CN102175845A - 一种甜菜夜蛾幼虫对杀虫剂抗药性的监测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种杀虫剂抗药性监测方法，该方法包括：(1)通过田间采集获得至少一个地理区域的甜菜夜蛾幼虫种群；(2)将田间采集的甜菜夜蛾幼虫种群转入室内扩繁一代；(3)将扩繁后一代3龄甜菜夜蛾幼虫饥饿2小时后进行抗药性测定；(4)通过将至少一种杀虫剂原药稀释成死亡率在10％-90％的五个浓度，浸渍甘蓝圆叶片制成带毒叶片饲喂甜菜夜蛾3龄幼虫；(5)一定时间后检查结果，获得某一地区甜菜夜蛾幼虫对某种杀虫剂的抗药性水平。本方法通过对田间甜菜夜蛾种群对杀虫剂抗性的监测，明确田间甜菜夜蛾对杀虫剂的抗性情况，从而可以为甜菜夜蛾的抗性治理及综合防治提供有效的指导。
Description
(一)技术领域：
本发明涉及一种甜菜夜蛾幼虫对杀虫剂抗药性的监测方法，属于农药学和昆虫学领域。
(二)背景技术：
甜菜夜蛾(Spodoptera exigua(Hübner))俗称白菜褐夜蛾，隶属于鳞翅目夜蛾科，是一种世界性分布的重要农业害虫。因其食性杂、寄主范围广，又特别喜食蔬菜、大豆、花生、玉米和棉花等作物，对农业生产造成很大成胁。造成甜菜夜蛾暴发成灾主要是由以下几方面的原因造成的：一是高温干旱的特殊气候条件有利于甜菜夜蛾的发生，二是近几年来种植结构的改变，特别是90年代以来蔬菜种植面积的不断增加为甜菜夜蛾提供了充足的食料，三是抗药性的产生导致了甜菜夜蛾防治难度的增加。其中抗药性问题又是造成甜菜夜蛾暴发成灾的一个重要原因。
长期以来化学药剂的不合理使用，导致甜菜夜蛾对多种杀虫剂产生了不同程度的抗药性。为了延缓甜菜夜蛾抗药性的发展，及时制定抗性治理措施，抗药性监测成为准确获知甜菜夜蛾在某地抗性水平的有效手段。Brewer等采用诱虫和生物测定的方法，监测到美国加州甜菜夜蛾对氰戊菊酯的相对抗性倍数为11倍，甜菜夜蛾对拟除虫菊酯类药剂迅速产生抗药性；Ernst等(1992)报道，1990年采用浸叶法测定危地马拉棉花甜菜夜蛾田间种群对氯氰菊酯产生了6000倍的抗药性；Moulton等采用浸叶法测定了美国亚利桑那州和泰国甜菜夜蛾对多杀菌素和甲氧虫酰肼的抗性；1993年，郑允采用喷雾塔喷雾法、浸叶法测定了台湾北、中、南部地区甜菜夜蛾4龄幼虫对有机磷类、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性；1995年吴士昌采用幼虫浸渍法测定了上海地区甜菜夜蛾3龄幼虫对有机磷类、氨基甲酸酯类杀虫剂的抗性；2002年，刘永杰采用点滴法、浸叶法测定了南京、上海等六个地区甜菜夜蛾3龄幼虫对有机磷类、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类、昆虫生长调节剂类杀虫剂的抗性水平；2008年，贾变桃采用浸叶法测定了江苏、河南甜菜夜蛾初孵幼虫对阿维菌素类、噁二嗪类、吡咯类、昆虫生长调节剂类杀虫剂的抗药性。
上述监测工作确实为甜菜夜蛾的田间防治及抗性治理提供了极大的帮助，但存在各监测单位监测方法步骤繁琐，方法不规范的问题。
(三)发明内容
本发明就是以已有研究方法为基础，针对现有监测方法中存在的不足而提出的，目的在于提供一种简便、快速、准确的抗性监测方法。
为了实现上述目的，本发明提供了一种甜菜夜蛾幼虫对杀虫剂抗药性的监测方法，该方法包括以下步骤：(1)通过田间采集获得至少一个地理区域的甜菜夜蛾幼虫种群；(2)将田间采集的甜菜夜蛾幼虫种群室内扩繁一代；(3)将扩繁一代后的3龄甜菜夜蛾幼虫挑入二十四孔养虫板中，饥饿2小时后进行抗药性测定；(4)通过将至少一种杀虫剂原药稀释成死亡率在10％-90％的五个浓度，浸渍圆叶片制成带毒叶片饲喂步骤(3)中挑选的甜菜夜蛾3龄幼虫；(5)一定时间后检查结果，获得某一地区甜菜夜蛾幼虫对某种杀虫剂的抗药性水平。
在本发明的方法中，所述步骤(1)进一步包括在同一个地理区域内“W”型五点取样，采集方圆3公顷内的甜菜夜蛾幼虫，每点采集数量至少在100头以上，总数量应在500头以上。所述步骤(3)进一步包括试验使用的二十四孔养虫板(孔深20mm，孔径15mm)用质量分数0.5％的癸甲溴铵水溶液浸泡过夜后清水冲洗、晾干后使用；挑选健康、活泼，生长均匀一致3龄甜菜夜蛾幼虫于24孔板中，每孔一头试虫。所述步骤(4)进一步包括试验使用的圆叶片采用不结球甘蓝叶，甘蓝叶用质量分数为0.1％曲拉通水溶液将表皮蜡质层洗去、晾干，用直径为10mm的打孔器打成圆叶片；药液配制是将杀虫剂原药用丙酮溶解，然后用质量分数为0.1％吐温-80水溶液直接配制成所需浓度；每个浓度重复3次。所述步骤(5)进一步包括对于常规杀虫剂和部分新型杀虫剂处理后48小时检查结果，至少包括有机磷类、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类、阿维菌素类、噁二嗪类、吡咯类、大环内酯类杀虫剂；昆虫生长调节剂类杀虫剂为处理后72小时检查结果，至少包括蜕皮激素类似物、保幼激素类似物。
本发明的有益效果
1)本发明使用曲拉通水溶液将甘蓝叶片表皮蜡质层洗去、晾干，提高了药液对叶片的润湿展布效果，使药液在甘蓝叶片上分布更均匀，提高了抗性监测结果的准确性。
2)本发明使用的二十四孔养虫板经济易得，占用空间小，不同试虫间干扰小，检查结果快速、方便。
(四)具体实施方式
下面对本研究的具体实施方式进一步详细说明。
实施例1：本实验的目的在于研究甲氨基阿维菌素苯甲酸盐在山东滕州、滨州两地的抗药性水平。
田间分别在山东滕州、滨州步行“W”型五点取样，采集方圆3公顷内的甜菜夜蛾3龄以上幼虫，每点采集数量约以上约100头，总计约500头，室内饲养一代，挑取大小均匀一致的3龄试虫于24孔板中饥饿2小时抗药性水平测定。准确称取90％甲氨基阿维菌素苯甲酸盐原药1.1111g，用丙酮溶解定容至100mL容量瓶中，配成10000mg.L-1的甲维盐母液，用0.1％吐温-80水溶液将母液稀释成2.00、0.50、0.13、0.03、0.01mg.L-1用于甜菜夜蛾滕州种群的抗性监测，用0.1％吐温-80水溶液将母液稀释成4.00、2.00、1.00、0.50、0.25mg.L-1用于甜菜夜蛾滨州种群的抗性监测，用0.1％吐温-80水溶液将母液稀释成0.20、0.10、0.05、0.03、0.01mg.L-1用于甜菜夜蛾敏感种群的抗性监测，分别将洗净晾干的甘蓝圆叶片按浓度从低到高的顺序在配制好的药液中浸渍10s，取出晾干，将带药叶片加入二十四孔板中，每浓度重复3次，48h后检查结果。以对照死亡率小于10％为有效试验，计算死亡率和校正死亡率，用DPS数据处理系统计算LC50值，毒力回归曲线。试验结果见表1、2.
表1.甜菜夜蛾幼虫对甲维盐抗药性监测结果
表2.甜菜夜蛾幼虫对甲维盐抗药性监测结果分析
从结果可以看出，采用本发明的抗药性监测方法测定时，各重复平行性好，LC50值可信度高，置信区间小，相关性高，斜率误差小。
实施例2：本实验的目的在于研究虫酰肼在滕州、滨州两地的抗药性水平。
田间分别在滕州、滨州步行“W”型五点取样，采集方圆3公顷内的甜菜夜蛾3龄以上幼虫，每点采集数量约以上约100头，总计约500头，室内饲养一代，挑取大小均匀一致的3龄试虫于24孔板中饥饿2小时后待用。准确称取95％虫酰肼原药1.0500g，用丙酮溶解定容至100mL容量瓶中，配成10000mg.L-1的虫酰肼母液，用0.1％吐温-80水溶液将母液稀释成200.00、100.00、50.00、25.00、12.50mg.L-1用于甜菜夜蛾滕州种群的抗药性监测，用0.1％吐温-80水溶液将母液稀释成400.00、200.00、100.00、50.00、25.00mg.L-1用于甜菜夜蛾滨州种群的抗药性监测，用0.1％吐温-80水溶液将母液稀释成10.00、5.00、2.50、1.25、0.31mg.L-1用于甜菜夜蛾敏感种群的抗药性监测，分别将洗净晾干的甘蓝圆叶片按浓度从高到低的顺序在配制好的药液中浸渍10秒，取出晾干，将带药叶片加入二十四孔板中，每浓度重复3次，72小时后检查结果。以对照死亡率小于10％为有效试验，计算死亡率和校正死亡率，用DPS数据处理系统计算LC50值，毒力回归曲线。试验结果见表3、4.
表3.甜菜夜蛾幼虫对虫酰肼抗药性监测结果
表4.甜菜夜蛾幼虫对虫酰肼抗药性监测结果分析
从结果可以看出，采用本发明的抗药性监测方法测定时，各重复平行性好，LC50值可信度高，置信区间小，相关性高，斜率误差小。
Claims (5)
1.一种甜菜夜蛾幼虫对杀虫剂抗药性的监测方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：
(1)通过田间采集获得至少一个地理区域的甜菜夜蛾幼虫种群；
(2)将田间采集的甜菜夜蛾幼虫种群室内扩繁一代；
(3)将扩繁一代后的3龄甜菜夜蛾幼虫挑入二十四孔养虫板中，饥饿2小时后进行抗药性测定；
(4)通过将至少一种杀虫剂原药稀释成死亡率在10％-90％的五个浓度，浸渍圆叶片制成带毒叶片饲喂甜菜夜蛾3龄幼虫；
(5)一定时间后检查结果，获得某一地区甜菜夜蛾幼虫对某种杀虫剂的抗药性水平。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)进一步包括在同一个地理区域内“W”型五点取样，采集方圆3公顷内的甜菜夜蛾幼虫，每点采集数量至少在100头以上，数量应在500头以上。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)进一步包括挑选3龄甜菜夜蛾幼虫健康、活泼，生长均匀一致；试验使用的二十四孔板(孔深20mm，孔径15mm)用质量分数0.5％癸甲溴铵水溶液浸泡过夜后清水冲洗、晾干后使用。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(4)进一步包括试验使用的圆叶片采用不结球甘蓝叶，甘蓝叶用质量分数1％曲拉通水溶液将表皮蜡质层洗去、晾干，用直径为10mm的打孔器打成圆叶片；药液配制是将杀虫剂原药用丙酮溶解后用质量分数为0.1％吐温-80水溶液直接配制成所需浓度。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(5)进一步包括对于常规杀虫剂和部分新型杀虫剂处理后48小时检查结果，至少包括有机磷类、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类、噁二嗪类、吡咯类、大环内酯类杀虫剂，昆虫生长调节剂类杀虫剂为处理后72小时检查结果，至少包括蜕皮激素类似物、保幼激素类似物。
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