CN102250837B

CN102250837B - 脐带间充质干细胞数字化自动生产方法

Info

Publication number: CN102250837B
Application number: CN 201110176693
Authority: CN
Inventors: 杨兵; 李伟
Original assignee: JIANGSU BEIKE BIO-TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: JIANGSU BEIKE BIO-TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2011-06-28
Filing date: 2011-06-28
Publication date: 2013-03-06
Anticipated expiration: 2031-06-28
Also published as: CN102250837A

Abstract

本发明涉及一种脐带间充质干细胞数字化自动生产方法，采用培养瓶作为细胞生长载体，联合机械流水线及数字化全自动生物反应器构建而成。所述培养瓶包括放置在机械流水线上且外接生物反应器的三只培养瓶；机械流水线包括机械传动装置和电子控制装置，电子控制装置根据生物反应器的处理数据控制机械传动装置使培养瓶在此流水线中完成振荡、翻转、倾斜90度等动作；生物反应器包括控制系统、探测装置、供气装置、加液装置、去液装置，根据探测装置监控细胞培养过程中的关键参数经生物反应器分析处理后协同机械流水线自动完成送气、加液、去液、收集操作从而实现细胞培养全过程，脐带组织块在此自动生产系统中可扩增脐带间充质干细胞至10⁹。

Description

脐带间充质干细胞数字化自动生产方法

技术领域

本发明属细胞培养与细胞工程领域，涉及脐带间充质干细胞数字化自动生产方法。

背景技术

传统的细胞培养，大都是人工操作，对生产的各个方面有诸多的限制，比如人员素质、洁净工作室级别、操作管理规章制度等。尽管具备了严格化的生产管理及完善的质量控制，诸多人为因素对干细胞生产的影响也是不可避免的，细胞的质量及稳定性仍然不能保证。目前，生物反应器在国内外诸如疫苗生产的细胞规模生产领域已经广泛开展起来，它可以有效地提高细胞及相关产物的生产效率并减小细胞生产的风险。然而，生物反应器尚未成熟的应用到间充质干细胞，主要原因是：1.此项技术条件较高，需要选用合适的载体以使细胞贴附并在立体失重的环境下培养；2.立体失重的细胞培养环境同传统的静止培养有诸多的不同，因此生产出的细胞质量尚不可知，这对间充质干细胞的临床应用也存在一定的风险；3.实践中为了保证间充质干细胞临床应用的疗效和安全性，并不允许长时间扩增，也无需太多的细胞，这也限制了传统的大规模生产细胞的生物反应器的应用。

发明内容

为了解决现有技术中人工培养细胞费时费力、细胞培养稳定性差、成本高、效率低等不足，本发明提供了一种脐带间充质干细胞数字化自动生产方法，应用于细胞的自动化、流水线培养，减少了人工操作影响因素，确保细胞培养的质量及稳定性，节约细胞培养成本，提高细胞培养效率。

本发明采用的技术方案是：一种脐带间充质干细胞数字化自动生产方法，包括以下步骤：

(1)将无菌采集的脐带剪成1mm³的组织块，组织块经培养液重悬后经第一培养瓶的组织块添加接口A2加入，然后关闭组织块添加接口A2，系统进入细胞培养状态，生物反应器的探测装置对培养过程的各项参数进行探测；

(2)生物反应器控制供气装置使细胞生长过程中CO₂的浓度始终保持在5%，并保持培养瓶气压恒定；当培养液中营养物质消耗过多，生物反应器和机械流水线协同操作换液如下：第一培养瓶即原代组织块培养瓶受控振荡10秒钟后翻转倒置，培养液由去液接口A3排除，第一培养瓶受控翻转正置，经加液接口A1补充新的培养液；

(3)机械流水线保持第一培养瓶中细胞培养温度37℃恒定，并定期微小振荡，保证原代细胞贴壁均一；

(4)生物反应器的探测装置通过探测各项关键参数变化趋势，分析、判断出第一培养瓶中的细胞生长状况，并计算出细胞传代的时间，细胞消化所需的各种液体的量；

(5)至细胞传代时，第一培养瓶受控翻转倒置，培养液由去液接口A3排除，第一培养瓶受控翻转正置，经加液接口A1补充生理盐水，机械流水线振荡使第一培养瓶洗涤10秒钟，第一培养瓶受控翻转倒置，生理盐水由去液接口A3排除，第一培养瓶受控翻转正置，再经加液接口A1补充细胞消化所需的酶，机械流水线振荡培养瓶37℃消化5分钟，第一培养瓶受控翻转呈90度竖直，使细胞悬液经收集接口A4转移至第二培养瓶的细胞添加接口B2，第一培养瓶受控翻转正置，再经加液接口A1补充少量培养液，机械流水线振荡培养瓶10秒钟，第一培养瓶受控翻转呈90度竖直，使残留细胞悬液经收集接口A4转移至第二培养瓶的细胞添加接口B2；

(6)第一培养瓶受控复位，经加液接口A1补充培养液，瓶中原代组织块继续培养；

(7)第二培养瓶受控侧翻90度后迅速正置以保证各细胞培养层液体分布均匀，静置培养12小时使细胞贴壁，第二培养瓶受控侧翻90度后停留5秒钟后缓慢倒置，培养液经去液接口B3排除，第二培养瓶受控翻转正置，生理盐水经加液接口B1加入，第二培养瓶受控侧翻90度后迅速正置，机械流水线振荡洗涤10秒钟，第二培养瓶受控侧翻90度后停留5秒钟后缓慢倒置，生理盐水由去液接口B3排除，第二培养瓶受控翻转正置，经加液接口B1补加新的培养液，第二培养瓶受控侧翻90度后迅速正置后静置培养；探测装置通过探测各项关键参数变化趋势，分析、判断出第二培养瓶中细胞生长状况，并计算出细胞传代的时间和细胞消化所需的各种液体的量；

(8)至细胞传代时，第二培养瓶受控侧翻90度后停留5秒钟后缓慢倒置，培养液由去液接口B3排除，培养瓶受控翻转正置，经加液接口B1补充生理盐水，第二培养瓶受控侧翻90度后迅速正置，机械流水线振荡培养瓶洗涤10秒钟，培养瓶受控侧翻90度后停留5秒钟后缓慢倒置，生理盐水由去液接口B3排除，培养瓶受控翻转正置，再经加液接口B1补充细胞消化所需的酶，第二培养瓶受控侧翻90度后迅速正置，机械流水线振荡培养瓶37℃消化5分钟，培养瓶受控翻转呈90度竖直状态，使细胞悬液经收集接口B4转移至第三培养瓶的细胞添加接口C2，第二培养瓶受控翻转正置，再经加液接口B1补充少量培养液，第二培养瓶受控侧翻90度后迅速正置，机械流水线振荡培养瓶10秒钟，第二培养瓶受控翻转呈90度竖直状态，使残留细胞悬液经收集接口B4转移至第三培养瓶的细胞添加接口C2；

(9)第二培养瓶受控复位，等待从第一培养瓶中消化的细胞再次移入培养；

(10)第三培养瓶受控侧翻90度后迅速正置以保证各细胞培养层液体分布均匀，静置培养12小时使细胞贴壁，第三培养瓶受控侧翻90度后停留5秒钟后缓慢倒置，培养液经去液接口C3排除，第三培养瓶受控翻转正置，生理盐水经加液接口C1加入，第三培养瓶受控侧翻90度后迅速正置，机械流水线振荡洗涤10秒钟，第三培养瓶受控侧翻90度后停留5秒钟后缓慢倒置，生理盐水由去液接口C3排除，第三培养瓶受控翻转正置，经加液接口C1补加新的培养液，第三培养瓶受控侧翻90度后迅速正置后静置培养；探测装置通过探测各项关键参数变化趋势，分析、判断出第三培养瓶中细胞生长状况，并计算出细胞传代的时间和细胞消化所需的各种液体的量；

(11)细胞传代时，第三培养瓶受控侧翻90度后停留5秒钟后缓慢倒置，培养液由去液接口C3排除，培养瓶受控翻转正置，经加液接口C1补充生理盐水，第三培养瓶受控侧翻90度后迅速正置，机械流水线振荡培养瓶洗涤10秒钟，培养瓶受控侧翻90度后停留5秒钟后缓慢倒置，生理盐水由去液接口C3排除，培养瓶受控翻转正置，再经加液接口C1补充细胞消化所需的酶，第三培养瓶受控侧翻90度后迅速正置，机械流水线振荡培养瓶37℃消化5分钟，培养瓶受控翻转呈90度竖直状态，使细胞悬液经收集接口C4转移至细胞收集容器中，第三培养瓶受控翻转正置，再经加液接口C1补充少量培养液，第三培养瓶受控侧翻90度后迅速正置，机械流水线振荡培养瓶10秒钟，第三培养瓶受控侧翻90度后停留5秒钟后缓慢倒置，使残留细胞悬液经收集接口C4转移至细胞收集容器中；

(12)从第一培养瓶中长出的细胞，重复上述步骤(2)-(11)操作3次后，此来源的脐带间充质干细胞培养的操作结束；

(13)细胞收集容器中收集的细胞经简单的洗涤即可得到临床用的脐带间充质干细胞。

所述培养瓶包括至少三只培养瓶，至少三只培养瓶均水平放置于机械流水线上，至少三只培养瓶的瓶盖上均设置生物反应器的供气装置、探测装置；至少三只培养瓶的第一培养瓶为培养原代细胞的单层培养瓶，第一培养瓶的瓶底设有四个接口分别为加液接口A1、组织块添加接口A2、去液接口A3和收集接口A4，加液接口A1和去液接口A3均连接生物反应器，加液接口A1的作用是从生物反应器中补加培养液、消化液等细胞培养所需的相关溶液，组织块添加接口A2的作用是添加脐带华通氏胶组织块，添加后即封闭，去液接口A3是将已培养细胞的培养液、消化液等溶液从此接口移向生物反应器，收集接口A4是用来收集原代细胞；所述第二培养瓶为传代细胞培养瓶，第二培养瓶的瓶底设有四个接口分别为加液接口B1、细胞添加接口B2、去液接口B3和收集接口B4，加液接口B1和去液接口B3均连接生物反应器，加液接口B1的作用是从生物反应器中补加培养液、消化液等细胞培养所需的相关溶液，细胞添加接口B2连接第一培养瓶收集接口A4接收原代细胞，B3是将已培养细胞的培养液、消化液等溶液从此接口移向生物反应器，B4是用来收集细胞；所述第三培养瓶是传代细胞培养瓶，第三培养瓶的瓶底部设有四个接口分别为加液接口C1、细胞添加接口C2、去液接口C3和收集接口C4，加液接口C1和去液接口C3均连接生物反应器，细胞添加接口C2连接第二培养瓶收集接口B4，加液接口C1作用是从生物反应器中补加培养液、消化液等细胞培养所需的相关溶液，细胞添加接口C2连接第二培养瓶收集接口B4接收第二培养瓶培养的细胞，去液接口C3是将已培养细胞的培养液、消化液等溶液从此接口移向生物反应器，收集接口C4在细胞培养过程中封闭，培养完成的细胞收集时外接细胞收集容器。

进一步地，所述加液接口A1、B1、C1外接生物反应器内的加液装置，且加液接口A1、B1、C1上均设有0.22μm过滤器，防止加液污染；所述去液接口A3、B3、C3外接生物反应器内的去液装置，且去液接口A3上设有孔径大小为2mm的筛网，防止去液时组织块移出；所述收集接口A4、B4、C4上均设有200目筛网，防止未消化成单细胞的细胞团移出。

进一步地，所述第一、二、三培养瓶瓶底的若干个接口均设置于培养瓶瓶底的上部或顶部位置，且若干个接口均处于同一水平面上。当培养瓶水平翻转倒置时，若干个接口均处于下方，方便液体顺利地由相应接口流出，当培养瓶受控翻转呈90度竖直状态时，收集接口均位于培养瓶最下方，液体或细胞等能从培养瓶顺畅流出，方便快速执行细胞传代换液的相关操作。

进一步地，所述第二、三培养瓶内设有多层细胞培养平面，所述每层培养平面两侧均和细胞培养瓶两侧相接，每层培养平面另外两侧与细胞培养瓶的瓶底和瓶盖分离且设有高出培养平面4mm的边界围成水池状，水平盛装4mm高度以下的液体，多层细胞培养平面相互之间为平行不接触设置。

再进一步地，所述第二培养瓶和第三培养瓶间可增设一个或多个与第二培养瓶结构相同的传代细胞培养瓶。

本发明所述的机械流水线包括电子控制装置以及分别与电子控制装置连接的至少三组机械传动装置，所述各机械传动装置分别包括工作架、驱动工作架的动作臂以及驱动动作臂的电机，电子控制装置与生物反应器的控制系统连接，生物反应器的探测装置所探测的数据分析处理后传输给机械流水线的电子控制装置，电子控制装置分别控制至少三组机械传动装置，使分别设置于机械传动装置上的培养瓶受控呈振荡、倾斜、翻转倒置或90度竖直状态，配合细胞培养完成相关动作。每个机械传动装置的工作架上还设有与电子控制装置连接的加热装置，实现细胞培养过程对培养瓶的加热需要。

本发明所述的生物反应器包括控制系统、探测装置、供气装置、加液装置、去液装置、数字显示触摸屏，所述探测装置、供气装置、加液装置、去液装置、数字显示触摸屏均与控制系统连接，所述探测装置包括二氧化碳探头、温度探头、PH探头等若干根探头，探测装置的每根探头和供气装置的供气管均设置于每只培养瓶的瓶盖上，每根探头均由各培养瓶的瓶口伸入细胞培养瓶中探测细胞培养过程中所需参数，并将探测信号发送给控制系统；供气装置为细胞生长提供所需的气体并保持各培养瓶间气压恒定，供气装置的供气量、加液装置的加液量以及去液装置的去液量均由控制系统控制；所述加液装置连接第一培养瓶瓶底上的加液接口A1、第二培养瓶瓶底上的加液接口B1以及第三培养瓶瓶底上的加液接口C1，去液装置连接第一培养瓶瓶底上的去液接口A3、第二培养瓶瓶底上的去液接口B3以及第三培养瓶瓶底上的去液接口C3，为细胞换液传代时液体的转移所用；生物反应器的控制系统将探测装置各探头的探测信号分析处理后向加液装置、去液装置、供气装置发出加液、去液、补气信息，并将数据信息传输给控制机械流水线的电子控制装置配合完成传代、换液等细胞培养过程的机械动作。所述加液装置中设有医用生理盐水、无需中和的消化酶、临床级细胞培养液。所述数字显示触摸屏方便查看细胞培养过程的监测数据。

本发明的自动生产系统进入细胞培养状态，生物反应器的探测装置对培养过程的各项参数进行探测；生物反应器的供气装置控制细胞生长过程中CO₂的浓度始终保持在5%，并保持各培养瓶间气压恒定；当培养液中营养物质消耗过多，生物反应器和机械流水线协同操作换液步骤如下：培养瓶受控振荡10秒钟后翻转倒置，培养液由去液接口移除至生物反应器的去液装置，培养瓶受控翻转正置，从生物反应器的加液装置中经加液接口向各自的培养瓶内补充新的培养液，三只培养瓶受控在机械流水线上单独动作；机械流水线保持各培养瓶的细胞培养温度37℃恒定，并定期微小振荡，保证细胞生长的均一性。生物反应器的控制系统通过探测装置探测各项关键参数变化趋势，分析、判断出培养瓶中细胞生长状况，并计算出细胞传代的时间及细胞消化所需的各种液体的量，生物反应器和机械流水线协同操作传代步骤如下：培养瓶受控振荡10秒钟后翻转倒置，培养液由去液接口移除至生物反应器的去液装置，培养瓶受控翻转正置，从生物反应器的加液装置经加液接口向各自的培养瓶内补充生理盐水；机械流水线振荡10秒钟洗涤，培养瓶受控翻转倒置，生理盐水由培养瓶的去液接口移除至生物反应器的去液装置，培养瓶受控翻转正置，从生物反应器的加液装置再经加液接口向培养瓶内补充细胞消化所需的酶；机械流水线振荡培养瓶37℃消化5分钟，培养瓶受控翻转呈90度竖直，细胞悬液经收集接口至下一培养瓶培养或者直接移出至细胞收集容器，培养瓶受控翻转正置，再从生物反应器的加液装置经加液接口向培养瓶内补充少量培养液，培养瓶受控振荡10秒钟后再翻转呈90度竖直，经培养瓶的收集接口将残留的细胞转移到下一培养瓶或者收集至细胞收集容器中，三只培养瓶受控在机械流水线上单独动作。翻转正置操作，为保证各细胞培养层液体分布均匀，均由机械流水线控制第二或第三培养瓶侧翻90度后迅速正置；翻转倒置操作，为保证第二、第三培养瓶各培养层的培养液、消化液等溶液均能够完全移除，均由机械流水线控制第二或第三培养瓶侧翻90度后停留5秒钟后缓慢倒置。

采用以上技术方案后，本发明的有益效果是：

本发明采用的机械流水线配合生物反应器自动完成细胞培养、换液、传代、收集等过程的振荡、翻转、倾斜90度等动作，实现了细胞的培养由人工到自动化的转变；在培养过程中可轻微晃动，保证细胞原代培养的均匀，细胞质量差异少；细胞培养采用多层细胞培养瓶静置培养，可以保证培养的细胞质量与人工常规培养的细胞无异；培养瓶内多层培养平面叠加节省了空间，减少了对生物反应器探测探头数目的需要，也节省了其它配套设施，系统使用成本低；采用数显的全自动生物反应器对细胞培养过程可视化数字监控，能精确计算传代及换液的时间、换液量、消化过程中各种液体的用量，实现细胞生产全过程的精确控制，避免人工操作因素影响，减少培养材料的浪费，培养出的细胞质量稳定，满足细胞的大规模培养的数字化实时监控，工作效率高；由机械流水线和生物反应器协同完成细胞自动化生产的全过程，采用全封闭方式进行操作，减少了污染的可能，降低了洁净厂房及相关仪器耗材的费用。

本发明通过细胞培养全过程的自动化、流水线培养，减少了人工操作影响因素，大大提高了细胞的培养质量，提高了细胞的稳定性，节约细胞培养成本，细胞培养效率显著提高。

附图说明

图1为本发明生产系统的结构示意图。

图1中：生物反应器1，控制系统11，加液装置12，去液装置13，供气装置14，探测装置15；机械流水线2，电子控制装置21，电机22，动作臂23，工作架24、25、26；第一培养瓶3、第二培养瓶4，第三培养瓶5。

具体实施方式

以下结合附图对本发明作进一步详细说明。

图1所示中的一种脐带间充质干细胞数字化自动生产系统，包括培养瓶、机械流水线2、生物反应器1。所述的机械流水线2包括电子控制装置21以及分别与电子控制装置连接的至少三组机械传动装置，所述各机械传动装置分别包括工作架24、驱动工作架运动的动作臂23以及驱动动作臂工作的电机22，电机连接电子控制装置，电子控制装置与生物反应器的控制系统11连接，每只工作架上放置一培养瓶，每个工作架上还设有与电子控制装置连接的加热装置，实现细胞培养过程对培养瓶的加热需要。

本发明所述的生物反应器1包括控制系统11、探测装置15、供气装置14、加液装置12、去液装置13和数字显示触摸屏，所述探测装置15、供气装置14、加液装置12、去液装置13、数字显示触摸屏均与控制系统11连接，所述探测装置15包括二氧化碳探头、温度探头、PH探头等若干根探头，探测装置的每根探头和供气装置的供气管均设置于每只培养瓶的瓶盖上，每根探头均由各培养瓶的瓶口伸入细胞培养瓶中探测细胞培养过程中所需参数，并将探测信号发送给控制系统；供气装置14为细胞生长提供所需的气体并保持各培养瓶间气压恒定，供气装置的供气量、加液装置12的加液量以及去液装置13的去液量均由控制系统11控制。生物反应器1将探测装置各探头的探测信号分析处理后发出补气、加液、去液、收集信息，并将数据信息传输给机械流水线2的电子控制装置21，电子控制装置控制动作臂23运动使工作架上的培养瓶完成细胞培养过程的振荡、倾斜、翻转90度等机械动作；加液装置12中设有医用生理盐水、无需中和的消化酶、临床级细胞培养液。

所述培养瓶包括至少三只培养瓶3、4、5，至少三只培养瓶的瓶盖和瓶底同在一水平面上放置于机械流水线2的工作架24、25、26上，至少三只培养瓶的瓶盖上均设置生物反应器的供气装置14、探测装置15；至少三只培养瓶的第一培养瓶3为原代细胞的单层培养瓶，第二、三培养瓶4、5为内设有多层细胞培养平面的传代培养瓶；第一培养瓶3的瓶底设有四个接口分别为加液接口A1、组织块添加接口A2、去液接口A3和收集接口A4；第二培养瓶4的瓶底设有四个接口分别为加液接口B1、细胞添加接口B2、去液接口B3和收集接口B4；第三培养瓶5的瓶底部设有四个接口分别为加液接口C1、细胞添加接口C2、去液接口C3和收集接口C4；第一培养瓶3的加液接口A1、第二培养瓶4的加液接口B1、第三培养瓶5的加液接口C1均连接生物反应器1的加液装置12，作用是从生物反应器的加液装置中经加液接口补加培养液、消化液等细胞培养所需的相关溶液，且加液接口A1、B1、C1上均设有0.22μm过滤器，防止加液污染；第一培养瓶3的去液接口A3、第二培养瓶4的去液接口B3、第三培养瓶5的去液接口C3均连接生物反应器1的去液装置13，作用是将已培养细胞的培养液、消化液等溶液从去液接口移向生物反应器的去液装置，且第一培养瓶3的去液接口A3上设有孔径大小为2mm的筛网，防止第一培养瓶去液时组织块移出；第一培养瓶3的组织块添加接口A2是直径1cm的圆型接口，其作用是添加脐带华通氏胶组织块，添加后即封闭，第一培养瓶3的收集接口A4是将收集的原代细胞送至第二培养瓶4的细胞添加接口B2，第二培养瓶4的收集接口B4将收集的传代细胞送至第三培养瓶5的细胞添加接口C2，通过第三培养瓶5的收集接口C4将最终培养出的细胞收集至细胞收集容器中，第三培养瓶5收集接口C4在细胞培养过程中封闭，且收集接口A4、B4、C4上均设有200目筛网，防止未消化成单细胞的细胞团移出。第二培养瓶4和第三培养瓶5间可增设一个或多个与第二培养瓶结构相同的传代细胞培养瓶。

进一步地，所述第一、二、三培养瓶3、4、5瓶底的若干个接口均设置于培养瓶瓶底的上部或顶部位置，且若干个接口均处于同一水平面上。当培养瓶水平翻转倒置时，若干个接口均处于下方，方便液体顺利地由相应接口流出，当培养瓶受控翻转呈90度竖直状态时，收集接口均位于培养瓶最下方，液体或细胞等能从培养瓶顺畅流出，方便快速执行细胞传代换液的相关操作。

所述第二、三培养瓶4、5内或第二与第三培养瓶间增设的培养瓶内均设有多层细胞培养平面，每层培养平面的两侧均和细胞培养瓶两侧相接，每层培养平面另外两侧与细胞培养瓶的瓶底和瓶盖分离且设有高出培养平面4mm的边界，可与培养瓶两侧围合成水池状，水平盛装4mm高度以下的液体，多层细胞培养平面相互之间为平行不接触设置。加液时，为保证第二、第三培养瓶各细胞培养层液体分布均匀，均由机械流水线2控制培养瓶侧翻90度后迅速正置，当培养瓶侧翻90度状态时，液体汇集于瓶侧下部以及瓶底和瓶盖处，当培养瓶瞬间翻转正置时，培养瓶内液体能立即均匀分布至各层培养平面，充分利用了培养瓶的有效空间；去液时，培养瓶侧翻90度后停留5秒钟，液体汇集于瓶侧下部以及瓶底和瓶盖处，缓慢倒置，液体即完全汇集到培养瓶最下方，液体或细胞等能从培养瓶顺畅流出，方便快速执行细胞传代换液的相关操作。

本发明的步骤如下：

Claims

1.一种脐带间充质干细胞数字化自动生产方法，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞数字化自动生产方法，其特征是：所述培养瓶包括至少三只培养瓶(3,4,5)，至少三只培养瓶均设置于机械流水线(2)上，至少三只培养瓶的瓶盖上均设置生物反应器的供气装置(14)和探测装置(15)；至少三只培养瓶的第一培养瓶(3)为原代细胞培养瓶，第一培养瓶的瓶底设有四个接口分别为加液接口A1、组织块添加接口A2、去液接口A3和收集接口A4，加液接口A1和去液接口A3均连接生物反应器；所述第二培养瓶(4)为传代细胞培养瓶，第二培养瓶的瓶底设有四个接口分别为加液接口B1、细胞添加接口B2、去液接口B3和收集接口B4，细胞添加接口B2连接第一培养瓶收集接口A4，加液接口B1和去液接口B3均连接生物反应器；所述第三培养瓶(5)是传代细胞培养瓶，第三培养瓶的瓶底部设有四个接口分别为加液接口C1、细胞添加接口C2、去液接口C3和收集接口C4，细胞添加接口C2连接第二培养瓶收集接口B4，加液接口C1和去液接口C3均连接生物反应器；第一培养瓶组织块添加接口A2是在组织块添加后即封闭，第三培养瓶收集接口C4是在细胞培养过程中封闭、细胞收集时外接细胞收集容器。

3.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞数字化自动生产方法，其特征是：所述加液接口A1、B1、C1外接生物反应器内的加液装置，且加液接口A1、B1、C1上设有过滤器；所述去液接口A3、B3、C3外接生物反应器内的去液装置，且去液接口A3上设有筛网；所述收集接口A4、B4、C4上设有筛网。

4.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞数字化自动生产方法，其特征是：所述第二、三培养瓶(4,5)内设有多层细胞培养平面，所述每层培养平面两侧均和细胞培养瓶两侧相接，每层培养平面另外两侧与细胞培养瓶的瓶底和瓶盖分离且设有高出培养平面4mm的边界围成水池状，多层细胞培养平面相互之间为平行不接触设置。

5.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞数字化自动生产方法，其特征是：所述第二培养瓶(4)和第三培养瓶(5)间增设一个或多个与第二培养瓶结构相同的传代细胞培养瓶。