CN102213709A - 一种测定水体有机污染物毒性的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于环境有机污染物检测技术领域，公开了一种测定水体有机污染物毒性的方法，该方法包括以下步骤：(1)建立C₁₈Empore^TM膜仿生固相萃取技术及其有机污染物负荷总量的测定方法；(2)测定单一有机化合物及其混合化合物对水体生物毒性；(3)对水体有毒有机化合物的污染水平进行分析和危险进行预测。本发明方法具有直接、快速、简便和价廉等优点。

Description

一种测定水体有机污染物毒性的方法

技术领域

本发明属于环境有机污染物检测技术领域，具体涉及一种测定水体有机污染物毒性的方法。

背景技术

随着近代工业迅速发展，有机化合物的产量和种类与日俱增，环境水体中有毒有机化合物污染十分严重。其中以有机氯农药、多氯联苯、石油烃等持久性有毒有机污染物尤为突出，它们极易在生物体内中高度富集，破坏和改变遗传物质，不仅影响水生生物的繁殖能力，最终造成水生生物资源的衰竭；而且这些有机化合物还能通过经济鱼类、贝类及其它海产品进入人体，严重危害人体健康。这些有毒有机污染物对人们造成的危害是隐蔽的，但是长久而持续。所以，对这些痕量有毒有机污染物的预测与控制是二十一世纪水资源保护工作重点之一，在国外水环境研究中已受到极大关注。

到目前为止，对水体有机污染物的检测都只是基于分析化学的方法，即萃取水体中的有机物，再用大型精密仪器(气相色谱(GC)，气相色谱质谱联用技术GC-MS)对水样品进行全分析，即对各单一有机污染物的定性确认和定量分析。(参考文献：①王凌，黎先春，殷月芬等，莱州湾水体中有机磷农药的残留监测与风险影响评价，安全与环境学报，2007，7(3)：83-85；②管丽凤，周桂芹，陈爱芹，水中多氯联苯的测定，化工技术与开发，2008，37(2)：42-44；③李爱强，陈军，张宗祥，气相色谱法测定水中的多氯联苯，江苏环境科技，2007，20(2)：56-57)

但是，这些水体有机污染物的检测尚存在以下不足之处：

1)萃取方法

如今常用的萃取方法有固相萃取技术和固相微萃取技术。

固相萃取技术(Solid-phase extraction)是使用固相吸附剂进行萃取和浓缩水体中有毒有机污染物，此技术具有简单、高效快速，容易达到定量萃取等优点。但是，该技术成本较高，为了得到良好的分离效果，需花费较多时间去优选操作条件，而且还需少量的选择性溶剂进行洗脱，还没办法达到真正的无溶剂的样品预处理。

固相微萃取技术(Solid-phase microextration)是在固相萃取的基础上结合顶空分析(headspace)建立起来的一种新的样品前处理技术，此分析设备结构简单，携带方便，是一种真正的无溶剂的样品预处理方法。但是，此技术取用的萃取头商品化纤维种类较少，且容易破碎，成为固相微萃取技术推广应用的限制。

2)水样分析所用大型精密仪器

如今常用的水样分析都是用大型精密仪器(如气相色谱(GC)，气相色谱质谱联用技术GC-MS)对水样进行分析，但是大型精密仪器携带不方便，无法用于野外实时监测。此方法能高效、灵敏、快速对单一有机污染物进行定性确认和定量分析，但是此方法技术得到的只是单纯的单一污染物的量，从而无法预测水体中的污染物，成为水样分析方法推广应用的限制。

发明内容

本发明的目的是提供一种测定水体有机污染物毒性的方法，该方法是基于C₁₈ Empore^TM膜仿生固相萃取技术，结合建立的混合有机污染物联合毒性的预测模型，测定水体中有机污染物毒性的新方法。本发明方法具有直接、快速、简便和价廉等优点。

本发明的技术方案如下：

本发明提供了一种测定水体有机污染物毒性的方法，该方法包括以下步骤：

(1)建立C₁₈ Empore^TM膜仿生固相萃取技术及其有机污染物负荷总量的测定方法；

(2)测定单一有机化合物及其混合化合物对水体生物毒性；

(3)对水体有毒有机化合物的污染水平进行分析和危险进行预测。

进一步，步骤(1)包括以下步骤：a.测定不同时间下的C₁₈膜固相仿生萃取的有机化合物，确定萃取所需的平衡时间；b.测定不同C₁₈膜量下固相仿生萃取的有机化合物的量，确定最佳C₁₈膜用量；c.根据所确定的平衡时间和最佳C₁₈膜用量，建立一套野外现场C₁₈膜固相仿生萃取有机化合物，采用蒸汽压仪VPO测定C₁₈膜的有机污染物负荷总量的方法。

进一步，步骤(2)包括以下步骤：a.根据文献资料(Verhaar Henk JM，Leeuwen Cees JV，Hermens JLM，1992，Classifying environmental pollutants.1：Structure-activity relationships for prediction of aquatic toxicity.Chemosphere 25，471-491)，选取系列水体典型有机污染物，测定各单一有机污染物对水生生物的毒性；b.根据各单一有机化合物的毒性测定结果，配置两组分或以上的混合有机化合物，测定系列混合有机化合物对水体生物联合毒性EC_50M；c.研究K_MD(表示在C₁₈ Empore^TM膜疏水相体积为V时有机混和化合物的分配系数)与混合有机化合物对水体生物联合毒性EC_50M的相关关系，建立混合有机化合物联合毒性的预测模型。

进一步，步骤(3)包括以下步骤：采用C₁₈膜固相仿生萃取技术，野外现场萃取有机化合物，并通过蒸汽压仪VPO测定不同量的C₁₈膜对水体中混合有机污染物的负荷总量，计算水体中混合有机污染物的初始量Q⁰ _water，I和混合有机污染物的初始浓度Q⁰ _water，I/W，分析水体有毒有机化合物的污染水平；然后计算水体中混合有机污染物的K_MD，并采用步骤(2)中构建的典型混合有机污染物联合毒性的预测模型推测水体中混合有机污染物总毒性大小，评价其危害程度。

所述的水体选自海洋中的水。

本发明与现有技术相比，具有如下优点和有益效果：

1、本发明可在无须知道混合物具体组成的情况下，直接预测海洋、湖泊、河流等一切水体中有毒有机污染物，尤其是水产养殖区的水体有毒有机污染物的预测。本发明还可用于水体毒性的预测预警，同时，对有机污染物的环境生态风险评价提供了一个重要的、必不可少的手段。

2、本发明可将从源头保证水产品的安全，增强全国各地水产品的市场形象，提升出口的国际竞争力。这在水产品年产量数十万吨，但水产品中有毒物质含量检出率逐年增加，出口退货时间经常发生的全中国具有相当的经济意义。同时，除水产品外，本发明方法预期还可应用于其他农产品的食品安全，比如目前无公害蔬菜在市场上备受推崇，而无污染的灌溉用水是无公害蔬菜的除土壤外的另一个非常重要的保证，显然本发明方法也是灌溉用水水质监控预测的最为经济的有效手段。

3、目前许多饮用水源中甚至已发现种类繁多的有毒物和致癌物质，农业和农村面源污染也处于失控状态。如果采用本发明方法控制饮用水源的水质安全，将有相当大的市场。

4、由于环境水体普遍受到有毒有机化合物的污染，生态系统的安全已经受到严重的威胁。为了保护生态系统的健康持续发展，目前水体污染控制问题已得到了空前的重视。由于本发明方法具有直接、快速、简便和价廉等优点，将在水环境污染保护方面中具有广泛的应用前景，比如可在工厂污水排放控制、各大河流和近海海域海水的污染监测等许多方面均可加以应用，从而将在保障生态系统健康方面也发挥着重要的作用。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

本实施例的技术方案如下，包括以下基本步骤：

(1)建立C₁₈ Empore^TM膜仿生固相萃取技术及其有机污染物负荷总量的测定方法；

C₁₈膜/水分配系数的测定：

在1L的广口瓶中，加入1000mL 1，2，4，5-四氯苯浓度的待测溶液(称取约0.02g 1，2，4，5-四氯苯，溶解于10ml容量瓶中，取出0.5ml加入25ml容量瓶中定容，然后将稀释后的25ml溶液加入到装有250ml蒸馏水的烧杯中，加入时尽量缓慢，并且不停的摇动烧杯，然后将烧杯超声45分钟，待充分溶解后加入装500ml蒸馏水的大瓶子中，将烧杯加入250ml蒸馏水再次超声润洗，瓶子中溶液总量为1L)和23.0mg左右的C₁₈膜Empore^TM(丝状，每条约5.0mg，购自美国Baker公司，1g膜含有2.95μl十八烷基有机相)，密封超声(I＝0.6mA)一定时间(测试中萃取的平衡时间请参看表1)后，迅速转移膜至10mL容量瓶中，把膜用缓流N₂吹干后，加入一定量(约8mL)的正己烷，密封超声(I＝0.6mA)20min，有机相用0.45μm的有机膜过滤后进气相色谱GC，气相色谱的具体操作条件：保持室内温度(空调)22±1℃；进样量为1μl，无分流进样；进样口为260℃；检测器为300℃；N₂流速为1.5ml/min；柱升温程序为100℃保持1分钟，以20℃/min升至260℃，测定待测物的含量。

a.固定膜的量为23mg，测定不同时间下的C₁₈膜固相仿生萃取的有机化合物，确定萃取所需的平衡时间；

在实验过程中，得出各萃取1，2，4，5-四氯苯所需的平衡时间见表1：

表1

平衡时间h	0.0	0.5	1.0	1.5	2.0	3.0	4.0	5.0
									转换率X/％	0.0	9.2	16.8	23.8	36.6	28.8	30.4	29.6
分配系数lgKSD	0.00	4.29	4.59	4.78	5.04	4.89	4.92	4.90

当t＝3h时，溶液浓度Ct趋于稳定，此动态过程达到平衡，分配系数lgK_SD的大小也趋于一致，此时的K_SD真正反映有机化合物在水相和C₁₈ Empore^TM膜有机相的分配系数，可用于表征有机化合物在水环境中的归趋问题。对于脂溶性小于或等于1，2，4，5-四氯苯的化合物来说，所需分配平衡时间选在3h。比传统摇瓶振荡法(96h)大大缩短了达到平衡的时间。K_SD与X根据公式(2)和(3)算出。

$K_{\mathrm{SD}}=\frac{W}{V}\×\frac{X}{100-X}---\left(2\right)$

$X=\frac{\underset{i=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}{Q}_{\mathrm{Disk},i}^t}{\underset{i=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}{Q}_{\mathrm{Water},i}^0}---\left(3\right)$

式中，W为水溶液体积，V为C₁₈膜疏水相的体积，X为化合物在C₁₈膜和水相之间的转换率(％)，Q⁰ _water，Q^t _water分别为初始时刻和平衡时(t时刻)水溶液中有机化合物的量。

b.测定不等量C₁₈膜下固相仿生萃取的有机化合物的量，确定最佳C₁₈膜用量；

在1L的广口瓶中，加入1000mL浓度为0.50，5.00，15.00，25.00和45.00mg/L 1，4-二氯苯，分别用5.0，15.0，25.0，50.0，100.0mg量的C₁₈膜(丝状，每条约5.0mg，购自美国Baker公司，1g膜含有2.95μl十八烷基有机相)，密封超声(I＝0.6mA)0.5，1.0，2.0，3.5，5.0和7.0h后，迅速转移膜至10mL容量瓶中，把膜用缓流N₂吹干后，加入一定量(约8mL)的正己烷，密封超声(I＝0.6mA)20min，有机相用0.45μm的有机膜过滤后进气相色谱GC，气相色谱的具体操作条件：保持室内温度(空调)22±1℃；进样量为1μl，无分流进样；进样口为260℃；检测器为300℃；N₂流速为1.5ml/min；柱升温程序为100℃保持1分钟，以20℃/min升至260℃，测定待测物的含量。

在实验过程中，改变膜的用量，得出1，4-二氯苯转化率见表2：

表2

膜量mg	5.0	15.0	25.0	50.0	100.0
						转换率X/％	0.40	0.96	1.93	3.25	6.00
分配系数lgKSD	3.55	3.46	3.55	3.47	3.45

由上表可以推出膜量的多少不会影响分配系数的大小。

c.现场C₁₈膜固相仿生萃取和混合有机化合物的C₁₈膜/水分配系数的测定法

在2L的广口瓶中，加入2000mL的待测水样和25.0mg的C₁₈膜(丝状，每条约5.0mg)，密封，超声(I＝0.6mA)3h，迅速采用缓流N₂吹干后，加入约8ml正己烷，密封，超声(I＝0.6mA)20min，有机相用0.45μm的有机膜过滤后，采用蒸汽压仪VPO测定待测物含量后，根据公式(7)求出∑Q⁰ _water，I，进而根据公式(2)、公式(3)和公式(4)计算受污染水体中混合有机污染物的K_MD(数值请参看表4)。对于某一特定有机化合物，当它在一定量的C₁₈Empore^TM膜上的分配达到平衡时，膜上所分配的有机物量与其初始浓度密切相关，只要测定某一污染物的浓度，通过测定其在C₁₈Empore^TM膜/水上的分配系数，就可以判断生物体上实际吸附的污染物浓度。

此步骤中计算水体中混合有机污染物的初始量Q⁰ _water，I的计算公式为：

$K_{\mathrm{MD}}=\frac{W}{V}\×\frac{\underset{i=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}\frac{Q_{\mathrm{water},i}^0}{1+\frac{W}{{\mathrm{VK}}_{\mathrm{SDi}}}}}{\underset{i=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}{Q}_{\mathrm{water},i}^0-\underset{i=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}\frac{Q_{\mathrm{water},i}^0}{1+\frac{W}{{\mathrm{VK}}_{\mathrm{SDi}}}}}---\left(4\right)$

$K_{\mathrm{MD}-1}=\frac{W}{V_1}\×\frac{\underset{i=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}{Q}_{\mathrm{Disk},i-1}^t}{\underset{i=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}{Q}_{\mathrm{Disk},i}^0-\underset{i=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}{Q}_{\mathrm{Disk},i}^t}---\left(5\right)$

$K_{\mathrm{MD}-2}=\frac{W}{V_2}\×\frac{\underset{i=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}{Q}_{\mathrm{Disk},i-2}^t}{\underset{i=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}{Q}_{\mathrm{Disk},i}^0-\underset{i=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}{Q}_{\mathrm{Disk},i-2}^t}---\left(6\right)$

$\frac{W}{V_1}\×\frac{\underset{i=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}{Q}_{\mathrm{Disk},i-1}^t}{\underset{i=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}{Q}_{\mathrm{Disk},i}^0-\underset{i=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}{Q}_{\mathrm{Disk},i-1}^t}=\frac{W}{V_2}\×\frac{\underset{i=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}{Q}_{\mathrm{Disk},i-2}^t}{\underset{i=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}{Q}_{\mathrm{Disk},i}^0-\underset{i=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}{Q}_{\mathrm{Disk},i-2}^t}---\left(7\right)$

Q⁰ _water为水溶液中有机化合物的初始量；Q^t _water在t时刻水溶液中有机化合物的量；V1和V2分别为不同C₁₈Empore^TM膜疏水相的体积；Q^t _disk，i-1为C₁₈Empore^TM在t时，膜疏水相的体积V时膜吸附的有机物的量，W为水溶液体积(L)；i表示不同的有机化合物

公式(7)的来源选自：Verhaar HJM，Busser FJM，Hermens JLM，1995，A surrogate parameter for the baseline toxicity content of contaminated water.Environ Sci Technol 29(3)：726-734。

(2)测定单一有机化合物及其混合化合物对水体生物毒性；

湛江叉鞭金藻毒性的测定：藻类生物毒性法是一种简便快速、行之有效的方法，已被广泛用于毒性测定与毒物筛选等方面，所选取的湛江叉鞭金藻(购于中科院南海海洋研究所)体积小，没有细胞壁，营养丰富，较易被吸收，因此，是海产动物人工育苗中重要的饵料之一。根据预实验，每个化合物均设计六个浓度梯度(包含空白值)，在浓度期间按等对数比设计，覆盖了生长抑制率的0％-100％，将这些不同浓度的化合物加入到处于对数生长期的藻类培养物中，每天定时摇晃4次，96h后在显微镜下，用血球计数板测定藻的数目，计算各浓度下化合物对藻的抑制率，最后以化合物的浓度为横坐标，抑制率为纵坐标作图，根据浓度与相对发光度均值的相关线性公式计算出各化合物的EC₅₀值(单一化合物生物效应采用EC₅₀来表示，是指对50％的测试生物产生抑制效应时的化合物的浓度，单位用mol/L表示。测试方法依据国标，以湛江叉鞭金藻为指示生物，测定A、B两类化合物的单一毒性，那么这两种单一化合物生物效应浓度分别为EC_50-A，EC_50-B)。

a.根据文献资料(Verhaar Henk JM，Leeuwen Cees JV，Hermens JLM，1992，Classifying environmental pollutants.1：Structure-activity relationships for prediction of aquatic toxicity.Chemosphere 25，471-491)，选取系列水体典型有机污染物，各单一有机污染物对湛江叉鞭金藻的毒性见表3；

表3

^*为EC₅₀的95％置信区间

b.根据各单一有机化合物的毒性测定结果，配置两组分混合有机化合物，将这些不同浓度的化合物加入到处于对数生长期的藻类培养物中，每天定时摇晃4次，96h后在显微镜下，用血球计数板测定藻的数目，计算各浓度下化合物对藻的抑制率，EC_50M按照公式(1)计算，

${\mathrm{EC}}_{50M}=\frac{C_M}{\frac{C_A}{{\mathrm{EC}}_{50A}}+\frac{C_B}{{\mathrm{EC}}_{50B}}+\·\·\·}---\left(1\right)$

式中，EC_50i为化合物i的EC₅₀；M为A、B...等组成的混合体系

各系列混合有机化合物对湛江叉鞭金藻联合毒性(EC_50M)见表4：

表4

^*为logEC_50M的95％置信区间

c.研究K_MD与混合有机化合物对湛江叉鞭金藻联合毒性(EC_50M)的相关关系，建立混合有机化合物联合毒性的预测模型。在excel中计算K_MD与EC_50M的相关性，进行线性回归预测模型。公式(8)为混合卤代苯有机化合物对湛江叉鞭金藻的毒性预测模型：

Log1/EC_50M＝0.9328logK_MD-0.7321   (8)

n＝17，R²＝0.9329

(n为所测定的混合卤代苯化合物对湛江叉鞭金藻的毒性数据的数量，R²为公式(8)中Log1/EC_50M与logK_MD的相关性，即表示此公式的可信程度，最高值为1)

(3)对水体有毒有机化合物的污染水平进行分析和危险进行预测。

采用C₁₈膜固相仿生萃取技术，野外萃取有机化合物，并通过蒸汽压仪VPO测定不同量的C₁₈膜水体中混合有机污染物的负荷总量，根据公式(7)计算水体中混合有机污染物的初始量Q⁰ _water，I和混合有机污染物的初始浓度Q⁰ _water，I/W，污染水平考照国家排放标准，首先(一)实验室：1.选定污染地典型有毒有机污染物；2.测定混合有机物的K_MD和EC_50M；3.建立K_MD和EC_50M的定量关系；(二)野外：C₁₈膜固相仿生萃取，根本有机污染物在水相和C₁₈膜的分布情况来判断对生物体的影响。

混合卤代苯化合物对湛江叉鞭金藻的毒性预测结果如表5。

表5

^*：指用蒸汽压仪VPO测定的K_MD

^**：为logEC_50M的95％置信区间

^***：通过公式8得出的毒性值

实验方法：

待测液的配置：称取约0.02g 1，2，4，5-四氯苯，溶解于10ml容量瓶中，取出0.5ml加入25ml容量瓶中定容，然后将稀释后的25ml溶液加入到装有250ml蒸馏水的烧杯中，加入时尽量缓慢，并且不停的摇动烧杯，然后将烧杯超声45分钟，待充分溶解后加入装500ml蒸馏水的大瓶子中，将烧杯加入250ml蒸馏水再次超声润洗，瓶子中溶液总量为1L；

在1L的广口瓶中，加入1000mL 1，2，4，5-四氯苯浓度的待测溶液和23.0mg左右的C₁₈膜Empore^TM(丝状，每条约5.0mg，购自美国Baker公司，1g膜含有2.95μl十八烷基有机相)，密封超声(I＝0.6mA)一定时间(测试中萃取的平衡时间请参看表1)后，迅速转移膜至10mL容量瓶中，把膜用缓流N₂吹干后，加入一定量(约8mL)的正己烷，密封超声(I＝0.6mA)20min，有机相用0.45μm的有机膜过滤后进气相色谱GC，并有特定公式求出有机物的C₁₈膜Empore^TM相和水相的分配系数。

气相色谱的具体操作条件：保持室内温度(空调)22±1℃；进样量为1μl，无分流进样；进样口为260℃；检测器为300℃；N₂流速为1.5ml/min；柱升温程序为100℃保持1分钟，以20℃/min升至260℃，测定待测物的含量。

数据处理：

当有机化合物在C₁₈膜Empore^TM相和水相达到分配平衡时，分配系数K_SD表达为：

$K_{\mathrm{SD}}=\frac{W}{V}\×\frac{X}{100-X}---\left(2\right)$

$X=\frac{\underset{i=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}{Q}_{\mathrm{Disk},i}^t}{\underset{i=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}{Q}_{\mathrm{Water},i}^0}---\left(3\right)$

式中：W为水溶液体积(L)；V为C₁₈膜Empore^TM相的体积[V值为0.227μl/mg与C₁₈膜Empore^TM膜质量(mg)的乘积]；X为化合物在C₁₈膜Empore^TM相和水相之间的转化率(％)；Q⁰ _water，Q^t _water分别为初始时刻和平衡时(t时刻)水溶液中有机化合物的量。

实验藻种：湛江叉鞭金藻购于中科院南海海洋研究所；

培养方法：取大亚湾海水，经0.45μm滤膜抽滤后，高温高压消毒。营养盐配方按f/2配方，光照约2000～30001ux，光暗周期为12h∶12h。培养温度：(27±1)℃。

湛江叉鞭金藻生物毒性的测定与处理：

单一化合物对湛江叉鞭金藻生物毒性采用96h的半数有效浓度EC₅₀表示，具体测定方法参照OECD法。

混合化合物对湛江叉鞭金藻生物毒性的测定方法与单一化合物相似，采用混合半数有效浓度EC_50M表示，EC_50M根据公式计算。

${\mathrm{EC}}_{50M}=\frac{C_M}{\frac{C_A}{{\mathrm{EC}}_{50A}}+\frac{C_B}{{\mathrm{EC}}_{50B}}+\·\·\·}---\left(1\right)$

式中，EC_50i为化合物i的EC₅₀；M为A、B...等组成的混合体系

统计分析：数据运用SPSSll.50与SigmaPlot 2001统计软件进行处理。

混合卤代苯化合物对湛江叉鞭金藻的毒性数据结果见表4。.

c.研究K_MD与混合有机化合物对湛江叉鞭金藻联合毒性(EC_50M)的相关关系，建立混合有机化合物联合毒性的预测模型。在excel中计算K_MD与EC_50M的相关性，进行线性回归预测模型。公式(8)为混合卤代苯有机化合物对湛江叉鞭金藻的毒性预测模型：

Log1/EC_50M＝0.9328logK_MD-0.7321  (8)

n＝17，R²＝0.9329

(n为所测定的混合卤代苯化合物对湛江叉鞭金藻的毒性数据的数量，R²为公式(8)中Log1/EC_50M与logK_MD的相关性，即表示此公式的可信程度，最高值为1)

上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和应用本发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于这里的实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种测定水体有机污染物毒性的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤，

(1)建立C₁₈ Empore^TM膜仿生固相萃取技术及其有机污染物负荷总量的测定方法；

(2)测定单一有机化合物及其混合化合物对水生生物毒性；

(3)对水体有毒有机化合物的污染水平进行分析和危险进行预测。

2.根据权利要求1所述的测定水体有机污染物毒性的方法，其特征在于：所述的步骤(1)包括以下步骤：a.测定不同时间下的C₁₈膜固相仿生萃取的有机化合物，确定萃取所需的平衡时间；b.测定不同C₁₈膜量下固相仿生萃取的有机化合物的量，确定最佳C₁₈膜用量；c.根据所确定的平衡时间和最佳C₁₈膜用量，建立一套野外现场C₁₈膜固相仿生萃取有机化合物，采用蒸汽压仪VPO测定C₁₈膜的有机污染物负荷总量的方法。

3.根据权利要求1所述的测定水体有机污染物毒性的方法，其特征在于：所述的步骤(2)包括以下步骤：

a.选取系列水体典型有机污染物，测定各单一有机污染物对水生生物的毒性；

b.根据各单一有机化合物的毒性测定结果，配置两组分或以上的混合有机化合物，测定系列混合有机化合物对水生生物联合毒性混合半数有效浓度EC_50M；

c.研究K_MD与混合有机化合物对水生生物联合毒性EC_50M的相关关系，建立混合有机化合物联合毒性的预测模型。

4.根据权利要求1所述的测定水体有机污染物毒性的方法，其特征在于：所述的步骤(3)包括以下步骤：采用C₁₈膜固相仿生萃取技术，野外现场萃取有机化合物，并通过蒸汽压仪VPO测定不同量的C₁₈膜对水体中混合有机污染物的负荷总量，计算水体中混合有机污染物的初始量Q⁰ _water，I和混合有机污染物的初始浓度Q⁰ _water，I/W，分析水体有毒有机化合物的污染水平；然后计算水体中混合有机污染物的K_MD，并采用步骤(2)中构建的典型混合有机污染物联合毒性的预测模型推测水体中混合有机污染物总毒性大小，评价其危害程度。

5.根据权利要求1所述的测定水体有机污染物毒性的方法，其特征在于：所述的水体选自海洋中的水。