CN102226153A - 用于生成污染菌抗血清的免疫原的制备方法 - Google Patents
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Abstract
用于生成污染菌抗血清的免疫原的制备方法，涉及免疫原的制备方法。本发明是要解决目前无菌操作中常被一株污染菌污染的问题。方法：一、制备菌悬液；二、将菌悬液与液体石蜡混均得混合液，向混合液中加入羊毛脂，形成乳化液即为免疫原。另一种方法：一、得到产朊假丝酵母JTW-1培养物；二、将培养物加入到戊二醛水溶液中，摇床振荡收集产物；三、将产物过滤，洗涤，去水分得到交联酵母菌；四、向去离子水中加入交联酵母菌，震荡混匀后形成的悬液即为免疫原。利用本发明制备的免疫原生成抗血清，将抗血清加入到易受污染的培养基中，可有效抑制产朊假丝酵母JTW-1的污染，解决了目前无菌操作中常被杂菌产朊假丝酵母JTW-1污染的问题。
Description
技术领域
本发明涉及免疫原的制备方法。
背景技术
各种各样的微生物存在于我们的生活空间中，如空气、水和物体表面等。在利用微生物进行生产过程中，如菌种保藏、微生物转接、菌种活化等都涉及无菌操作这一环节，包括使用超净台、操作前使用紫外灯照射、化学灭菌、高温灭菌、火焰灭菌等。我们在进行操作过程中发现，即使经过认真仔细的操作也会经常被一种杂菌污染，并且在其他实验室操作过程中也会出现这种现象。这种杂菌的污染会干扰欲保存菌种的转接、分离与纯化，甚至使这种杂菌成为优势菌种，而导致保藏菌株不纯或产生死亡的现象。
发明内容
本发明是要解决目前无菌操作中常被一株污染菌污染的问题，提供用于生成污染菌抗血清的免疫原的制备方法。
本发明中污染菌为产朊假丝酵母JTW-1(Candida utilis JTW-1)，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2011年3月21日，保藏编号为CGMCC No.4700。
本发明用于生成污染菌抗血清的免疫原的制备方法，按以下步骤进行：一、制备菌悬液：将产朊假丝酵母JTW-1接种在经过灭菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，然后放置于80～300r/min的摇床上，于28℃培养3天，用孔径0.45μm的滤膜过滤除去培养基，收集到产朊假丝酵母JTW-1培养物，将产朊假丝酵母JTW-1培养物溶于无菌水中制成密度为1×107～1×109个/mL的菌悬液；二、制备免疫原：将步骤一制得的菌悬液与液体石蜡按体积比1∶1～4混均，得混合液，然后按每1mL混合液加入1g羊毛脂的比例向混合液中加入羊毛脂混匀，形成乳化液即为免疫原。
本发明用于生成污染菌抗血清的免疫原的另一种制备方法，按以下步骤进行：将产朊假丝酵母JTW-1接种在经过灭菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，于28℃培养3天，用孔径0.45μm的滤膜过滤除去培养基，收集到产朊假丝酵母JTW-1培养物；将产朊假丝酵母JTW-1培养物加入到体积浓度为0.5％～20％的戊二醛水溶液中，产朊假丝酵母JTW-1培养物的重量与戊二醛水溶液的体积比为1g∶1～100mL，然后在室温下于80～300r/min的摇床上振荡16h，收集产物；然后将产物用孔径0.45μm的滤膜过滤，滤去液体部分，再以抽滤方式用去离子水洗涤，然后滤去水分，得到交联酵母菌；按交联酵母菌重量与去离子水体积比为1g∶1～100mL的比例向去离子水中加入交联酵母菌，震荡混匀后形成的悬液即为免疫原。
利用本发明制备的免疫原制成污染菌抗血清，再将抗血清加入到易受污染的培养基中，可有效抑制产朊假丝酵母JTW-1的污染，解决了目前无菌操作中常被污染菌产朊假丝酵母JTW-1污染的问题。本发明的方法简单，易于操作。
附图说明
图1为具体实施方式一中产朊假丝酵母JTW-1在麦芽汁琼脂培养基中生长的菌落形态图；图2为具体实施方式一中产朊假丝酵母JTW-1的细胞形态图。
具体实施方式
本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。
具体实施方式一：本实施方式用于生成污染菌抗血清的免疫原的制备方法，按以下步骤进行：一、制备菌悬液：将产朊假丝酵母JTW-1接种在经过灭菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，然后放置于80～300r/min的摇床上，于28℃培养3天，用孔径0.45μm的滤膜过滤除去培养基，收集到产朊假丝酵母JTW-1培养物，将产朊假丝酵母JTW-1培养物溶于无菌水中制成密度为1×107～1×109个/mL的菌悬液；二、制备免疫原：将步骤一制得的菌悬液与液体石蜡按体积比1∶1～4混均，得混合液，然后按每1mL混合液加入1g羊毛脂的比例向混合液中加入羊毛脂混匀，形成乳化液即为免疫原。
利用本实施方式的免疫原进行污染菌抗血清的制备，方法如下：取2～4公斤重的健康雄性家兔，对家兔进行耳静脉注射本实施方式制得的免疫原，每只家兔每天同一时间注射1次，每次每只注射1～3mL，连续注射6天；对经过上述免疫后的家兔进行无菌取血，然后放置分层，离心后取上清，即得到污染菌抗血清。
将污染菌抗血清加入易受污染的培养基中，可有效抑制产朊假丝酵母JTW-1的污染，解决了目前无菌操作中常被杂菌产朊假丝酵母JTW-1污染的问题。本发明的方法简单，易于操作。
本实施方式步骤一所述的产朊假丝酵母JTW-1(Candida utilis JTW-1)，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2011年3月21日，保藏编号为CGMCC No.4700。产朊假丝酵母JTW-1在麦芽汁液体培养基中培养不产醭，管底有菌体沉淀；在麦芽汁琼脂培养基上培养，菌落呈乳白色，平滑有光泽，边缘整齐(如图1)，以分裂和多端出芽的营养体方式繁殖；在加盖玻片的玉米粉琼脂培养基上培养，形成大量假菌丝。产朊假丝酵母JTW-1细胞呈圆形或椭圆形(如图2)，大小为(3～5)μm×(7～13)μm。
发酵糖实验表明，产朊假丝酵母JTW-1可以发酵葡萄糖和蔗糖，但不能发酵半乳糖、麦芽糖、纤维二糖、海藻糖、乳糖、蜜二糖、松三糖、菊糖或棉籽糖。同化碳源实验表明，产朊假丝酵母JTW-1对葡萄糖、蔗糖、棉籽糖、麦芽糖、菊糖、松三糖、纤维二糖、甘油利用良好，但不能利用半乳糖、乳糖、蜜二糖、可溶性淀粉。产朊假丝酵母JTW-1的同化硝酸钾阳性，可在无维生素的培养基中生长。能够良好利用硫酸铵、硝酸铵、氯化铵、尿素。产朊假丝酵母JTW-1耐氯化钠浓度最高为8％。
产朊假丝酵母JTW-1可在麦芽汁培养基、玉米粉琼脂培养基和马铃薯葡萄糖琼脂培养基中生长。产朊假丝酵母JTW-1在43℃下能够生长。
对照《酵母菌的特征与鉴定手册》、《菌种保藏手册》和《真菌鉴定手册》中对酵母形态特征和生理特征的描述，可以鉴定此菌株为产朊假丝酵母(Candida utilis)。
本实施方式步骤一所述的产朊假丝酵母JTW-1是由受污染的马铃薯葡萄糖琼脂培养基中分离得到。挑取马铃薯葡萄糖琼脂培养基中白色的单个污染菌落，经多次马铃薯葡萄糖琼脂培养基平板划线培养，得到单菌落的纯培养物产朊假丝酵母JTW-1。
制得的污染菌抗血清可以稀释1～256倍使用，使用时将稀释后的抗血清与培养基按体积比1∶4～20混合。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤一中放置于100～250r/min的摇床上。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤一中放置于150～200r/min的摇床上。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是：步骤一中制成密度为1×108个/mL的菌悬液。其它与具体实施方式一至三之一相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是：步骤二中将步骤一制得的菌悬液与液体石蜡按体积比1∶2混均。其它与具体实施方式一至四之一相同。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是：步骤二中将步骤一制得的菌悬液与液体石蜡按体积比1∶3混均。其它与具体实施方式一至四之一相同。
具体实施方式七：本实施方式用于生成污染菌抗血清的免疫原的制备方法，按以下步骤进行：一、制备菌悬液：将产朊假丝酵母JTW-1接种在经过灭菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，然后放置于120r/min的摇床上，于28℃培养3天，用0.45μm微孔滤膜过滤除去培养基，收集到产朊假丝酵母JTW-1培养物，将产朊假丝酵母JTW-1培养物溶解于无菌水中制成密度为1×108个/mL的菌悬液；二、制备免疫原：将步骤一制得的菌悬液与液体石蜡按体积比1∶1混均，得混合液，然后按每1mL混合液加入1g羊毛脂的比例向混合液中加入羊毛脂混匀，形成乳化液即为免疫原。
利用本实施方式的免疫原进行污染菌抗血清的制备，方法如下：取3公斤重的健康雄性家兔，对家兔进行耳静脉注射本实施方式制得的免疫原，每只家兔每天同一时间注射1次，每次每只注射2mL，连续注射6天；对经过上述免疫后的家兔进行无菌取血，然后放置分层，离心后取上清，即得到污染菌抗血清。
将4mL马铃薯葡萄糖琼脂培养基高温灭菌，凉至40～50℃，将上述污染菌抗血清稀释10倍，无菌操作取0.5mL稀释后抗血清加入到4mL马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，混匀，制成斜面培养基；将产朊假丝酵母JTW-1溶解于无菌水中制成密度为1×107～1×109个/mL的菌悬液，挑取一环菌悬液接种于斜面培养基，划线28℃培养2天之后，未有污染酵母菌落出现；而未加入污染菌抗血清的斜面培养基，接种上述菌悬液一环，划线28℃培养2天，则出现污染酵母菌落。
将20mL马铃薯葡萄糖琼脂培养基高温灭菌，凉至40～50℃，将上述污染菌抗血清稀释10倍，无菌操作取2.5mL稀释后的抗血清加入到20mL马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，混匀，制成平板培养基；将产朊假丝酵母JTW-1溶解于无菌水中制成密度为1×107～1×109个/mL的菌悬液，挑取一环菌悬液接种于平板培养基，划线28℃培养2天之后，未有污染酵母菌落出现；而未加入污染菌抗血清的平板培养基，接种上述菌悬液一环，划线28℃培养2天，则出现污染酵母菌落。
具体实施方式八：本实施方式用于生成污染菌抗血清的免疫原的制备方法，按以下步骤进行：一、将产朊假丝酵母JTW-1接种在经过灭菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，于28℃培养3天，用孔径0.45μm的滤膜过滤除去培养基，收集到产朊假丝酵母JTW-1培养物；二、将产朊假丝酵母JTW-1培养物加入到体积浓度为0.5％～20％的戊二醛水溶液中，产朊假丝酵母JTW-1培养物的重量与戊二醛水溶液的体积比为1g∶1～100mL，然后在室温下于80～300r/min的摇床上振荡16h，收集产物；三、然后将产物用孔径0.45μm的滤膜过滤，滤去液体部分，再以抽滤方式用去离子水洗涤，然后滤去水分，得到交联酵母菌；四、按交联酵母菌重量与去离子水体积比为1g∶1～100mL的比例向去离子水中加入交联酵母菌，震荡混匀后形成的悬液即为免疫原。
利用本实施方式的免疫原进行污染菌抗血清的制备，方法如下：选择体重在2～3kg健壮的家兔，第1天每只兔子四足掌各注射0.2mL免疫原，背部皮下4点注射，每点0.2mL免疫原，第3天每只兔四足掌各注射0.1mL免疫原，背部皮下4点注射，每点0.1mL免疫原；第5天每只兔四足掌各注射0.1mL免疫原，背部皮下4点注射，每点0.1mL免疫原；两天后无菌取血，然后放置分层，离心后取上清，即得到抗血清。
将污染菌抗血清加入易受污染的培养基中，可有效抑制产朊假丝酵母JTW-1的污染，解决了目前无菌操作中常被杂菌产朊假丝酵母JTW-1污染的问题。本发明的方法简单，易于操作。
本实施方式步骤一所述的产朊假丝酵母JTW-1(Candida utilis JTW-1)，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2011年3月21日，保藏编号为CGMCC No.4700。
制得的污染菌抗血清可以稀释1～1024倍使用，使用时将稀释后的抗血清与培养基按体积比1∶4～20混合。
具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式八不同的是：步骤二中将产朊假丝酵母JTW-1培养物加入到体积浓度为1％～15％的戊二醛水溶液中。其它与具体实施方式八相同。
具体实施方式十：本实施方式与具体实施方式八不同的是：步骤二中将产朊假丝酵母JTW-1培养物加入到体积浓度为5％～10％的戊二醛水溶液中。其它与具体实施方式八相同。
具体实施方式十一：本实施方式与具体实施方式八不同的是：步骤二中将产朊假丝酵母JTW-1培养物加入到体积浓度为8％的戊二醛水溶液中。其它与具体实施方式八相同。
具体实施方式十二：本实施方式与具体实施方式八至十一之一不同的是：步骤二中产朊假丝酵母JTW-1培养物的重量与戊二醛水溶液的体积比为1g∶10～80mL。其它与具体实施方式八至十一之一相同。
具体实施方式十三：本实施方式与具体实施方式八至十一之一不同的是：步骤二中产朊假丝酵母JTW-1培养物的重量与戊二醛水溶液的体积比为1g∶30～60mL。其它与具体实施方式八至十一之一相同。
具体实施方式十四：本实施方式与具体实施方式八至十一之一不同的是：步骤二中产朊假丝酵母JTW-1培养物的重量与戊二醛水溶液的体积比为1g∶50mL。其它与具体实施方式八至十一之一相同。
具体实施方式十五：本实施方式与具体实施方式八至十四之一不同的是：步骤四中按交联酵母菌重量与去离子水体积比为1g∶10～90mL的比例向去离子水中加入交联酵母菌。其它与具体实施方式八至十四之一相同。
具体实施方式十六：本实施方式与具体实施方式八至十四之一不同的是：步骤四中按交联酵母菌重量与去离子水体积比为1g∶30～70mL的比例向去离子水中加入交联酵母菌。其它与具体实施方式八至十四之一相同。
具体实施方式十七：本实施方式与具体实施方式八至十四之一不同的是：步骤四中按交联酵母菌重量与去离子水体积比为1g∶50mL的比例向去离子水中加入交联酵母菌。其它与具体实施方式八至十四之一相同。
具体实施方式十八：本实施方式用于生成污染菌抗血清的免疫原的制备方法，按以下步骤进行：一、将产朊假丝酵母JTW-1接种在经过灭菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，于28℃培养3天，用孔径0.45μm的滤膜过滤除去培养基，收集到产朊假丝酵母JTW-1培养物；二、将产朊假丝酵母JTW-1培养物加入到体积浓度为10％的戊二醛水溶液中，产朊假丝酵母JTW-1培养物的重量与戊二醛水溶液的体积比为1g∶1～100mL，然后在室温下于100r/min的摇床上振荡16h，收集产物；三、然后将产物用孔径0.45μm的滤膜过滤，滤去液体部分，再以抽滤方式用去离子水洗涤，然后滤去水分，得到交联酵母菌；四、按交联酵母菌重量与去离子水体积比为1g∶1～100mL的比例向去离子水中加入交联酵母菌，震荡混匀后形成的悬液即为免疫原。
将4mL麦芽汁培养基高温灭菌，凉至40～50℃，将上述污染菌抗血清稀释200倍，无菌操作取0.5mL稀释后抗血清加入到4mL麦芽汁培养基中，混匀，制成斜面培养基；将产朊假丝酵母JTW-1溶解于无菌水中制成密度为1×107～1×109个/mL的菌悬液，挑取一环菌悬液接种于斜面培养基，划线28℃培养2天之后，未有污染酵母菌落出现；而未加入污染菌抗血清的斜面培养基，接种上述菌悬液一环，划线28℃培养2天，则出现污染酵母菌落。
将20mL麦芽汁培养基高温灭菌，凉至40～50℃，将上述污染菌抗血清稀释200倍，无菌操作取2.5mL稀释后的抗血清加入到20mL麦芽汁培养基中，混匀，制成平板培养基；将产朊假丝酵母JTW-1溶解于无菌水中制成密度为1×107～1×109个/mL的菌悬液，挑取一环菌悬液接种于平板培养基，划线28℃培养2天之后，未有污染酵母菌落出现；而未加入污染菌抗血清的平板培养基，接种上述菌悬液一环，划线28℃培养2天，则出现污染酵母菌落。
Claims (8)
1.用于生成污染菌抗血清的免疫原的制备方法，其特征在于用于生成污染菌抗血清的免疫原的制备方法，按以下步骤进行：一、制备菌悬液：将产朊假丝酵母JTW-1接种在经过灭菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，然后放置于80～300r/min的摇床上，于28℃培养3天，用孔径0.45μm的滤膜过滤除去培养基，收集到产朊假丝酵母JTW-1培养物，将产朊假丝酵母JTW-1培养物溶于无菌水中制成密度为1×107～1×109个/mL的菌悬液；二、制备免疫原：将步骤一制得的菌悬液与液体石蜡按体积比1∶1～4混均，得混合液，然后按每1mL混合液加入1g羊毛脂的比例向混合液中加入羊毛脂混匀，形成乳化液即为免疫原。
2.根据权利要求1所述的用于生成污染菌抗血清的免疫原的制备方法，其特征在于步骤一中放置于100～250r/min的摇床上。
3.根据权利要求1或2所述的用于生成污染菌抗血清的免疫原的制备方法，其特征在于步骤一中制成密度为1×108个/mL的菌悬液。
4.根据权利要求3所述的用于生成污染菌抗血清的免疫原的制备方法，其特征在于步骤二中将步骤一制得的菌悬液与液体石蜡按体积比1∶2混均。
5.用于生成污染菌抗血清的免疫原的制备方法，其特征在于用于生成污染菌抗血清的免疫原的制备方法，按以下步骤进行：一、将产朊假丝酵母JTW-1接种在经过灭菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，于28℃培养3天，用孔径0.45μm的滤膜过滤除去培养基，收集到产朊假丝酵母JTW-1培养物；二、将产朊假丝酵母JTW-1培养物加入到体积浓度为0.5％～20％的戊二醛水溶液中，产朊假丝酵母JTW-1培养物的重量与戊二醛水溶液的体积比为1g∶1～100mL，然后在室温下于80～300r/min的摇床上振荡16h，收集产物；三、然后将产物用孔径0.45μm的滤膜过滤，滤去液体部分，再以抽滤方式用去离子水洗涤，然后滤去水分，得到交联酵母菌；四、按交联酵母菌重量与去离子水体积比为1g∶1～100mL的比例向去离子水中加入交联酵母菌，震荡混匀后形成的悬液即为免疫原。
6.根据权利要求5所述的用于生成污染菌抗血清的免疫原的制备方法，其特征在于步骤二中将产朊假丝酵母JTW-1培养物加入到体积浓度为1％～15％的戊二醛水溶液中。
7.根据权利要求5或6所述的用于生成污染菌抗血清的免疫原的制备方法，其特征在于步骤二中产朊假丝酵母JTW-1培养物的重量与戊二醛水溶液的体积比为1g∶30～60mL。
8.根据权利要求7所述的用于生成污染菌抗血清的免疫原的制备方法，其特征在于步骤四中按交联酵母菌重量与去离子水体积比为1g∶30～70mL的比例向去离子水中加入交联酵母菌。
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1210017A (zh) * | 1997-09-01 | 1999-03-10 | 黄河 | 一种功能食品免疫牛奶 |
| US7241613B1 (en) * | 2002-06-05 | 2007-07-10 | Oscient Pharmaceuticals Corporation | Identification of Candida cell surface proteins and their uses |
| CN101334363A (zh) * | 2008-01-09 | 2008-12-31 | 青岛大学 | 一种基于荧光假单胞菌鞭毛蛋白检测松材线虫病的方法 |
| WO2011031850A1 (en) * | 2009-09-10 | 2011-03-17 | Merial Limited | New vaccine formulations comprising saponin-containing adjuvants |
-
2011
- 2011-05-10 CN CN 201110120093 patent/CN102226153B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1210017A (zh) * | 1997-09-01 | 1999-03-10 | 黄河 | 一种功能食品免疫牛奶 |
| US7241613B1 (en) * | 2002-06-05 | 2007-07-10 | Oscient Pharmaceuticals Corporation | Identification of Candida cell surface proteins and their uses |
| CN101334363A (zh) * | 2008-01-09 | 2008-12-31 | 青岛大学 | 一种基于荧光假单胞菌鞭毛蛋白检测松材线虫病的方法 |
| WO2011031850A1 (en) * | 2009-09-10 | 2011-03-17 | Merial Limited | New vaccine formulations comprising saponin-containing adjuvants |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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