CN102210698A

CN102210698A - 包含3-氨基吡啶-2-甲醛缩氨基硫脲的癌症治疗

Info

Publication number: CN102210698A
Application number: CN2010102896792A
Authority: CN
Inventors: 敬祥林; M·斯诺
Original assignee: Vion Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Vion Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2004-01-02
Filing date: 2004-01-02
Publication date: 2011-10-12

Abstract

本发明提供一种药物组合物，其中包含有效剂量的用于癌症治疗的3-氨基吡啶-2-甲醛缩氨基硫脲和药物可接受的载体。本发明另外提供一种口服组合物，其中包含有效剂量的3-氨基吡啶-2-甲醛缩氨基硫脲和可接受的载体。本发明还提供用于静脉内给药的上述药物组合物，其中包含足够每天供给受试者约100至约200mg/m²的3-氨基吡啶-2-甲醛缩氨基硫脲。最后，本发明提供一种容器，该容器能够(a)防止3-氨基吡啶-2-甲醛缩氨基硫脲受光降解或损伤，及(b)包含至少有效剂量的3-氨基吡啶-2-甲醛缩氨基硫脲。

Description

包含3-氨基吡啶-2-甲醛缩氨基硫脲的癌症治疗

本申请是中国专利申请号200410001627.5的分案申请。

贯穿本申请，参考各种出版物并且在引用它们的正文中可以发现这些出版物的完整引证。因此这些出版物完整的公开内容结合在本发明中以更充分地描述与本发明有关的现有技术。

技术领域

本发明涉及使用用于治疗癌症的3AP(也称为Triapine)的组合物和方法。在一具体方面，本发明涉及单独使用3AP或与其它抗癌药组合治疗癌症的方法。

背景技术

在二十世纪九十年代Sartorelli等首先合成3AP(3-氨基吡啶-2-甲醛(carboxaldehyde)缩氨基硫脲)，一种核苷酸还原酶(RR)抑制剂(Liu M-C，等J.Med.Chem.38：4234，1995；美国专利号5,281,715；美国专利号5,721,259；美国专利号5,869676)。RR是一种酶，其在脱氧核糖核酸(DNA)的生物合成中导致核糖核苷酸还原成脱氧核糖核苷酸。由于在哺乳动物细胞中极低水平的脱氧核糖核苷酸该还原过程是限速步骤。已经确定细胞生长速率与特异的RR活性之间的正比关系(Elford HL，等J.Biol.Chem.245：5228，1970)。因此，预计RR的抑制剂在杀死增殖癌细胞中有效。

哺乳动物RR是由两个亚基组成的异二聚体。M1亚基包含核苷酸结合部位，M2亚基包含金属结合部位。M2亚基包含非血红素铁和酪氨酸自由基，其对于核苷酸的酶促还原是必需的(Cory JG；在：International Encyclopedia of Pharmacology and therapeutics-Inhibitors of Ribonucleotide Diphosphate Reductase Activity中，Cory JG；Cory AM，编辑；Pergamon Press：NY；128段，245页，1989)。M2亚基的抑制剂通过破坏自由基起作用。在羟基脲(HU)的情形中，其是作用于M2亚基的唯一临床批准的RR抑制剂，由于哺乳动物细胞容易再生酪氨酸自由基，抑制是可逆的。

3AP属于作用M2的RR抑制剂类别，其是α-杂环甲醛缩氨基硫脲(HCT)(图1)。HCT比HU效力高65-5,000倍(Liu M-C，J.Med.Chem.38：4234，1995)。

HCT系列中最初的先导结构，5-羟基-吡啶-2-甲醛缩氨基硫脲(5-HP，参见图1)，在移植动物模型中显示广谱抗肿瘤活性并在I期临床研究中被评估(DeConti RC，等，Cancer Res.32：1455，1972)。通过O-葡糖苷酸偶联物的形成和随后消除，5-HP进行迅速代谢，其导致在患者中2.5-10分钟的短的生物半衰期(T_1/2)(KrakoffIH，等，Cancer Chemother.Rep.58：207，1974)。设计包含3-氨基的HCT衍生物，3AP，来避免该代谢命运。3AP抑制二磷酸胞苷(CDP)还原酶，对于来自Ehrlich瘤的高度纯化的酶平均IC₅₀(诱导50％抑制的浓度)值为0.3μM，对于部分纯化的酶为0.82μM。已经显示它对于M109和L1210瘤以及L1210的耐羟基脲亚系种类(version)具有抗肿瘤活性。抗肿瘤活性的平均IC₅₀值为0.75-1.6μM。(Liu M-C，等J.Med.Chem.38：4234，1995)。3AP改善的抗肿瘤活性是因为缓慢地多的身体清除和对RR增强的效力。

3AP在预先移植白血病的小鼠中具有抗肿瘤活性(Liu M-C，等J.Med.Chem.39：2586，1996)。当以10-30mg/kg/注射的剂量每天两次连续6天腹膜内注射小鼠。在15mg/kg/注射的剂量观测到最大抗肿瘤效果，治疗/对照存活率(T/C)为262％。高于或低于15mg/kg的剂量效力较低：在10mg/kg/注射T/C＝246％和在20mg/kg/注射为192％。在甚至更高的剂量(30mg/kg/注射)下，3AP减少了这些动物的存活，其超出对照治疗所观测到的(T/C＝96％)。这可能由于3AP的细胞毒性作用超过抗肿瘤作用。

还已知3AP在预先移植鼠M109肺癌和人A2780卵巢癌的小鼠中显示减小肿瘤大小。3AP抑制两种肿瘤的生长，最佳治疗时间表为6-10mg/kg/给药，每天两次(大约相隔8小时)。一天一次的剂量给药时间表，甚至以更高的剂量，是无活性的(Finch，RA，等，Biochem Pharmacol 59：983，2000)。

已经显示3AP与DNA损伤剂的组合在有L1210白血病的小鼠中诱导至少附加的抗肿瘤效果，如通过小鼠存活时间超过由任一单个试剂所诱导的存活时间的延长的增加所反映(Finch，RA，等，Biochem Pharmacol 59：983，2000)。评估的DNA损伤剂和剂量水平是：2.5，5.0和10mg/kg依托泊苷；0.5，1和1.5mg/kg多柔比星；0.5，1和2.0mg/kg顺铂；和2.5，5和10mg/kg 1-乙酰-1，2-双(甲磺酰)-2-(2-氯乙基)肼。当与顺铂共同给药时3AP的剂量水平是0.5，1和2mg/kg，当与所有其它DNA-损伤剂共同给药时是2.5，5.0和7.5mg/kg。每日连续6天腹膜内施行组合治疗。每日大约间隔8小时给药3AP两次，而每日给药DNA-损伤剂一次。这些发现显示3AP可抑制在DNA-损伤剂诱导的损伤后引发的DNA修复过程，从而增强了抗肿瘤活性。相反，当3AP与吉西他滨或胞嘧啶阿拉伯糖苷(阿糖胞苷，ara-C)组合时在有L1210白血病的小鼠中未发现存活时间延长的增加。

在I期研究中，24位顽固性白血病患者接受在第1天和第15天或第1天和第8天开始的96小时持续静脉输注3AP。在疗法(regimen)的第1天和第15天，起始剂量是120mg/m²/天，最大耐受剂量(MTD)是160mg/m²/天。在第一个疗程(course)中接受160mg/m²/天8位患者中的3位，和在第二个疗程中逐步上升至该剂量的一位患者出现肝剂量限制毒性(DLT)(dose-limiting toxicity)。对于疗法的第1天和第8天，以140mg/m²/天的固定剂量给药第一次96-小时输注。将在第8天开始的第二次输注从120mg/m²/天逐步上升至160mg/m²/天而未观测到DLT。未出现客观应答(objective responses)。超过70％的患者的白细胞数减少超过50％。3AP的稳态水平是0.6-1μM。如从体外研究预计，在这些血浆浓度下dATP库下降，并且循环中的白血病细胞的DNA合成能力减小(Giles F.J.等，Leukemia Res.，27：1077，2003)。

在晚期癌症患者中进行另外的I期研究是每天两小时静脉输注5天给药3AP。4周重复一次疗程。起始剂量为5mg/m²/天并逐步上升至96mg/m²/天。修改该研究来在扩展的患者群组中确定每隔2周每天x5给药96mg/m²剂量的安全性和耐受力。总共32位患者接受治疗；3-4级白细胞减少是在以96mg/m²/天治疗的4位患者中观测到的主要毒性，其在治疗后的星期中出现并在第15天前消退为≤1级。对于后者的时间表最普通的非血液学毒性(non-hematologic toxicities)是衰弱，发热，恶心和呕吐，粘膜炎，减少的血清碳酸氢盐，和血胆红素过多，严重程度主要是1-2级并迅速可逆。在每隔一周的时间表上的血液学毒性包括白细胞减少(在至少一个疗程中93％为4级)和贫血(71％为2级，22％为3级)。血小板减少较不常见并只在22％中严重程度为3-4级。未观测到部分或完全应答。在每隔一周的时间表上治疗的三位患者有抗肿瘤效果迹象。第一位患者，患有转移至腹膜乳癌的73岁女性，在多重化学疗法和激素治疗之后仍发展，在两个疗程后显示提高的基线CA27.29血清水平减小53％。她的腹内疾病是不可测量的。该患者在第5疗程后死于肠穿孔。一位患有转移至锁骨上和颈节的食道-胃结合处腺癌的39岁男性患者，并且在两次预先化学疗法后仍发展，在4个疗程内CEA减少51％，伴随颈腺病的减少和痛苦的改善。在另外3个疗程后患者发展进行性疾病。一位患有食道癌和连续涉及远侧食道和近端胃的56岁男性在4个疗程后肿瘤改善，其是通过内镜检查显现的。在另外4个疗程后疾病进展。在每隔一周的时间表上治疗的另外两位患者(转移性乳癌和结肠癌)，两者涉及实质疾病(substantial disease)和有多重先前治疗，感觉有疾病稳定的迹象，并分别接受10个和6个疗程的治疗(Murren，J.等，Clin Cancer Res.，9：4092，2003)。

此外，在由J.Murren等进行的研究中，测定3AP能否增强顺铂(cddp)的抗肿瘤活性。在I期临床中，3AP的DLT是骨髓抑制。在治疗期间在群组1-2中每隔一周，第1-5天通过2小时IV输注给予患者3AP 96mg/m²，在群组3-4中第1-4天q3w。在连续的群组中，每个3AP疗程第3天给予cddp 25mg/m²；第3，4天25mg/m²；第3天，第4天或第2天，第3天37.5mg/m²。应答显示在18位患者中，未观测到部分/完全应答。在2位乳癌患者中肿瘤标记改善(1位持续治疗11个周期)，在包括预先铂暴露的2位患者的其它4位(肾，甲状腺，非小细胞肺癌和肝脏中迅速发展性腺癌)中注意到疾病稳定2-6个治疗周期。总之，第1-4天3AP 96mg/m²和第2-3天cddp 37.5mg/m²，q3w，是可容许的并且伴随易处理的毒性。批准在较轻预处理的患者和cddp-应答肿瘤中的2期试验(Murren，J等，Proc Am Soc Clin Oncol 22：160，2003)。

在另一个研究中，Yen，Y等发现在肿瘤细胞系中，短暂的3AP曝露2-16小时(hrs)，接着曝露吉西他滨1小时，可增加吉西他滨DNA掺入，产生协同细胞毒性。在另一I期临床试验，Yen，Y等指出完全剂量的吉西他滨可安全地与3AP 105mg/m²一同给予病者。这提供进一步在吉西他滨应答的恶性肿瘤如肺和胰中研究该组合的理论基础。(Yen Y.等，ProcAm Soc Clin Oncol 22：143，2003)。

发明内容

发明概述

本发明的主要目的是提供单独使用3AP或与其它抗癌剂组合治疗癌症的方法。本发明的另外目的是提供一种药物组合物，其包含3AP和药物可接受的载体。本发明提供一种口服组合物，其包含有效量的3-氨基吡啶-2-甲醛缩氨基硫脲和可接受载体。另一个目的是提供通过将3AP包装在防止或减少光穿透的材料中以保护3AP免于由于光曝露的损伤的方法。

附图说明

图1.α-杂环甲醛缩氨基硫脲的结构。

图2.用各种浓度的3AP处理KB细胞指示的时间，然后洗涤两次以去除胞外3AP。在3AP曝露后立即加入0.3μM[³H]-阿糖胞苷，并在37℃温育30分钟。提取DNA并通过闪烁谱计定量掺入的标记。

图3.用各种浓度的3AP处理KB细胞指示的时间，然后洗涤两次以去除胞外3AP。在3AP曝露后立即加入0.3μM[³H]-吉西他滨，并在37℃温育30分钟。提取DNA并通过闪烁谱计定量掺入的标记。

发明详述

本发明提供一种药物组合物，其包含有效量的用于癌症治疗的3AP和药物可接受的载体。

本文中，可互换地使用术语癌，肿瘤和赘生物并且它们的含义相同。

本发明还提供一种组合物，其包含3AP和另外的治疗药的剂量。3AP可与另外的治疗药协同作用。

对于静脉给药，上述组合物包含足够每日提供给受试者的量的3AP。3AP可以是每天100-200mg/m²。在优选实施方案中，3AP是每天大约120-大约160mg/m²。在另一个实施方案中，使用该组合物至少10天。在优选实施方案中，使用该组合物10-20天。在此方案，病人在接收3AP 4-7天后可停止用药3-7天，然后再继续接受治疗。

本发明还提供上述药物组合物，其包含有效量的用于癌症治疗的3AP和它的药物可接受的载体，此外包含另一种治疗药。

对于包含另一种治疗药的药物组合物，静脉给药包含大约100-120mg/m²量的3AP。

本文中，所述另一种治疗药是吉西他滨或顺铂。如可以容易地为普通技术工人所理解，可以使用其它药剂。

本发明还提供一种口服组合物，其包含有效量的3-氨基吡啶-2-甲醛缩氨基硫脲和可接受载体。

本发明另外提供上述口服组合物，其进一步包含另一种治疗药。

本发明涉及治疗哺乳动物癌症的方法，其包含通过静脉给药或通过口服给药对所述哺乳动物给药治疗有效量的3AP。

更具体地，本发明涉及治疗哺乳动物癌症的方法，其包含对所述哺乳动物给药治疗有效量的3AP。通过在患有各种癌症的人中进行临床试验以确定每m²体表面积的有效剂量和剂量给药时间表。

对于3AP通过静脉给药典型的治疗剂量是大约2mg至160mg/m²/天，一天一次，连续1-20天。在优选实施方案中3AP的剂量是60-120mg/m²/天，一天一次，连续2-14天。在更优选的实施方案中3AP的剂量是80-100mg/m²/天，一天一次，连续4-7天。应当理解对于治疗实体瘤和白血病的最优选实施方案是不同的。

在另一个实施方案中，通过在一段时间内连续静脉注射对所述哺乳动物给予3AP。对于3AP通过连续静脉注射的典型治疗剂量为大约20mg-250mg/m²/天，连续1-10天。

在优选实施方案中，3AP的剂量为60-200mg/m²/天，连续2-7天。在另一优选实施方案中3AP的剂量为100-160mg/m²/天，连续3-4天。应当理解对于治疗实体瘤和白血病的最优选实施方案是不同的。

在另一个实施方案中，将3AP与其它抗癌药组合给予所述哺乳动物。这些抗癌药的实施例是氨喋呤，羟基脲，甲氨蝶呤，氟尿嘧啶，阿糖胞苷，6-巯嘌呤，氟达拉滨，喷司他丁，吉西他滨，长春新碱，长春碱，紫杉醇，依托泊苷，替尼泊苷，阿霉素，柔红霉素，去甲氧柔红霉素，表柔比星，米托蒽醌；博来霉素，丝裂霉素，放线菌素D，氮芥，环磷酰胺，异环磷酰胺，美法仑，苯丁酸氮芥，白消安，卡莫司汀，洛莫司汀，顺铂，卡铂，泼尼松，甲基泼尼松(methylprednisone)，地塞米松，氟甲睾酮，氟他胺，乙烯雌酚，炔雌醇，他莫昔芬，甲羟孕酮，醋酸甲地孕酮，氨鲁米特，亮丙立德，达卡巴嗪，丙卡巴肼和L-天冬酰胺酶。在优选实施方案中，将3AP与紫杉醇，顺铂，阿糖胞苷，和/或吉西他滨给予所述哺乳动物。所述抗癌药是在3AP给药之前或之后给予。在另一优选实施方案中，在3AP给药后给予吉西他滨，阿糖胞苷或顺铂。

在特定情形下，将3AP以120mg/m²/天连续静脉给药给予4天，在第3天以50mg/m²给予顺铂和以80mg/m²给予紫杉醇。在其它情形下，将3AP以96mg/m²/天，每天2小时给予4天，并在第2天和第3天以37.5mg/m²给予顺铂。如果在给予3AP后第一天典型地以800-1000mg/m²给予吉西他滨，以140至200mg/m²/天，每天2-4小时给予3AP，连续4天。

单独3AP或与上述其它抗癌药组合的精确量将依赖于例如给药的条件和哺乳动物的大小和种类而变化。一般来说，在治疗癌症中可以使用任何量的3AP。当然，每种所选抗癌药的量将依赖于哺乳动物的重量和疾病状态。本领域技术人员可调整剂量形式以取得理想的治疗水平。

在另一个实施方案中，为了非肠道给药将3AP配制为无菌注射液，其可包含溶剂，抗氧化剂，螯合剂，缓冲液，抑菌剂和使制剂与预定受试者的血液等渗的溶质；和水和非水无菌混悬液，其可包括混悬剂和增稠剂。在优选实施方案中，将3AP溶解在包含聚乙二醇，乙醇，抗坏血酸和柠檬酸的溶液中。

如上所述，该组合物可以配制成液体、片剂或胶囊的形式。在一个实施方案中，将3AP配制成用于口服给药的固体或液体形式。固体形式的制剂包括粉末，片剂，药丸，胶囊和可分散颗粒。固体载体可以是一种或多种物质，其也可作为稀释剂，调味剂，增溶剂，混悬剂，粘合剂，防腐剂，片剂崩解剂或包囊材料。在胶囊中，所述稀释剂是细微分散固体，其是与3AP混合并填充于胶囊中。在片剂中，将3AP与具有必需结合性质的载体以适当的比例混合，并以所要的形状和大小压制。所述粉末，胶囊和片剂优选含有5至大约70％活性化合物。适当的载体是碳酸镁，硬脂酸镁，滑石，糖，乳糖，果胶，糊精，淀粉明胶，西黄蓍胶，甲基纤维素，羧甲基纤维素钠，低熔点蜡，可可脂等。

通过使用粘稠物质如天然或合成树胶，树脂，甲基纤维素，羧甲基纤维素钠和其它众所周知的混悬剂将细微分散的活性组分分散在水中，可以制备适于口服使用的液体溶液。还包括的是固体形式的制剂，其是用来在使用前即刻转变为用于口服给药的制剂的液体。该液体形式包括溶液，混悬液和乳剂。除了活性组分以外，这些制剂可包含着色剂，调味剂，稳定剂，缓冲液，人造或天然增甜剂，分散剂，增稠剂，增溶剂等。

还可以以控释型(time-release)制剂给药3AP。在制备控释型或长效组合物的技术中现在可利用各种各样的方法。任何这些控释型或长效制剂适合于本发明的实行中，只要它在治疗癌症中不有害影响3AP的效力。控释型的优势包括更低的峰血清吸收浓度，其显著地减小了给药化合物的不利的副作用和毒性。另外，导致减小的给药频率，其显著地改善患者的顺应性。优选每12-24小时给药的频率。另外，3AP更大的恒定血清浓度将由此导致允许更稳定地减轻症状。

在口服制剂中3AP的剂量将依赖于正被治疗的癌症的类型和其它临床因素如哺乳动物的重量和身体条件。应当理解本发明可以应用于人和兽医使用。对于口服给药于人，大约50-500mg/m²/天，优选大约100-400mg/m²/天，最优选150-300mg/m²/天的剂量通常是足够的。将日剂量分为2-4次。可以给药多个周期并且每个周期包括3-30天。

本发明还提供能够防止3AP降解的容器，其包含有效量的3AP。在另一优选实施方案中，3AP溶液是在密封的琥珀色安瓿或小瓶中提供。

本发明还提供制备如上所述组合物的方法。在1999年1月9日批准的美国专利号5869,676中已经描述用于合成3AP的方法。

从随后的试验细节将更好地理解本发明。然而，本领域技术人员将容易理解讨论的具体地方法和结果仅仅是举例说明本发明，其在其后附的权利要求中更充分地描述。

具体实施方式

实施例1

吉西他滨和阿糖胞苷的3AP的改善的效果

3AP抑制RR活性而导致对于DNA复制和修复必需的核苷酸库的衰竭。因此，在3AP治疗后能够掺入DNA和导致细胞毒性的核苷类似物应该更好地可以与天然核苷酸竞争。通过在3AP治疗后的不同时间检测放射标记吉西他滨或阿糖胞苷(ara-C)掺入KB人口咽癌细胞的DNA中来评估该概念(图2和3)(Wright JA，等Biochem.Cell Biol.68：1364-1990)。

在本研究中，用各种浓度的3AP处理细胞一定的时间后，洗涤细胞两次以去除胞外的3AP。在3AP曝露后立即加入0.3μM[³H]-吉西他滨或[³H]-阿糖胞苷，37℃温育30分钟。提取DNA并且通过闪烁谱计定量掺入的标记。在所有浓度和时间点用3AP预处理增强吉西他滨和阿糖胞苷掺入KB细胞的DNA，作为3AP浓度和预曝露的时间两者的函数发生更大的掺入。

通过细胞存活实验检测3AP和核苷酸类似物的组合对肿瘤细胞系的细胞毒性。将几种肿瘤细胞系(KB，HTB177人小细胞肺癌和HL60人白血病)预曝露于3AP不同时间段，接着加入吉西他滨或阿糖胞苷。在72小时后，通过测量线粒体氧化还原酶活性定量剩余的活细胞。剂量-效果分析(组合指数(combination index))显示3AP和吉西他滨或阿糖胞苷的组合，在核苷类似物4-12小时之前给药3AP，导致协同细胞杀死(表1和表2)。0.7-0.85的组合指数(C.I.)说明中等增效，0.3-0.7说明增效，0.1-0.3说明强烈增效。总起来说，该数据证明3AP预处理肿瘤细胞，使核苷酸库衰竭和抑制DNA修复，加强了核苷酸类似物掺入DNA中与及协同增强细胞毒性。

表1：在各种细胞系中3AP加上吉西他滨的组合。

表2：在各种细胞系中3AP与随后的阿糖胞苷的组合。

实施例2

生产用于静脉给药的3AP

将活性成分，3AP加至聚乙二醇-300(PEG)(3AP在PEG中大约为7.1mg/mL)中，并均化以减小粒度。然后加入含有柠檬酸(20mg/mL)和抗坏血酸(3.3mg/mL)的乙醇，并混合直至获得透明溶液(乙醇∶PEG＝3∶7，v/v)。当需要延长混合来溶解药物时还使用气动混合轴。用氮冲洗该溶液以防止在混合过程中3AP的氧化降解。将该溶液首先通过0.45μm的膜滤器，然后通过2个连续使用的无菌0.22μm膜滤器过滤。在过滤之前和之后使用起泡点测定进行过滤器的完整性检验。通过在122.5℃高压灭菌最少40分钟将装填设备和20mm橡皮塞灭菌。在230℃将10-mL I类琥珀色小瓶洗涤和去热源(depyrogenate)最少45分钟。然后将无菌溶液无菌在100级的区域中填充于无菌小瓶中。在设定目标填充重量后，在填充过程中进行填充校核。然后塞住小瓶并用20mm用flip-off铝封密封。每个小瓶包含10ml溶液，其含有50mg 3AP，7mL PEG，3mL乙醇，60mg柠檬酸和10mg抗坏血酸。

实施例3

保护3AP免于由光曝露诱导的降解

将两瓶3AP注射液在室温下曝露于光(1200J)中1.5小时。一个在透明玻璃小瓶中和另一个在琥珀色玻璃小瓶中，瓶子用带有丁基合成橡胶塞子和铝的弯边(crimp)封印。在每个时间点通过HPLC一式两份分析样品。

3AP光曝露后的稳定性用带有紫外(UV)检测器的HPLC来分析。使用包括四梯度泵，自动取样器(autosampler)，柱加热器和多波长或光二极管阵列检测器的Agilent technologies 1100系列HPLC系统。样品用Supelco LC-18-T柱(5μm，250x6.0mm)分析，流动相由25％MeOH/75％50mM KH₂PO₄和1mM EDTA组成。数据获取和处理是应用Agilent ChemStation软件。表4总结了对保存在透明或琥珀色小瓶中的3AP光曝露的结果。明显地，琥珀琥珀色小瓶为3AP提供保护以免在光曝露中降解。另外，在透明小瓶中3AP溶液的颜色在光曝露后从黄色变为橙色。结果说明琥珀色小瓶保护3AP免于在光曝露中受到损伤。

表4：

实施例4

用3AP的静脉给药治疗白血病

通过对白血病患者静脉给药给药3AP。每天以120-160mg/m²/天给予3AP 10-20天，或者直至骨髓中癌细胞完全清除。3AP在2-4小时的时间内完全给予。

实施例5

用3AP静脉给药治疗实体瘤

对于实体瘤，每隔一周以70-100mg/m²/天给予3AP 4-5天，3-9个月。在4小时的时间内静脉给予3AP。

实施例6

用静脉给药3AP和吉西他滨治疗实体瘤

在晚期癌症患者中开始I期临床试验以确定当组合使用时3AP和吉西他滨的安全分布(profile)和功效。在每28天周期的第1，8和15天给药3AP和吉西他滨。最初，以105mg/m²的固定剂量输注3AP两小时，在完成3AP输注后不小于1小时和不大于4小时这时间内开始给予吉西他滨。输液吉西他滨在30分钟内完成。在第一群组3位患者的第一个周期中给药3AP而无吉西他滨。其它群组包括使用吉西他滨；最低的吉西他滨剂量是600mg/m²。在吉西他滨1000mg/m²的剂量水平之后，修改该研究以确定3AP的剂量是否可以逐步上升至大于105mg/m²。3AP 105mg/m²后在1-4小时内输注吉西他滨1000mg/m²产生的毒性与相同剂量的单独吉西他滨所期望类似的毒性相似。其后吉西他滨固定在1000mg/m²而将3AP逐步上升至140及185mg/m²。在所有剂量下，3AP平均输注终止血清浓度均等于或高于能增强体外吉西他滨活性的3AP有效浓度。

在接受多于一个剂量的3AP-吉西他滨并评估应答的22位患者中，观察到一位完全应答和两位部分应答，另外一位患者已经有延长的大的肝转移稳定。一位患有转移性支气管肺泡癌的患者具有肺，胸膜和胸壁损伤，其满足部分应答的标准。他由于相关的呼吸困难终止治疗，在怜悯使用方案(compassionate use protocol)上被给予吉非替尼片(gefitinib)作为维持治疗，并保持无发展18个月。一位转移至纵隔和腹膜后淋巴结的食道癌患者取得持续5个月的部分应答。另一位未知原发和患有胰和肝上端疾病的患者在持续1.5个月的第4个周期后取得完全缓解。一位转移至肝脏的胆管癌患者具有大的8.5cm肝质量减小和CA19-9减小＞50％，其未满足部分应答的标准。后者患者在超出他的第10个周期的持续治疗中保持稳定。

在2-4小时内输注105mg/m²3AP，接着每28天在第1，8，15天输注吉西他滨(1000mg/m²)通常是耐受良好的(well-tolerated)并且与单独的吉西他滨相比具有相似的毒性分布图。3AP产生轻度至适度的高铁血红蛋白症，可能在肺和心血管储备不足的患者中导致急性症状。这组合证明抗肿瘤活性并值得在II期临床试验中进一步研究。

实施例7

用与顺铂组合3AP的静脉给药治疗实体瘤。

在群组1和2中每隔一周在第1至第5天，在群组3和4中每3周第1至第4天，通过2小时的静脉输注以96mg/m²给予3AP。在连续的群组中，给予顺铂在第3天以25mg/m²，在第3天37.5mg/m²；在第3天和第4天25mg/m²；在每个3AP疗程的第3天和第4天或第2天和第3天37.5mg/m²。已经登记24位患者；在该方案前23位患者进行过预先的化疗，中位值为3，并且12位已经接受铂试剂。在18位可评估的患者中，未观测到部分/完全应答。在2位乳癌患者中肿瘤标记改善(1位持续治疗11个周期)，在包括先前曾接受铂治疗的2位患者的其它4位(肾，甲状腺，非小细胞肺癌和肝脏中迅速发展性腺癌)中注意到疾病稳定2-6个治疗周期。基于这些结果，设计每3周重复的在第1至第4天3AP 96mg/m²/天和在第2至第3天顺铂37.5mg/m²/天的疗法来治疗实体瘤患者。

实施例8

生产用于口服给药的3AP

将药物物质3AP通过20筛目的筛子并在V-壳(shell)掺合机中与淀粉1500(作为稀释剂)混合15分钟。将硬脂酸镁(用作润滑剂)通过20目的筛子，加至掺合机中并另外混合5分钟。使用胶囊填料将上述粉末掺合物以每胶囊大约170mg手工填充于尺寸1号的硬明胶胶囊中。然后将填充的胶囊除尘和抛光。每个胶囊包含50mg 3AP，119mg淀粉1500，和1mg硬脂酸镁(magnesium state)。

实施例9

3AP胶囊的人口服生物利用度

3位患者在接受静脉输注96mg/m²3AP之前一周口服2粒胶囊(100mg总剂量)。为了评估生物利用度，在3AP口服和静脉内给药之后从所有患者收集血样；口服给药血样是在剂量前，10，20，30分钟，1，2，4，6-8和24小时从所有患者收集；静脉内给药血样是在剂量前，15，30分钟，1.5，2，2.25，2.5，2.75，3，6和8小时收集的。血清通过高效液相色谱(HPLC)分离并3AP浓度用UV检测器(400nm)分析。使用仪器包括Agilent Technologies 1100系列HPLC系统，Supelco Discovery C18柱(250mm x 4.6mm)(Supelco，St.Louis，MO)。数据获取和处理是应用Agilent ChemStation软件。药物动力学模型和药物动力学参数使用WinNonlin软件(Pharsight Corporation，Mountain View，CA)计算。单隔室模型用于计算下列药物动力学参数：从时间零点至最后的数据点的血清浓度-时间曲线(AUC)下的面积，峰血清浓度(C_max)，清除半衰期(T1/2)，稳态分布体积(V_ss)和总身体清除率(C1)。计算描述的统计(平均值和标准偏差)，并用来表征每个剂量水平的药物动力学参数。通过比较AUC和对那个患者口服校正静脉接受的总剂量，测定对于每个患者的生物利用度。对于口服生物利用度相关PK参数的总结在表4中显示。接受100mg口服剂量的患者显示非常稳定的生物利用度数据，C_max值为0.2-0.4mg/L并且AUC值为0.8-1.2小时*mg/L，其转换成78％的平均口服生物利用度。该结果表明可以口服给予患者3AP胶囊以治疗疾病。

表3：生物利用度100mg剂量

实施例10

用3AP口服给药治疗癌症

3AP的口服制剂更适合于治疗癌症患者，因为药物给药容易并且可以每天多次给予药物。3AP的日剂量是50-200mg/m²，每天给予2-4次，可达连续7天。对于治疗实体瘤患者每3周重复治疗，持续3-9个月。设计3AP 50-500mg/m²/天，每天给予2-4次，可达连续21天，每4周重复，持续3-9个月的疗法来治疗白血病患者。

实施例11

用3AP口服给药和其它抗癌药治疗癌症

设计3AP 50-500mg/m²/天，每天2-4次，可达连续7天，和在第2至第3天顺铂37.5mg/m²/天，每3周重复的疗法来治疗实体瘤患者。

设计3AP 50-500mg/m²/天，每天2-4次达连续7天，和在第2至第3天阿糖胞苷1000-4000mg/m²/天，每2至3周重复的疗法来治疗白血病患者。

参考文献

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Claims

1.3-氨基吡啶-2-甲醛缩氨基硫脲和选自吉西他滨、顺铂或阿糖胞苷的另外的治疗药的组合在制备用于癌症的药物中的用途，其中所述药物包含足够每天提供受试者每m² 20-250mg的3-氨基吡啶-2-甲醛缩氨基硫脲。

2.根据权利要求1的用途，所述药物包含足够每天提供受试着每m²20-200mg的3-氨基吡啶-2-甲醛缩氨基硫脲。

3.根据权利要求1的用途，所述药物包含足够每天提供受试着每m²100-120mg的3-氨基吡啶-2-甲醛缩氨基硫脲。