CN102257955B - 一种通过无性繁殖建立齿肋赤藓单株克隆体系的方法 - Google Patents

一种通过无性繁殖建立齿肋赤藓单株克隆体系的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN102257955B
CN102257955B CN 201110116117 CN201110116117A CN102257955B CN 102257955 B CN102257955 B CN 102257955B CN 201110116117 CN201110116117 CN 201110116117 CN 201110116117 A CN201110116117 A CN 201110116117A CN 102257955 B CN102257955 B CN 102257955B
Authority
CN
China
Prior art keywords
stem
individual plant
culture
mitt
appear
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN 201110116117
Other languages
English (en)
Other versions
CN102257955A (zh
Inventor
张丙昌
王敬竹
张元明
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Xinjiang Institute of Ecology and Geography of CAS
Original Assignee
Xinjiang Institute of Ecology and Geography of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Xinjiang Institute of Ecology and Geography of CAS filed Critical Xinjiang Institute of Ecology and Geography of CAS
Priority to CN 201110116117 priority Critical patent/CN102257955B/zh
Publication of CN102257955A publication Critical patent/CN102257955A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102257955B publication Critical patent/CN102257955B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Landscapes

  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明公开了通过无性繁殖建立齿肋赤藓单株克隆体系的方法。通过选取齿肋赤藓纯群，选取生长健壮的植株，经冲洗、消毒后，用已灭菌的尖头镊子取已处理好的单株齿肋赤藓再生能力强的茎尖、茎以及茎叶碎片接种在已灭菌的BBM固体培养基中，然后用封口膜将培养皿封口置于光照培养箱中，培养温度25℃，光照强度36μmol·m-2·s-1，光照/黑暗时间为14h/10h，培养2-3周后，苔藓茎尖、芽孢及叶片基部均会诱导出现新的分枝；茎叶碎片会出现原丝体，原丝体发育到一定阶段，出现新的分枝；2周后，将新的分枝取下，分别取其茎尖和茎再次转接到新的固体培养基中，反复转接，逐级扩大培养，形成单株克隆系。

Description

一种通过无性繁殖建立齿肋赤藓单株克隆体系的方法
发明领域
本发明涉及荒漠苔藓单株克隆的生物技术领域，具体的说，本发明涉及一种齿肋赤藓的单株克隆生物技术领域。
背景技术
近年来，我国荒漠化越来越严重，是世界上沙漠化最严重的国家之一，沙漠化土地总面积已达373万平方公里，年扩展率为2460平方公里，每年因沙漠化造成的直接经济损失高达540亿元。针对这严重的现状，寻求有效的途径防止土地资源沙化已是当务之急。
传统的防风固沙措施如植树造林、草方格沙障和粘土沙障表面上看是有效的，但不能从根本上解决沙化和沙漠化土地的治理问题。主要是高等植物生长缓慢，生长周期长，另外，每棵高等植物都相当于一个大型的抽水泵，将地下水通过蒸腾释放到大气中，从而使本已贫乏的地下水更加贫乏。特别是大于100cm较深层的土壤的含水量下降明显，深根系固沙植物对根际区域水分的利用，进一步恶化了固沙区土壤深层的水分状况，进而抑制了这些植物的生长和生存。
生物结皮作为干旱荒漠地区特殊环境的产物，是由苔藓植物、细菌、真菌、蓝绿藻、地衣与土壤形成的有机复合体。而土壤微生物结皮是苔类、叶苔、蓝绿藻、地衣类、真菌和细菌等生物组分与其下很薄的土壤共同形成的一个复合的生物土壤层。生物结皮在其发育过程中，积极参与土壤的形成，具有改变土壤理化性质、增加土壤有机质含量的功能，对土壤抗侵蚀性能的提高有着显著功效。土壤生物结皮抗逆性强，具有光合、生物固氮两大生理功能，光能利用率远高于高等植物，能够有效的利用光能资源，可以在干旱、严寒、盐碱、土壤贫瘠的恶劣的环境下发育生长，形成5-50mm厚的地表覆盖物，从而增强地表的稳定性，有效地减小荒漠地表的侵蚀，在防风、固沙、防止土壤侵蚀、改变水分分布状况等方面起着重要作用。
苔藓植物是一类由水生生活转为陆地生活过渡型的植物类群，在不同的生态系统中均有苔藓植物的足迹。在荒漠生态系统中，苔藓也占据着重要的生态位。齿肋赤藓是古尔班通古特沙漠藓类结皮层中的优势物种，此物种参与生物结皮的形成，在生物防沙、固沙和生态小环境的改善中发挥着不可替代的作用。
苔藓植物个体小，种类不宜鉴定，如在古尔班通古特沙漠中齿肋赤藓与墙藓属中的泛生墙藓、泛生墙藓无芒变种形态非常接近，在野外采样时容易混淆，不同研究者野外取样不尽相同，甚至不是同一个种，在生理、分子调控机理获取的研究结果缺乏可比性。亟需实现齿肋赤藓单株克隆技术能够解决了这一难题，从而保证实验中获取材料的统一性。
发明内容
针对国内外未见报道有关齿肋赤藓的单株克隆的技术现状，由于齿肋赤藓与墙藓属中的泛生墙藓、泛生墙藓无芒变种形态非常接近，在野外采样时容易混淆，不同研究者野外取样不尽相同，甚至不是同一个种；另外，同一物种也存在不同的基因型，在生理、分子调控机理获取的研究结果缺乏可比性。本发明的目的在于提供一种齿肋赤藓的单株克隆体系的方法，保证了实验中获取材料的统一性。
本发明具体提供一种通过无性繁殖建立齿肋赤藓单株克隆体系的方法，具体培养步骤包括：
(1)在野外藓类结皮中，选取生长良好的齿肋赤藓纯群，在实验室内经形态鉴定确认是齿肋赤藓后，再选取一株生长健壮的植株，通过无菌蒸馏水冲洗干净、70％酒精消毒处理20s；
(2)配制经改良的BBM液体培养基，将pH调至8.0，添加琼脂粉，添加量为15g·L-1，混匀后121℃灭菌30min，然后将培养基倒入培养皿中；
(3)在接种过程中，通过超净工作台，用已灭菌的尖头镊子取已处理好的单株齿肋赤藓再生能力强的茎尖和茎，接种在已灭菌的BBM固体培养基中，另外将茎叶碎片接在其它固体平板中，用parafilm封口膜将培养皿封口；
(4)将上述获得的培养皿置于光照培养箱中，培养温度25℃，光照强度36μmol·m-2·s-1，光照/黑暗时间为14h/10h，培养2-3周后，苔藓茎尖和茎上的芽孢再生能力强，经光照诱导后开始长出新的分枝；在叶片基部形成愈伤组织后也会出现新的分枝；茎叶碎片会出现原丝体，原丝体发育到一定阶段，出现新的分枝；2周后，将新的分枝取下，分别取其茎尖和茎再次转接到新的固体培养基中，反复转接，逐级扩大培养，形成单株克隆系。
本发明中，在制备BBM固体培养基琼脂粉添加量为15g·L-1，121℃灭菌30min，然后将培养基倒入直径为90mm的培养皿中。
本发明中，每升BBM培养基组分如下：NaNO3 0.25g，，K2HPO4 0.075g，MgSO4 0.075g，CaCl2·2H2O 0.025g，KH2PO4 0.175g，NaCl 0.025g，微量元素溶液1ml/L。微量元素溶液组分：每升重蒸水中加VB1 1g，VB6 0.5g，Na2EDTA0.05g，MnCl2·4H2O 0.0014g，FeSO4·7H2O 8.8g，MoO3 0.71g，CaSO4·5H2O1.57g，Co(NO3)2·6H2O 0.49g。
通过实施本发明具体的技术内容，可以达到以下有益效果。
由于齿肋赤藓与墙藓属中的泛生墙藓、泛生墙藓无芒变种形态非常接近，在野外采样时容易混淆，不同研究者野外取样不尽相同，甚至不是同一个种，另外，同一物种也存在不同基因型的差别，在生理、分子调控机理获取的研究结果缺乏可比性，本发明提供了一种齿肋赤藓的单株克隆体系的方法，通过该方法建立齿肋赤藓单株克隆材料，从而能够保证了实验中获取材料的统一性。
附图说明：
图1是齿肋赤藓不同组织碎片形成的原丝体图，其中，1为芽孢萌发生成的幼枝，2为茎尖形成的幼枝，3-4为茎尖叶的边缘基部积累营养物质萌发产生新的幼枝，5为茎叶碎片形成的原丝体，6为在原丝体基础上产生的幼枝。
具体实施方式
下面，举实施例说明本发明，但是，本发明并不限于下述的实施例。
实施例一：齿肋赤藓的单株克隆体系的建立
具体培养步骤包括：
在野外藓类结皮中，选取生长良好的齿肋赤藓纯群，在实验室内经形态鉴定确认是齿肋赤藓后，再选取一株生长健壮的植株。通过冲洗、消毒处理，利用制备的BBM固体培养基，高温灭菌后将培养基置于培养皿中进行接种，在接种过程中，通过超净工作台，用已灭菌的尖头镊子取已处理好的单株齿肋赤藓再生能力强的茎尖和茎，接种在已灭菌的BBM固体培养基中，另外将茎叶碎片接在其它固体平板中，用parafilm封口膜将培养皿封口，将培养皿置于光照培养箱中，培养温度25℃，光照强度光照强度36μmol·m-2·s-1，光照/黑暗时间为14h/10h，培养2-3周后，参见附图1，苔藓茎尖和茎上的芽孢开始长出新的分枝，在叶片的边缘和基部也会产生新的分枝，另外茎叶碎片还会出现原丝体，原丝体发育到一定阶段，出现新的分枝。2周后，将新的分枝取下，分别取其茎尖和茎再次转接到新的固体培养基中，反复转接，逐级扩大培养，形成单株克隆系。
在制备BBM固体培养基琼脂粉添加量为15g·L-1，121℃灭菌30min，然后将培养基倒入直径为90mm的培养皿中。
本发明中，每升BBM培养基组分如下：NaNO3 0.25g，，K2HPO4 0.075g，MgSO4 0.075g，CaCl2·2H2O 0.025g，KH2PO4 0.175g，NaCl 0.025g，微量元素溶液1ml/L。微量元素溶液组分：每升重蒸水中加VB1 1g，VB6 0.5g，Na2EDTA0.05g，MnCl2·4H2O 0.0014g，FeSO4·7H2O 8.8g，MoO3 0.71g，CaSO4·5H2O1.57g，Co(NO3)2·6H2O 0.49g。
采用本发明提供的齿肋赤藓的单株克隆体系的建立，建立齿肋赤藓单株克隆材料，保证了实验中获取材料的统一性。

Claims (1)

1.一种通过无性繁殖建立齿肋赤藓单株克隆体系的方法，其特征在于，所述的具体培养步骤包括：
(1)在野外藓类结皮中，选取生长良好的齿肋赤藓纯群，在实验室内经形态鉴定确认是齿肋赤藓后，再选取一株生长健壮的植株，通过无菌蒸馏水冲洗干净、70％酒精消毒处理20s；
(2)配制经改良的BBM液体培养基，将pH调至8.0，添加琼脂粉，添加量为15g·L-1，混匀后121℃灭菌30min，然后将培养基倒入培养皿中；
(3)在接种过程中通过超净工作台，用已灭菌的尖头镊子取已处理好的单株齿肋赤藓再生能力强的茎尖和茎，接种在已灭菌的步骤(2)提供的BBM固体培养基中，另外将茎叶碎片接在其它固体平板中，用parafilm封口膜将培养皿封口；(4)将上述获得的培养皿置于光照培养箱中，培养温度25℃，光照强度36μmol·m-2·s-1，光照/黑暗时间为14h/10h，培养2-3周后，苔藓茎尖和茎上的芽孢再生能力强，经光照诱导后开始长出新的分枝；在叶片基部形成愈伤组织后也会出现新的分枝；茎叶碎片会出现原丝体，原丝体发育到一定阶段，出现新的分枝；2周后，将新的分枝取下，分别取其茎尖和茎再次转接到新的固体培养基中，反复转接，逐级扩大培养，形成单株克隆系；
(5)配制经改良的BBM液体培养基，每升该培养基组分如下：NaNO30.25g，，K2HPO4 0.075g，MgSO4 0.075g，CaCl2·2H2O 0.025g，KH2PO4 0.175g，NaCl0.025g，微量元素溶液1ml/L，微量元素溶液组分：每升重蒸水中加VB1 1g，VB60.5g，Na2EDTA 0.05g，MnCl2·4H2O 0.0014g，FeSO4·7H2O 8.8g，MoO3 0.71g，CaSO4·5H2O1.57g，Co(N O3)2·6H2O 0.49g。
CN 201110116117 2011-05-06 2011-05-06 一种通过无性繁殖建立齿肋赤藓单株克隆体系的方法 Expired - Fee Related CN102257955B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 201110116117 CN102257955B (zh) 2011-05-06 2011-05-06 一种通过无性繁殖建立齿肋赤藓单株克隆体系的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 201110116117 CN102257955B (zh) 2011-05-06 2011-05-06 一种通过无性繁殖建立齿肋赤藓单株克隆体系的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102257955A CN102257955A (zh) 2011-11-30
CN102257955B true CN102257955B (zh) 2012-12-26

Family

ID=45004959

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN 201110116117 Expired - Fee Related CN102257955B (zh) 2011-05-06 2011-05-06 一种通过无性繁殖建立齿肋赤藓单株克隆体系的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102257955B (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102511393B (zh) * 2011-12-12 2013-08-14 齐齐哈尔大学 东亚砂藓配子体再生体系的建立方法
CN102626050B (zh) * 2012-04-25 2014-03-12 中国科学院新疆生态与地理研究所 极端耐旱齿肋赤藓单株克隆系的保存、活化及快速扩繁方法
CN105981636B (zh) * 2015-02-11 2019-03-29 上海市园林科学规划研究院 一种泥炭藓原丝体快速繁殖的方法
GB2601311B (en) * 2020-11-24 2022-11-23 Micropropagation Services E M Ltd Methods of in vitro culturing sphagnum

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1560227A (zh) * 2004-02-25 2005-01-05 福建师范大学 雨生红球藻原生质体制备与再生技术
CN1654596A (zh) * 2005-01-13 2005-08-17 中国科学院水生生物研究所 土壤藻类对荒漠半荒漠土壤的改良方法
CN101144058A (zh) * 2007-08-22 2008-03-19 厦门大学 一种虾青素的微藻培养基

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1560227A (zh) * 2004-02-25 2005-01-05 福建师范大学 雨生红球藻原生质体制备与再生技术
CN1654596A (zh) * 2005-01-13 2005-08-17 中国科学院水生生物研究所 土壤藻类对荒漠半荒漠土壤的改良方法
CN101144058A (zh) * 2007-08-22 2008-03-19 厦门大学 一种虾青素的微藻培养基

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
杨红兰等.齿肋赤藓乙醛脱氢酶基因ALDH21的克隆与表达分析.《基因组学与应用生物学》.2010,第29卷(第1期),第24～30页. *
金传萌等.红球藻水生748株(Haematococcus sp.HB748)培养基的选择与对维生素B12的需求.《应用与环境生物学报》.1997,第3卷(第2期),第177～179页. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN102257955A (zh) 2011-11-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103875503B (zh) 一种提高极端干旱荒漠区胡杨幼株移栽成活率的方法
CN103718908B (zh) 一种滨梅根蘖育苗方法
CN103858770A (zh) 一种花叶玉簪快速繁殖的方法
CN102257955B (zh) 一种通过无性繁殖建立齿肋赤藓单株克隆体系的方法
CN103238525A (zh) 一种利用组织培养技术繁殖平贝母的方法
CN102612953A (zh) 一种荒漠环境中人工藻结皮的构建模式
CN104472366A (zh) 一种提高南方生态型枣树苗木耐盐性的组织培养快繁方法
CN103168594A (zh) 一种曼地亚红豆杉栽培方法
CN102696483B (zh) 绿花百合快速繁殖方法
CN103636492A (zh) 一种高山杜鹃粉金蝶组培快速繁殖方法
CN109429971A (zh) 丛枝菌根真菌菌剂的制备方法
CN103053296A (zh) 银杏的栽培技术
CN104686337A (zh) 一种百合的组织培养快繁方法
CN104488723A (zh) 一种朝鲜淫羊藿组培快速繁殖方法
CN102257954B (zh) 一种齿肋赤藓原丝体的培养与保存方法
CN102181391B (zh) 一种提高豆科树种抗干、热能力的t49ma菌株及其根瘤化种苗的培养方法
CN106212277A (zh) 一种生产生姜菌根组织培养种苗的方法
CN102199542B (zh) 一种具鞘微鞘藻的纯化分离方法
CN105820960B (zh) 一株网状球囊霉菌lcgx-39及其应用
CN105432398A (zh) 水淹和干旱胁迫条件下提高桑树成活率的方法
CN107278406A (zh) 一种利用丛枝菌根修复盐碱裸地的方法
CN106665307A (zh) 一种桂花高效扦插育苗方法
CN109804913A (zh) 一种白羊草-内生真菌共生体的构建方法
CN102138527A (zh) 土茯苓组培苗的培养方法
Zai et al. The application of beach plum (Prunus maritima) to wasteland vegetation recovery in Jiangsu Province, China: seedling cloning and transplantation

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20121226

Termination date: 20180506

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee