CN102232986A - 高山离子芥或其提取物用于制备防治肝脏疾病药物的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了高山离子芥或其提取物的制备方法和用途。经试验证明，本发明中的高山离子芥或其提取物，对药源性肝病、酒精性肝病、肝纤维化及脂肪肝等具有良好的预防和治疗作用，因此，可以按照常规制剂方法制成任何一种包括片剂、胶囊剂、口服液、冲剂等成药制剂，用于防治肝脏疾病。

Description

高山离子芥或其提取物用于制备防治肝脏疾病药物的用途

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及高山离子芥或其提取物的制备和用途，高山离子芥或其提取物在制备防治肝脏疾病药物中的应用。

背景技术

中国是肝病大国。近年来，随着接种肝炎病毒预防性疫苗的普及，病毒性肝炎的发病率呈下降趋势，而非感染性肝病如药源性肝病、酒精性肝病、肝纤维化、脂肪肝等发病率日益上升，并呈现低龄化趋势，严重威胁着全民的健康，防治肝病成为一个长久的课题(齐俊英.疑难性肝病诊断的思考[J].中西医结合肝病杂志，2009，19(4)：193-194)。

高山冰缘植物系指一系列分布在高山植被带以上，永久冰雪带以下，能适应冰雪严寒生境的寒旱生或寒冷中早生多年生轴根性杂类草以及垫状植物，植株矮小，高5～10cm，呈莲座状，垫状，植物体密被棉毛，根系发达(韩艳.高山离子芥铁转运蛋白基因编码序列的克隆及其抗氧化作用的分析[D].兰州：兰州大学，2008)。这类植物常年生长在强烈的日辐射、低温、疾风等恶劣环境中，有着极强的生命力，并造就其独特的生理活性。药理研究表明高山冰缘植物具有抗氧化、护肝、抗缺氧、抗肿瘤(宁鹏，张寿，杨太东，等.藏雪莲水提取物对小白鼠抗氧化作用的研究[J].青海大学学报(自然科学版)，2009，27(2)：63-65；陈艳军，高旭珍，康巍，等.高山红景天对大白鼠肝星状细胞增殖分化的影响[J].肝脏，2007，12(3)：193-194；陈玉满，陈江，毛光明，等.高山红景天的耐缺氧作用实验研究[J].中国卫生检验杂志，2007，17(8)：1494-1496；Way TD，Lee JC，Kuo DH，et al.Inhibition of epidermal growth factorreceptor signaling by Saussurea involucrate，a rare traditional Chinese medicinal herb，in humanhormone-resistant prostate cancer PC-3 cells[J].J Agric Food Chem，2010，58(6)：3356-3365)等活性。

高山离子芥(Chorispora Bungeana Fisch.And C.A.Mey.)是一种十字花科高山冰缘植物，生长于其它花类植物无法生长的冰缘地带，整个生命周期受到低温、强紫外辐射和低氧分压的影响。Wu(Wu YL，Lian LH，Jiang YZ，et al.Hepatoprotective effects of salidroside on fulminanthepatic failure induced by D-galactosamine and lipopolysaccharide in mice[J].J Pharm Pharmacol，2009，61(10)：1375-1382)等指出高山冰缘植物可通过抗氧化发挥护肝作用，而高山离子芥已被验证具有较强的抗氧化活性(Guo GX，Zhang MX，Chen Y，et al.Relation of several antioxidantenzymes to rapid freezing resistance in suspension cultured cells from alpine Chorispora bungeana[J].Cryobiology，2006，52(2)：241-250)，作为典型的高山冰缘植物，有可能在预防或缓解肝损伤方面有出色的表现。我们在此首次公开了高山离子芥或其提取物具有防治肝脏疾病作用。

发明内容

本发明提供了高山离子芥或其提取物作为肝脏疾病防治药物的用途，可用于药源性肝病、酒精性肝病、肝纤维化、脂肪肝等多种肝病的预防和治疗。本发明提供了一种包含高山离子芥或其提取物及常规药用载体的药物组合物，其特征是所述药物组合物是采用常规制剂工艺制备而成的口服或非口服途径方式给药的制剂。

本发明提供了预防或治疗肝脏疾病的方法，包括向肝病患者给予高山离子芥或其提取物或前面所述药物组合物。

本发明提供的高山离子芥或其提取物可以长期应用，具有明显的预防或改善肝损伤的功效，安全可靠。

采用各种不同方法制备的高山离子芥提取物对本发明的用途没有影响。

具体实施方式

肝病是指发生在肝脏的病变，包括但不限于肝炎、药源性肝病、酒精性肝病、肝纤维化、脂肪肝、肝癌等，危害极大。药源性肝病(drug-induced liver disease，DILD)是指由药物或其代谢才产物引起的肝损伤，其表现可从无症状、非特异性的生化改变到急性肝炎、慢性肝炎、急性肝衰竭、胆汁淤积，甚至肝硬化、肝脏肿瘤、脂肪肝、肉芽肿等(付静，李志军.药物性肝病的发病机制及治疗新进展[J].天津医药，2009，37(4)：333-335)。酒精性肝病(alcoholic liver disease，ALD)是指由于过量摄入酒精导致的肝脏损害及其一系列病变，可分为轻型酒精性肝病、酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化等(徐正婕，陆伦根.酒精性肝病的流行病学和自然史[J].中国处方药，2010，1：32-34)。肝纤维化(hepatic fibrosis)是指肝细胞发生坏死及炎症刺激时，肝脏内纤维结缔组织异常增生的病理过程，轻者称为肝纤维化，重者进而使肝小叶结构改建，假小叶及结节形成，称为肝硬化(程君，杨云霞.黄芩苷对四氯化碳致亚急性肝纤维化小鼠的保护作用[J].华西药学杂志，2010，25(1)：32-33)。脂肪肝(fatty liver disease，FLD)是指多种因素所致的肝脏脂肪代谢障碍，脂类物质的动态平衡失调，致使肝细胞内脂肪蓄积过多，肝脏发生弥漫性脂肪浸润(脂肪变性)及一系列病理生理变化的一种临床病理综合征，按病理变化的进展可分为单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎、脂肪性肝纤维化、脂肪性肝硬化四个阶段(苌新明，负建蔚.脂肪性肝病防治的研究进展[J].世界华人消化杂志，2009，17(35)：3573-3578)。

本发明提供了高山离子芥或其提取物在制备肝脏疾病防治药物中的应用，包括但不局限于药源性肝病、酒精性肝病、肝纤维化、脂肪肝等肝脏疾病。

高山离子芥植株可以于每年7～8月从海拔高度为3700～4000m的天山附近向阳砾石山坡上采集后，连同泥土一起在纸箱中运回实验室，途中喷水保持湿润。植株高约3～10cm，被白色短柔毛，地下有粗的肉质根，根端有直立的根状茎，叶多数，基生，深裂到全裂，叶片椭圆形，羽状(阿依吐尔汗，谭敦炎，李志军，等.高山离子芥营养器官的结构与环境的关系研究[J].新疆农业大学学报，1998，21(4)：273-277)。

高山离子芥提取物可以通过以下方式制备：

(1)取新鲜高山离子芥全株，净选除杂质，使用粉碎机粉碎，置1000ml圆底烧瓶中，加药材重量的4倍水浸泡约1h，热煎煮，提取三次，每次1.5h，过滤(用80目尼纶布)，合并滤液，3000rpm离心10min，取上清液浓缩，冷冻干燥成干浸膏即得高山离子芥水提物。

(2)取新鲜高山离子芥全株，净选除杂质，烘干，使用粉碎机粉碎，置1000ml圆底烧瓶中，加药材重量的4倍水浸泡约1h，热煎煮，提取三次，每次1.5h，过滤(用80目尼纶布)，合并滤液，3000rpm离心10min，取上清液浓缩，冷冻干燥成干浸膏即得高山离子芥水提物。

(3)取新鲜高山离子芥全株，净选除杂质，使用粉碎机粉碎，置1000ml圆底烧瓶中，加药材4倍重量的60％～80％(v/v)乙醇浸泡约1h，回流提取3次，每次1h，过滤(用80目尼纶布)，合并滤液，3000rpm离心10min，取上清液浓缩，冷冻干燥成干浸膏即得高山离子芥醇提物。

(4)取新鲜高山离子芥全株，净选除杂质，烘干，使用粉碎机粉碎，置1000ml圆底烧瓶中，加药材4倍重量的60％～80％(v/v)乙醇浸泡约1h，回流提取3次，每次1h，过滤(用80目尼纶布)，合并滤液，3000rpm离心10min，取上清液浓缩，冷冻干燥成干浸膏即得高山离子芥醇提物。

本发明所述的高山离子芥或其提取物可以根据临床需要，加入相应药用载体，以片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊、悬浮液、溶液、糖浆、注射剂、霜剂、软膏、凝胶剂、喷雾剂、口嚼剂或贴剂等制剂形式存在。

本发明所述的高山离子芥或其提取物可根据临床需要，采用口服或非口服方式用药，优选口服给药方式。

本发明所述的高山离子芥或其提取物制剂采用口服方式用药时，人用剂量优选0.05-50g/人/日(相当于生药量)，其中更优选为0.5-25g/人/日(相当于生药量)，最优选为2.5-5g/人/日(相当于生药量)。

以下结合实验例对本发明进行说明，但本发明并不受限于该实施例。

实施例1高山离子芥提取物的制备

每年7～8月从海拔高度为3700～4000m的天山附近向阳砾石山坡上采集高山离子芥植株，连同泥土一起在纸箱中运回实验室，途中喷水保持湿润。取80g新鲜高山离子芥全株，净选除杂质，使用粉碎机粉碎，置1000ml圆底烧瓶中，加药材重量的4倍水浸泡约1h，热煎煮，提取三次，每次1.5h，过滤(用80目尼纶布)，合并滤液，3000rpm离心10min，取上清液浓缩，冷冻干燥成干浸膏即得1.7g高山离子芥水提物。

实施例2高山离子芥提取物的制备

每年7～8月从海拔高度为3700～4000m的天山附近向阳砾石山坡上采集高山离子芥植株，连同泥土一起在纸箱中运回实验室，途中喷水保持湿润。取80g新鲜高山离子芥全株，净选除杂质，烘干，使用粉碎机粉碎，置1000ml圆底烧瓶中，加药材重量的4倍水浸泡约1h，热煎煮，提取三次，每次1.5h，过滤(用80目尼纶布)，合并滤液，3000rpm离心10min，取上清液浓缩，冷冻干燥成干浸膏即得6.9g高山离子芥水提物。

实施例3高山离子芥提取物的制备

每年7～8月从海拔高度为3700～4000m的天山附近向阳砾石山坡上采集高山离子芥植株，连同泥土一起在纸箱中运回实验室，途中喷水保持湿润。取80g新鲜高山离子芥全株，净选除杂质，使用粉碎机粉碎，置1000ml圆底烧瓶中，加药材4倍重量的60％～80％(v/v)乙醇浸泡约1h，回流提取3次，每次1h，过滤(用80目尼纶布)，合并滤液，3000rpm离心10min，取上清液浓缩，冷冻干燥成干浸膏即得1.9g高山离子芥醇提物。

实施例4高山离子芥提取物的制备

每年7～8月从海拔高度为3700～4000m的天山附近向阳砾石山坡上采集高山离子芥植株，连同泥土一起在纸箱中运回实验室，途中喷水保持湿润。取80g新鲜高山离子芥全株，净选除杂质，烘干，使用粉碎机粉碎，置1000ml圆底烧瓶中，加药材4倍重量的60％～80％(v/v)乙醇浸泡约1h，回流提取3次，每次1h，过滤(用80目尼纶布)，合并滤液，3000rpm离心10min，取上清液浓缩，冷冻干燥成干浸膏即得7.3g高山离子芥醇提物。

实施例5高山离子芥提取物对肝纤维化的影响

1材料与方法

1.1实验动物

SPF级昆明种小鼠，体重18～22g，雄性。购自北京维通利华实验动物技术有限公司(许可证号：SCXK(京)2007-001)，饲养于北京联合大学应用文理保健食品功能检测中心实验动物房。

1.2试剂

四氯化碳：北京化工厂，石蜡油：Sigma公司；ALT、AST试剂盒：南京建成生物研究所；透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)肝纤维化ELISA试剂盒：上海森雄科技实业有限公司。

1.3仪器

多功能酶标仪：Sigma公司；TGL 16M离心机：湖南凯达科学仪器有限公司；涡旋混合器：金坛市医疗器械厂。

2方法

2.1造模及给药

小鼠适应性饲养7d后，随机分为模型组、正常组和高山离子芥提取物高、中、低剂量(5、2.5、1.25g/kg，相当于生药量)组，每组10只。高山离子芥提取物组灌胃给予高山离子芥提取物，1次/d，连续40d，其他两组给予等量蒸馏水。模型组和给药组小鼠皮下注射10％四氯化碳石蜡油溶液(10ml/kg)，1次/周，连续40d。正常组小鼠则皮下注射等量石蜡油溶液。

2.2指标测定

第40d，小鼠禁食12h后，眼眶取血，3000rpm离心10min，分离血清，检测血清中ALT、AST、HA，LN水平。

2.3数据处理

实验数据表示为

，采用SPSS13.0软件，用单因素方差分析进行统计学处理，P＜0.05表示有统计学意义。

3结果

3.1高山离子芥提取物对肝纤维化小鼠肝功能的影响

表1中数据显示，由四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠血清中ALT、AST明显升高，与正常组比较，有显著性差别，而高山离子芥提取物组血清中ALT和AST的水平明显下降，且有一定的量效关系，表明高山离子芥提取物能有效地缓解四氯化碳引起的药物性肝损伤。

表1高山离子芥提取物对肝纤维化小鼠肝功能的影响(

)

注：与模型组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01

3.2高山离子芥提取物对小鼠肝纤维化指标的影响

四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠血清中HA、LN水平明显高于正常组，有显著性差异。高山离子芥提取物不同剂量组与模型组比较，血清中HA、LN水平均有不同程度的下降。结果表明，高山离子芥提取物对肝纤维化有一定的防治作用，能明显减低肝纤维化程度。

表2高山离子芥提取物对小鼠肝纤维化指标的影响()

注：与模型组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01

实施例6高山离子芥提取物对酒精性脂肪肝的影响

1材料与方法

1.1实验动物

SPF级昆明种小鼠，体重18～22g，雄性。购自北京维通利华实验动物技术有限公司(许可证号：SCXK(京)2007-001)，饲养于北京联合大学应用文理保健食品功能检测中心实验动物房。

1.2试剂

红星二锅头酒(56度)，北京红星股份有限公司；丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)和考马斯亮兰试剂盒，南京建成生物工程研究所。

1.3仪器

多功能酶标仪：Sigma公司；TGL 16M离心机：湖南凯达科学仪器有限公司；涡旋混合器：金坛市医疗器械厂。

2方法

2.1造模及给药

小鼠适应性饲养7d后，随机分为模型组、正常组和高山离子芥提取物高、中、低剂量(5、2.5、1.25g/kg，相当于生药量)组，每组10只。模型组和高山离子芥提取物组灌服白酒(10ml/kg)，2次/d，中间间隔1h，连续5d，正常组给予等量蒸馏水。高山离子芥提取物组在每日白酒灌胃后，灌胃给予高山离子芥提取物，其他两组给予等量蒸馏水。

2.2指标测定

第5d，小鼠禁食12h后，眼眶取血，3000rpm离心10min，分离血清，用于检测血清ALT、AST；在同一位置取0.2g肝组织，加入冰冷的生理盐水，制成10％匀浆，3000rpm离心10min，取上清，待测肝组织TG、γ-GT；在同一位置取小块肝组织OCT包埋，于液氮中迅速冷冻，冰冻切片，油红O染色。

2.3数据处理

实验数据表示为

，采用SPSS13.0软件，用单因素方差分析进行统计学处理，P＜0.05表示有统计学意义。

3结果

3.1实验动物一般情况

正常组小鼠皮毛光滑，活泼，体重增加正常，无死亡情况。模型组小鼠灌胃给予白酒后，出血暂时性兴奋，稍后出现醉酒状态，精神萎靡，皮毛无光泽，体重明显下降，死亡两只。高山离子芥给药组小鼠情况介于两者之间。

3.2高山离子芥提取物对脂肪肝小鼠肝功能的影响

持续灌胃给予白酒后可使小鼠血清ALT、AST水平明显升高，与正常组相比有显著性差异。高山离子芥提取物预处理可明显抑制白酒引起的血清转氨酶水平的上升，与模型组相比差异显著。

表3高山离子芥提取物对脂肪肝小鼠肝功能的影响(

)

注：与模型组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01

3.3高山离子芥提取物对脂肪肝小鼠脂质水平的影响

模型组小鼠肝组织中γ-GT和TG水平与模型组相比，明显升高，表明成功建立脂肪肝模型。高山离子芥提取物各剂量组能显著下调脂肪肝小鼠脂质水平，显示高山离子芥提取物具有抗酒精性肝损伤，抑制肝内脂肪沉积作用。

表4高山离子芥提取物对脂肪肝小鼠脂质水平的影响()

注：与模型组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01

3.4油红O染色结果

冰冻切片油红O染色显示，正常组小鼠肝细胞内几乎未见脂肪滴。而模型组小鼠肝细胞内可见多个、体积较大的红色的脂肪滴，小叶中央区域红染。高山离子芥组脂肪滴较少也较小，染色较浅。

Claims (10)

1.高山离子芥或其提取物用于制备防治肝脏疾病药物的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征是高山离子芥或其提取物用于制备预防或治疗药源性肝病的用途。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征是高山离子芥或其提取物用于制备预防或治疗酒精性肝病的用途。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征是高山离子芥或其提取物用于制备预防或治疗肝纤维化的用途。

5.根据权利要求1所述的用途，其特征是高山离子芥或其提取物用于制备预防或治疗脂肪肝的用途。

6.根据权利要求1所述的用途，其特征是所述的高山离子芥提取物是高山离子芥水提物。

7.根据权利要求1所述的用途，其特征是所述的高山离子芥提取物是高山离子芥醇提物。

8.根据权利要求6所述的用途，其特征是所述的高山离子芥水提物通过以下方式制备：取高山离子芥全株或全株的一部分，使用粉碎机粉碎，加水浸泡，加热煎煮，提取3次，过滤，合并滤液，离心，取上清液浓缩，冷冻干燥成干浸膏即得高山离子芥水提物。

9.根据权利要求7所述的用途，其特征是所述的高山离子芥醇提物通过以下方式制备：取高山离子芥全株，使用粉碎机粉碎，加乙醇浸泡，回流提取3次，过滤，合并滤液，离心，取上清液浓缩，冷冻干燥成干浸膏即得高山离子芥醇提物。

10.一种药物组合物，其特征是所述药物组合物包含高山离子芥或高山离子芥提取物及常规药用载体，采用常规制剂工艺制备而成的口服或非口服途径方式给药的制剂。