生命科学院细胞库)48h后，进行MTT(美国Sigma公司)检测HK-156对这些细胞的毒性，用抑制率来表示(％)。结果如图3所示，HK-156对HEK293/NF-κB-luc细胞的IC₅₀为41.3μM，而对其他两株细胞的IC₅均在60μM左右。因此，从这些结果可以看出，HK-156抑制LPS诱导的NF-κB转录活性的治疗指数(41.3/3.61＝11.4)＞10。

4)HK-156抑制LPS诱导单核细胞THP-1炎症因子的释放

不同浓度的HK-156(0，5，10，20，40μM)同LPS(1μg/mL)共同孵育THP-1(5×105/mL)过夜后，ELISA检测培养基中的细胞因子浓度。结果如图4A和图4B所示，HK-156剂量依赖地显著抑制LPS刺激的炎症因子TNF-α和IL-1β的释放，在20μM浓度时能够完全抑制。其中对IL-1β的抑制能力更强，在5μM时就有显著性差异。图中，**表示p＜0.01，与只加LPS组相比。

5)HK-156对THP-1细胞的毒性

不同浓度的HK-156(0，5，10，20，40μM)孵育THP-1细胞(5×10⁵细胞/mL)48h后，进行CCK-8检测HK-156的细胞毒性。结果如图5所示，最大浓度达20μM时，对THP-1细胞生长没有影响(生长抑制率＜10％)，而在40μM时则有一定的生长抑制作用(70％)。

6)HK-156抑制LPS诱导的炎症因子mRNA的表达

不同浓度的HK-156(0，5，10，20μM)同LPS(1μg/mL)共同孵育THP-1(5×10⁵细胞/mL)2h后，反转录PCR扩增实时定量PCR检测细胞因子的mRNA水平。结果如图6A和图6B所示，THP-1经LPS刺激2h后，相对于未加任何刺激的细胞TNF-α和IL-1β的表达量分别上升了70和2000多倍，而HK-156则能不同程度地剂量依赖性抑制这些因子mRNA的产生，在20μM时几乎能够抑制达到本底水平，其中对IL-1β的抑制效果最为明显。图中，**表示p＜0.01，与只加LPS组相比。

7)HK-156抑制LPS诱导NF-κB复合物的入核和转录

a)THP-1(5×10⁵细胞/mL)用PMA(10ng/mL)诱导贴壁后，加入不同浓度的HK-156(0，5，10，20，40μM)或者阳性化合物TPCA-1(TPCA)同LPS(1μg/mL)共同孵育30min。

b)提取核蛋白：将细胞以1000rpm离心10min，弃上清，用冷的含磷酸酶抑制剂的PBS洗细胞两次，弃去上清，将细胞置于冰上。后将细胞重悬于的低渗缓冲液HB中，用枪头吹打均匀，并转移到预冷的1.5mL的离心管中，在冰上孵育15min。加入25μL表面活性剂并在涡旋振荡器上用最高速振荡10s。4℃14000g离心1min。弃去上清部分(胞质蛋白)，将沉淀用20μL完全裂解液(试剂盒自带)重悬，用涡旋振荡器最高速振荡10s。将混悬物置于冰上孵育30min，并在摇床上缓慢摇动(150rpm)。中间每隔10min再剧烈振荡30s。当孵育时间达到30min后，用最高速振荡30s，14000g离心10min。收集上清即为所提核蛋白，Bradford法测定蛋白浓度，而后保存在-80℃。

c)免疫印迹检测核蛋白中p65含量。

结果如图7所示，在0，5，10，20，40μM四个浓度条件下HK-156能够剂量依赖地不同程度抑制p65的入核，其中以40μM浓度最为明显。

8)HK-156靶向作用于TAK1上游的配体信号分子

不同浓度的HK-156(0，5，10，20，40μM)和LPS(1μg/mL)共孵育THP-1细胞15min后，收集并裂解细胞，免疫印迹检测p-IκBα、IκBα、p-IKKβ/IKKα和p-TAK1。结果如图8所示，HK-156能够剂量依赖地抑制LPS刺激的IκBα的磷酸化及降解。而对IκBα上游激酶IKK复合物的检测则表明，LPS能够诱导复合物中IKKβ的S177和S181位点的磷酸化。而HK-156能够剂量依赖地同时抑制LPS诱导的IKKβ两个磷酸化位点(S177和S181)的磷酸化。而进一步对上游信号分子TAK1激酶的研究则表明，HK-156能够剂量依赖地抑制LPS激活的TAK1的磷酸化，而TPCA-1作为专一性的IKKβ抑制剂则不能抑制LPS激活的TAK1的磷酸化。因此，HK-156是通过作用于TAK1上游的靶分子从而抑制LPS诱导TAK1的磷酸化激活，并进而抑制IKKβ的磷酸化激活以及IκBα的磷酸化和降解，从而达到抑制p65入核的结果。

9)HK-156抑制低剂量LPS诱导小鼠体内细胞因子释放的作用

BALB/C小鼠腹腔注射50mg/kg HK-156或者溶媒对照，分别在1h、2h和4h后，再腹腔注射2mg/kg LPS或生理盐水2h后，通过眼球摘除法收集全血，4℃放置1h后，6000rpm离心15min，收集上层血清用于细胞因子含量的测定，弃下层血凝块。适当比例稀释血清(一般1∶2)，ELISA检测血清中TNF-α的含量。结果如图9所示，给HK-1561h后给LPS，与给溶媒后给LPS组相比，TNF-α浓度虽有减少但并没有统计学意义，而给HK-1562h后再给LPS则显著抑制了TNF-α的产生，而4h后再给LPS则抑制效果进一步增大，有50％左右的抑制效果，意味着4h后HK-156的吸收浓度可能已达最高峰，此时的作用效果可能最好。

10)HK-156降低高剂量的LPS诱导小鼠的死亡率及延长其存活时间

BALB/C小鼠腹腔注射(i.p.)HK-156(50mg/kg)或者溶媒4h后，i.p.LPS(15mg/kg)，然后每隔一小时观察一次死亡情况。Graph-Pad Prism 4.5软件作Keplan-Meier生存曲线，并用Mantel-Haenszel log rank test进行统计学分析。结果如图10所示，HK-156能够降低高剂量的LPS所致的死亡率，延长其存活时间，模型组在70h后全部死亡，而给HK-156组则有25％的小鼠直到200h的监测点还很好的存活，两者具有统计学意义，*P＜0.05。

由上述试验结果可见，本发明的HK-156作为小分子核转录因子NF-κB信号通路抑制剂，对LPS刺激的NF-κB激活的半数有效抑制率(IC₅₀)为3.61μM，而治疗指数约为10。另外，本发明的HK-156能够抑制LPS诱导的炎症因子TNF-α和IL-1β等的转录和表达，并且在50mg/kg剂量下HK-156能抑制LPS诱导的小鼠血清中TNF-α的产生，并能在败血症模型上保护高剂量LPS诱导小鼠的死亡。本发明提供的小分子化合物HK-156，其通过作用于TAK1上游的靶点，抑制LPS诱导的TAK1的磷酸化，进而引起IKKβ磷酸化的降低，从而导致IκBα的磷酸化和降解，并导致随后的NF-κB转位入核及其与κB增强子序列的结合受到抑制。

Claims (6)

1.如下式所示的N-(2-甲基呋喃[2，3-d]嘧啶-4-基)丙烯酰胺：

2.一种制备权利要求1所述的N-(2-甲基呋喃[2，3-d]嘧啶-4-基)丙烯酰胺的方法，该方法的反应路线如下：

氰基乙酸乙酯在甲醇钠NaOMe的存在下，于甲醇MeOH中与乙脒回流反应生成化合物1；

化合物1在氢氧化钠NaOH的存在下与碘I₂反应生成化合物2；

化合物2在催化剂四三苯基膦钯Pd(PPh₃)₄、碘化亚铜CuI、二异丙基乙基胺DIPEA、乙腈MeCN的存在下，与三甲基硅乙炔回流反应，生成化合物3；

化合物3在溶剂N，N二甲基甲酰胺DMF的存在下，与碳酸银AgCO₃反应，生成化合物4；

化合物4在氢化钠NaH、四氢呋喃THF的存在下与二碳酸二叔丁酯Boc₂O反应生成化合物5；

化合物5在氢氧化钠NaOH水溶液与乙醇EtOH的存在下室温搅拌生成化合物6；

化合物6在二氯甲烷CH₂Cl₂和三乙胺Et₃N的存在下与烯丙酰氯反应生成化合物7；

化合物7在二氯甲烷CH₂Cl₂和三氟醋酸CF₃COOH的存在下生成最终产物8，即生成权利要求1所述的N-(2-甲基呋喃[2，3-d]嘧啶-4-基)丙烯酰胺。

3.权利要求1所述的N-(2-甲基呋喃[2，3-d]嘧啶-4-基)丙烯酰胺在制备小分子核转录因子NF-κB信号通路抑制剂中的用途。

4.权利要求1所述的N-(2-甲基呋喃[2，3-d]嘧啶-4-基)丙烯酰胺作为小分子核转录因子NF-κB信号通路抑制剂在制备抗炎症的药物中的用途。

5.根据权利要求4所述的用途，其中，所述炎症包括类风湿性关节炎、炎性肠病、慢性阻塞性肺病、哮喘、多发性硬化症和败血症。

6.一种抗炎症的药物组合物，其含有治疗有效量的权利要求1的N-(2-甲基呋喃[2，3-d]嘧啶-4-基)丙烯酰胺以及药学上可接受的辅料。

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