CN102210853A - 一种含有表皮细胞生长因子(egf)及透皮短肽融合蛋白的用于防治糖尿病足坏疽的脂质体的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种含有表皮细胞生长因子(EGF)及透皮短肽融合蛋白的用于防治糖尿病足坏疽的脂质体的制备方法，它是采用有机溶剂逆向蒸发法将表皮生长因子(EGF)及透皮短肽融合蛋白包合起来，使其能很好的保护活性，又强化了对患者皮肤的渗透力，对糖尿病足坏疽有着显著地防治作用。另外，选择较低的EGF及透皮短肽融合蛋白的含量配方，该脂质体还可以用于美容和治疗烧烫伤。

Description

一种含有表皮细胞生长因子(EGF)及透皮短肽融合蛋白的用于防治糖尿病足坏疽的脂质体的制备方法
发明领域
本发明涉及一种含有表皮细胞生长因子(EGF)及透皮短肽融合蛋白的，用于防治糖尿病足坏疽的防治的脂质体的制备方法，属生物医药领域。
发明背景
糖尿病足坏疽是糖尿病患者并发症的一种，严重的需要截肢。我国的糖尿病患者约6000万，其中有近1000万会产生坏疽，而其中的200万严重患者需要截肢，给广大患者带来极大地痛苦和不幸。
糖尿病足坏疽是一种难以治愈的顽疾，其主要原因是微血管病变，继而引起局部组织溃疡。中西医在防治糖尿病足坏疽方面做出了不懈的努力，但都没有取得理想的效果。或旷日持久，反复发作；或疼痛难忍，不治而终。
本发明是将表皮细胞生长因子(EGF)及透皮短肽融合蛋白制备成脂质体，直接施加于糖尿病足坏疽表面，在透皮肽的作用下，迅速渗透，直达病患深处。由于脂质体的包合作用，EGF避免了酶促降解，较长时间保持了活性，形成了较高的生物利用度，有效地抑制了溃疡的恶化，并使其在较短的时间内向好转化，最终使之完全愈合，摆脱截肢的厄运。
发明内容
本发明旨在提供一种方法简单、治疗周期短、见效快的治疗糖尿病足坏疽的方法。
为达到上述目的，本发明采取下列措施：
采用有机溶剂逆向蒸发法。以卵磷脂为脂质体的乳化剂，胆固醇为脂质体的脂质材料。工艺流程为：
配有机相：称取蛋黄卵磷脂、胆固醇、加乙醚加热并超声使之溶解；加水相EGF原液，超声或高压均质使水相和有机相变成均质的油水为一定比例的油包水型乳液状，接着回收乙醚：控制温度减压回收，至变成凝胶状再震荡混合：用漩涡混合器震荡或高压均质机乳化凝胶，打碎凝胶结构，使凝胶转变成水包油型的流动液体；然后再回收乙醚：减压回收剩余的乙醚。
经过几个震荡乳化、回收乙醚的过程，最终得到均质的乳状液，即为含有表皮生长因子(EGF)及透皮短肽融合蛋白的脂质体。
经测定用此种工艺制备的含有表皮生长因子(EGF)及透皮短肽融合蛋白的脂质体：
1、包封率达到80％-90％；
2、粒径达到100-150um；
3、稳定性：耐热(41±1℃)、耐寒(5±1℃)各24小时，恢复至室温后，外观性状、气味无显著差异，未出现分层现象；室温放置(10～16℃)45天，外观性状、气味无显著差异，未出现分层现象；耐热性追加：(40±1℃)继续放置7天，仍无显著差异。经动物实验，在每克物质包含25～75微克EGF脂质体局部治疗下：
1、24小时内，深入活组织中的EGF浓度最高达到0.4ug/ml，与皮下注射所得结果相似；
2、10天内，患处肉芽形成面积的百分比最高达到70％；
经患者临床实验，结果也令人满意，明显有截肢危险的糖尿病足坏疽患者，在溃疡清创后每周三次施用，第四周肉芽组织就被上皮覆盖，新表皮形成，坏疽痊愈且无复发。
实施例一：
1、配有机相：称取蛋黄卵磷脂100mg；
胆固醇50mg；
加乙醚9ml，加热并超声使之溶解；
2、水相：0.1～5ml的EGF原液，余量为纯水；
3、超声或高压均质：使水相和有机相变成均质的油水比例为3∶1的油包水型乳液状；
4、回收乙醚：控制温度在20℃，减压回收乙醚，至变成凝胶状；
5、震荡混合：用漩涡混合器震荡或高压均质机乳化凝胶，打碎凝胶结构，使凝胶转变成水包油型的流动液体；
6、回收乙醚：再减压回收剩余的乙醚。
经过几个震荡乳化、回收乙醚的过程，最终得到均质的乳状液，即为含有表皮生长因子(EGF)及透皮短肽融合蛋白的脂质体。
实施例二：
1、配有机相：称取蛋黄卵磷脂50～200mg；
胆固醇25～100mg；
加乙醚4.5～15ml，加热并超声使之溶解；
2、水相：3ml的EGF原液，余量为纯水；
3、超声或高压均质：使水相和有机相变成均质的油水比例为3∶1的油包水型乳液状；
4、回收乙醚：控制温度在20℃，减压回收乙醚，至变成凝胶状；
5、震荡混合：用漩涡混合器震荡或高压均质机乳化凝胶，打碎凝胶结构，使凝胶转变成水包油型的流动液体；
6、回收乙醚：再减压回收剩余的乙醚。
经过几个震荡乳化、回收乙醚的过程，最终得到均质的乳状液，即为含有表皮生长因子(EGF)及透皮短肽融合蛋白的脂质体。

Claims (7)

1.一种含有表皮细胞生长因子(EGF)及透皮短肽融合蛋白的防治糖尿病足坏疽的脂质体的制备方法，以5ml脂质体制剂计，其组成配方为：
①卵磷脂50～200mg；
②胆固醇25～100mg；
③乙醚4.5～15ml；
④EGF原液0.1～5ml；
⑤余量为纯水。
2.根据权利要求1所述的一种含有表皮细胞生长因子(EGF)及透皮短肽融合蛋白的防治糖尿病足坏疽的脂质体的制备方法，以5ml脂质体制剂计，其组成配方为：
①卵磷脂100mg；
②胆固醇50mg；
③乙醚9ml；
④EGF原液3ml；
⑤余量为纯水。
3.根据权利要求1或2所述的一种含有表皮细胞生长因子(EGF)及透皮短肽融合蛋白的防治糖尿病足坏疽的脂质体的制备方法，其特征是，所述的表皮生长因子选用人表皮生长因子。
4.根据权利要求1或2所述的一种含有表皮细胞生长因子(EGF)及透皮短肽融合蛋白的防治糖尿病足坏疽的脂质体的制备方法，其特征是，所述的透皮短肽是在EGF基础上通过改构使其具有透皮功能。
5.根据权利要求1～3所述的一种含有表皮细胞生长因子(EGF)及透皮短肽融合蛋白的防治糖尿病足坏疽的脂质体的制备方法是：
配有机相：称取蛋黄卵磷脂、胆固醇、加乙醚加热并超声使之溶解；加水相EGF及透皮短肽融合蛋白原液，超声或高压均质使水相和有机相变成均质的油水为一定比例的油包水型乳液状，接着回收乙醚：控制温度减压回收，至变成凝胶状再震荡混合：用漩涡混合器震荡或高压均质机乳化凝胶，打碎凝胶结构，使凝胶转变成水包油型的流动液体；然后再回收乙醚：减压回收剩余的乙醚。
经过几个震荡乳化、回收乙醚的过程，最终得到均质的乳状液，即为表皮生长因子(EGF)及透皮短肽融合蛋白的脂质体。 
6.根据权利要求1～3所述的一种含有表皮细胞生长因子(EGF)及透皮短肽融合蛋白的防治糖尿病足坏疽的脂质体的制备方法，其特征是，它在采用低剂量的EGF及透皮短肽融合蛋白时，可用于面部和皮肤美容。
7.根据权利要求1或2所述的一种含有表皮细胞生长因子(EGF)及透皮短肽融合蛋白的防治糖尿病足坏疽的脂质体的制备方法，其特征是，它在采用低剂量的EGF及透皮短肽融合蛋白时，可用于医治皮肤的烧烫伤。 
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Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

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